ferrag haddabib.univ-oeb.dz:8080/jspui/bitstream/123456789/5552/1...la situation alimentaire...

République Algérienne Démocratique et PopulaireMinistère de l’Enseignement Supérieur et de La Recherche

Université Larbi Ben Mhidi Oum El BouaghiFaculté Des Sciences Exactes et des Sciences de La Nature et

Département des

N°d’ordre……

Présenté pour l’obtention du diplôme de

OPTION

Ferrag Hadda

Devant le jury :

Présidente : Mme. Merradi. L.

Rapporteur : Mr. Hamitou, M.

Examinateur : Mr. Chekara Bouziani

Année universitaire

Isolement et identification des champignons transmis par

les semences de tomate (

essai in vitro de lutte biologique contre les souches

République Algérienne Démocratique et Populaire Ministère de l’Enseignement Supérieur et de La Recherche

Scientifique

Université Larbi Ben Mhidi Oum El Bouaghi Faculté Des Sciences Exactes et des Sciences de La Nature et

de la Vie Département des Sciences de La Nature et de la Vie

N°d’ordre……

Mémoire

Présenté pour l’obtention du diplôme de

MASTER

Filière : Biologie

OPTION : Microbiologie Appliquée

Thème :

Présenté par :

et Guerioun

Merradi. L. MCA Université Oum el Bouaghi

tou, M. MCA Université Oum el Bouaghi

Chekara Bouziani, M. MAA Université Oum el Bouaghi

Année universitaire : 2017/2018


les semences de tomate (Lycopersicon esculentum Mill

de lutte biologique contre les souches

phytopathogènes.

Ministère de l’Enseignement Supérieur et de La Recherche

Faculté Des Sciences Exactes et des Sciences de La Nature et

N° de série……

Guerioune Asma

Université Oum el Bouaghi




Lycopersicon esculentum Mill) et

de lutte biologique contre les souches

Remerciements

Nous exprimons notre profonde gratitude tout d’abord au Bon

Dieu le

miséricordieux de nous avoir donné le courage,

la volonté et la force pour réaliser ce travail.

Nous tenons à remercier profondément notre encadreur

Mr Hamitou Mokhtar

Maitre de conférences à l’université d’Oum El-Bouaghi dont

les directives,

les conseils et les remarques attentionnées nous ont guidé tout

au long de notre travail et nous

ont permis de le mener à bien.

Nous lui exprimons toute notre gratitude.

Nous adressons d’autre part nos remerciements

Mr Bouziani

Maitre de conférence à l’université d’Oum El-Bouaghi pour

l’honneur qu’il nous a

fait d’accepter de présider le jury.

Nous tenons également à remercier

Melle Merradi

Maitre de conférences à l’université d’Oum El-Bouaghi, qui a

donné de son temps pour examiner notre travail et faire partie

du jury.

Nous remercions aussi l’ensemble du personnel du

laboratoire de la

Microbiologie à l’université d’Oum El-Bouaghi.

A vous tous, un grand merci

DÉDICACES

Je remercie mon « Dieu » le tous puissant de nous avoir guidé pour

réaliser ce modeste travail.

C’est avec un grand plaisir que je dédie ce mémoire :

A mes parents qui sont ma source de lumière et d’inspiration,

Mon Père Chaaban en témoignage de ses sacrifies, ma Mère Bariza pour

ses sacrifices depuis qu’elle m’a mis au monde, et qui

N’a pas cessé de m’encourager, de me soutenir dans les moments

difficiles

A mes chers frères :Karim,Djamel, Samir

Avec ses femmes : Radia, Kanza, Amel

Petite frère : Mehdi

Et les enfant : Chahed, Asile,Anas

A tout mes oncles et tantes

A toute la famille Ferrag

A mon cher binôme Asma et sa famille

A tous mes enseignants et mes collègues de master2MBA 2018

Les mots ne suffisent guère pour exprimer l’attachement, l’amour et

l’affection que je porte pour vous.

Hedda

DÉDICACES

A l’aide de dieu tout puissant, qui m’a tracé le chemin de ma vie,

J’ai pu réaliser ce travail que je dédie :

A la lumière de mes yeux, l’ombre de mes pas et le bonheur de

ma vie ma mère Ghania qui ma apporté son appui durant toutes mes

années d’étude, pour

son sacrifice et soutien qui m’ont donné confiance, courage et sécurité.

A mon cher père Farhate qui ma appris le sens de la persévérance tout

au long de

mes études, pour son sacrifice ses conseils et ses encouragement

A mes très chers soeurs : Yassmina, Aycha , Faiza, Radia..

A mes très chers frères: Djaafar, Younesse , Karim, Ammar, Rabeh,Ali.

A ma très cher marie Sofiane

A tout mes oncles et tantes

A toute la famille guerioune

A mon cher binome Hedda et toute sa famille

A tous mes enseignants et mes collègues de master2MBA 2018

A vous…….

Asma

Sommaire

SOMMAIRE Liste des figures

Liste des tableaux

Liste des abréviations

Introduction……………………………………………………………………………1

Chapitre I : Synthèse bibliographique.

I.1.Solanacées…………………………………………………………………………..3

I.2.La tomate …………………………………………………………………………..3

2.1. Historique …………………………………………………………………………3

2.2. Nomenclature et classification ………………………………………………..…….4

2.3. Description botanique de la tomate ………………………………………………….….. 4

2.4. Production et Importance économique de la tomate en Algérie ………………………..5

I.3.les graines ……………………………………………………………………………5

3.1. Origine et importance ………………………………………………………..……6

3.2. Composition chimique de la graine………………………………………...……..6

3.3. Stockage des graines…………………………………………………………..….. 7

I.4. Généralités sur la phytopathologie…………..…………………………….………… 7

4.1. Maladies abiotiques (non parasitaires)……………………………..………….. …..7

4.2. Maladies biotiques (parasitaires)……………………………………………………7

4.2.1. Virus………………………………………………………………………..……..7

4.2.2. Bactéries…………………………………………………………………….…….7

4.2.3. Champignons……………………………………………………………...………8

4.2.4. Principales maladies fongiques de la tomate …………………………..…………8

I.5. Les champignons qui transmisent par les semences…………………………………. 14

I.6.La lutte biologique ………………………………………………………………...…..14

6.1. Trichoderma:………………………………………………………………………..14

6.1.1. Généralités sur Trichoderma……………………………………………………………. 14

6.1.2. Taxonomie de Trichoderma…………………………………………..…………..14

6.1.3. Mode d’action de Trichodermasp………………………………………....………15

I.7. La lutte chimique ……………………………………………..……………………….15

I.8.Les fongicides :…………………………………………………………………………15

8.1. Définition …………………………………………………………….………………15

8.2. Particularités des fongicide ……………………………………….………………….16

8.3. Caractéristiques des fongicides :………………………………………………...……16

8.3.1. Familles ou groupes chimiques des fongicides………………………………...……..16

8.3.2. Dérivés de l’acide carbamique:…………………………………………………….…16

8.3.2.1.Les Benzimidazoles…………………………………………………………..……..16

8.3.2.2. Les Carbendazimes…………………………………………………………………16

8.3.2.2. Les Carbendazimes…………………………………………………………...…….16

8.3.2.3. Le Thiophanate-méthyle………………………………………………………...….16

8.4. Comportement des fongicides au niveau de la plante…………………………..………16

Chapitre II : Matériels et méthodes II.1. Matériel …………………………………………………………………………………19

1.1. Echantillonnage………………………………………………………………………..19

1.2. La souche fongique utilisée pour la lutte biologique………………………………….19

1.3. Les milieux de cultures……………………………………………..…………………19

1.4. Les fongicide utiliser pour la lutte chimique …………………………....……………19

II.2. Méthode expérimentales :…………………………………………………………...…..21

2.1. Calculer le Pourcentage de germination des graines de tomate ………………………21

2.1.1. Méthode du dessus du papier………………………………………………..………21

2.1.2. Détermination du taux d’humidité …………………………………………...……..22

2.2. Isolement des champignons accompagnants extérieurement les grains de tomate …...22

2.2.1. Préparation de la solution mère …………………………………………………..…22

2.2.2. Isolement sur milieu PDA……………………………………………………...…….23

2.2.3. Isolement des champignons accompagnants intérieurement les grains de tomates …23

2.3. Purification sur milieu PDA……………………………………………………...…….24

2.4. Identification des champignons isolés ………………………………………...………24

2.4.1. Identification macroscopique ………………………………………………….…….24

2.4.2.Identification microscopique ……………………………………………………...….25

2.5. Antagonisme in vitro de Trichoderma sp. à l’égard des champignons pathogènes

Isolés…………………………………………………………………………………...25

2.5.1. Confrontation directe………………………………………..……………………….25

2.5.2. Confrontation à distance…………………………………………………………….26

II. 8. Effet de fongicide sur la croissance mycélienne des souches pathogènes…………..…27

Chapitre III : Résultats et discussion III.

Résultats ………………………………………………………………………...……………29

III.1. Estimation de taux de germination ……………………………………………………..29

III.2. Estimation du pourcentage de l’humidité ……………………………………………..29

III.3.1. Isolement des champignons accompagnants extérieurement les grains de tomate…...29

3.2. Isolement des champignons accompagnants intérieurement les grains de tomate ….29

III.4. identification des mycètes isolés …………………………………………………….…30

4.1. Comparaison entre la microflore de deux échantillons des grains étudiés selon le type

d’isolement (intérieur ou extérieur)…………………… ……………………………32

III.5. Antagonisme in vitro de Trichoderma sp. à l’égard des champignons isolés ……...33

5.1. Confrontation directe …………………………………………………………..……33

5.2. La confrontation à distance ………………………………………………………….34

III.6. Effet de fongicide sur la croissance mycélienne des souches pathogènes………….….36

III.7. Discussion. ………………………………………………………………………….….38

7.1. Isolement des champignons accompagnants extérieurement et intérieurement les

grains de tomate…………………………………………………………………………...….38

7.2. Antagonisme in vitro de Trichoderma sp. à l’égard des champignons isolés….... 38

7.3. Effet de fongicide sur la croissance mycélienne des souches pathogène……………39

Conclusion générale ………………………………………………….……..…41

Références bibliographique ………………………………………………….42

Annexe ……………………………………………………………………..….49

Résumé

Liste des figures

N de figure Titre de figure Page

1 La tomate (lycopersicum esculentum) 3

2 Structure de la graine de tomate. Vue générale(1) ; coupe

longitudinale(2) 5

3 Symptômes de l’Alternariose sur feuille et tige de tomate 9

4 Symptômes de la pourriture grise sur tige et fruit de la tomate 9

5 Symptômes de la fusariose vasculaire de la tomate 10

6 Symptômes du milidiou sur feuille et fruits de tomate 10

7 Symptômes de l’Oïdium néolycopersici sur des feuilles de

tomate 11

8 Symptômes de Passalorafulva sur une de tomate 11

9 Symptomes de la Stemphyliose sur une feuille de tomate 12

10 Symptomes de trichotheciumroseum sur un fruit de tomate 12

11 Symptomes de l'Anthracnose sur fruit de tomate 13

12 Sclérotes murs sur une tige de tomate 13

13

Action du fongicide par pénétration. Pénétration de la matière

active vers les assises cellulaires sous-jacentes (produits

pénétrants).

17

14

Action du fongicide par contact. La matière active ne franchit

pas la cuticules et agit uniquement sur les organes externes du

champignon (spores-appressoria).

17

15

Action systémique du fongicide .Pénétration par la cuticule,

puis déplacement uniquement par la sève brute (xylène).La

systémique vers le bout des feuilles est dit « ascendante ou

acropète ».L’élément « moteur »du déplacement est

l’évapotranspiration

18

16 Les grains de tomates utilisés dans cette étude 19

17 Test de germination des semences sur le dessus de papier

absorbants dans des boites de pétri 21

18 Agitation de solution mère pendant 5min. 22

19 Les étapes d’isolement extérieur des champignons sur milieu

PDA 23

20 Les étapes d’isolement extérieur des champignons sur milieu 24

Liste des figures

PDA

21 Conformation entre le pathogène et l’antagoniste par contact

direct sur milieu gélosé. 26

22 Confrontation à distance entre l’isolat pathogène et

Trichoderma sp. 27

23 Les étapes de préparation solution fongicide-PDA. 28

24 N’ombres d’isolats fongiques à partir des graines étudiés. 29

25 Les genres fongiques isolés à partir des grains étudiés 31

26 Nombre des isolats fongiques internes et externes des deux

échantiollons étudiés. 32

27 Influence de confrontation directe de Trichoderma sp contre les

champignons pathogènes. 33

28 Influence de confrontation à distance de Trichoderma sp contre

les champignons pathogènes. 36

29 L’influence de Methylthiophanate sur la croissance mycélienne

des souches pathogènes. 36

30 L’influence de Melody duo sur la croissance mycélienne des

souches pathogènes. 37

31 L’influence de Milor duo sur la croissance mycélienne des

souches pathogènes.. 37

32 L’influence de Curenox duo sur la croissance mycélienne des

souches pathogènes. 37

Liste des tableaux

N de tableau Titre de tableau Page

1 Composition biochimique des graines de tomate………………….. 4

2 La classification de la tomate…………………………………….. 5

3 Evolution de la tomate en Algérie entre 2001-2009………………. 6

4 les principales maladies de la tomate……………………………… 8

5 les fongicide utiliser pour la lutte chimique……………………….. 20

6 Le pourcentage de germination de graine de tomate……………... 30

7

Nombre et pourcentage globale des espèces fongiques isolés à

partir des deux Variétés étudiées……………………………….

31

8

Répartition des isolats fongiques selon les deux échantillons

étudiés……………………………………………….

32

9

L’effet de Trichoderma sp sur la croissance mycélienne de chaque

agent pathogène après 7 jours d’incubation par confrontation

directe……………………………………………

34

10

l’effet de Trichoderma sp sur la croissance mycélienne de chaque

agent pathogène après 7 jours d’incubation par confrontation

indirecte……………………………………………

35

Liste des abréviations :

Abréviation

Signification

PDA

°C

g

min

ml

L

mm

h

MEA

T

%

In

Ex

I

C

ITCMI

Potato Dextrose Agar

Degré de cilsuce

gramme

minute

millilitre

Litre

millimètre

heure

Malt Extract Agar

Température

Pourcentage

Intérieur

Extérieur

Inhibition

Concentration

Introduction

Introduction

1

Introduction.

La culture maraichère est considérée comme une principale ressource alimentaire à

l’échelle mondiale. La situation alimentaire actuelle de l’Algérie nécessite une meilleure prise

en charge de l’amélioration de la production agricole de large consommation de la tomate

D’un point de vue agronomique ces cultures sont aisées et d’un point de vue commercial,

elles sont très appréciées par les populations algériennes.

Dans le monde entier, la tomate occupe la deuxième place après la pomme de terre, que ce

soit dans la production ou la consommation [ Trichpoulou et Lagio ( 1997) ;Lemoines,

(1999)] . Les pays méditerranéens sont consommateurs en toutes saisons (Benkamoun,

2009). Attestent qu’en France, elle est le premier légume frais consommé avec 14 Kg par

personne et par an, loin derrière les Grecs qui consomment 56Kg de tomates fraîches par an et

par personne. En Algérie, elle est beaucoup plus consommée sous sa forme industrielle. Bacil

(1993) estime que sa consommation annuelle sous forme concentrée avoisinerait les 04 Kg

par an et par habitant.

La production de tomate n’a cessé de progresser régulièrement ces dernières décennies dans

le monde, elle est passée de 48 millions de tonnes en 1978 à 124 millions en 2006 (Blancard

et al., 2009). Pour son importance elle est amenée à croître dans les prochaines années,

notamment, du fait de l'incitation à consommer d'avantage de fruits et de légumes.

Les producteurs sont confrontés à diverses maladies qui s’attaquent aux cultures. De

nombreuses cultures vivrières et de rente sont ravagées par des parasites, dont les plus

notoires sont les champignons phytopathogènes. Les produits chimiques utilisés à l’heure

actuelle pour lutter contre les champignons phytopathogènes présentent des inconvénients.

La plupart d’entre eux, sont toxiques pour les utilisateurs qui entrent en contact avec

la substance de préservation. Cela justifie les recherches actuellement menées dans ce

domaine, qui tendent à mettre au point de nouvelles méthodes de lutte moins nuisibles pour

l’environnement. De ce fait, la lutte biologique contre ces moisissures phytopathogènes,

s'avère très importante, et ce par l'utilisation de microorganismes producteurs de substances à

effet antifongique. La lutte biologique se considère comme une alternative très prometteuse, à

cause de l’ubiquité naturelle des agents microbiologiques dans les écosystèmes. Ces dernières

se caractérisent par leur grande variété, leur dissémination facile, leur spécificité d’action

ainsi leur persistance dans l’environnement (De Kouassi, 2001)

Introduction

2

L'objectif de ce travail vise à démontrer la flore fongique accompagnant

extérieurement et intérieurement de deux variétés de graines de tomate et, essayer d’évaluer

l’activité d’inhibition d’une souche de Trichoderma sp. et quatre fongicides chimiques sur

le développement mycélien des souches fongiques phytopathogènes isolés.

L’approche a été réalisée en trois grands chapitres :

Le chapitre I : une synthèse bibliographique, est réalisée dans une étude générale sur

la tomate et les champignons qui ont relation avec elle.

Le chapitre II : une description des protocoles expérimentaux utilisés pour

l’isolement, la purification et l’identification des champignons accompagnants les

graines de tomate et essai in vitro de lutte biologique et chimique de ces souche

phytopatogènes.

Le chapitre III : consacrée à la présentation des résultats obtenus et à leur

interprétation et discussion.

Chapitre I synthèse bibliographique

3

I.1.Solanacées:

Solanacées a longtemps occupé un grand intérêt pour de nombreux chercheurs, éleveurs et

consommateurs. En effet, la famille des solanacées est composée de plus de 3 000 espèces,

dont la pomme de terre porteuse de tubercules (Solanum tuberosum), un certain nombre de

légumes fruitiers (tomate, aubergine [Solanum melongena] et poivrons [Capsicum annuum]),

des plantes ornementales (Pétunia [pétunia hybrida], Nicotiana), plantes à feuilles comestibles

(Solanum aethiopicum, Solanum macrocarpon) et plantes médicinales. Les solanacées sont le

troisième taxon végétal le plus important sur le plan économique, le plus précieux en termes

de cultures maraîchères et la plus variable des espèces cultivées en termes d'utilité agricole.

En plus de leur rôle de sources de nourriture importantes, de nombreuses espèces de

solanacées ont un rôle de plantes modèles scientifiques, comme la tomate et le poivre, pour

l'étude du développement des fruits (Lukas., 2005).

I.2.La tomate :

2.1. Historique :

La tomate est originaire du nord-ouest de l’Amérique du sud (Colombie, Equateur, Pérou,

nord du Chili) ; introduite en Europe, Italie, Espagne au XVI siècle comme plante

ornementale. Elle est cultivée depuis le XVIII siècle pour son fruit, consommé comme

légume. La plante étant de la même famille que la belladone, ses fruits n’étaient pas

considérées comme comestible, mais utiles en médecine (Jean-Claude et al., 2003).

Fig.1.La tomate (lycopersicum esculentum)


4

2.2. Nomenclature et classification :

En 1753, le botaniste suédois Linnaeus l’a nommée Solanumlycopersicum, mais 15 ans plus

tard Philipe Miller a remplacé ce nom par Lycopersicomesculentum(Taylor, 1986).Bien que

les taxonomistes aient récemment réintroduits son nom original Solanumlycopersicum,

(HeiseretAnderson,.1999).

Tab.1.La classification de la tomate.

Selon APG III (2009),la classification de la

tomate qui suivie

Cronquist (1981) ; Gaussen et al. (1982)

proposèrent la classification de la tomate

qui estlargement suivie :

Kingdom… Plantae

Division …...Angiosperms

Class……….Eudicots

Clade………Coreeudicots

Clade ….......Asteridae

Clade ………Lamiids

Order………Solanales

Family……..Salanaceae.

Genus……..Solanumoulycopersicon

Species.…..lycopersiconesculentumMill

Kingdom… Plantae

Division …Trachenobionta

Class… …Magnoliophyta

Clade…......Magnoliopsida

Clade…......Asteridae

Order……..Solanales

Genus………….Solanum ou lycopersicon

Espèce …lycopersiconesculentumMill.

2.3. Description botanique de la tomate :

La tomate (lycopersiconesculentum) est une plante de la famille des solanacées, comme la

pomme de terre-qui a la même origine géographique -, l’aubergine, le poivron, le tabac, ou

encore la morelle douce-amère ou la belladone, toutes deux toxiques. (Jean- marie, 2007) en

plus de ca La tomate est une plante herbacée annuelle, appartenant au groupe des légumes-

fruits (Baba Aissa, 1999).

Chapitre I

2.4. Production et Importance économique de la tomate en Algérie

La tomate (Lycopersicum

secteurmaraicher en Algérie. Elle est considérée à juste que la pomme de terre, l’ail et

l’oignon, quiforment un groupe d’espèces prioritaires. Sa production est en plein expansion, à

la faveur denombreux programm

développementntrural. A cet effet, de nouvelles techniques de productions sont introduites ces

dernières annéespermettant plus de

Tab.2. Evolution de la

I.3. Les graines :

Les graines sont des sources importantes de

sont souvent utilisées directement comme

«graines semences» sont d’une grande

puisqu’elles influencent considérablement la

important et incontournable dans le développement de

l’amélioration de la productivité

de 3 à 5 mm de long et de 2 à 4 mm de large. L’embryon est enroulé dans l’albumen. Le poids

de mille graines est en moyenne de 3 g

Fig.2.Structure de la graine de tomate. Vue générale(1)

1

synthèse bibliographique

5

et Importance économique de la tomate en Algérie:

esculentum Mill) occupe une place privilégiée dans le



la faveur denombreux programmes mis en place par le Ministère de l’agriculture et du

ntrural. A cet effet, de nouvelles techniques de productions sont introduites ces

dernières annéespermettant plus de rendement à l’hectare (Tableau 3) (FAO, 2008).

volution de la tomate en Algérie entre 2001-2009 (Anonyme 2, 2009)

Les graines sont des sources importantes de matières premières végétales et industrielles qui

sont souvent utilisées directement comme ressource alimentaire et/ou comme semences.

«graines semences» sont d’une grande importance socio-économique et agronomique

puisqu’elles influencent considérablement la production végétale. Elles jouent un rôle

et incontournable dans le développement de l’agriculture notamment dans

la productivité. Nombreuses, en forme de rein ou de poire, poilues, beiges,


de mille graines est en moyenne de 3 g (Shankara, 2005).

Structure de la graine de tomate. Vue générale(1) ; coupe longitudinale(2).

2

synthèse bibliographique

Mill) occupe une place privilégiée dans le



es mis en place par le Ministère de l’agriculture et du

ntrural. A cet effet, de nouvelles techniques de productions sont introduites ces

FAO, 2008).

(Anonyme 2, 2009).

matières premières végétales et industrielles qui

ressource alimentaire et/ou comme semences. Les

économique et agronomique

production végétale. Elles jouent un rôle

l’agriculture notamment dans

Nombreuses, en forme de rein ou de poire, poilues, beiges,


; coupe longitudinale(2).


6

3.1. Origine et importance :

La production et l'utilisation des semences de qualité revêtent une grande importance

puisqu'elles permettent une augmentation rapide et substantielle de la production à condition

de faire intervenir des facteurs de production complémentaires comme l'irrigation et la lutte

contre les maladies et ennemis de culture (Feistritzer, 1979).

Pour toutes les espèces, la semence représente à la fois le progrès génétique qui détermine le

potentiel de la culture et la valorisation de la récolte. Selon Kapata (2000), elle conditionne

tous les autres investissements et la réussite de la production, quantitative et qualitative de

même que son usage représente le meilleur moyen pour acheminer le progrès génétique aux

champs des planteurs.

3.2. Composition chimique de la graine :

On a trouvé que les graines de tomate contiennent :

Tab.3. Composition biochimique des graines de tomate (Amalou et al., 2013).

Constituants

quantité

Eau (%)

6.97

Matière sèches (%)

93.3

Cendres (%)

4.16

Matière azotées totales(%)

3.95

Protéines (%)

24.72

Lipides (%)

26.2

Sucres totaux (%)

4.25

Cellulose brute (%)

24.24

Béta-Carotène (mg/100g)

1.76

Lycopene (mg/100g)

2.76


7

3.3. Stockage des graines :

Les graines sont en général stockées dans desconditions physiologiques et

environnementalesqui favorisent le maintien ou la perte de leurcapacité germinative et de leur

vigueur. La vigueurdes graines étant définie par l’ISTA (International,SeedTesting

Association) comme étant la sommedes propriétés de la graine qui déterminent leniveau de

l’activité et de la performance desgraines ou lots de graines pendant la germinationet

l’émergence des plantules (Aya et al., 2011).

I.4. Généralités sur la phytopathologie :

La phytopathologie est la science qui s’intéresse aux maladies des plantes, elle regroupe

différents types d’études tels que la botanique, la microbiologie, l’écologie et la physiologie

végétal, etc. L’organisme des végétaux tout comme celui des animaux, est sujet à des

maladies, qui peuvent inhiber le développement et le rendement de ces plantes. Parfois ces

maladies affectent l’économie et la santé publique (Philippe, 2003).

La maladie est définit comme une succession de réponses invisibles et visibles des cellules et

des tissus d’une plante, soit à cause d’un microorganisme ou à une modification d’un ou de

plusieurs facteurs climatiques. Ces modifications induisent des bouleversements de forme, de

fonction ou de leur intégrité. L’effet de ces variations sur la plante provoque la perte d’une ou

de plusieurs parties de la plante et conduit à sa mort totale (Messiaen et al.,1991).

4.1. Maladies abiotiques (non parasitaires) :

Sont très variées entres autres : la toxicité minérale, l’excès d’humidité, déficience

nutritionnelle en eau, variations de températures, pollution de l’air atmosphérique,

oxygénation et le manque ou excès de la lumière.

4.2. Maladies biotiques (parasitaires) :

Sont dues à des microorganismes, les agents pathogènes peuvent être:

4.2.1. Virus :

sont des agents infectieux non-vivants, qui envahissent leurs hôtes sensibles de façon

généralisée ou systémique. Les seules parties exemptes de virus sont les méristèmes logés à

l’apex des tiges et à l’intérieur des bourgeons. Ils peuvent provoquer des mosaïques dans les

parenchymes, qui conduisent à l’apparition des symptômes nécrotiques. Le virus est transmis

par tubercules, rhizomes ou boutures à tous ses descendants (Messiaen et al., 1991).

4.2.2. Bactéries :

sont des organismes vivants unicellulaires, procaryotes, ubiquitaires et sont présentes dans

tous les types de biotopes rencontrés sur la terre (Messiaen et al., 1991) . Il y a environ 40


8

millions de cellules bactériennes dans un gramme de sol (Marie, 2004). Les bactéries

phytopathogènes sont classées en sept genres à savoir : Pseudomonas, Xanthomonas, Erwinia,

Agrobacterium, Streptomyces, Clavibacteret Xylella.

4.2.3. Champignons :

Parmi 100000 espèces de champignons microscopiques ou mycètes connues, 2% sont des

parasites phytopathogènes et parfois des parasites obligatoires (Messiaen et al., 1991 ) . Par

exemple, les champignons de l'oïdium sont des parasites obligatoires. Parmi les agents

phytopathogènes :

-Plasmodiophorabrassicae(hernie du chou)

-Phytophtora (mildiou)

-Fusarium, Giberella(maladies vasculaires)

-Ustilago(charbon), Puccinia, Uromyces(rouille) (Michel, 2004)

Tab.4. les principales maladies de la tomate (Jones et al., 1991).

Maladies bactérienne Les viroses

Le chancre bactérien:Causée par

ClavibacterMichiganensissubsp.michiganensis.

La moucheture des feuilles : causée par

Pseudomonassyringaepv.syringae.

La tache bactérienne : causée par

pseudomonassyringeapv.tomato.

La moucheture bactérienne : causée par

Xanthomonascampestris n pv. Vesicatoria.

Le flétrissement bactérien : causé par

Ralstontasolanacearum.

La moelle noire : causée par

pseudomonascorrugata.

La pourriture molle bactérienne:causée par

Erwiniacaratovorasubspcarotovora.

La mosaique de la tomate causée par le

virus de la mosaique de la tomate (ToMV)et

par d’autres virus non spécifiques qui

attaquent la tomate.

La maladie bronzée de la tomate : virus

de la maladie bronzée de la tomate (TSWV)

Maladie des feuilles jaunes en cuillére de

la tomate (Tyle):virus des feuilles jaunes en

cuillére d la tomate (TYLCV)

La jaunisse apicale de la tomate:virus de

la jaunisse apicale de la tomate.

4.2.4. Principales maladies fongiques de la tomate :

Les maladies fongiques de la tomate les plus répandues sont les suivantes :


9

4.2.4.1.Alternariose:

Les agents causaux Alternariaspp. de cette maladie sont ubiquistes et peuventatteindre toutes

les parties de la plante, feuille, tige, collets, fruits et même les graines(Jalal.,

2010).Alternariaspp. Peuvent se manifester à différents stades dedéveloppement de la culture

(plantule et plante adulte)(Fig.3).

Fig.3 : Symptômes de l’Alternariose sur feuille et tige de tomate(Hansen, 2009).

4.2.4.2. Moisissure grise :

Cette maladie a comme agent causal Botrytis cinerea. Qui est responsablede la pourriture

grise (Fig.4).Il est observé sur tomate dans pratiquement toutes les zonesde production de ce

fruit-légume dans le monde. La conservation de ce microorganisme se faitsous forme de

conidies, mycélium et sclérotes (Kadrietal., 2014). B. cinerean’attaque le fruit qu’à partir

d’unebase nutritive constituée d’un organe sénescent qu’il colonise (Hmounietal., 2003).

Fig.4. Symptômes de la pourriture grise sur tige et fruit de la tomate (Egel et Saha, 2015)

4.2.4.3. Fusariose:

Les Fusariumsont responsables de flétrissements vasculaires par leur envahissement

des vaisseaux du xylème (Fig. 5). La tomate peut être attaquée par deux maladies fusariennes

différentes, la flétrissure fusarienne causée par Fusarium oxysporum lycopersici(Snyder


10

Hansen., 1940) "FOL" et la pourriture de la racine et du collet causées par

Fusariumoxysporumradicis-lycopersici(Jarvis et Shoemaker, 1979).

Fig.5. Symptômes de la fusariose vasculaire de la tomate (Kenneth, 2014).

4.2.4.4. Mildiou :

Le mildiou est l'une des principales maladies aériennes de la culture de la tomate

notamment lorsque les conditions sont fraiches et humides. L'agent phytopathogène est

L’oomycète Phytophthora infestons dont la dissémination peut se faire par le vent ou la pluie.

Au cours de la progression de la maladie, le feuillage devient peu à peu jaune puis brun,

s’enroule puis se ratatine avant de mourir.Des taches brunes apparaissent et unemince couche

de mycélium peut se former lorsque les conditions climatiques sont humides (Rotemetal.,

1970), jusqu'à que les fruits deviennent pourris(Fig.6)

Fig.6. Symptômes du milidiou sur feuille et fruits de tomate (Kenneth, 2011).

4.2.4.5. Oïdium :

Les agents causaux de l'oïdium chez la tomate sont des parasites obligatoires aériens,en

nombre de deux :Leveillula taurica(Arnaud, 1921), et Oïdium neolycopersici.Ces

champignons provoquent des taches poudreuses blanches ou jaunes sur la face

supérieure des feuilles adultes (Fig. 7), un feutrage blanc poudreux à la face inférieure et le

limbe peut se replier vers le haut. Les parties atteintes brunissent ultérieurement, se nécrosent


11

au centre, se dessèchent et se déchirent facilement (Aydi, 2013).

Fig.7. Symptômes de l’Oïdium néolycopersici sur des feuilles de tomate (Babadoost,

2014).

4.2.4.6. Cladosporiose :

Cette maladie, appelée également «moisissure olive», est très spécifique à la tomate.

L'agent causal est Passalora fulva, il semble présenter de grandes affinités pour la tomate, en

particulier pour ses folioles. Il se manifeste par des taches jaunâtres, chlorotiques qui se

nécrosent progressivement sur la face supérieuredes feuilles et par une moisissure grise

verdâtre sur la face inférieure (Fig. 8)(BraunetCrous, 2003).

Fig.8. Symptômes de Passalora fulva sur une de tomate (Egel et Saha., 2015).

4.2.4.7. Stemphyliose :

Cette maladie est mondialement répartie et elle est particulièrement grave dans leszones de

production tropicales et subtropicales humides. La stemphyliose est donc une maladie foliaire

dont les symptômessont classiquement associés à trois espèces d'ascomycètes différentes de

Stemphylium. S.solani,S. lycopersiciet S. botryosumf. sp. Lycopersici. Les spores de

cesderniers sont transportées par le vent, la pluie, le brouillard ou la rosée. Cette maladie se


12

manifeste par des taches grises sur les feuilles (Fig. 9) qui deviennent sèches et cassantes par

la suite (Weber, 1930).

Fig.9. Symptomes de la Stemphyliose sur une feuille de tomate (Cerkauskas, 2005).

4.2.4.8. Pourriture rose :

Cette maladie est due à Trichothecium roseum(Link, 1809).Ce champignon semble plus

confidentiel sur tomate sur laquelle il a été rapporté notamment sur des fruitsproduits sous

abri sur fruit, le champignon est à l'origine de lésions circulaires imbibées d'eau qui peuvent

êtreauréolées d'une zone brune et elles se couvrent d'une moisissure rose pâle recouverte de

blanc(Fig.10). Le fruit devient par la suite mou et émis une odeur aigre et tombe

prématurément (Dalbello, 2008).

Fig.10. Symptomes de Trichothecium roseum sur un fruit de tomate (Dalbello. 2008).

4.2.4.9. Anthracnose :

Cette maladie, induite par Colletotrichum coccodes (Wallr., Hughes, 1958), est trèsredoutée

par les producteurs de tomate d'industrie notamment lorsqu'elle touche les fruits.On parle dans

ce cas de «l'anthracnose» ou de la pourriture racinaire ou maladie du charbon. Il occasionne

desdégâts sur les racines, les feuilles, les tiges et les fruits (Yonghao, 2013).Il seconserve

dans le sol sous forme de sclérotes et hiverne sur les débris des végétaux infectés et même

dans les graines.Les symptômesde cette maladie sont caractérisés par l'apparition de taches


13

concaves, rondes ou allongées, bien délimitées, de couleur brun-noir avec des ponctuations

noires au centre (Fig. 11). Les tissus se dessèchent, flétrissent et finissent par mourir pendant

la croissance.

.

Fig.11. Symptomes de l'Anthracnose sur fruit de tomate (Mark et Edmunds, 2005).

4.2.4.10. Sclérotiniose:

C'est une maladie fongique qui s'appelle également "Pourriture du Collet" ou"Pourriture

Blanche" est induite chez la tomate par deux agents :Sclerotinia sclerotiorum de (Bary,1884)

ou Sclerotinia minor ( Jagger, 1920).Ces dernières peuvent se former à l’intérieurcomme à

l’extérieur de la tige dans une large gamme de températures allant de 0 à 30 °C(Achbani et

al., 1995).Toutes lesparties aériennes présentent des taches jaunâtres ou noirâtres (Fig. 12), le

feuillage se flétrit,les fruits et la plante finit par pourrir entièrement.

Fig.12. Sclérotes murs sur une tige de tomate (Babadoost, 2014).


14

I.5. Les champignons qui transmissent par les semences :

Les champignons transmis par les semences sont de nature très variée .certains sont de

véritables parasites, d’autres ne sont que des parasites secondaires ou opportuniste .pouvant

même parfois se comporter en saprophytes. Des saprophytes sensu stricto sont également

fréquemment rencontrés dans les lots de semences .Certaines évoluent en parasites au cours

du stockage si les conditions ambiantes leur sont favorable :c’est le cas des penicillium et des

Aspergillus. Des parasites plus inféodés à une espèce donnée peuvent également évoluer au

cours du stockage notamment quand les semences sont conservées dans de mauvaises

conditions, et d’autre champignons pathogènes comme Alternerai sp, Fusarium sp, Phoma

glomerata ,Chaetomium sp (Rémi, 1997).

I.6.La lutte biologique :

L'ACTA définie la lutte biologique comme étant « une méthode qui consiste à

combattre un organisme nuisible par l'utilisation de mécanisme naturels appartenant soit au

règne animal soit au règne végétal, ou qui en décrivent ».

Cette méthode consiste à utiliser différents organismes vivants, appelés auxiliaires, ou

leurs produits, pour prévenir ou réduire les dégâts causés par les bio-agresseurs. Il s’agit

d'utiliser la biodiversité et les ennemis naturels des espèces nuisibles. (Fernendes ,2005).

La lutte biologique est un essor constant car elle présente une alternative à la lutte chimique.

6.1. Trichoderma:

6.1.1. Généralités sur Trichoderma :

Le nom Trichoderma est donné à un genre de micro-organismes classé parmiles ascomycètes.

Dans les deux dernières décennies, le nombre des espèces de Trichoderma

reconnues a triplé, atteignant 100 (Druzhininaet al., 2006). Trichoderma spsontconnus en

tant qu’agents de lutte biologique contre les agents phytopathogènes et commesource

d’enzymes et de métabolites d'intérêts industriels (Sadfi et al., 2008). Enfait, les métabolites

antifongiques sont des composés tels que les peptaïbols (trichokonines,

trichosporines, hypomurocines et trichorovines) (Benkada, 2006) ou les mycotoxines

comme les trichothécènes (Tabuc, 2007).

D’autre part, selon le CRCC, les Trichoderma ont un intérêt agro-alimentairedans la

production de cellulase et d'hémicellulase et comme exhausteur d'arômes.

6.1.2. Taxonomie de Trichoderma:

Selon Bisset (2004) (in Benkada, 2006), la position taxonomique desTrichodermasp. est

comme suit:

Embranchement…………….. Amastigomyccètes


15

Sous embranchement…………Ascomycètes

Classe …………………….. ….Sordariomycètes

Ordre …………………… …...Hypocréales

Famille …………………… …Hypocraceae

Genre …………………… ….Hypocrea=Trichoderma

Espece……………………….... sp

6.1.3. Mode d’action de Trichoderma sp:

Il peut utiliser :

L’antibiose : mécanisme résultant de la production de substances qui agissent comme

des antibiotiques et qui inhibent la croissance de l’agent pathogène.

La compétition : mécanisme qui se manifeste par l’aptitude de Trichoderma à utiliser

les mêmes ressources du milieu (aires d’alimentation, sites de développement) que les

champignons pathogènes mais Trichodermaemploie ce mode d’action surtout pouroccuper les

lieux avant l’arrivée des indésirables.

Le parasitisme : résulte de la destruction de l’agent pathogène lorsque de

Trichoderma s’enroule autour de celui-ci soit en l’étranglant ; en pénétrant àl’intérieure

et ou en lui injectant des substances (enzymes) qui le détruisent.

I.7. La lutte chimique :

Les traitements chimiques sont largement utilisés pour combattre les maladies fongiques et

bactériennes. Pour lutter contre les pathogènes des plantes, les produits les plus utilisé sont

les fongicides (non systémiques, de contact ou systémiques, pénétrants)(Lepoivre, 2003).

I.8.Les fongicides :

8.1. Définition :

Selon Simon et al(1994) et Rocher(2004), Les fongicides représentent l‘ensemble des

substances actives contre les champignons, certains chercheurs classent également dans cette

catégorie, les produits ayant une action contre les bactéries, virus ou mycoplasme, c‘est le

groupe de pesticide le moins utilisé de part par le monde.

Les fongicides sont des substances chimiques ou biologiques qui tuent ou neutralisent les

champignons pathogènes, sont appelés aussi mycocides ou produits antifongiques, qui

peuvent être de nature abiotique (produits chimiques) ou biotique (bactérie, champignon), les

fongicides chimiques sont de loin les plus utilisés et sont le plus souvent de nature

synthétique. Les fongicides chimiques sont commercialisés sous l‘une des formes suivantes :

poudre mouillable, suspension concentrée, granule à disperser, concentré soluble ou liquide,


16

tous se caractérisent par une ou plusieurs matières actives qui sont à l‘origine même de

l‘efficacité de produit contre l‘agent fongique( Simon et al., 1994 ; Leroux, 2003).

8.2. Particularités des fongicide :

La particularité importante est la très haute activité spécifique vis-à-vis de sa cible :

préventive : inhibe la croissance des tubes germinatifs du champignon qui ne peut plus

pénétrer dans la feuille.

curative : est l’encapsulation des haustoria par la plante elle –même .les haustoria perdent

leur fonction de nutrition du champignon à la surface de la feuille.

8.3. Caractéristiques des fongicides :

8.3.1. Familles ou groupes chimiques des fongicides:

Selon Simon et al(1994) et Leroux (2003), comme un exemple pour les familles des

fongicides est:

Les carbamates : on peut les subdiviser en dérivés de l‘acide carbamique et de l‘acide

dithiocarbamique, les premiers sont des fongicides systémiques regroupant

essentiellement les benzimidazoles, les deuxièmes sont des fongicides de contact.

8.3.2. Dérivés de l’acide carbamique:

8.3.2.1.LesBenzimidazoles :

Lesazoles tels que les propiconazoles, cyproconazoles et les flusilazoles.

8.3.2.2. Les Carbendazimes :

Ils sont absorbés par les organes verts mais aussi par les racines des végétaux, et sont

véhiculés par le courant de la sève brute.

8.3.2.3. Le Thiophanate-méthyle :

Il se décompose en carbendazime s‘il est stocké trop longtemps, avec un mode d‘action très

voisin. Dérivé de l‘acide dithiocarbamique, il constitue un groupe très important, ils sont

dotés d‘un mode d‘action qui les rend très peu phytotoxiques.

8.4.Comportement des fongicides au niveau de la plante :

Selon Couvreur (2002), les fongicides peuvent être répartis en trois catégories principales, en

fonction de leur comportement au niveau de la plante : contact, pénétrant ou systémique :

Les produits de contact ou de surface:

Ces derniers ont une activité antifongique liée exclusivement à la fraction présente au niveau

des barrières externes des plantes (cuticule pour les parties aériennes) et ne subissent pas de

transfert interne. Ils ne peuvent pas franchir la barrière de la cuticule restant à la surface du

végétal (Fig. 1). Exp : les chlorothalonils, les dithiocarbamates et les famoxadone.


17

Les produits pénétrants:

Après un transfert limité dans les plantes (sans translocation par le xylème ou le phloème), ces

produits sont susceptibles d‘inhiber un parasite présent dans les tissus végétaux, cette

propriété est à l‘origine de leur activité curative vis-à-vis deschampignons parasites (Fig.2).

Ils sont pénétrants à l‘intérieur de la plante sans transport ultérieur,exp : le krésoxin-méthyl,

triphloxystrobine et les pyriméthanil.

Les produits systémiques :

D'après Couvreur (2002), après la translocation dans le système vasculaire via le xylème

et/ou le phloème, ils peuvent inhiber un parasite présent lors de la zone traitée. L‘absorption

foliaire est comme dans le cas du pénétrant, un phénomène de diffusion passive, définie

comme le mouvement des produits chimiques de la surface de la feuille à travers la cuticule

jusqu‘à l‘intérieur de la plante (Fig.13).

Fig.13. Action du fongicide par pénétration (Couvreur, 2002). Pénétration de la matière

active vers les assises cellulaires sous-jacentes (produits pénétrants).

Fig.14.Action du fongicide par contact (Couvreur, 2002). La matière active ne franchit pas la

cuticules et agit uniquement sur les organes externes du champignon (spores-appressoria).


18

Fig.15. Action systémique du fongicide (Couvreur, 2002).Pénétration par la cuticule, puis

déplacement uniquement par la sève brute (xylène).La systémique vers le bout des feuilles est

dit « ascendante ou acropète ».L’élément « moteur »du déplacement est l’évapotranspiration.

Chapitre II Maté

II.1. Matériel :

1.1.Echantillonnage :

Les graines de deux variétès de tomate

Chouhada, Oum-Elbouaghi(fig.16).

Fig.16. Les grains de tomates utilisés dans cette étude.

1.2. La souche fongique utilisée

La souche antagoniste de Trichoderma

prometteur de ce travail.

1.3. les milieux des cultures :

* On a utilisé le milieu (PDA.

*On a utilisé le milieu (MEA.malt

1.4. les fongicide utilisés pour la lutte chimique

On a utilisé pour la lutte chimique

duo ;Curenox ; Milor) qui ont été fourni

Elbouaghi(Tab.5).

Chapitre II Matériels et Méthodes

19

deux variétès de tomate téstées ont été fournies par les agriculteurs

(fig.16).

Les grains de tomates utilisés dans cette étude.

fongique utilisée pour la lutte biologique :

Trichoderma sp. utilsée pour la lutte biologique a été fournis par le

cultures :

potato- dextrose –agar) pour isoler et purifier

EA.malt- excract-agar) pour identifier les mycètes

pour la lutte chimique :

a lutte chimique quatre fongicides (Methyl Thiophanate 70

qui ont été fournies par l’ ITCMI de Bir Rogaa w.d’Oum

riels et Méthodes

ont été fournies par les agriculteurs de Bir- El

a été fournis par le

purifier les mycètes .

les mycètes isolés(annex1).

70 % ; Melody

Oum-

Chapitre II Maté

Tab.5. les fongicides utilisés pour la lutte chimique .

Nom chimique ou Commun

Methylthiophanate

Melody duo

Milor

Curenox


20

pour la lutte chimique .

Fongicide

Commun Definition

Est une fongicide systémique à un contact

curative, de famille Thiophanate

contient 70% de methiophanate comme

substance active, sa formulation est un

poudre mouillable, utiliser pour les vigne

des arbres fruitières et des culture

légumières.

Est une fongicide multi site agit de manière

préventive curative contienne 5,5%

Iprovalicarbe et 6,1% Propinèbe sou

poudre mouillable, agent de m

pomme de terre, tomate et la vigne

Est une fongicides systémique trouve forme

poudre mouillable , utiliser pour les maladies

du pomme terre, tomate et cucurbitacées

Est une fongicide à site multiple à

poudre muillable avec contact préventive,à

base de 88%d’oxychlorure de cuivre contre

le milidiou de la vigne et la po

terremaladie.

riels et Méthodes

Definition

Est une fongicide systémique à un contact

curative, de famille Thiophanate-Méthyl

contient 70% de methiophanate comme

substance active, sa formulation est un

poudre mouillable, utiliser pour les vigne

des arbres fruitières et des culture

st une fongicide multi site agit de manière

préventive curative contienne 5,5%

Iprovalicarbe et 6,1% Propinèbe sous forme

poudre mouillable, agent de mildiou de la

tomate et la vigne.

st une fongicides systémique trouve forme

poudre mouillable , utiliser pour les maladies

du pomme terre, tomate et cucurbitacées.

Est une fongicide à site multiple à nature de

contact préventive,à

base de 88%d’oxychlorure de cuivre contre

le milidiou de la vigne et la pomme de


21

II.2. Méthodes expérimentales :

2.1. Le calcul de Pourcentage de germination des graines de tomate :

On a utilisé la méthode du dessus du papier pour calculer la faculté germinative des

graines.Cette méthode est bien adaptée aux espèces ayant des semences de moins de 2mm de

diamètre , comme à légumineuses à petites graines . les semences sont mises à germer sur du

papier absorbant humide dans des conteneurs ayant un couvercle qui ferme bien pour éviter la

perte d’humidité , les boites pétri en verre ou plastique sont des conteneurs couramment

utilisé.Premièrement stérilises les boites en verre dans le four pasteur à180 C pendant

20minute ensuite calculer 200 graines de chaque échantillon, couper le papier absorbant à la

taille et la forme de boite puis placer le papier dans le fonds des boites, ajouter l’eau distiller

doucement jusqu'à le papier devienne humide et métier les graines par division en 50 graines

dans chaque boite .finalement couvrir les boites et s’assurer qu’il n’ y à pas de blocage de

l’aire résultent d’un axés d’humidité sur le couvercle , incuber les boites à 25 C à 6 jour est à

chaque foi ajouter l’eau distiller pour la germination des graines(Rao,2006) .

Fig.17. les étapes de test de germination des semences sur le dessus de papier absorbants dans

des boites de Pétri (Rao, 2006).

Chapitre II Maté

2.1.2. Détermination de taux d’humidité

Il est important de déterminer le taux d’humidité de semence

prédire de manière précise la vie potentielle

La méthode le plus utiliser pour estimer la pourcentage de l’humidité c’est la méthode

déshydratation à l’étuve , peser

graines dans l’étuve à 60 C pendant 24 heure puis laissée la refroidir dans le dessi

pendant 2 minute . après la mesure aux même temps poids sec répéter la technique 2 à 3 fois

et chaque fois mesurée le poids sec

Taux d’humidité (%) = P2-P3

P2-p1

P1=poids d’un boit pétri avec son couvercle

l’échantillon avant déshydratation

l’échantillon après déshydrations

2.2. Isolement des champignons accompagnants

2.2.1. Préparation de la solution mère

Dans un Erlen-meyer de 250 ml contenant 50 ml d’eau distillée stérile on ajoute

aseptiquement 1 g de chaque échantillon de graine, ce mélange est agité mécaniquement

pendant 5 minutes afin de mettre la solution mère qui utilise pour l’ensemencement en masse.

Fig.18. Agitation de solution mère pendant 5min.


22

taux d’humidité :

erminer le taux d’humidité de semence avant et après

prédire de manière précise la vie potentielle des graines.

plus utiliser pour estimer la pourcentage de l’humidité c’est la méthode

peser 1g de graine de tomate pour chaque échantillon et séchée les

C pendant 24 heure puis laissée la refroidir dans le dessi


et chaque fois mesurée le poids sec.

3×100 , dans laquelle

1

tri avec son couvercle ; P2=poids d’un boit pétri avec son couvercle et

l’échantillon avant déshydratation ; P3= poids d’un boit pétri avec son couvercle et

l’échantillon après déshydrations(Rao et al., 2006).

. Isolement des champignons accompagnants extérieurement les grains de tomate

.1. Préparation de la solution mère

meyer de 250 ml contenant 50 ml d’eau distillée stérile on ajoute


utes afin de mettre la solution mère qui utilise pour l’ensemencement en masse.

Agitation de solution mère pendant 5min.

riels et Méthodes

et après le stockage pour

plus utiliser pour estimer la pourcentage de l’humidité c’est la méthode

g de graine de tomate pour chaque échantillon et séchée les

C pendant 24 heure puis laissée la refroidir dans le dessiccateur


=poids d’un boit pétri avec son couvercle et

= poids d’un boit pétri avec son couvercle et

rieurement les grains de tomate

meyer de 250 ml contenant 50 ml d’eau distillée stérile on ajoute


utes afin de mettre la solution mère qui utilise pour l’ensemencement en masse.

Chapitre II Maté

2.2.2. Isolement sur milieu PDA :

Dans chaque boites de Pétri en verre on a additionné 2 gouttes d’acides acétique (10%) « Pour

éviter tout contamination bactérienne » et puis ensemencées 1ml de solution mère. Ensuite

couler le milieu PDA dans la boite de Pétri sous des conditions stériles

Après solidification chacune des boites est fermées aseptiquement en utilisant de para film

(Fig.19). Les boites sont incubées à une température 25 °C, avec un suivi de croissance toutes

les 24 heures pendant 7 jours (Benkada, 1994)

1.additionnement de deux gouttes d’acide acétique et ajouter d’1ml de solution mère.

2. coulage de

Fig.19. Les étapes d’isolement extérieur des champignons sur milieu PDA.

2.2.3. Isolement des champignons accompagnants intérieurement les grains de tomates

Les grains de tomate utilisées dans l’isolement intérieur ont été désinfectés en surface dans

l’eau de Javel (10 %) pendant 2min. Après deux rinçages à l’eau distillée stérile,

ont été séchées avec du papier absorbant stérile pour être, ensuite ensemencées. Sous des

conditions aseptiques, les grains désinfectés ont été placés directement, à l’aide d’une pince

stérile, dans des boites de Pétri contenant le milieu PDA à


23

.2. Isolement sur milieu PDA :



couler le milieu PDA dans la boite de Pétri sous des conditions stériles avec trois répétition,


Les boites sont incubées à une température 25 °C, avec un suivi de croissance toutes

(Benkada, 1994).

additionnement de deux gouttes d’acide acétique et ajouter d’1ml de solution mère.

2. coulage de milieu PDA dans les boites de Pétri.

Les étapes d’isolement extérieur des champignons sur milieu PDA.

des champignons accompagnants intérieurement les grains de tomates

utilisées dans l’isolement intérieur ont été désinfectés en surface dans

l’eau de Javel (10 %) pendant 2min. Après deux rinçages à l’eau distillée stérile,



des boites de Pétri contenant le milieu PDA à raison de dix grains par boite. Avec

riels et Méthodes



avec trois répétition,


Les boites sont incubées à une température 25 °C, avec un suivi de croissance toutes

additionnement de deux gouttes d’acide acétique et ajouter d’1ml de solution mère.

Les étapes d’isolement extérieur des champignons sur milieu PDA.

des champignons accompagnants intérieurement les grains de tomates :

utilisées dans l’isolement intérieur ont été désinfectés en surface dans

l’eau de Javel (10 %) pendant 2min. Après deux rinçages à l’eau distillée stérile, les graines



raison de dix grains par boite. Avec

Chapitre II Maté

trois répétitions (Fig.20).Les boites sont incubées à 25°C avec un suivi de croissance toutes

les 24 heures pendant 7 jours (Benkada, 1994).

1.désinfection de la surface des graine

3. Placement

Fig.20. Les étapes d’isolement des mycètes accompagnants intérieurement

les grains de tomate

2.3. Purification sur milieu PDA :

Après 6 jours d’incubation, les

PDA jusqu’à obtention de souches pures, incubées à 25°C avec un suivi de croissance toutes

les 24h. Cette pureté est contrôlée par observation microscopique des cultures.

2.4. Identification des champignons isolés

La détermination des genres et des espè

macroscopique) et à la morphologie (identification microscopique).

2.4.1. Identification macroscopique

D’après Guiraud, (1998) Les caractères morphologiques et culturaux sont déterminés après

ensemencement des souches pures sur milieu de MEA (annexe). Les souches sont prélevées


24

Les boites sont incubées à 25°C avec un suivi de croissance toutes

(Benkada, 1994).

la surface des graines. 2. séchage avec papier absorbant

3. Placement des grains sur milieu PDA, avec fermetur

des biotes à l’aide d’un para Film.

ement des mycètes accompagnants intérieurement

tomate sur milieu PDA.

2.3. Purification sur milieu PDA :

incubation, les isolats obtenues sont repiquées successivement


. Cette pureté est contrôlée par observation microscopique des cultures.

2.4. Identification des champignons isolés :

La détermination des genres et des espèces fait appel au caractère culturaux (

macroscopique) et à la morphologie (identification microscopique).

2.4.1. Identification macroscopique :

Les caractères morphologiques et culturaux sont déterminés après

mencement des souches pures sur milieu de MEA (annexe). Les souches sont prélevées

riels et Méthodes

Les boites sont incubées à 25°C avec un suivi de croissance toutes

séchage avec papier absorbant stérile

fermeture

ement des mycètes accompagnants intérieurement

successivement sur milieu


. Cette pureté est contrôlée par observation microscopique des cultures.

caractère culturaux (identification

Les caractères morphologiques et culturaux sont déterminés après

mencement des souches pures sur milieu de MEA (annexe). Les souches sont prélevées


25

sous formes de cylindre de 1cm de diamètre. Le cylindre est centré et chaque boite contient

une seul souche. L’incubation se fait dans les mêmes conditions que la purification

précédente.

L'identification se base essentiellement sur les caractères suivant :

- La vitesse de croissance (rapide, moyenne, lente)

- La texture des colonies.

- La couleur des colonies.

- La couleur du face et revers de la culture.

2.4.2.Identification microscopique :

L'identification microscopique est effectuée par un prélèvement d'un petit fragment mycélien

à l'aide d'une anse de platine stérile. Puis le fragment est déposé sur une lame en lui ajoutant

le Bleu de Méthylène, ensuite recouvert d’une lamelle ; L'observation est effectuée au

microscope optique aux différents grossissements (×10, ×40).

L'étude microscopique du mycélium est basée sur.

- L'absence ou présence de cloisons.

- Couleur des filaments mycéliens.

- Mode de ramification des cloisons.

- Différenciation des thallospores (Botton et al., 1990 ; Rémi, 1997).

2.5. Antagonisme in vitro de Trichoderma sp. à l’égard des champignons pathogènes

isolés.

L’activité antagoniste de Trichoderma sp. contre les souches pathogènes testées a été

abordée de deux différentes manières. Quatre boites de Petri ont été utilisées pour chaque

test, avec trois répétitions.

2.5.1. Confrontation directe.

Dans une boite de Pétri contenant le milieu PDA, deux disques de 10 mm de

diamètre constitués par l’inoculum du pathogène et celui de l’antagoniste ont été placés

à 60 mm l’un de l’autre, symétriquement par rapport au centre de la boite. Pour le

témoin, un disque mycélien du pathogène a été déposé dans un autre boit.

Après incubation cinque jours à 25°C et à l’obscurité (Hibar et al., 2005).

Chapitre II Maté

Fig.21. confrontation directe entre

2.5.2. Confrontation à distance.

Il consiste à repiquer l’antagoniste et l e pathogène dans deux boites séparées ; par la

sui te, un assemblage est réalisé par l a super position de deux boites,

le pathogène en haut (Fi g. 2). La jonction entre les deux boites est assurée par des

couches de parafilm afin d’éviter toute déperdition des substances volatiles. On expose

ainsi l’isolat de l’agent pathogène à l’infl

souche de Trichoderma sp.

Le témoin est formé par super position des deux boites, celle du haut contenant une

pastille de l’agent pathogène , alors que celle du bas ne contient que

boites sont soumises pendant 5 j ours à 25°C à l’obscurité

Le pourcentage d’inhibition (IC ) de la croissance mycélienne du pathogène par l’

antagoniste a été évalué selon la méthode s

IC% = (DT-DPA / DT) ×100.

DT : croissance diamétrale du témoin. DPA : croissance diamétrale mycélienne du

pathogène en présence de l’antagonis

Pathogène


26

ntation directe entre le pathogène et l’antagoniste sur milieu PDA

Confrontation à distance.


sui te, un assemblage est réalisé par l a super position de deux boites, Trichodermasp.



ainsi l’isolat de l’agent pathogène à l’influence des substances volatiles émises par l a


pastille de l’agent pathogène , alors que celle du bas ne contient que le milieu PDA. Les

boites sont soumises pendant 5 j ours à 25°C à l’obscurité (Dannis et Webster., 1971).


antagoniste a été évalué selon la méthode suivante :

DPA / DT) ×100.


pathogène en présence de l’antagoniste ( Sy A., 1976).

Milieu PDA

Antagoniste

riels et Méthodes

sur milieu PDA .


Trichodermasp.en bas et



uence des substances volatiles émises par l a


le milieu PDA. Les

is et Webster., 1971).



Antagoniste


27

Fig.22. Confrontation à distance entre le pathogène et l’antagoniste sur milieu PDA..

II. 8. Effet de fongicide sur la croissance mycélienne des souches pathogènes.

La dose conseillée a utilisé par le producteur de fongicide a été choisie pour préparer la

solution mère. On a pesé ( 0.12g de Methlythiophanate )(0,20g de Melody duo) ( 1g de

curenoxe)( 0,87g de Milor) et on ajoute chaque quantité pesée dans un erlenmeyer de 100ml.

Additionner 45ml de l’eau distillée stérile. Homogénéiser l'échantillon mère par agitation de

l’erlenmeyer à l’aide d’un vertex. Et à partir de cette dose on a préparé des suspension diluées

dans le milieu de culture PDA.

Dans une boite de Pétri contenant le milieu PDA- fongicide ,un disque de 10 mm de

diamètre constitués par l’inoculum du pathogène a été placé au centre de la boite. Pour

le témoin, un disque mycélien du pathogène a été déposé dans un autre boite contient le

PDA sans fongicide (fig.23).L’efficacité du fongicide est déterminée par le calcul du

pourcentage d’inhibition :IC% = (DT-DPA / DT) ×100.


pathogène en présence de fongicide (Attrassi, 2005).

Antagoniste

Chapitre II Maté

Fig.23


28

Fig.23. les étapes de préparation des solutions fongicide

riels et Méthodes

fongicide-PDA.

Chapitre III Résultats et Discussion

III. Résultats.

III.1. Estimation de taux de germination.

Après le calcul des graines de tomate

que l’échantillon I a une faculté germinative plus élevée(

de l’échantillon II ( 48%)(Tab.

III.2. Estimation du pourcentage d

Après le calcul de taux d’humidité des graines

taux d’humidité plus élevé (11%) que celui de l’échantillon

III.3.1. Isolement des mycètes

Après sept jours d’incubation

fongiques à partir de l’échantillon

l’isolement intérieure (Fig.24)

III.3.2.Isolement des champign

Après sept jours d’incubation à 25°C.

à partir de l’échantillon II, 13 isolats de l’isolement extérieur et 9 isolats de l’isolement

intérieur (Fig.24).

0

5

10

15

20

25

Isolement extérieur

Isolement intérieur

19

6Nom

bre

d'i

sola

tats

Fig.24 .Nombres d'isolats fongiques à partir des graines étudies.


29

imation de taux de germination.

graines de tomate germées pendant six jours à 25 C,

a une faculté germinative plus élevée( 94% ) comparativement que

(Tab.6).

Estimation du pourcentage d’humidité des graines.

taux d’humidité des graines on a enregistré que l’échantillon

(11%) que celui de l’échantillon I (4%) (Tab.6).

Isolement des mycètes accompagnants les graines de l’échantillon

cubation à 25°C. sur milieu PDA on a pu d’isoler 25 isolats

à partir de l’échantillon I, 19 isolats de l’isolement extérieur et 6 isolats de

).

Isolement des champignons accompagnants les graines de l’échantillon

sept jours d’incubation à 25°C. Sur milieu PDA on a pu d’isoler 22 isolats fongiques

, 13 isolats de l’isolement extérieur et 9 isolats de l’isolement

Isolement total

Isolement extérieur

Isolement intérieur

Isolement total

25

139

22



C, on à observée

) comparativement que celle

que l’échantillon II a un

l’échantillon I.

on a pu d’isoler 25 isolats

, 19 isolats de l’isolement extérieur et 6 isolats de

l’échantillon II:

milieu PDA on a pu d’isoler 22 isolats fongiques

, 13 isolats de l’isolement extérieur et 9 isolats de l’isolement

Isolement


échantillon2

échantillon1


30

III.4. identification des mycètes isolés :

Après l’identification des isolats fongiques on a trouvé ce qu’ils sont appartenant aux 7

genres(annexe 2). Cladosporium sp avec 11 isolats (23%) ; Penicillium, 10 isolats (21.27%),

Aspergillus, 9 isolats (19.14%), Chaetomium, 9 isolats (19.48%) ; Mucor, 4 isolats (8.51%) ;

Phoma, 2 isolats (4.25%) ; et le genre non identifier avec 2 isolats (4.25%). (Tab.7)

Tab.6. Le pourcentage de germination et le taux d’humidité de graine de tomate.

Nombre d’échantillon

Pourcentage d’humidité

Pourcentage de germination

Les champignons

Genre Nombre d’isolat

I

4

94

Chaetomium sp

Mucor sp

Aspergillus sp

Cladosporium sp

genre non

identifier

2

4

9

8

2

Nombre total 25

II

11

48,5

Phoma glome rata

Chaetomium sp

Penicillium sp

Cladosporium sp

2

7

10

3

Nombre total 22


Tab.7. Nombre et pourcentage globale des espèces fongiques isolés à partir des deux

Variétés étudiées.

Genres

Cladosporium

Penicillium

Aspergillus,

Chaetomium

Mucor

Phoma Phoma

1/8

19%

20%

9%4%

Fig.25. Les genres fongiques isolés à partir des


31

Nombre et pourcentage globale des espèces fongiques isolés à partir des deux

espèces Nombre d’isolat

sp. 11

sp. 10

niger 9

sp. 9

sp. 4

Phoma glomerata 2

2

23%

21%

19%

4%


grains étudiés.

Cladosporium

Penicillium sp

Aspergillus sp

Cheatomium sp

Mucor sp

Phoma glomerata

E1/8


Nombre et pourcentage globale des espèces fongiques isolés à partir des deux

Pourcentage%

23.39

21.27

19.14

19.14

8.5

4.25

4.25


Cladosporium

Penicillium sp

Aspergillus sp

Cheatomium sp

Mucor sp

Phoma glomerata

E1/8


4.1. Comparaison entre la microflore

type d’isolement (intérieur ou extérieur)

Après l’isolement et l’identification des mycètes on a trouvé que :

a. l’échantillon 1est plus infecté avec 25 isolats par rapport à l’échantillon 2 avec 22isolats.

b. On a révélé la présence d’une importante biodiver

5genres fongiques: Chaetomium , Mucor,Aspergillus, Cladosporium,E 1/8

rapport à l’échantillon 2 qui possède 4 genres seulement :

Phoma,Chaetomium,Penicillium,Cladosporium

Tab.8. Répartition des isolats fongiques selon les deux échantillons étudiés

Genre

échant

Phoma

Chaetomium

E1

Ex

0 0

In 0

2

E2

Ex

2

6

In

0 1

0

5

10

15

20

0 0 0

02

2

6

0

Nem

bre

d'i

sola

ts

Fig.26. Nombre des isolats fongique internes et externes des deux


32

microflore de deux échantillons des grains étudiés selon le

lement (intérieur ou extérieur) :

Après l’isolement et l’identification des mycètes on a trouvé que :


b. On a révélé la présence d’une importante biodiversité fongique sur l’échantillon 1 avec

Chaetomium , Mucor,Aspergillus, Cladosporium,E 1/8

rapport à l’échantillon 2 qui possède 4 genres seulement :

Chaetomium,Penicillium,Cladosporium (Tab.8 et Fig.26):

Répartition des isolats fongiques selon les deux échantillons étudiés

Chaetomiu Penicillium

Mucor

Aspergillr

Cladosporiums

0 0 9 8

0 4 0 0

2 0 0 3

8 0 0 0

0

98

2

19

0

4

0 0 0

62

0 03

0

13

1

8

0 0 0 0

9

Fig.26. Nombre des isolats fongique internes et externes des deux échantillons étudiés.


de deux échantillons des grains étudiés selon le


sité fongique sur l’échantillon 1 avec

Chaetomium , Mucor,Aspergillus, Cladosporium,E 1/8 non identifier par

Répartition des isolats fongiques selon les deux échantillons étudiés.

Cladosporiu

1/8

N.total

2 19

0 6

0 13

0 9

Fig.26. Nombre des isolats fongique internes et externes des deux

Echantillon 1ExEchantillon 1InEchantillon 2Ex


33

III.5. Antagonisme in vitro de Trichoderma sp. à l’égard des champignons isolés.

5.1. Confrontation directe :

Les résultats de la confrontation directe vis-à-vis de Trichoderma sp. Contre les

champignons phytopathogènes testés ont montré que le Trichoderma sp. inhibe la croissance

mycélienne de mycètes testés avec des degrés situés après le premier jour d’essai entre :

8,33 ,10et 36,84% respectivement sur P.glomerata et le genre non identifier et Chaetomium

sp., et que cette dernière augmente jusqu'au quatrième jour d’essai où elle a enregistré : 30 ;

55,55 ; 63,07% pour le genre non identifié, Chaetomium sp., et P.glomerata ( Fig.27)

(Tab.9).

8,33

27,77

50

63,07

36,8440

51,4255,55

10

23,07 23,52

30

0

10

20

30

40

50

60

70

24 48 72 96

pou

rcen

tage

d'i

nh

ibit

ion

m

ycél

ien

ne

Heures

Fig.27. Influence de confrontation directe de Trichoderma sp contre les champignons pathogènes.

Phoma glomerata

Chaetomium sp

e 1/8


34

Tab.9. L’effet de Trichoderma sp sur la croissance mycélienne de chaque agent pathogène

après 7 jours d’incubation par confrontation directe.

5.2. La confrontation à distance.

Les résultats de la confrontation à distance vis-à-vis de Trichoderma sp. Contre les

champignons phytopathogènes testés ont montré que le Trichoderma sp. inhibe la croissance

mycélienne de mycètes testés avec des degrés situés après le premier jour d’essai entre :

10 ;15,15 et 30 % respectivement sur P.glomerata et Chaetomium sp et le genre non

Isolat Témoin Résultats de tests

d’antagoniste directe

Pourcentage

d’inhibition

Chaetomium

Chaetomium Témoin Chaetomium+Trichoderma

55.55%

Phoma

Phoma glomerata Témoin Phoma +Trichoderma

63.07%

Non

identifier

1/8 non identifier Témoin

1/8 non

identifier+Trichoderma

30%


35

identifier., et que cette dernière augmente jusqu'au quatrième jour d’essai où elle a enregistré

: 26,66 ; 40 ; 44,44% pour Chaetomium sp., le genre non identifié et P.glomerata (Tab.10)

et (Fig.28).

Tab.10. l’effet de Trichoderma sp sur la croissance mycélienne de chaque agent

pathogène après 7 jour d’incubation par confrontation indirecte.

Isolat

Témoin

Résultats de tests d’antagoniste indirecte

Pourcentag

e

d’inhibition

Chaetomium

26.66%

Phoma

glomerata

44.44%

1/8 Non

identifier

40%


36

III.6. Effet de fongicide sur la croissance mycélienne des souches pathogènes.

Résultats obtenue montre que après l’incubation des boites à 25 °C pendant 7 jours ;a

faible concentration ,il y’a une croissance environ 50% donc les isolats fongique résistée les

matières active des fongicides , dans les concentration des fongicides (0,06g/l.) pour

Methlthiophanate ,(0,1g/l.) pour Melody duo, (0,5g/l.) pour Milor, (0,3g/l.) pour Curenox , il

y a un absence de croissance mycélienne des souche pathogène au contraire il ya une bonne

croissance dans les boites à l’absence des fongicides (témoin) (Annexe 3). . donc ces

dernières doses les plus efficace pour l’inhibition totale de croissance mycélienne des

champignons pathogènes (phoma glomerata ,chaetomium sp et 1/8 non identifiée) (Fig. 29,

30 , 31 et 32).

15,15

21,8125 26,66

3033,33

39,13 40

1013,66

42,544,44

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

24 48 72 96

po

urc

enta

ge

d'i

nh

ibit

ion

m

ycé

lien

ne

Heures Fig.28. Influence de confrontation à distance de

Trichoderma sp contre les champignons pathogènes.

Chaetomium sp

e1/8

Phoma glomerata

44,4452,22 53,33

100

73,21 76,78 78,57

100

0

20

40

60

80

100

120

0,012 0,024 0,042 0,06

pou

rcen

tage

d'i

nh

ibit

ion

m

ycél

ien

ne

Concentration de Methylthiophanate g/ml

Fig.29. L'influence de Methylthiophanate sur la croissance mycélienne des souche pathogène.

Phoma glomeratae1/8


58,82

71,4275,55

0

20

40

60

80

100

120

0,02Pou

rcen

tage

d'i

nh

ibit

ion

m

ycél

ien

ne

Concentration de Melody duo g/ml

Fig.30. L'influence mycélienne des souche

60,7168,23

0

20

40

60

80

100

120

0,1

Pou

rcen

tage

d'i

hib

itio

n

myc

élie

nn

e

Concentration de Milore g/ml

Fig.31. Influence de Milor sur la croissance mycélienne

52,94

75

0

20

40

60

80

100

120

0,087

Pou

rcen

tage

d'i

nh

ibit

ion

m

ycél

ien

ne

Concentration de

Fig.32. L'influence de mycélienne des souche


37

63,52 67,05

100

87,5

100 100

80 83,33

100

0,04 0,07 0,1

Concentration de Melody duo g/ml

Fig.30. L'influence de Melody duo sur la croissance mycélienne des souche pathogène.

Chaetomium sp

e1/8

73,21 76,78

100

83,35 84,85

100

0,2 0,35 0,5

Concentration de Milore g/ml

Fig.31. Influence de Milor sur la croissance mycélienne des souche pathogéne.

E1/8

Chaetomium sp

58,8267,05

100

76

100 100

0,174 0,3 0,435

Concentration de Curenox g/ml

Fig.32. L'influence de Curenox sur la croissance mycélienne des souche pathogène.

Chaetomium sp

e1/8


Chaetomium

Chaetomium sp

Chaetomiu


38

III.7. Discussion :

7.1. Isolement des champignons accompagnants extérieurement et intérieurement les

grains de tomate :

Cette étude porte sur l’isolement et l’identification des souches fongiques

phytopathogènes à partir des graines de tomate par deux échantillons différents.

La totalité des isolats fongiques (47 isolats) on été isolés à partir du milieu PDA. Les isolats

obtenus ont été identifiés et classés dans 07genres en classé dans deu divisions différentes, la

majorité sont Deutéromycètes « Aspergillus sp, Penicillium sp, Phoma

glomerata,Chaetomium sp,Cladosporium sp»,et Zygomycètes «Mucor sp ».

Le volume de contamination fongique des graines de tomate est différencié entre les

deux échantillons possible appartenir sur le taux d’humidité, cette différenciation est

influencée parfois par les conditions climatiques ou les conditions de stockage (humidité,

température et système de ventilation) ou l’installation d’une charge fongique importante, ce

qui peut entraîner une modification qualitative et quantitative de la microflore et le taux de

germination des l’échantillons (Pinton, 2007).

L’apparition de Aspergillus sp avec une pourcentage de 19.14% est favorisée par les

fuites d’air selon (Anne, 2002). En plein champ les insectes, parasites des cultures, créent des

lésions au niveau de l’enveloppe des graines qui favorisent la pénétration de l’inoculum à

l’intérieur de la graine. Ces derniers constituent par la suite un terrain favorable à

l’infestation, et selon (Rémi., 1997) Penicillium sp et A niger se sont des parasites

secondaires ou opportunistes se comporter des saprophytes sont rencontrés dans les lots

de semences, elles sont évoluent en parasites au cours du stockage si les conditions ambiantes

leur sont favorable.

A travres les résultats montre que Phoma glomerata trouve dans les semences. Phoma

glomerata et chaetomium sp trouve dans les graines du sol et les semences de plantes qui

dégradée les matières organique dans le sol comme cellulose (Rémi., 1997).

7.2. Antagonisme in vitro de Trichoderma sp. à l’égard des champignons isolés :

Lutte biologique à un potentiel susceptible de protéger les cultures de tomates contre les agent

pathogène tout en limitant l’utilisation de pesticides qui peut être responsable a la pollution

des sols et des eaux sous-terrain. Cette méthode de lutte.


39

La croissance mycélium des champignons pathogènes inhibée par l’antagoniste

Trichoderma sp . Ces résultats sont en parfaite conformité avec ceux obtenus par Albouvette

et al. (1983) montre que le trichoderma sp inhibe la croissance mycélienne des champignons

pathogènes.

La croissance mycélium des champignons pathogènes telle que phoma glomerata inhibée

par l’antagoniste Trichoderma sp (test de confirmation). Ces résultats sont en parfaite

conformité avec ceux obtenus par (Hamitou and Laid ., 2015)

Les résultats de confrontation directe de trichoderma sp contre Chaetomium sp sur milieu

PD montre que l’antagoniste inhibé la croissance mycélienne d’isolats fongiques dans le

quatrième jour de l’expérience.

Et selon Davet (1996) qui ont montré que la croissance de Trichoderma sp est plus rapide que

celle du pathogène, de ce fait, elle colonise le milieu nutritif et assimile les éléments nutritifs,

c'est le phénomène appelé compétition. Ces résultats peuvent être aussi expliquée par le

mécanisme d'antibiose, qui est due à la sécrétion de substances agissant comme étant des

antibiotiques et qui inhibent aussi la croissance du pathogène réalisée par Haran et al.,

(1996), Zhihe et al,. (1998). Ainsi la phénomène de parasitisme (DE LA Cruz et al.,

1995; Benhammou et Chet, 1996) qui est exploité en lutte biologique (El-Gali, 2015). Ce

phénomène se passe lorsque les hyphes de T. sp s'enroulent autour du champignon

phytopathogène (Ezziyyani et al., 2004) présentant une phase initiale d'interaction avec les

mycéliums, une phase intermédiaire pour surmonter l'effet inhibiteur de celui-ci et une phase

finale de parasitisme (El-Gali, 2015). Cette dernière est caractérisée par la libération

d'enzymes pour dégrader les parois cellulaires (Benitez et al. 2004).

7.3. Effet de fongicide sur la croissance mycélienne des souches pathogènes

Les traitements chimiques sont largement utilisés pour combattre les maladies fongique de

tomate, les produits les plus utilisé sont les fongicides (non systémiques, de contact ou

systémiques, pénétrants) (Lepoivre, 2003).

La matière active thiophanate –méthyl du fongicide methilthiophanate est efficace pour

les trois champignons pathogène (Phoma glomerata ,Chaetomium sp et 1/8 non identifiée )

dans les concentration élevé (35,50ml) qui inhibe totalement la croissance mycélienne, donc

selon le mode action de cette fongicide qui forme une barrière protectrice sur la surface du

végétal et empêche la germination des spores ou le développement du mycélienne du

champignons responsable de la maladie selon (Roger 2014).


40

Pour le Melody duo fongicide multi site toxique contient deux substances (propinébe et

Iprovalicarbe) qui inhibe la croissance mycélienne des champignons pathogène, selon

(Leroux, 2003) Les produits multi-sites sont utilisés soit en pulvérisation sur le feuillage des

cultures, soit en traitement des semences. Ils inhibent plus particulièrement la germination des

spores. Du fait de leur faible rémanence, Et ces composés inhibent simultanément plusieurs

fonctions essentielles du champignon ; ils n‘ont pas de cible enzymatique spécifique réalisée

par Simon et al. (1994),

Le fongicide de curenox contient la matière active d’oxychlorure de cuivre

qui inhibe la croissance mycélienne des trois souches étudié pathogène, le cuivre exerce aussi

une action sue les plantes en renforçant l’épiderme (effet de tonnage) provoquant chez

certains variété des fruitières roussissures et au débit de toxicité réalisée par (Roger ,1990).

Conclusion

41

Conclusion

Les résultats de l’isolement et l’identification des mycètes accompagnants extérieurement

et intérieurement des deux variétés locales des graines de tomate (Solanum lycopersicum)

montrent que les graines étudiées contiennent une diversité d’espèces fongiques, avec

notamment des champignons :

1. Saprophytes (champignons de stockage) tels que le Penicillium, Aspergillus, Mucor qui

contaminent les graines pendant le transport et le stockage, et peuvent produire des

mycotoxines très dangereuses, qui peuvent réduire la vitalité des graines cultivées.

2. Pathogènes (champignons de champ) tels que le Phoma , Alternaria, Chaetomium et

Cladosporium qui peuvent provoquer des maladies sur le champ.

Les résultats de lutte chimiques par les fongicides(Methyl-thiophanate, Melody duo , Curenox

,Milor) contre les mycètes isolés montrent que les quatre fongicides testés se sont révélés

efficaces en inhibant la croissance mycélienne des trois champignons pathogènes testés

(Fig.31,32 et 33). La réduction de croissance mycélienne varie de 50 à 100%.

Les résultats de lutte biologique par l’utilisation de l’antagoniste Trichoderma sp. contre les

mycètes isolés montrent que le Trichoderma a inhibé la croissance mycélienne des trois

champignons pathogènes testés (Tab.10 et 11). La réduction de croissance mycélienne varie

de 55.55%Chaetomium sp, 63.07% Phoma glomerata, 30% 1/8 non identifier pour

confrontation direct et pour la confrontation à distance 26.66 %Chaetomium sp,44.44%

Phoma glomerata,40% 1/8 non identifier.

Et à la fin nous proposons :

* Sur le plan technique :

1. L’utilisation des fongicides testées pour traiter les graines de tomate, et sur le champ pour

traiter les plantes infectés.

2. Pour assurer une protection phytosanitaire performante constitue une solution de

substitution à l’emploi de produits chimiques nuisibles à l’équilibre naturel des

écosystèmes , nous proposons cette souche de Trichoderma pour traiter les graines de tomate,

et essai in vivo sur champ.

3. L’identification classique des isolats non identifier.

4. Identification moléculaire des souches qui ont une importance économique ou industrielle.

Références bibliographiques

42

Références bibliographiques.

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Annexes

49

Annexe(1).Les milieux de culture.

1. milieu PDA

Pomme de terre………………………...…200g

Glucose ……………………………………20g

Agar-agar…………………………………..20g

Eaux distillé……………… …………...1000ml

Autoclavage : 20min à 121°C (Larpent, 1985).

2. milieu MEA

Extrais de malt………………………..…….20g

Agar –agar…………………………………..20g

Eaux distillé………………………………1000g

Autoclavage : 20min à 121°C (Larpent, 1985).

Annexe(2). Identification des

Classification des mycètes étudiés

Kingdom : Fungi

Division : Deuteromycota

Class : Hyphomycetes

Order : Moniliales

Family : Dematiaceae

Genus : Cladosporium

Species : sp.

Kingdom . Fungi

Division. Sedis-incertae

Sub-division.

Mucormycotina

Order : Mucorales

Family : Mucoraceae

Genus : Mucor

Species: sp

50

ation des champignons isolés par les graines de tomate.

Caractères culturaux et microscopique

Caractères culturaux :

*Recto: les colonies ont une

Texture veloutée ou

floconneuse parfois

poudreuse, couleur

au brun noire très foncé.

*Verso : brun noire

*Croissance

Caractère microscopique

Conidies

conidiospores = grande taille

les suivants = plus petite

forment longues chaines

acropètes ramifiées

Caractères culturaux

*Recto : texture laineuse, la

couleur varie du garis au

brun

*Verso : incolore ;

*Croissance :

Caractère microscopique :

*Sporocystes :

*Spores : rondes ;

ouornementées de spicules

*Chlamy

présentes et abondantes

Annexes

par les graines de tomate.

et microscopique


: les colonies ont une

Texture veloutée ou

neuse parfois

poudreuse, couleur vert olive

au brun noire très foncé.

: brun noire

*Croissance : lente.

Caractère microscopique:

: à l’extrémité des

conidiospores = grande taille

les suivants = plus petite

forment longues chaines

acropètes ramifiées.


: texture laineuse, la

couleur varie du garis au

incolore ;

*Croissance : très rapide


*Sporocystes : globuleux ;

*Spores : rondes ; lisses

ouornementées de spicules ;

*Chlamydospores : parfois

présentes et abondantes.

Kingdom : Fungi



Order: Moniliales

Family : Moniliaceae

Genus : Aspergillus

species : niger

Kingdom : Fungi



Order : Moniliales

Family : Moniliacea

Genus : Penicillium

Species :sp

51

Caractères culturaux

*Recto : colonie de surface ;

Granuleuses, blanches au

début, puis jaunes et, à

maturité, elles deviennent

noires.

*Verso : incolore à

jaunepâle.

*Croissance :

Caractères microscopique

*Conidiophore:

hyaline ou brunâtre dans sa

moitié supérieur, très long

1.5-3 mm

* Phialide :

métules brunâtres


*Recto : des colonies

duveteuses, po

couleur grise, jaune ou rose.

*Verso : jaune

*Croissance :

Caractère

*Conidiophore :

ramifies parfois regroupés

en buisson ou crémier.

* Phialide :

verticilles à l’extrémité des

conidiophoressont serrées

les unes contre les autres

l’ensemble donne une

de pinceau.

*Conidie

Annexes


colonie de surface ;

Granuleuses, blanches au

début, puis jaunes et, à

maturité, elles deviennent

incolore à

jaunepâle.

*Croissance : très rapide


*Conidiophore: lisse,

hyaline ou brunâtre dans sa

moitié supérieur, très long

3 mm

* Phialide : portée par des

métules brunâtres


des colonies

duveteuses, poudreuse, de

grise, jaune ou rose.

jaune.

*Croissance : rapide


*Conidiophore : simple ou

ramifies parfois regroupés

en buisson ou crémier.

* Phialide : disposées en

verticilles à l’extrémité des

conidiophoressont serrées

les unes contre les autres

l’ensemble donne une image

de pinceau.

Conidie : rondes à ovindes,

Annexes

52

hyalines ou pigmentées

lisses

Kingdom : Fungi



Order : Sphaeropsedales

Family :

Sphaeropsedaceae

Genus : Phoma

Species: glomerata

Caractères culturaux : *Recto : les colonies de

texture glabre initialement,

puis duveteuse La couleur

passe du gris olive au brun.

*Verso : brun foncé.



Pycnides : des élément

arrondis ou piriforme, bruns

à noirs avec orifice

Conidies :hyaline,

cylindrique Phialide :courte

Kingdom : Fungi

Division : Ascomycota

Class : Euascomycetes

Order : Sordariales

Family : Chaetomiaceae

Genus : Chaetomium

Species: sp


*Recto : colonie coton blanc

au départ.et devienne jaune

foncée.

*Verso : jaune.



Les hyphes septiques,

périthèces sont de grande

taille fragiles globuleuses à

flacon

Les asques : cylindriques.

E1/8

Non identifier

Annexes

53

Annexe(3). Influence des fongicides utilisés sur les souches phytopathogène .

Phoma glomerata

Chaetomium sp

Methylthio

phanate et

la dose de

fongicide

Melody

Duo et la dose de

fongicide

Curenox

et la dose

de

fongicide

Témoin

Melody

duo et la

dose de

fongicide

Milor et la

dose de

fongicide

Curenox

et la dose

de

fongicide

Témoin

Annexes

54

E 1/8 non identifié

Milor et

la dose

de

fongicide

Methylthi

ophanate

et la dose

de

fongicide

Melody

duo et la

dose de

fongicide

Curenox

et la dose

de

fongicide

Témoin

Résumé

Résumé.

L’objectif de la présente investigation est d’isoler et d’identifier les mycètes accompagnants

extérieurement et intérieurement les graines de tomate (Lycopersicum esculentum Mill), et

d’évaluer le potentiel d’inhibition in vitro, de Trichoderma sp. et quatre fongicides

chimiques ( Methylthiophanate, Melody duo, Milor et Curenox) sur la croissance mycélienne

des souches phytopathogènes isolées. Les graines des deux variétés de tomate ont été fournies

par les agriculteurs de Bir El Chouhada wilaya d'Oum-El-Bouaghi (Algérie). Les résultats

obtenus ont permis d’identifier 47 isolats fongiques à partir des variétés des graines. Les

genres les plus fréquents sont dans cet ordre : Cladosporium sp avec 11 isolats (23%) ;

Penicillium, 10 isolats (21.27%), Aspergillus, 9 isolats (19.14%), Chaetomium, 9 isolats

(19.48%) ; Mucor, 4 isolats (8.51%) ; Phoma, 2 isolats (4.25%) ; et un genre non identifier

avec 2 isolats (4.25%). Les résultats de l’étude de la confrontation directe et à distance de

Trichoderma sp. sur les souches phytopathogènes indiquent une inhibition de la croissance

mycélienne à des degrés variables : 55.55%, 63.07% et 30% pour la confrontation directe

lors, elles étaient 26.66 %, 44.44% et 40% pour la confrontation à distance respectivement

sur le Chaetomium sp., Phoma glomerata, et le genre non identifier. Les résultats de la lutte

chimique montrent que les fongicides utilisés réduisent la croissance mycélienne des souches

pathogènes testés, et que cette dernière augmente avec l’augmentation de la dose de fongicide

testés. Ces résultats ont nous permis d’enregistrer les IC50 les IC90 suivantes :

Methlthiophanate (IC50 =0.021g/l ; IC90 =0.05-0.052g/l), Melody duo (IC90=0.045-0.085

g/l),Milor (IC90 = 0.4-0.425 g/l) et Curenox (IC90 = 0.239- 0.365g/l).

Mots clés : souche phythopatogène, fongicide, graine de tomate, Trichoderma sp .

Résumé

Abstract.

The objective of the present investigation is to isolate and identify the accompanying fungi

externally and internally tomato seeds (Lycopersicum esculentum Mill), and to evaluate the in

vitro inhibition potential of Trichoderma sp. and four chemical fungicides

(Methylthiophanate, Melody Duo, Milor and Curenox) on mycelial growth of isolated

phytopathogenic strains. The seeds of both varieties of tomato were supplied by the farmers of

Bir El-Chouhada wilaya of Oum-El-Bouaghi (Algeria). The results obtained identified 47

fungal isolates from the seed varieties. The most common genera are in this order:

Cladosporium sp with 11 isolates (23%); Penicillium, 10 isolates (21.27%), Aspergillus, 9

isolates (19.14%), Chaetomium, 9 isolates (19.48%); Mucor, 4 isolates (8.51%); Phoma, 2

isolates (4.25%); and a non-identifying genus with 2 isolates (4.25%). The results of the study

of the direct and remote confrontation of Trichoderma sp. on phytopathogenic strains indicate

an inhibition of mycelial growth to varying degrees: 55.55%, 63.07% and 30% for direct

confrontation at, they were 26.66%, 44.44% and 40% for remote confrontation respectively

on Chaetomium sp ., Phoma glomerata, and the non-identifying genus. The results of the

chemical control show that the fungicides used reduce the mycelial growth of the pathogenic

strains tested, and that the latter increases with the increase of the fungicide dose tested. These

results allowed us to record the following IC50 IC90: Methlthiophanate (IC50 =0.021g/l ; IC90

=0.05-0.052g/l), Melody duo (IC90=0.045-0.085 g/l),Milor (IC90 = 0.4-0.425 g/l) et Curenox

(IC90 = 0.239- 0.365g/l).

Key words : phytopathogenic strains, fungicide, tomato seeds, Trichoderma sp.

Résumé

الملخص

Lycopersicumالھدف من الدراسة الحالیة ھو عزل و تعریف الفطریات المصاحبة لبذور الطماطم خارجیا و داخل

esculentum Mill(و تقییم امكانیة تثبیطTrichoderma sp . و اربعة مبیدات الفطریات الكیمیائیة )میثلثیوفانات,

من النوعین كلا بذور . المعزولة لامراض النباتمن سلالات مسببة على نمو فطر) كورینوكس,میلور,میلودي دیو

47حددت علیھا الحصول تم التي النتائج). الجزائر(ام البواقي الطماطم تم الحصول علیھا من مزارع بئر الشھداء ولایة

عزلة فطریة اي 11ب Cladosporium spھي بھذا الترتیب الاجناس الاكثر شیوعا . عزلة فطریة من اصناف البذور

، ٪19.14عزلات بنسبة 9ب ,Aspergillu ,٪21.27 عزلات بنسبة 10 ب Penicillium , ٪23 بنسبة

Chaetomium 19.48عزلات بنسبة 9ب٪, Mucor ؛٪8.51عزلات بنسبة 4ب Phoma و ,٪ 4.25عزلتین بنسبة ب

على Trichoderma spنتائج دراسة المواجھة المباشرة و عن بعد ل .٪ 4.25الجنس الغیر محدد بعزلتین بنسبة

للمواجھة بالنسبة ٪30٪ و 63.07٪، 55.55 السلالات المسببة للامراض و تشیر لتثبیط النمو الفطري بدرجات متفاوتة

Chaetomium,بالنسبة للمواجھة عن بعد على التوالي للاجناس ٪40 و٪ 44.44 ،٪26.66 و یكون ,المباشرة

Phoma glomerata نتائج المكافحة الكیمیائیة التي تستخدم المبیدات الفطریة تقلل النمو الفطري .و الجنس الغیر محدد

ھذه النتائج سمحت لنا بتسجیل. و ھذا الاخیر یزید بزیادة تركیز المبید المختبر,للسلالات المسببة للامراض المختبرة

IC50 وIC90 التالیة : Methlthiophanate (IC50 =0.021g/l ; IC90 =0.05-0.052g/l) , Melody duo

(IC90=0.045-0.085 g/l) , Milor (IC90 = 0.4-0.425 g/l) و Curenox (IC90 = 0.239- 0.365g/l). .

.Trichoderma sp ,بذور الطماطم ,مبید فطري ,الفطریات المسببة لامراض النبات :البحث كلمات

Réalisé par :

Ferrag Hadda et Guerioune Asma

Date de soutenance : le 18/06/2018

Thème : Isolement et identification des champignons transmis par les semences de tomate

(Lycopersicon esculentum Mill) et essai in vitro de lutte biologique contre les souches

phytopathogènes.

Résumé :

L’objectif de la présente investigation est d’isoler et d’identifier les mycètes accompagnants

extérieurement et intérieurement les graines de tomate (Lycopersicum esculentum Mill), et

d’évaluer le potentiel d’inhibition in vitro, de Trichoderma sp. et quatre fongicides

chimiques ( Methylthiophanate, Melody duo, Milor et Curenox) sur la croissance

mycélienne des souches phytopathogènes isolées. Les graines des deux variétés de tomate

ont été fournies par les agriculteurs de Bir El Chouhada wilaya d'Oum-El-Bouaghi (Algérie).

Les résultats obtenus ont permis d’identifier 47 isolats fongiques à partir des variétés des

graines. Les genres les plus fréquents sont dans cet ordre : Cladosporium sp avec 11 isolats

(23%) ; Penicillium, 10 isolats (21.27%), Aspergillus, 9 isolats (19.14%), Chaetomium, 9

isolats (19.48%) ; Mucor, 4 isolats (8.51%) ; Phoma, 2 isolats (4.25%) ; et un genre non

identifier avec 2 isolats (4.25%). Les résultats de l’étude de la confrontation directe et à

distance de Trichoderma sp. sur les souches phytopathogènes indiquent une inhibition de la

croissance mycélienne à des degrés variables :55.55%, 63.07% et 30% pour la confrontation

directe lors, elles étaient 26.66 %, 44.44% et 40% pour la confrontation à distance

respectivement sur le Chaetomium sp., Phoma glomerata, et le genre non identifier. Les

résultats de la lutte chimique montrent que les fongicides utilisés réduisent la croissance

mycélienne des souches pathogènes testés, et que cette dernière augmente avec

l’augmentation de la dose de fongicide testés. Ces résultats ont nous permis d’enregistrer les

IC50 les IC90 suivantes : Methlthiophanate (IC50 =0.021g/l ; IC90 =0.05-0.052g/l), Melody

duo (IC90=0.045-0.085 g/l),Milor (IC90 = 0.4-0.425 g/l) et Curenox (IC90 = 0.239- 0.365g/l).

Mots clés : souche phythopatogène, fongicide, graine de tomate, Trichoderma sp

Présidente : Mme. Merradi. L. MCA Université Oum el Bouaghi

Rapporteur : Mr. Hamitou, M. MCA Université Oum el Bouaghi

Examinateur : Mr. Chekara Bouziani, M. MAA Université Oum el Bouaghi

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