these - vetagro sup vetagro sup campus veterinaire de lyon année 2014 - thèse n° les fentes...

VETAGRO SUP CAMPUS VETERINAIRE DE LYON

Année 2014 - Thèse n°

LES FENTES ORO-FACIALES CONGENITALES CHEZ LE

CHIEN : ETUDE RETROSPECTIVE DES FACTEURS DE

RISQUES NUTRITIONNELS ET GENETIQUES CHEZ LES

BOULEDOGUES FRANÇAIS ET LES BOXERS PRESENTES AU

CERREC DE 2007 A 2013

THESE

Présentée à l’UNIVERSITE CLAUDE-BERNARD - LYON I

(Médecine - Pharmacie)

et soutenue publiquement le 19 septembre 2014

pour obtenir le grade de Docteur Vétérinaire

par

Briand Quentin

Né le 04 mars 1988

à Villeurbanne

5

Remerciements

A Monsieur le Professeur O. CLARIS,

De la Faculté de Médecine de Lyon,

Qui nous a fait l’honneur d’accepter la présidence de ce jury de thèse.

Hommage respectueux.

A Monsieur le Docteur S. BUFF,

De VetAgro Sup Campus Vétérinaire de Lyon,

Pour avoir encadré ce travail,

Pour sa sympathie, sa disponibilité et ses conseils avisés,

Sincère reconnaissance.

A Madame le Professeur K. CHALVET-MONFRAY,


Pour avoir accepté de faire partie de ce jury de thèse,

Pour son aide précieuse en analyse statistique,

Sincères remerciements.

A Madame le Docteur E. ROSSET,


Pour être membre invité de ce jury de thèse,

Pour son aide hors du commun et sa grande disponibilité,

Pour sa gentillesse et ses nombreux encouragements,

Sincères remerciements et amitié.

A Monsieur le Docteur A. DEL CARRO,


Pour son implication et son aide précieuse,

Pour sa bonne humeur communicative,

Sincère amitié.

6

A mes Parents,

Pour leur soutien infaillible,

Pour leur générosité et leur bienveillance.

A ma grand-mère,

Pour avoir toujours cru en moi,

Pour avoir toujours répété que rien ne me serait impossible.

A mes grandes sœurs,

Carole, Fanny, Julia et Chloé, et leurs maris,

Pour leur affection et leur soutien,

Pour leurs différences et notre esprit de famille.

A Anaïs,

Pour être une petite sœur en or,

Pour sa compréhension et notre complicité de toujours.

A mes neveux et nièces,

Pour être des enfants et jeunes adultes d’exception.

A mes oncles et tantes,

A mes cousins et cousines,

Pour leurs nombreux encouragements.

A mes amis,

Pour leur présence dans ma vie,

Pour tous ces bons moments passés ensemble.

7

Table des matières

Table des Figures .............................................................................................................................. 11

Table des Tableaux ........................................................................................................................... 13

Tables des abréviations ..................................................................................................................... 14

Introduction ...................................................................................................................................... 15

Partie I : Développement embryonnaire et description anatomique de la région oro-

nasale du chien .............................................................................................................................. 17

A. Embryologie de la région oro-nasale ...................................................................................... 18

I. Développement facial initial et mise en place des bourgeons faciaux ..................................... 18

II. Formation des cavités faciales et de la lèvre supérieure .......................................................... 20

1. Cavité nasale et lèvre supérieure ........................................................................................ 20

2. Mâchoire et cavité orale ..................................................................................................... 21

III. Formation du palais ........................................................................................................... 23

1. Palais primaire ................................................................................................................... 23

2. Palais secondaire ............................................................................................................... 23

3. Mécanismes cellulaires et moléculaires .............................................................................. 25

B. Bases anatomiques et rôles de la région oro-nasale chez le chien .......................................... 27

I. Les cavités nasales ................................................................................................................ 27

II. Les lèvres .......................................................................................................................... 28

III. La cavité buccale ............................................................................................................... 28

1. Les joues ........................................................................................................................... 29

2. Le palais dur ...................................................................................................................... 29

3. Le palais mou .................................................................................................................... 30

4. Le plancher sublingual ....................................................................................................... 31

5. La langue........................................................................................................................... 31

6. La partie orale du pharynx ................................................................................................. 32

Partie II : Les fentes oro-faciales congénitales ........................................................................ 33

A. Les anomalies congénitales ..................................................................................................... 34

I. Définition et caractérisation ................................................................................................... 34

II. Données statistiques et prévalence ..................................................................................... 34

III. Etiologie ............................................................................................................................ 35

1. Origine génétique .............................................................................................................. 35

2. Origine environnementale (ou externe ou exogène) ............................................................ 35

a) Origine alimentaire ............................................................................................................ 35

b) Origine iatrogène ............................................................................................................... 36

3. Origine multifactorielle...................................................................................................... 36

8

4. Origine épigénétique.......................................................................................................... 36

IV. Moments d’apparition ........................................................................................................ 37

V. Signes cliniques..................................................................................................................... 38

B. Les fentes labio-palatines ........................................................................................................ 39

I. Définitions, description et prévalences ................................................................................... 39

1. Fente labiale ...................................................................................................................... 39

2. Fente palatine .................................................................................................................... 39

3. Classification ..................................................................................................................... 39

4. Prévalence des fentes oro-faciales ...................................................................................... 42

a) Chez l’enfant ..................................................................................................................... 42

b) Chez l’espèce canine ......................................................................................................... 44

c) Chez les autres espèces ...................................................................................................... 44

II. Découverte et prise en charge thérapeutique chez le chiot ...................................................... 45

1. Signes cliniques ................................................................................................................. 45

2. Prise en charge thérapeutique ............................................................................................. 45

a) Fentes labiales et labio-alvéolaires ..................................................................................... 46

b) Fentes palatines ................................................................................................................. 47

(1) Fermeture du palais dur.................................................................................................. 47

(2) Fermeture du palais mou ................................................................................................ 48

(3) Suivi post-opératoire et complications ............................................................................ 49

III. Apparition lors du développement embryonnaire et étiologie ............................................. 50

1. Anomalies lors du développement embryonnaire ............................................................... 50

2. Etiologie des fentes oro-faciales ......................................................................................... 51

a) Généralités concernant l’espèce humaine ........................................................................... 51

b) Généralités concernant l’espèce canine .............................................................................. 51

c) Déterminisme génétique .................................................................................................... 52

(1) De l’espèce humaine ...................................................................................................... 52

(2) De l’espèce canine ......................................................................................................... 53

d) Facteurs environnementaux ............................................................................................... 53

e) Les folates ......................................................................................................................... 54

(1) Définition, description et provenance ............................................................................. 54

(2) Métabolisme des folates ................................................................................................. 54

(3) Rôles généraux des folates ............................................................................................. 56

3. Acide folique et spina bifida chez l’homme........................................................................ 57

a) Anomalies du tube neural et spina bifida ............................................................................ 57

b) Effet de l’acide folique ...................................................................................................... 58

c) Mécanisme d’action ........................................................................................................... 59

4. Acide folique et fentes labio-palatines ................................................................................ 62

a) Effet chez l’homme ........................................................................................................... 62

9

b) Effet chez le chien ............................................................................................................. 64

c) Mécanisme d’action ........................................................................................................... 65

Partie III : Etude rétrospective des facteurs de risques nutritionnels et génétiques mis en

jeu dans l’apparition de fentes oro-faciales chez le chien ................................................. 69

A. Matériel et Méthodes ...................................................................................................... 70

I. Mise en place du questionnaire .............................................................................................. 70

II. Echantillonnage et recueil de données ................................................................................ 70

III. Analyse statistique ............................................................................................................. 70

B. Analyse des résultats ............................................................................................................... 71

I. Résultats relatifs aux deux races ............................................................................................ 71

1. Analyse descriptive ........................................................................................................... 71

a) Analyse par portée ............................................................................................................. 71

b) Analyse des données individuelles ..................................................................................... 71

2. Fentes palatines et effet de l’acide folique .......................................................................... 72

a) A l’échelle des portées ....................................................................................................... 72

b) A l’échelle individuelle ...................................................................................................... 73

3. Fentes palatines et effet de l’alimentation maternelle.......................................................... 75

a. A l’échelle des portées ....................................................................................................... 75

b. A l’échelle individuelle ...................................................................................................... 75

II. Résultats relatifs aux Bouledogues français ........................................................................ 77


a) Analyse par portées ........................................................................................................... 77


2. Fentes palatines et génétique .............................................................................................. 77







III. Résultats relatifs aux Boxers .............................................................................................. 83


a) Analyse des portées ........................................................................................................... 83


2. Fentes palatines et génétique .............................................................................................. 84





10



IV. Analyse multi-variée.......................................................................................................... 93

1. Premier modèle ................................................................................................................. 93

2. Deuxième modèle .............................................................................................................. 94

C. Discussion des résultats ........................................................................................................... 96

I. Causes d’exclusion et données manquantes ........................................................................... 96

II. Critiques de l’étude réalisée ............................................................................................... 96

III. Critique des résultats de l’étude ......................................................................................... 97

1. De l’étude descriptive et l’analyse des pédigrées ................................................................ 97

2. Des résultats relatifs à l’effet de l’acide folique sur les fentes palatines............................... 98

3. Des résultats relatifs à l’effet de l’alimentation maternelle sur les fentes palatines .............. 98

Conclusion…………………………………………………………………………………………... 100

Bibliographie .................................................................................................................................. 101

Annexes .......................................................................................................................................... 105

11

Table des Figures

Figure 1: Chronologie du développement embryonnaire chez le chien, relative aux jours de gestation

(MCGEADY, 2006). ......................................................................................................................... 18

Figure 2: Face d’un embryon humain de 3-4 semaines (HAEGEL et TUCHMANN-DUPLESSIS,

1979). ............................................................................................................................................... 19

Figure 3: Développent des bourgeons faciaux chez un embryon humain (HAEGEL et TUCHMANN-

DUPLESSIS, 1979). ......................................................................................................................... 20

Figure 4 : Développement de la lèvre supérieur et des narines chez un embryon humain (HAEGEL et

TUCHMANN-DUPLESSIS, 1979). .................................................................................................. 21

Figure 5 : Développement embryonnaire des structures faciales (MCGEADY, 2006). ....................... 22

Figure 6 : Développement embryonnaire des cavités orale et nasale (vues en coupe transversale)

(MCGEADY, 2006). ......................................................................................................................... 22

Figure 7 : Formation du palais primaire en vue ventrale (HAEGEL et TUCHMANN-DUPLESSIS,

1979). ............................................................................................................................................... 23

Figure 8: Formation du palais secondaire en vue ventrale chez un embryon humain (HAEGEL et

TUCHMANN-DUPLESSIS, 1979). .................................................................................................. 24

Figure 9 : Fusion palatine en vue ventrale chez un embryon porcin (MCGEADY, 2006). .................. 25

Figure 10 : Mécanisme moléculaire de la transformation épithélio-mésenchymateuse (LAGAMBA et al,

2005) ................................................................................................................................................ 26

Figure 11 : Ostéologie du crâne et de la face chez l’espèce canine (KÖNIG et LIEBICH, 2004) ........ 27

Figure 12 : Région nasale et lèvres chez le chien (GRANDAGE, 2003.). ........................................... 28

Figure 13 : Ostéologie de la région maxillo-palatine chez le chien (KÖNIG et LIEBICH, 2004). ....... 30

Figure 14 : Palais du chien en vue ventrale (BARONE, 1996). .......................................................... 31

Figure 15 : Médicaments à l’origine de malformations congénitales (PETERSON et KUTZLER,

2011). ............................................................................................................................................... 36

Figure 16 : Mécanismes épigénétiques (JOYEUX, 2011). ................................................................. 37

Figure 17 : Chiot Bulldog Anglais atteint d’anasarque congénital (ROSSET E.) ................................ 38

Figure 18 : Différentes fentes oro-faciales (MOSSEY et al, 2009) : ..................................................... 40

Figure 19 : Fente labiale bilatérale chez un chiot Bulldog (ROSSET E.) ............................................ 40

Figure 20 : Fente palatine chez un chiot (ROSSET E.) ...................................................................... 41

Figure 21 : Fentes palatine chez une portée de Cockers (BUFF S.) .................................................... 41

Figure 22 : Fente labio-palatine chez un chiot Bouledogue français (BRIAND Q.) ............................ 42

Figure 23 : Fente labio-palatine bilatérale chez un chiot Bouledogue français (ROSSET E.) .............. 42

Figure 24 : Prévalences des fentes labiale et labio-palatine isolées (A) et des fentes palatines isolées

(B) en Europe d’après EUROCAT (MOSSEY et al, 2009). ................................................................. 43

Figure 25 : Première étape de la chirurgie d’une fente labio-alvéolaire (FOSSUM, 2007). ................. 46

Figure 26 : Deuxième étape de la chirurgie d’une fente labio-alvéolaire (FOSSUM, 2007). ............... 46

Figure 27 : Technique du lambeau mucopériosté en transposition (FOSSUM, 2007). ........................ 47

Figure 28 : Lambeau mucopériosté et fermeture du palais dur (BRAU S.). ........................................ 47

Figure 29 : Technique des lambeaux mucopériostés de glissement (FOSSUM, 2007). ....................... 48

Figure 30 : Technique chirurgicale de fermeture du palais mou (FOSSUM, 2007). ............................ 49

Figure 31 : Fermeture du palais mou (BRAU S.) ............................................................................... 49

Figure 32 : Suivi 4 jours post-opératoire d’un Bouledogue atteint de fente palatine (BRAU S.) ......... 50

Figure 33 : Molécule d’acide folique. ................................................................................................ 54

Figure 34 : Cycle métabolique des folates (CZEIZEL et MEDVECZKY, 2003). ..................................... 55

Figure 35 : Spina bifida chez un fœtus humain (JOYEUX, 2011). ..................................................... 57

12

Figure 36 : Cycle métabolique méthionine-homocystéine et folates (CZEIZEL, 2011). ........................ 61

Figure 37 : Lien entre nombres de chiots dans la portée et présence de malformations. ...................... 72

Figure 38 : Histogramme des doses d’acide folique administrées en mg/kg/j. .................................... 73

Figure 39 : Prévalences de chiots atteints de fente palatine avec ou sans supplémentation en acide

folique (%)........................................................................................................................................ 74

Figure 40 : Analyse des pédigrées de Bouledogues français. .............................................................. 78

Figure 41 : Risque relatifs de malformations et fentes palatines en fonction du nombre de chiots

composant une portée de Bouledogue français. ................................................................................. 79

Figure 42 : Histogramme des doses d’acide folique administrées en mg/kg/j chez les chiennes

Bouledogues français ........................................................................................................................ 79

Figure 43 : Prévalences des chiots Bouledogues français atteints de fente palatine en fonction de la

supplémentation en acide folique (%) (Différence significative, p=0.0133). ....................................... 81

Figure 44 : Prévalences des chiots Bouledogues français atteints de fente palatine selon l’alimentation

gestationnelle (%) (Différence significative, p-value=9,83.10^-10). ................................................... 82

Figure 45 : Analyse des pédigrées de Boxers. .................................................................................... 85

Figure 46 : Histogramme des doses d’acide folique administrées en mg/kg/j chez les chiennes Boxers

......................................................................................................................................................... 86

Figure 47 : Prévalence (%) des portées avec fente(s) palatine(s) selon la race (différence significative,

p=0.01143) ....................................................................................................................................... 86

Figure 48 : Prévalences des fentes palatines selon la race (%) (Différence significative, p=0.0057).... 88

Figure 49 : Prévalences des chiots Boxers atteints de fente palatine selon la supplémentation de la

mère en acide folique (%). ................................................................................................................ 89

Figure 50 : Prévalences des chiots atteints de fente palatine avec ou sans supplémentation de la mère

en acide folique (%) (Différence significative pour le Bouledogue français). ..................................... 89

Figure 51 : Prévalences des fentes palatines chez les Boxers selon l’alimentation gestationnelle (%)

(Différences significatives). .............................................................................................................. 91

Figure 52 : Risques relatifs d’apparition de fente palatine selon l’alimentation maternelle. ................ 92

Figure 53 : Distances de Cook utilisées comme méthode d’appréciation du modèle 1 de régression

logistique. ......................................................................................................................................... 94

Figure 54 : Distances de Cook utilisées comme méthode d’appréciation du modèle 2 de régression

logistique. ......................................................................................................................................... 95

13

Table des Tableaux

Tableau 1: Moments d’apparition d’anomalies congénitales potentielles lors de la gestation du chien.

......................................................................................................................................................... 37

Tableau 2 : Description de la population totale étudiée. ..................................................................... 72

Tableau 3 : Fentes palatines et supplémentation en acide folique de la population totale étudiée. ....... 74

Tableau 4 : Prévalences des fentes palatines et autres malformations avec intervalles de confiance (%).

......................................................................................................................................................... 74

Tableau 5 : Prévalences des fentes palatines avec intervalles de confiance, selon l’alimentation

maternelle (%). ................................................................................................................................. 75

Tableau 6 : Risques relatifs et Odd Ratio d’apparition de fente palatine selon l’alimentation

gestationnelle (p-value* significative) ............................................................................................... 76

Tableau 7 : Description de la population de Bouledogues français étudiée. ........................................ 77

Tableau 8 : Fentes palatines et supplémentation en acide folique chez les Bouledogues français. ....... 80

Tableau 9 : Prévalences des fentes palatines et autres malformations avec intervalle de confiance chez

les Bouledogues. ............................................................................................................................... 81

Tableau 10 : Prévalences des fentes palatines, avec intervalles de confiance, selon l’alimentation

gestationnelle de la chienne Bouledogue français (%)........................................................................ 82


gestationnelle chez les Bouledogues français (p-value* significative) ................................................ 83

Tableau 12 : Description de la population de Boxers étudiée. ............................................................ 84

Tableau 13 : Fentes palatines et supplémentation en acide folique chez les Boxers. ........................... 87

Tableau 14 : Prévalences des fentes palatines et autres malformations avec intervalle de confiance

chez les Boxers (%). ......................................................................................................................... 88

Tableau 15 : Prévalences des fentes palatines, avec intervalles de confiance, selon l’alimentation

gestationnelle de la chienne Boxer (%). ............................................................................................. 90


gestationnelle chez les Boxers (* p-value significative). .................................................................... 92

Tableau 17 : Odds Ratio ajustés d’apparition de fente palatine et intervalles de confiance à 95%

calculés par régression logistique selon le modèle 1 (*=significativité). ............................................. 93

Tableau 18 : Odds Ratio ajustés d’apparition de fente palatine et intervalles de confiance à 95%

calculés par Régression logistique selon le modèle 2 (*=significativité)............................................. 95

14

Tables des abréviations

ACPA: American Cleft Palate Association.

ADN: Acide Désoxyribonucléique.

AFSSA: Agence Française de Sécurité Sanitaire des Aliments.

APOC2: Apo lipoprotéine C2.

BARF: Biologically Appropriate Raw Food ou « Nourriture crue biologiquement appropriée ».

CERREC: Centre d’Etude et Recherche en Reproduction et Elevage Canin.

EGFR: Epidermal Growth Factor Receptor

EUROCAT: European Registry of Congenital Anomalies and Twinning.

FGF: Fibroblast Growth Factor.

FST: Folistatin

IC: Intervalle de confiance.

IRF6: Interferon Regulatory Factor 6.

LEF-1: Lymphoid Enhancer-binding Factor 1.

MTHFR: Méthylenetétrahydrofolate Réductase.

OMS: Organisation Mondiale de la Santé.

OR: Odd Ratio ou Rapport de chance.

ORa: Odd Ratio ajusté.

RR: Risque Relatif.

PAX3: Paired box 3.

PCR: Polymerase Chain Reaction.

PIGA: Phosphatidylinosytol Glycan Anchor.

PVR: Poliovirus Receptor.

PVRL1: Poliovirus Receptor-related 1.

SHh: Sonic Hedgehog.

SNAP91: Synaptosomal-Associated Protein 91 kDa.

TBX22: T-box transcription factor 22.

TGF: Transforming Growth Factor.

TP63: Tumor Protein p63.

15

Introduction

Les affections néo-natales représentent un problème important pour les éleveurs canins

car elles sont à l’origine de pertes non négligeables. En effet, une moyenne de 20% de pertes

est rapportée de la naissance au sevrage. Les investigations cliniques sont difficiles à cause de

la petite taille des animaux et la symptomatologie souvent non spécifique. L’étiologie est

fréquemment multifactorielle et peut concerner les conditions de mise-bas, l’âge et l’état de

santé de la chienne, le génotype des reproducteurs, l’alimentation et les traitements éventuels

de la mère pendant la gestation, ainsi que les conditions d’hygiène de l’élevage.

Parmi ces pathologies néonatales, on rencontre les anomalies congénitales. Ce sont des

anomalies de structure ou de fonction de cellules, tissus ou organes, présentes à la naissance.

Ces défauts de développement peuvent être causés par des facteurs génétiques,

chromosomiques ou environnementaux.

Les fentes oro-faciales font partie des anomalies congénitales les plus rencontrées chez

le chien. Elles peuvent concerner le palais primaire, on parle alors de bec de lièvre, et/ou le

palais secondaire, dur comme mou. Il s’agit alors de communications entre la cavité orale et

nasale. Les races brachycéphales semblent clairement prédisposées. Ces malformations

représentent un véritable risque pour l’éleveur qui aura le plus souvent recours à l’euthanasie

des chiots atteints étant donné l’importante prise en charge thérapeutique que cela nécessite

tant sur le plan pratique qu’économique. Ainsi, le but de l’éleveur est d’éviter la naissance de

chiots atteints d’une telle malformation.

De nombreuses études ont été réalisées afin de connaitre le déterminisme d’apparition

des fentes labio-palatines, notamment chez des animaux de laboratoire et l’homme. Leur

étiologie semble multifactorielle avec notamment une intervention de l’acide folique

(vitamine B9). L’acide folique est d’abord connu chez l’enfant comme acteur préventif

d’apparition d’anomalie du tube neural lors de supplémentation péri-conceptionnelle de la

femme enceinte. Puis, il a été montré qu’il diminuerait éventuellement le risque de fente oro-

faciales chez l’enfant. Ainsi, par analogie des développements embryonnaires des espèces

canines et humaines et sur la base de quelques publications réalisées chez le chien (Boston

Terrier notamment), une supplémentation en acide folique a été proposée aux chiennes

gestantes venant au CERREC (Centre d’Etude et Recherche en reproduction et Elevage

Canin, au sein de VetAgro Sup) depuis 2007. Une étude rétrospective de l’apparition des

fentes labio-palatines chez le chien a alors pu être mise en œuvre.

Dans une première partie, le développement embryonnaire de la région oro-faciale

ainsi que son anatomie, fondamentaux à la compréhension des modalités d’apparition des

fentes labio-palatines, seront décrits. Puis, la deuxième partie sera consacrée aux anomalies

congénitales que sont les fentes oro-faciales. Enfin, dans un troisième temps, l’étude

rétrospective sera détaillée et ses résultats explicités et discutés.

17

Partie I : Développement embryonnaire et description

anatomique de la région oro-nasale du chien

Le développement embryonnaire permet le passage d’une cellule fécondée à un

individu. Après les stades 2 cellules, 4 cellules, 8 cellules, morula et blastula, a lieu la

gastrulation. La gastrula comportant 3 types de cellules réparties en 3 feuillets est alors

formée. L’endoderme est le feuillet le plus interne, le mésoderme le feuillet intermédiaire et

l’ectoderme le plus externe. Les différents organes et structures de l’organisme se formeront

ensuite à partir de ces feuillets. Les annexes embryonnaires se développent en parallèle et

permettent les échanges avec la mère (CREPEL, 1998).

Ainsi, nous allons commencer par détailler le développement embryonnaire de la

région oro-nasale chez le chien puis nous décrirons son anatomie.

18

A. Embryologie de la région oro-nasale

La forme de la face est variable selon les espèces. Les chevaux, bovins et cochons ont

un crane plus long, ils sont qualifiés de dolichocéphales. Les humains et primates ont un crane

plus courts et sont dits brachycéphales. Ainsi, le chien à la particularité de contenir différentes

races dont certaines sont dolichocéphales (Bergers allemands, Colley…) et d’autres

brachycéphales (Bouledogue, Carlin, Boxer….). Les races intermédiaires sont dites

mésocéphales (HYTTEL et al, 2010a).

Le développement embryonnaire de la face et notamment des lèvres et du palais a été

intensément étudié chez l’homme. De nombreuses études ont permis de mettre en évidence

que ce développement est similaire chez les différents mammifères, notamment chez l’homme

et le chien. Cependant, la chronologie des évènements de l’embryogenèse est différente et

relative à la durée de gestation de chaque espèce (MOSSEY et al, 2009). L’illustration suivante

(Figure 1) résume cette chronologie chez le chien et montre notamment la période du

développement embryonnaire de la région oro-nasale canine qui s’étend du 17 au 33ème

jours

de gestation (HYTTEL et al, 2010a).

Figure 1: Chronologie du développement embryonnaire chez le chien, relative aux jours de

gestation (MCGEADY, 2006).

I. Développement facial initial et mise en place des bourgeons faciaux

La neurulation commence le 16ème

jour de gestation chez le chien (21ème

chez

l’homme). Le tissu neurectoblastique est alors à l’origine de la plaque neurale. Puis la

gouttière neurale se met en place par élévation du bourrelet ectodermique de part et d’autre de

la plaque neurale. Au niveau de l’accolement de ce bourrelet, se trouvent les cellules des

crêtes neurales (HYTTEL et al, 2010a).

19

Le développement de la face débute le 17ème

jour avec l’acquisition d’un statut mobile

et mésenchymateux et la migration des cellules des crêtes neurales. Combinées à un centre de

mésoderme et une surface épithéliale, ces dernières forment la face primaire (JIANG et al,

2006; HYTTEL et al, 2010a).

Cinq proéminences appelées bourgeons faciaux se forment à partir de la première

paire d’arcs branchiaux mis en place suite aux nombreuses mitoses des cellules des crêtes

neurales. Il s’agit du bourgeon fronto-nasal, des 2 bourgeons maxillaires latéralement et des 2

bourgeons mandibulaires caudalement. Ces bourgeons faciaux délimitent une bouche

primitive dite stomodeum (Figure 2) (JIANG et al, 2006; HYTTEL et al, 2010a).

Le bourgeon fronto-nasal va ensuite former 2 vésicules qui seront à l’origine des

hémisphères cérébraux. Puis, un épaississement ectobastique de part et d’autre de ce bourgeon

forme les placodes olfactives au niveau des fosses nasales, alors en continuité avec le

stromodeum, ainsi que les placodes visuelles. Les bourgeons nasaux vont ensuite se

développer médialement et latéralement (Figure 3) (JIANG et al, 2006; HYTTEL et al, 2010a).

La croissance mésenchymateuse des bourgeons maxillaires repousse les fosses nasales

médialement. La lèvre supérieure est alors constituée des bourgeons maxillaires latéralement

et des bourgeons nasaux médiaux (internes) et latéraux (externes). Puis les bourgeons nasaux

latéraux sont repoussés rostralement permettant un contact direct des bourgeons maxillaires et

nasaux médiaux en région distale. Le sillon lacrymo-nasal est alors délimité et sera à l’origine

du canal lacrymo-nasal. Les bourgeons maxillaires se développent encore pour former

l’ébauche des joues et du maxillaire. Débute alors la fusion des bourgeons qui se poursuit

jusqu’à la 7ème

semaine de grossesse chez la femme (JIANG et al, 2006; HYTTEL et al, 2010a).

Figure 2: Face d’un embryon humain de 3-4 semaines (HAEGEL et TUCHMANN-DUPLESSIS,

1979).

20

Figure 3: Développent des bourgeons faciaux chez un embryon humain (HAEGEL et

TUCHMANN-DUPLESSIS, 1979).

II. Formation des cavités faciales et de la lèvre supérieure

1. Cavité nasale et lèvre supérieure

Les placodes nasales mises en place de part et d’autre du bourgeon fronto-nasal

s’invaginent pour former les fosses nasales ainsi que les bourgeons nasaux latéraux et

médiaux. Le stromodeum et les fosses nasales entrent en contact pour former la membrane

oro-nasale qui dégénèrera ensuite. Les fosses nasales sont à l’origine de la cavité nasale

primaire alors bien séparée de la cavité orale primaire. Les choanes primaires permettant la

connexion des cavités orales et nasales vont apparaitre suite à la régression caudale de la

membrane oro-nasale. Cette dernière sera à l’origine du palais primaire. Les bourgeons

maxillaires s’étendent et fusionnent avec les bourgeons nasaux médiaux ou internes, créant

ainsi une base au développement des os de la mâchoire supérieure (maxillaire et incisif) et de

la lèvre supérieure. La lèvre supérieure est donc formée des deux bourgeons nasaux internes

et des deux bourgeons maxillaires. Les bourgeons nasaux externes forment les ailes du nez et

l’orifice narinaire par rapprochement des bourgeons nasaux internes et maxillaires (Figure 4)

(HYTTEL et al, 2010a).

Au 48ème

jour de grossesse, la lèvre supérieure est en place. Sa forme finale va varier

en fonction du degré de fusion des bourgeons nasaux. Ainsi, chez les carnivores et petits

ruminants, cette fusion est incomplète et un sillon median persiste, il est appelé philtrum. A

l’inverse, chez les chevaux, bovins et cochons, cette fusion est complète et la lèvre supérieure

est donc continue (JIANG et al, 2006; HYTTEL et al, 2010a).

21

Figure 4 : Développement de la lèvre supérieur et des narines chez un embryon humain

(HAEGEL et TUCHMANN-DUPLESSIS, 1979).

2. Mâchoire et cavité orale

Le 1er arc pharyngien est à l’origine des bourgeons mandibulaires et maxillaires. La

fusion des bourgeons mandibulaires entraine la formation de la mâchoire inférieure. Les

bourgeons maxillaires s’étendent pour entrer en contact avec les bourgeons nasaux externes,

formant le sillon naso-lacrymal. Ce sillon sera à l’origine du conduit lacrymal reliant le sac

conjonctival de l’œil à la cavité nasale. Les bourgeons maxillaires s’étendent ensuite

médialement et rostralement puis fusionnent avec les bourgeons nasaux médiaux pour former

la mâchoire supérieure (os maxillaire et incisif). Une élongation rostrale se forme alors chez

les chevaux ainsi que chez les espèces canines et félines exceptés chez les races

brachycéphales (HYTTEL et al, 2010a).

La cavité orale primaire provient du stomodeum. Les laminas labio-gingivales

supérieure et inférieure sont formées par épaississement ectodermique et développement des

mâchoires. La perte de substance dans leurs portions intermédiaires permet la formation des

lèvres et gencives, avec entre elles, le vestibulum oris. Les laminas labio-gingivales

fusionnent ensuite latéralement pour former les joues, définissant l’ouverture de la bouche. En

portion caudale, les 2nd

et 3ième

arcs branchiaux se différencient et forment l’os hyoïde. Les

cartilages laryngés sont, quant à eux, formés à partir des 4ème

à 6ème

arcs branchiaux (HYTTEL

et al, 2010a).

Les 2 illustrations suivantes (Figure 5Figure 6) résument cette description.

22

Figure 5 : Développement embryonnaire des structures faciales (MCGEADY, 2006).

A et B : 1 Placode nasale ; 2 Bourgeon maxillaire ; 3 Bourgeon mandibulaire ; 4 Bourgeon

fronto-nasal ; 5 Placode visuelle ; 6 Sillon naso-lacrymal ; 7 Stomodeum ; 8 Bourgeon nasal

externe ; 9 Bourgeon nasal interne ; 10 Site de fusion spécifique à l’espèce.

Figure 6 : Développement embryonnaire des cavités orale et nasale (vues en coupe

transversale) (MCGEADY, 2006).

1 Bourgeon mandibulaire ; 2 Bourgeon maxillaire ; 3 Cavité nasale primaire ; 4 Futur septum

nasal ; 5 Langue ; 6 Lames palatines ; 7 Future conchae ; 8 Futur organe vomeronasal

23

III. Formation du palais

Le palais est divisé en palais primaire comportant la lèvre supérieure et le prémaxillaire et

en palais secondaire constitué des palais dur et mou (WARZEE et al, 2001). Chez le chien, le

palais est totalement formé et fusionné, en l’absence d’anomalie, le 33ème

jour de gestation. Le

palais primaire se forme à partir du segment intermaxillaire et le palais secondaire à partir des

bourgeons maxillaires, ils fusionnent ensuite. Ainsi, un défaut de fusion formant la lèvre

supérieure affecte souvent la fusion palatine qui lui est secondaire. La fente labiale est donc

fréquemment accompagnée d’une fente palatine (JIANG et al, 2006).

1. Palais primaire

Les bourgeons nasaux médiaux fusionnent avec les bourgeons maxillaires par

accumulation de cellules mésenchymateuses en portion rostrale et cela forme le segment

inter-maxillaire ou massif médian. Ce dernier comporte 3 éléments : une composante labiale à

l’origine du philtrum de la lèvre supérieure, une composante gingivale dite processus incisif et

une composante palatine (Figure 7). Ainsi formés, le prémaxillaire et la lèvre supérieure

constituent le palais primaire. Les cavités orale et nasale sont alors séparées par la membrane

oro-nasale qui se perfore au niveau des choanes primaires (WARZEE et al, 2001; HYTTEL et

al, 2010a).

Figure 7 : Formation du palais primaire en vue ventrale (HAEGEL et TUCHMANN-DUPLESSIS,

1979).

2. Palais secondaire

La formation du palais secondaire se déroule du 30 au 33ème

jour de gestation chez le

chien. Il remplace la membrane oro-nasale et provient de 2 excroissances des bourgeons

maxillaires dites lames palatines. Ces lames grandissent et s’élèvent, formant les processus

palatins. Au même moment, le septum nasal se développe et fusionne partiellement avec les

24

processus palatins. Les processus palatins latéraux changent de position et passent de

verticaux à horizontaux puis fusionnent, séparant ainsi les cavités orale et nasale (Figure

8Figure 9). Rostralement, ils fusionnent avec le palais primaire. Le canal palatin antérieur se

forme au niveau de cette zone de transition (WARZEE et al, 2001; HYTTEL et al, 2010a).

Au début les processus palatins sont membraneux, mais ensuite leurs deux tiers rostraux

vont s’ossifier pour former le palais dur dont l’épithélium sera d’origine ectodermique. Cette

formation est sous la dépendance d’une part, d’interactions entre l’ectoderme et le

mésenchyme et d’autre part, de facteurs de croissance spécifiques. Le palais mou est formé

caudalement par développement de l’ectoderme. Il est d’ailleurs spécialement long chez le

cheval. Les choanes se déplacent caudalement, faisant communiquer les cavités nasales avec

le pharynx (WARZEE et al, 2001; HYTTEL et al, 2010a). Palais mou et palais dur constituent

ainsi le palais secondaire (Figure 8 Figure 9).

Figure 8: Formation du palais secondaire en vue ventrale chez un embryon humain (HAEGEL

et TUCHMANN-DUPLESSIS, 1979).

La flèche représente la communication oro-nasale qui disparait avec la fusion palatine.

Chez le chien, la fusion labio-palatine a lieu chez le fœtus autour du 33ème

jour de

gestation, l’ossification palatine est alors terminée. Pour information, elle se produit lors du

32ème

jour de gestation chez le chat et le cochon, entre les 49 et 56ème

jours chez le cheval et

entre les 56ème

et 63ème

jours chez le bovin (HYTTEL et al, 2010a).

25

Figure 9 : Fusion palatine en vue ventrale chez un embryon porcin (MCGEADY, 2006).

3. Mécanismes cellulaires et moléculaires

De nombreuses études ont permis de mettre en évidence un développement embryonnaire

des lèvres et du palais similaire chez les différents mammifères, notamment l’homme et le

chien. Les mécanismes ont été fortement étudiés chez la souris (MOSSEY et al, 2009).

Lors de la palatogenèse, au niveau des lames palatines, se forme transitoirement une

portion médiane épithéliale (ou MES= midline epithelial seam). Cette portion est constituée

de cellules basales cylindriques et de cellules péridermiques plates. Son rôle est inconnu et sa

régression est sujette à controverse puisque différents mécanismes sont proposés : apoptose

ou transformation mésenchymateuse de l’épithélium (transformation épithélio-

mésenchymateuse) (VAZIRI SANI et al, 2005; JIANG et al, 2006). Les études récentes iraient

plus dans le sens d’un phénomène d’apoptose. En effet, des analyses histologiques réalisées

sur des chiots Epagneuls Bretons atteints de fente palatine ont montré que le bord médial de

l’épithélium est intact (KEMP et al, 2009).

26

De nombreux signaux moléculaires ont été identifiés. C’est le cas de Sonic Hedgehog

(SHh) exprimé au niveau de l’épithélium maxillaire chez l’embryon de souris et notamment

au niveau du bord médial de l’épithélium lors de la palatogenèse (VAZIRI SANI et al, 2005;

JIANG et al, 2006). D’autres études sur la même espèce et chez l’homme ont permis de mettre

en évidence l’expression de MSX-1 dans le mésenchyme des lames palatines (SCHUTTE et

MURRAY, 1999; HYTTEL et al, 2010a; WEHBY et MURRAY, 2010). L’intervention lors du

développement des bourgeons faciaux du gène Barx 1, d’un gradient d’acide rétinoïque

(vitamine A) et de facteurs de croissance fibroblastiques tels que FGF10, FGFR2b et TP63 est

également rapportée. La fusion du palais met également en jeu d’autres composants tels que

des molécules d’adhésion cellulaires (nectine 1), des desmosomes et des facteurs de

croissance tels que TGFA, EGFR, et TBFbeta3. Ce dernier semble fondamental à cette

fusion car il stimule l’adhésion initiale des tissus puis augmente la surface épithéliale avant de

favoriser sa dégénérescence (MOSSEY et al, 2009). Des protéines extracellulaires telles que

COL2A1, COL1A2, COL11A2, PIGA, intégrine alphaV, glypican 3 interviendraient

également (SCHUTTE et MURRAY, 1999).

Concernant la potentielle transformation épithélio- mésenchymateuse, le gène LEF-1 a été

identifié comme un acteur central de cet évènement, ainsi que le signal de transduction TGF-

beta/Smad. D’autres gènes impliqués dans l’adhésion cellulaire, les mouvements du

cytosquelette et les signaux intracellulaires entrent également en jeu. Ainsi, un mécanisme

intracellulaire intervenant lors de cette transformation a été proposé. Lors du début de

l’adhésion palatine, un signal inconnu entrainerait une activation de l’expression du gène TGF

béta, puis par un phénomène de cascade celle du gène LEF1. Le facteur de transcription ainsi

synthétisé serait à son tour stimulé par le complexe Smad2/4 et cela activerait les gènes

responsables de la transformation épithélio-mésenchymateuse (Figure 10) (LAGAMBA et al,

2005).

Figure 10 : Mécanisme moléculaire de la transformation épithélio-mésenchymateuse

(LAGAMBA et al, 2005)

27

B. Bases anatomiques et rôles de la région oro-nasale chez le chien

La base osseuse de cette région est constituée dans le plan superficiel : des os incisifs

et nasaux dorsalement, des os maxillaire, lacrymal et zygomatique latéralement et de la

mandibule ventralement ; et dans le plan profond : du vomer, des os palatins et ptérygoïdes et

des cornets nasaux (Figure 11) (BARONE, 1996).

Figure 11 : Ostéologie du crâne et de la face chez l’espèce canine (KÖNIG et LIEBICH, 2004)

I. Les cavités nasales

Les cavités nasales et plus particulièrement leur portion rostrale, sont recouvertes

d’une muqueuse de type respiratoire. Cette dernière est composée d’un épithélium squameux

stratifié cilié et contient les glandes tubulo-acinaires sensibles aux stimuli mécaniques. Une

agression épithéliale entraine alors une hypersécrétion de ces glandes en grand nombre et un

jetage peut être observé au niveau des narines. Après une zone de transition, l’épithélium

devient de type olfactif et non cilié au niveau des volutes de l’ethmoïde, en région caudo-

dorsale des cavités. On retrouve les nerfs olfactifs ainsi qu’un nombre important de capillaires

sanguins (BARONE, 1996).

Les narines, orifices vers l’extérieur de ces cavités, permettent l’inspiration d’air. Elles

sont mises en mouvement grâce aux muscles nasal latéral et dilatateur des narines (BARONE,

1996).

28

II. Les lèvres

Leur face externe est recouverte de peau présentant des plis courts et fins, ainsi que les

vibrisses. Celle de la lèvre supérieure comporte, en outre, le philtrum, plus ou moins

développé selon l’espèce. La face interne est, quant à elle, composée de la muqueuse orale,

rose ou pigmentée et d’aspect extensible (élastine). Entre les 2, se trouve le bord libre d’aspect

régulier et mince. Le bord adhérent est marqué par un sillon profond entre la lèvre et la

gencive : c’est le sillon labio-gingival supérieur (Figure 12). Ce dernier comporte un fin repli

muqueux : le frein. Ainsi la structure de l’extérieur vers l’intérieur est la suivante : peau,

muscle orbiculaire de la bouche, glandes labiales et muqueuse (BARONE, 1996).

De nombreux muscles permettent leur mise en mouvements, parmi lesquels les

muscles abaisseurs des lèvres, incisifs, zygomatique, canin, releveur de la lèvre supérieure et

releveur naso-labial (BARONE, 1996).

Leurs rôles sont la préhension et le tri des aliments, l’aspiration des liquides, la

fermeture de la cavité buccale.

Figure 12 : Région nasale et lèvres chez le chien (GRANDAGE, 2003.).

III. La cavité buccale

Elle est délimitée par les lèvres, les joues, les palais dur et mou et le plancher

sublingual. Elle contient les dents et la langue. Elle est divisée en 2 parties par les arcades

dentaires : le vestibule en périphérie et la cavité propre centrale. La muqueuse buccale est

rigide et comporte de nombreux récepteurs sensoriels responsables du goût. L’épithélium est

pavimenteux, stratifié et plus ou moins kératinisé. En dessous, se trouve le chorion ou lamina

29

propria constitué de collagène et, relié au périoste par la sous-muqueuse. Cette dernière

comporte les glandes salivaires accessoires séreuses et muqueuses (GRAU et WALTER, 1975;

BARONE, 1996).

1. Les joues

Leur face externe comporte la région massétérique ou « plat de la joue » et la région

buccale ou « poche de la joue ». Leur face interne délimite avec les gencives, les sillons

bucco-gingivaux contenant les orifices des glandes buccales et du conduit parotidien

(BARONE, 1996).

La poche de la joue comporte les muscles buccinateur et abaisseur de la lèvre

inférieure, le muscle zygomatique et le muscle abaisseur de la langue. Le plat de la joue est,

quant à lui constitué des muscles masséter, branche de la mandibule et ptérygoidien médial.

Leur rôle est de repousser les aliments sous les dents (BARONE, 1996).

2. Le palais dur

Il s’agit du plafond de la cavité buccale constitué d’une longue voute délimitée

cranialement par l’arcade incisive et, latéralement par les molaires. Au niveau osseux, il est

composé de l’os incisif et des processus palatins des os maxillaires et palatins (Figure 13).

Une couche fibreuse avec un lacis veineux lui confère un aspect spongieux. Cette couche

contient également l’artère palatine, le nerf palatin et les glandes palatines en partie caudale

(BARONE, 1996).

Le palais dur est recouvert d’une muqueuse épaisse et plus ou moins pigmentée

comportant des reliefs caractéristiques de l’espèce. Parmi eux, on observe la papille incisive

en arrière des incisives centrales comportant les orifices du conduit incisif s’abouchant dans la

cavité nasale. Remarquons que ces orifices n’existent pas dans l’espèce humaine. Le raphé

constitue une crête médiane débutant près de la papille et s’étendant jusqu’au palais mou.

Enfin, les crêtes palatines sont des reliefs transverses allant du raphé jusqu’aux bords latéraux

du palais. Le chien en comporte entre 6 et 10, alors qu’elles sont peu développées chez

l’homme (Figure 14). Le rôle de ces crêtes est de favoriser le mouvement des aliments vers le

pharynx. Ainsi, leur plan caudal est plus pentu que le rostral (BARONE, 1996).

Le palais dur permet le phénomène de succion chez le jeune lors de la tété et donne

également appui aux aliments (rôle passif lors de la mastication) (BARONE, 1996).

30

Figure 13 : Ostéologie de la région maxillo-palatine chez le chien (KÖNIG et LIEBICH, 2004).

3. Le palais mou

Il est accroché à l’arcade palatine et prolonge ainsi le palais dur caudalement (Figure

14). Il est plus développé chez le chien que chez l’homme. Sa partie caudale constitue le voile

du palais séparant la cavité buccale et le pharynx. De plus, l’homme présente un

prolongement de ce voile, de forme conique : c’est ce qu’on appelle la luette ou l’uvule

palatine. Ainsi le palais mou régit le transit pharyngien. En effet, il est accroché à un fascia

sur lequel s’insèrent plusieurs muscles permettant de le mettre en mouvement. Le palais mou

s’élève et se plaque alors contre la paroi dorsale du pharynx lors de la déglutition. L’épiglotte

se rabat ensuite sur le larynx ce qui stoppe la respiration et permet l’entrée du bol alimentaire

dans l’œsophage. A l’inverse, au repos, le palais mou est en contact de la langue et permet

ainsi la respiration nasale (BARONE, 1996).

31

Figure 14 : Palais du chien en vue ventrale (BARONE, 1996).

4. Le plancher sublingual

Il est situé entre les arcades dentaires inférieures et comprend l’insertion de la langue.

Sa région rostrale donne attache au frein de la langue et comporte les caroncules sublinguales

où s’abouchent les glandes mandibulaire et sublinguale majeure. Sa partie rostrale comprend

la crête sublinguale contenant la glande sublinguale mineure. Il est constitué de la muqueuse

buccale épaisse (BARONE, 1996).

5. La langue

La langue est fixée à l’os hyoïde et à la mandibule. Elle est au contact du palais mou

caudalement. Elle est large, très mobile et extériorisable chez le chien. Sa muqueuse est

dermo-papillaire avec un épithélium pavimenteux. Elle comporte les papilles tactiles

mécaniques, les papilles gustatives ainsi que les glandes gustatives et linguales et les nodules

lymphatiques formant la tonsille linguale. Les muscles génio-glosse, styloglosse et hyo-glosse

permettent sa mise en mouvement (BARONE, 1996).

La langue permet le brassage des aliments et donc la facilitation de leur mastication, le

lapement des liquides, la gustation et participe à la déglutition grâce aux glandes linguales aux

sécrétions muqueuses enrobant les aliments (BARONE, 1996).

32

6. La partie orale du pharynx

On l’appelle l’isthme du gosier. Il est délimité par le palais mou, les arcs palato-glosse

et palato-pharyngien et la langue et l’épiglotte. On distingue le rhinopharynx, séparé de

l’oropharynx par le voile du palais. La muqueuse est ainsi de type respiratoire dorsalement et

de type digestif ventralement (BARONE, 1996).

Les différents muscles de cette région sont : le muscle élévateur du voile du palais, le

muscle tenseur du voile du palais, le muscle palatin, le muscle palato-glosse et le muscle

palato-pharyngien. Cette partie du pharynx comporte la tonsille palatine contenue dans la

fosse tonsillaire entre les arcs palatins (BARONE, 1996).

La partie orale du pharynx permet la déglutition du bol alimentaire et l’entrée d’air

pour la respiration (BARONE, 1996).

Le développement de la région oro-nasale ainsi que son anatomie ont ainsi été décrits

chez le chien. Il est notamment important de retenir que la formation du palais se termine lors

du 33ème

jour de gestation et a lieu grâce à des mécanismes cellulaires et moléculaires

complexes et non totalement élucidés. De plus, il est possible que ce développement

embryonnaire soit altéré par l’apparition d’anomalies congénitales. Parmi ces affections, la

plus fréquemment rencontrée est la fente oro-faciale ou labio-palatine. C’est de cette anomalie

développementale précisément que va traiter la deuxième partie de ce travail.

33

Partie II : Les fentes oro-faciales congénitales

Le développement embryonnaire et l’anatomie de la région oro-nasale chez le chien

ont ainsi été décrits afin de faciliter la compréhension des caractéristiques et conditions

d’apparition des fentes oro-faciales dont va faire l’objet cette deuxième partie. Dans un

premier temps, il semble essentiel de replacer cette malformation dans son contexte et d’ainsi

évoquer les anomalies congénitales de façon générale.

34

A. Les anomalies congénitales

I. Définition et caractérisation

Les anomalies de structure ou de fonction des cellules, tissus ou organes présents à la

naissance sont qualifiés d’anomalies congénitales. Elles font partie des pathologies néo-

natales. Il existe trois types d’anomalies congénitales : malformation, déformation et

perturbation. Une malformation est due à un défaut intrinsèque de différenciation ou de

développement embryonnaire d’une structure. Une déformation est due à une altération de

forme ou de structure d’une partie du corps ayant précédemment subi une différenciation

normale. Une perturbation qualifie un défaut de structure provenant de la destruction d’une

structure normale au préalable suite à un défaut d’apport sanguin ou des interactions

mécaniques (MCGEADY, 2006).

Il faut bien distinguer les termes congénital et héréditaire même si la confusion est

courante :

- Congénital, du latin congenitus (con = ensemble et genitus = procréation) : désigne

un caractère, un élément du phénotype de l’individu depuis sa conception et ainsi

potentiellement observable à la naissance.

- Héréditaire, du latin hereditarius qui signifie reçu par héritage : désigne un

caractère transmissible à la descendance (JOYEUX, 2011).

Il faut bien faire la distinction car la plupart des anomalies congénitales sont causés par des

facteurs environnementaux, le plus souvent non génotoxiques, et ne sont ainsi pas héréditaires

(85% chez l’homme) (JOYEUX, 2011).

Une anomalie congénitale peut être qualifiée d’isolée, multiple ou associée et de

majeure ou mineure (JOYEUX, 2011). Elle peut être macro ou microscopique, à la surface ou à

l’intérieur du corps, familiale ou sporadique, unique ou multiple (KALTER, 2003).

II. Données statistiques et prévalence

La prévalence d’anomalie congénitale est estimée entre 2% et 6% chez le chien selon

les auteurs. Elle ne dépasse pas 3-4% chez les ruminants et chevaux et il y en a très peu chez

le chat (MCGEADY, 2006). Ainsi la fréquence d’anomalie varie selon l’espèce, la race, la

localisation géographique et l’exposition à des agents tératogènes. Certaines sont visibles dès

la naissance mais d’autres ne sont décelées que bien plus tard (DUMON, 2005).

Chez l’homme, les malformations congénitales représentent une véritable menace de

mortalité et morbidité, elles causent plus de 25 % des mortalités néonatales et sont donc la

première cause de mortalité infantile (avant la prématurité et la mort subite du nourrisson). En

2004, selon l’OMS, elles ont causé 260 000 morts dans le monde, soit 7% des décès d’enfants

de moins de 5 ans (JOYEUX, 2011). Une surveillance épidémiologique étroite est mise en

35

place en Europe avec le projet Eurocat (European Registry of Congenital Anomalies and

Twinning) depuis 30 ans. Ainsi, la prévalence de ces malformations a pu être estimée et se

révèle proche de 3% en Europe avec une importance notable des malformations nerveuses et

notamment le spina bifida, défaut de fermeture caudal du tube neural de l’embryon

(GILLEROT, 2004). Dans le monde, on estime qu’environ 14% des enfants présentent une

malformation congénitale, les pays pauvres étant les plus touchés (JOYEUX, 2011).

III. Etiologie

L’étiologie de nombreuses anomalies congénitales chez l’homme et les animaux est

encore non élucidée. Chez l’homme, les causes de 50 à 70% des anomalies congénitales sont

encore inconnues, 15 à 20% seraient des causes génétiques tels que des mutations ou des

anomalies chromosomiques, 7 à 10% seraient environnementales et 20 à 25%

multifactorielles (MCGEADY, 2006; JOYEUX, 2011).

1. Origine génétique

Ce sont des causes internes et endogènes. Les anomalies sont parfois héréditaires et donc

transmises à la descendance. L’hérédité est alors soit conventionnelle : autosomique

dominante ou récessive ou lié au chromosome X ; soit non conventionnelle : mosaïque

germinale, multigénique, translocation chromosomique ou empreintes parentales. Elles sont

soit causées par la mutation d’un seul gène (monogéniques), soit dues à des anomalies

chromosomiques. On parle de facteurs tératogènes génétiques (JOYEUX, 2011).

Chez le chien, le fait que certaines anomalies soient bien plus rencontrées chez une race

donnée valide une certaine hérédité. Ainsi, les fentes palatines sont plus fréquentes chez les

Bouledogues, la myopathie chez le Golden Retriever, l’hémophilie chez le Berger Allemand,

l’hydrocéphalie chez les Chihuahua et Pékinois par exemples. De plus, une consanguinité

excessive est un facteur de risque important (DUMON, 2005).

2. Origine environnementale (ou externe ou exogène)

a) Origine alimentaire

Lorsque les vitamines A et D sont en excès dans la ration de la chienne gestante (teneur

supérieure à 12500 UI/kg des 17 au 22ème

jours de gestation), cela entraine l’apparition de

momifications fœtales, de fentes palatines ou de déformations de la queue. L’excès de

vitamine D entraine également une ossification précoce des fontanelles, une hypoplasie de

l’émail dentaire et des sténoses valvulaires au niveau du cœur. Une alimentation trop riche en

protéines pourrait être en faveur du syndrome du « chiot nageur » ou « watter puppy »

(DUMON, 2005; PETERSON et KUTZLER, 2011).

36

b) Origine iatrogène

L’origine iatrogène avec l’administration de médicaments à la chienne gestante n’est pas

négligeable. En effet, selon la dose, le moment et la durée d’administration, des morts fœtales,

des avortements ou des malformations congénitales variées vont être causées. Le moment le

plus à risque correspond aux 20 premiers jours de gestation (avant l’implantation utérine).

Parmi les produits tératogènes on trouve les antifongiques, les progestatifs, les corticoïdes,

certains antibiotiques (tétracyclines, doxycycline, gentamicine, terramycine, streptomycine) le

pentobarbital, et le mitotane notamment (Figure 15) (DUMON, 2005; PETERSON et KUTZLER,

2011).

Figure 15 : Médicaments à l’origine de malformations congénitales (PETERSON et

KUTZLER, 2011).

3. Origine multifactorielle

Cela concerne 20 à 25% des anomalies congénitales chez l’homme. Cela consiste en

un ou plusieurs facteurs tératogènes externes qui influencent de façon délétère un terrain

génétiquement prédisposé. Ainsi, un facteur environnemental a un pouvoir tératogène

influencé par la génétique (JOYEUX, 2011).

4. Origine épigénétique

Les facteurs épigénétiques entrainant des changements d’expression génique

(phénotype) sans modification du génotype/de la séquence d’ADN. Dans certains cas, ces

changements sont transmissibles à la descendance par persistance lors des divisions

cellulaires. Ces facteurs sont responsables d’une modification de l’expression des gènes

concernés et peuvent alors se révéler tératogènes. Des produits chimiques, médicamenteux, et

même nutritionnels peuvent entraîner ce phénomène (Figure 16). Les groupements méthyles

pouvant être retrouvés dans l’alimentation entrainent une méthylation de l’ADN qui active ou

réprime alors certains gènes. D’autres facteurs se lient aux histones et empêchent alors la

compaction et l’enroulement de l’ADN, entrainant aussi une activation ou répression de

gènes. Ce mécanisme existe de façon physiologique lors de l’embryogenèse. Lors de la

37

différenciation cellulaire se produisant au cours de la morphogenèse, les cellules souches sont

totipotentes puis se différencient en cellules pluripotentes, puis multipotentes avant d’aboutir

aux tissus bien différenciés (JOYEUX, 2011).

Figure 16 : Mécanismes épigénétiques (JOYEUX, 2011).

IV. Moments d’apparition

La formation des organes débute à partir du 14ème

jour chez le chien. Des malformations

morphologiques peuvent alors apparaitre, notamment suite à l’exposition du fœtus à des

agents tératogènes. Ainsi, du 14ème

au 23ème

jour, le système nerveux central sera concerné, du

17ème

au 31ème

jour c’est le développement de la face qui pourra être modifié, du 17ème

au

30ème

celui du cœur, du 21ème

au 30ème

la ceinture thoracique, du 21ème

au 39ème

les yeux, du

25ème

au 42ème

les dents et enfin du 32ème

au 45ème

les organes génitaux externes (Tableau I).

Avant le 14ème

jour post ovulation, l’exposition à des agents tératogènes n’aura pas d’effet sur

le développement des organes mais pourra entrainer une mort embryonnaire. Après le 35ème

jour, cela entrainera des fonctionnements défectueux ou des anomalies morphologiques

mineures (CREPEL, 1998).

Moment d’exposition (jours de gestation) Structures concernées par une anomalie

14-23ème

Système nerveux central

17-31ème

Face

17-30ème

Cœur

21-30ème

Ceinture thoracique

21-39ème

Yeux

25-42ème

Dents

32-45ème

Organes génitaux externes

Tableau 1: Moments d’apparition d’anomalies congénitales potentielles lors de la gestation du

chien.

38

V. Signes cliniques

Des signes cliniques ne sont pas nécessairement présents dès la naissance. Ainsi, les chiots

atteints d’une persistance du canal artériel (canal permettant de shunter la circulation

pulmonaire durant la vie fœtale) ne manifestent tout d’abord aucun signe clinique. Un souffle

cardiaque peut être entendu à l’auscultation ainsi qu’un thrill caractéristique. Puis, en

l’absence de traitement, les chiots développent une insuffisance cardiaque congestive gauche

et n’atteignent pas l’âge de 2 ans dans 60 à 70% des cas (LECOCQ, 2007).

Certaines anomalies congénitales sont, quant à elles, clairement identifiables après la

mise-bas. C’est le cas de l’anasarque congénital qui se traduit par un œdème généralisé

immanquable (Figure 17) mais aussi fréquemment par l’absence de pénis et par

l’imperforation de l’anus. L’hydrocéphalie consiste en une accumulation excessive de liquide

céphalo-rachidien dans les ventricules cérébraux ou dans l’espace sous arachnoïdien.

Lorsqu’elle est légère, il arrive qu’aucun signe clinique ne soit décelé. Dans les autres cas, des

symptômes nerveux seront observés et un œdème cérébral peut se former et les aggraver. Ces

chiots présentent un crâne en forme de dôme, dont la palpation peut être douloureuse et des

fontanelles restant ouvertes (SHELL, 1997; LECOCQ, 2007).

Figure 17 : Chiot Bulldog Anglais atteint d’anasarque congénital (ROSSET E.)

Les fentes labio-palatines doivent être recherchées et sont nettement visibles à l’ouverture

de la cavité buccale. Leurs signes seront détaillés par la suite.

39

B. Les fentes labio-palatines

I. Définitions, description et prévalences

Les fentes labio-palatines congénitales sont dues à une fermeture incomplète du palais

primaire (lèvre et prémaxillaire) et/ou secondaire (palais dur et mou) durant le développement

fœtal. Elles sont souvent accompagnées d’une asymétrie de la face. D’autres malformations

sont observés chez 8% des chiens et des chats avec fentes palatine et /ou labiale (HOSKINS,

2001c; WARZEE et al, 2001).

1. Fente labiale

La fente labiale ou cheiloschisis provient d’un défaut de fusion des bourgeons

maxillaires et nasaux médiaux au cours du développement embryonnaire. Les fentes de la

lèvre inférieure sont rares contrairement aux fentes labiales supérieures. Ces dernières se

situent à la jonction maxillaire-prémaxillaire et peuvent être unilatérales ou bilatérales,

complètes ou non. Elles sont souvent associées à une fente palatine dans l’espèce canine

(HYTTEL et al, 2010c). On parle alors de fente labio-palatine.

2. Fente palatine

La fente palatine ou palatoschisis provient d’un défaut partiel ou complet d’apposition

et fusion des processus palatins. Il en découle alors une communication entre les cavités orale

et nasale (HYTTEL et al, 2010c). Les palais dur et mou peuvent être concernés.

3. Classification

L’association américaine de fente palatine (American Cleft Palate association ACPA)

a créé une classification des fentes oro-faciales chez l’homme en 1960. Elle les subdivise de

la façon suivante (DREYER et PRESTON, 1974) :

- Fente labiale :

o Unilatérale : droite ou gauche

o Bilatérale : droite ou gauche

- Fente alvéolaire :

o Unilatérale : droite ou gauche

o Bilatérale : droite ou gauche

o Médiane

- Fente palatine :

o Palais dur

o Palais mou

Une étude réalisée sur 35 chiens de races Boxer et Bulldog a permis de valider cette

classification chez le chien. Cependant, il a été remarqué qu’elle ne prend pas en compte trois

caractéristiques importantes rencontrées chez cette espèce : la conservation de la symétrie du

40

maxillaire, le faible degré de protrusion du prémaxillaire et la subdivision des fentes du palais

dur: unilatérale droite ou gauche, bilatérale droite ou gauche et médiane. Ce dernier élément

suggère 3 « sutures » primitives au niveau du développement embryologique du palais dur.

Cette subdivision manquante semble être également une faille dans son application à l’homme

dont le développement palatin est similaire (DREYER et PRESTON, 1974).

Les fentes faciales peuvent être classées en différentes catégories chez les animaux

tout comme chez l’homme (Figure 18):

- La fente faciale-oblique qui consiste en une fissure latérale de la face allant de la

bouche aux paupières inférieures. On parle également de colobome de la face.

- La fente labio-narinaire qui découle d’un défaut de fusion des massifs médian et

externe de la face. Selon le degré de sévérité, elle peut concerner soit seulement la

lèvre (cheiloschisis ou fente labiale) soit la lèvre et le maxillaire

(cheilognathoschisis ou fente labio-alvéolaire). En terme courant, il s’agit du bec

de lièvre (Figure 19).

- La fente labiale médiane concerne la lèvre supérieure et consiste en l’absence du

massif médian et un nez aplati.

- La fente palatine (palatoschisis) et la fente labio-palatine qui concerne la lèvre, le

maxillaire et le palais (cheilognathopalatoschisis) (Figure 20Figure 21Figure

22Figure 23) (ROUX et al, 2003 ).

Figure 18 : Différentes fentes oro-faciales (MOSSEY et al, 2009) :

A Fente labio-alvéolaire ; B Fente palatine ; C Fente labio-palatine unilatérale incomplète ;

D Fente labio-palatine complète ; E : Fente labio-palatine bilatérale complète.

Figure 19 : Fente labiale bilatérale chez un chiot Bulldog (ROSSET E.)

41

Figure 20 : Fente palatine chez un chiot (ROSSET E.)

Figure 21 : Fentes palatine chez une portée de Cockers (BUFF S.)

42

Figure 22 : Fente labio-palatine chez un chiot Bouledogue français (BRIAND Q.)

Figure 23 : Fente labio-palatine bilatérale chez un chiot Bouledogue français (ROSSET E.)

4. Prévalence des fentes oro-faciales

a) Chez l’enfant

Les fentes oro-faciales font partie des anomalies les plus communes chez l’enfant

puisqu’il s’agit de l’anomalie cranio-faciale la plus courante. Leur fréquence est de 1

nouveau-né sur 1000 en Europe (KALTER, 2000; ITIKALA et al, 2001; KEMP et al, 2009), 1 sur

43

500 à 2500 dans le monde (SCHUTTE et MURRAY, 1999; JIANG et al, 2006). En effet, des

variations ethniques et géographiques ainsi que socio-économiques sont observées. Ainsi, les

populations indiennes, japonaises et chinoises présentent des prévalences supérieures aux

autres (VANDERAS, 1987; MOSSEY et al, 2009). Aux Etats-Unis, 6800 enfants naissent

chaque année avec une fente oro-faciale (LETRA et al, 2010).

Une distinction est faite entre fente labiale isolée et fente labio-palatine, fente palatine

isolée, fentes labiale et labio-palatine syndromiques et fente palatine syndromique

(VANDERAS, 1987; SCHUTTE et MURRAY, 1999; KALTER, 2003).

Les fentes labiales et labio-palatines isolées représentent environ 4.5% des anomalies

congénitales en Europe et les fentes palatines isolées environ 2.7%, soit un total d’environ

7.2%, d’après les données de l’EUROCAT (JOYEUX, 2011). Leurs prévalences sont

indiquées sur la Figure 24 ci-après.

On observe que les fentes labiales et labio-palatines sont plus fréquentes chez les garçons

alors que les fentes palatines le sont plus chez les enfants de sexe féminin. D’autres anomalies

sont plus fréquemment observées chez les patients avec fente palatine seule. Les fentes

labiales et labio-palatines sont dans 70-71% des cas isolées/non syndromiques (RICHTSMEIER

et al, 1994; MOSSEY et al, 2009).

En Europe, 55% des fentes palatines sont isolées, 18% sont associées à d’autres anomalies

et 27% font parties d’un syndrome. Il existe chez l’homme environ 250 syndromes

comprenant possiblement une fente palatine (RICHTSMEIER et al, 1994; MOSSEY et al, 2009).

Figure 24 : Prévalences des fentes labiale et labio-palatine isolées (A) et des fentes palatines

isolées (B) en Europe d’après EUROCAT (MOSSEY et al, 2009).

44

b) Chez l’espèce canine

Ce sont les fentes palatines qui sont les plus fréquentes. Les races prédisposées sont

les races brachycéphales telles que le Boxer, le Boston Terrier, le Bulldog anglais, le

Bouledogue français et le Pékinois. Néanmoins on peut également rencontrer cette anomalie

chez le Schnauzer, Labrador retriever, Cocker, Cavalier King Charles, West Highland White

Terrier, Colley et Chihuahua notamment. Les races brachycéphales peuvent avoir un risque

d’apparition de fentes palatines jusqu’à 30% supérieur aux autres races. Les chiens croisés et

les bergers ont, quant à eux, un risque de fente palatine congénitale moins important

(MULVIHILL et al, 1980; DENIS, 1997; HOSKINS, 2001b; WARZEE et al, 2001; HYTTEL et

al, 2010c; DOMOSLAWSKA et al, 2013; PETERSON et KUTZLER, 2011).

L’hydrocéphalie est l’autre anomalie que l’on rencontre le plus fréquemment

accompagnant une fente palatine : c’est le cas chez le Bulldog, le Cocker Spaniel et le

Chihuahua. Des anomalies oculaires sont également observées chez des Chihuahuas,

Schnauzer, Cocker Spaniel avec fente palatine (MULVIHILL et al, 1980).

D’après une étude sur une colonie d’Epagneuls Bretons, l’incidence d’apparition de

fente palatine est de 26.9%. Le palais dur est toujours concerné et dans des cas exceptionnels,

la fente palatine est associée à une fente labiale. Le ratio male : femelle est de 2 : 9. La taille

des portées contenant des chiots avec fente palatine est de 4.3 en moyenne avec toujours un

plus grand nombre de femelles (RICHTSMEIER et al, 1994).

Une étude sur les Bouledogues Français décrit une prévalence de fentes palatines de

8.6% (GUILLOTEAU et al, 2006). Une autre étude réalisée avec des Boston Terriers met en

évidence une prévalence de 17.6% (ELWOOD et COLQUHOUN, 1997). Une prévalence de 0.6%

est rapportée chez le Boxer mais semble sous-estimée (MOURA et al, 2012). Ainsi, face à ces

données peu nombreuses et très hétérogènes chez le chien, contrairement à l’enfant, l’étude

rétrospective entreprise dans ce projet n’apparait pas superflue.

c) Chez les autres espèces

De façon générale dans le règne animal, les fentes palatines sont significativement plus

fréquentes que les fentes labiales et labio-palatines. L’incidence des fentes palatines est de

0.06% chez les animaux, ce qui est proche de celle chez l’homme. Dans 22% des cas

d’animaux avec fente palatine, d’autres anomalies congénitales sont présentes. Chez les

bovins et notamment le veau charolais chez lequel le risque de fente palatine est élevé, on

parle de « Syndrome du Charolais » comportant des malformations épinières, de

l’arthrogrypose et une fente palatine (MULVIHILL et al, 1980).

On rencontre peu de fente palatine chez le chat mais les races Abyssin, Siamois et

Persans semblent plus concernées (MULVIHILL et al, 1980; HOSKINS, 2001b; GUILLOTEAU et

al, 2006).

45

II. Découverte et prise en charge thérapeutique chez le chiot

1. Signes cliniques

Les signes cliniques observés lors de l’existence d’une fente palatine chez le chiot

nouveau-né sont un écoulement de lait au niveau des narines, une dysphagie, des

régurgitations ou étouffements lors de l’allaitement, des éternuements, une toux et un retard

de croissance. Il y a un risque élevé de pneumonie par aspiration. La sévérité des signes

dépend de la taille de la communication oro-nasale (HOSKINS, 2001c; HYTTEL et al, 2010c).

Concernant les fentes labiales et labio-alvéolaires (lèvre et maxillaire), le préjudice est

surtout esthétique puisque seule une altération de la tétée peut être présente. Le risque de

pneumonie par fausse déglutition est faible. Ainsi le pronostic est assez bon (HOSKINS,

2001b; LECOCQ, 2007).

Les fentes palatines sont plus graves. La tétée est plus souvent altérée. On observe du

lait s’écoulant des narines et pouvant entrainer une inflammation nasale, une obstruction

nasale gênant la respiration ou une rhinite. Le risque de broncho-pneumonie par fausse

déglutition est alors élevé et la mort est possible (HOSKINS, 2001c).

Il faut bien vérifier l’absence d’autres anomalies congénitales lorsqu’une fente oro-

faciale est observée afin de prendre une décision de prise en charge en toute connaissance de

cause.

2. Prise en charge thérapeutique

Chez l’enfant, leur prise en charge est intense et comprend des chirurgies plastiques et

maxillo-faciales, de l’orthophonie, dentisterie et orthodontie, ainsi qu’un soutien

psychologique fréquent (MOSSEY et al, 2009).

Lors de fente palatine congénitale observée à la naissance chez le chien, deux options

sont possibles : l’euthanasie ou la programmation d’une chirurgie à partir de 7 à 9 semaines

d’âge. La prise en charge chirurgicale présente un pronostic satisfaisant en l’absence de

complications mais les soins à prodiguer dans l’attente de cette procédure dont l’alimentation

par sondage et une surveillance intense sont très contraignant, notamment pour un éleveur. De

plus, ce dernier ne souhaitera pas un individu atteint comme reproducteur transmettant

possiblement cette anomalie. Ainsi le recours à l’euthanasie est l’option choisie la plus

fréquemment (HOSKINS, 2001a, b; LECOCQ, 2007).

En cas de procédure chirurgicale, une antibiothérapie pré-opératoire est administrée et

une sonde trachéale avec compresses est mise en place.

46

a) Fentes labiales et labio-alvéolaires

Le traitement chirurgical des fentes labiales est essentiellement à visée esthétique.

Dans le cas d’une fente labiale simple, il s’agit d’une plastie pour combler le déficit tissulaire

de la lèvre supérieure. Un lambeau le plus épais possible est prélevé à partir de la gencive

et/ou la lèvre puis suturé (FOSSUM, 2007).

Concernant les fentes labio-alvéolaires, la chirurgie comprend 2 étapes : la séparation

oro-nasale pour former la narine et la plastie de la lèvre à partir d’un lambeau muco-cutané

prélevé sur la truffe (Figure 25Figure 26). Si la fente labiale est bilatérale, on se sert de la

partie rostrale de la truffe (FOSSUM, 2007).

Figure 25 : Première étape de la chirurgie d’une fente labio-alvéolaire (FOSSUM,

2007).

Figure 26 : Deuxième étape de la chirurgie d’une fente labio-alvéolaire (FOSSUM, 2007).

47

b) Fentes palatines

(1) Fermeture du palais dur

En cas de fente palatine, il faut attendre l’âge de 8-12 semaines avant de procéder à la

chirurgie. Une surveillance attentive doit être réalisée en attendant, un traitement des

bronchopneumonies et un sondage gastrique sont mis en place au besoin. La première étape

est la fermeture du palais dur, elle peut être réalisée selon deux techniques :

-Lambeau mucopériosté en transposition : On procède à une incision à la limite muqueuse

orale-muqueuse nasale (site receveur). Un lambeau mucopériosté est délimité tout le long de

la fente et allant jusqu’à proximité de l’arcade dentaire, puis il est soulevé et rabattu.

L’utilisation du bistouri électrique est à proscrire car elle entraine une nécrose des tissus. Une

suture à l’aide de points en U (fil résorbable de type Vicryl 4.0 à 5.0) permet de maintenir les

2 lambeaux superposés tandis que la zone à nu cicatrisera par seconde intention (Figure

27Figure 28) (FOSSUM, 2007).

Figure 27 : Technique du lambeau mucopériosté en transposition (FOSSUM, 2007).

Figure 28 : Lambeau mucopériosté et fermeture du palais dur (BRAU S.).

48

-Lambeaux mucopériostés de glissement : Ils sont utilisés lorsque la fente palatine est de plus

grande largeur. Deux lambeaux sont délimités des bords de la fente jusqu’aux long des

arcades dentaires puis soulevés. La muqueuse est également décollée pour permettre aux

bords de la muqueuse nasale puis de la muqueuse orale d’être suturés. De la même façon, les

côtés latéraux mis à nue cicatriseront par seconde intention (Figure 29) (FOSSUM, 2007).

Figure 29 : Technique des lambeaux mucopériostés de glissement (FOSSUM, 2007).

(2) Fermeture du palais mou

La deuxième étape de la procédure consiste en la fermeture du palais mou. Des

incisions de relâchement sont réalisées afin de diminuer la tension exercée par le muscle

tenseur du voile du palais. Deux lambeaux sont délimités et apposés grâce à des points

simples en 2 plans. Il faut parvenir à un recouvrement physiologique de l’épiglotte (Figure 30

Figure 31) (FOSSUM, 2007).

49

Figure 30 : Technique chirurgicale de fermeture du palais mou (FOSSUM, 2007).

Figure 31 : Fermeture du palais mou (BRAU S.)

(3) Suivi post-opératoire et complications

Les contrôles post-opératoires ont lieu après 3, 5 puis 14 jours (Figure 32). Une

antibiothérapie et une analgésie sont administrées. Une alimentation humide est donnée

pendant un mois et l’utilisation d’une sonde de pharyngostomie est conseillée (FOSSUM,

2007).

50

Figure 32 : Suivi 4 jours post-opératoire d’un Bouledogue atteint de fente palatine (BRAU S.)

Les complications d’une telle procédure sont des hémorragies, pneumonies, infections,

œdèmes et déhiscences de sutures. Il faut parfois procéder à plusieurs intervent ions avant

d’avoir un résultat satisfaisant (FOSSUM, 2007).

III. Apparition lors du développement embryonnaire et étiologie

1. Anomalies lors du développement embryonnaire

Les fentes oro-faciales congénitales proviennent d’un défaut de développement

morphogénique normal. La fermeture des palais primaire et secondaire a lieu entre les 25ème

et

33ème

jours de gestation chez le chien. Les fentes labio-palatines congénitales sont dues à une

fermeture incomplète du palais primaire et/ou secondaire durant le développement fœtal. Ce

défaut de fermeture peut ainsi concerner le palais dur et/ou le palais mou ou les palais

primaire et secondaire à la fois mais également la lèvre supérieure et entrainer l’apparition des

différentes fentes oro-faciales décrites précédemment (WARZEE et al, 2001).

Les fentes centrales du palais secondaire proviennent d’un défaut d’apposition ou

fusion des processus palatins latéraux. Cela peut être dû à une hypoplasie ou une dégénération

épithéliale. Une large cavité orale peut empêcher les processus latéraux de s’horizontaliser,

c’est ce qui peut expliquer l’incidence élevée de fentes palatines chez les brachycéphales. Les

fentes latérales du palais secondaire sont dues à un déplacement des processus latéraux et à un

défaut de fusion de ces processus avec les tissus mous formant les piliers des tonsilles

(WARZEE et al, 2001).

Une étude réalisée chez le chien et basée sur l’utilisation du Scanner et de

reconstitutions en 3 dimensions, a permis d’émettre l’hypothèse que les fentes palatines

pourraient être dues à une croissance inadéquate des lames palatines probablement à cause de

défauts d’ostéogenèse locale. Elle a également mis en évidence que les chiots atteints avaient

51

un large palais postérieur, une base du crane augmentée de taille ainsi qu’une asymétrie de

conformation de la tête (RICHTSMEIER et al, 1994).

La prévalence importante de fentes palatines chez nos animaux domestiques

s’expliquerait par le fait que la palatogenèse se compose d’évènements complexes mettant en

jeu des tissus indépendants devant interagir et se synchroniser (HYTTEL et al, 2010b). Ainsi,

un défaut de croissance ou de structure du mésenchyme facial ou de fusion épithéliale sera à

l’origine d’une fente labiale ou labio-palatine. Le développement de la lèvre supérieure met

en jeu une série d’évènements morphogéniques génétiquement programmés, d’apoptose, de

fusion active, de remaniements épithéliaux. Ainsi une infime anomalie concernant un de ces

évènements peut être à l’origine d’une fente labiale ou labio-palatine. L’intervention de

nombreux gènes et de nombreux signaux moléculaires explique également ce fort taux de

prévalence. Ils ont été fortement étudiés chez l’homme (JIANG et al, 2006). En effet, les

signaux entre l’épithélium palatin et le mésenchyme ont un rôle clé dans la palatogenèse et

surtout lors de la croissance des lames palatines. Leur perte de fonction et notamment celles

de FGF10 et FGFR2b, SHh ou MDX1 entrainerait donc l’apparition de fente oro-faciale

(MOSSEY et al, 2009). Cela sera décrit en détail par la suite.

2. Etiologie des fentes oro-faciales

a) Généralités concernant l’espèce humaine

Chez l’homme, la fente labiale ou labio-palatine et la fente palatine semblent avoir une

étiologie différente. Toutes deux peuvent faire partie de syndromes dus à des mutations

génétiques, des anormalités chromosomiques ou une exposition à des agents tératogènes, ou

bien peuvent être non syndromiques. On distingue ainsi 4 groupes : fente labiale ou labio-

palatine isolée, fente palatine isolée, fente labiale ou labio-palatine syndromique et fente

palatine syndromique (SCHUTTE et MURRAY, 1999).

Il a été observé que 70% des fentes oro-faciales sont non syndromiques et leurs

étiologie et pathogénie sont complexes et encore non totalement élucidées (SCHUTTE et

MURRAY, 1999; JIANG et al, 2006). En effet, les fentes oro-faciales chez l’enfant sont le

résultat d’interactions complexes entre de multiples facteurs génétiques et environnementaux

(SCHUTTE et MURRAY, 1999; WEHBY et MURRAY, 2010).

b) Généralités concernant l’espèce canine

L’origine des fentes labio-palatines congénitales chez le chien semble être héréditaire

récessive, congénitale ou iatrogène (corticoïdes, métronidazole ou griséofulvine). Des cas de

désordres métaboliques gestationnels sont également rapportés comme le diabète mellitus. De

plus, un excès de vitamine A ou une déficience en acide folique semble également

52

responsable de telles anomalies chez le chien, mais également chez les rats et souris

(HOSKINS, 2001b; WARZEE et al, 2001; LECOCQ, 2007).

Les similarités génomiques entre l’homme et le chien ainsi que leurs conditions de vie

dans les mêmes environnements laissent à penser que l’étude de cette anomalie congénitale

dans l’espèce canine pourrait contribuer à améliorer les connaissances chez l’homme et

inversement (MOURA et al, 2012).

c) Déterminisme génétique

(1) De l’espèce humaine

La génétique des fentes oro-faciales chez l’homme est complexe. En effet, l’étiologie

génétique de ces anomalies serait multifactorielle : 3 à 14 gènes et facteurs génétiques et

environnementaux déterminant un seuil d’expression (SCHUTTE et MURRAY, 1999; LETRA et

al, 2010; MOURA et al, 2012).

Il y aurait une différence entre la fente palatine et la fente labiale avec ou sans fente

palatine. Cette dernière serait transmise selon un déterminisme autosomal dominant alors que

celui de la fente palatine isolée serait récessif lié au chromosome sexuel X (KEMP et al, 2009).

Des mutations ou l’altération d’expression de nombreux gènes ont été mises en

évidence. C’est le cas de TGFA et TGFB3 à l’origine de facteurs de croissance, MSX1, IRF6,

PAX3 et TBX22 dont l’expression permet la synthèse de facteurs de transcription, mais

également MTHFR, APOC2, FGF et PVR notamment. De plus, il existerait une interaction

entre MSX1 et TGFB3. Cette hypothèse provient du fait que les patients avec fente labio-

palatine présentent significativement plus fréquemment ces 2 gènes mutés simultanément

(LIDRAL et al, 1998; SCHUTTE et MURRAY, 1999; MOSSEY et al, 2009; LETRA et al, 2010;

WEHBY et MURRAY, 2010).

Des études génétiques chez des familles philippines puis américaines, espagnoles,

turques, Guatemalaises et chinoises ont permis de mettre en évidence l’importance du

chromosome 6q en région 14.2 dans l’apparition des fentes oro-faciales. Une étude sur des

souris a alors prouvé que le gène candidat PRSS35 présent sur ce chromosome s’exprime au

niveau de la tête et du palais lors de l’embryogenèse (analyses PCR). Un autre gène à

proximité, SNAP91 a été étudié et s’exprime au niveau cérébral, ce qui expliquerait que les

fentes oro-faciales soient fréquemment accompagnées d’anomalies cérébrales (LETRA et al,

2010).

Enfin, les syndromes avec fente oro-faciale sont dus à des anomalies chromosomiques

(5 régions identifiées : duplications en 3p26-21 ou 10p15-11 et délétions en 4p16-14, 4q31-35

ou 1q25), une transmission mendélienne (gènes IRF6, FGFR1, TP63, PVRL1 notamment) ou

une exposition à des agents tératogènes (SCHUTTE et MURRAY, 1999; MOSSEY et al, 2009).

53

(2) De l’espèce canine

L’espèce canine est caractérisée par une grande diversité phénotypique mais une perte de

variabilité génomique. C’est pour cela que les maladies héréditaires sont fréquentes chez la

plupart des races canines (KEMP et al, 2009).

Les études réalisées chez le chien ont permis de mettre en évidence une transmission

autosomale récessive de la fente palatine. En effet, les analyses de pédigrées de colonies

d’Epagneuls Bretons, de Bergers des Pyrénées et de Boxers ont révélé ce mode de

transmission (JURKIEWICZ et BRYANT, 1968; RICHTSMEIER et al, 1994; KEMP et al, 2009;

MOURA et al, 2012).

De plus, il est supposé qu’une fente palatine pourrait, en association avec d’autres

anomalies, être létale chez le male (RICHTSMEIER et al, 1994). Enfin, la consanguinité

augmente le risque d’apparition d’une telle anomalie (MOURA et al, 2012).

Une analyse ADN a permis d’exclure la mise en cause des gènes candidats suivants :

TGFB3, MSX1 et FST (KEMP et al, 2009).

Plus précisément, l’apparition des fentes oro-faciales chez le chien serait due à des

mutations sur le gène codant pour la 5-10-methylenetetrehydrofolate réductase MTHFR ayant

un rôle central dans le cycle métabolique des folates. Cette enzyme MTHFR a son importance

dans l’organogénèse ayant lieu lors de la première moitié de la gestation et au cours de

laquelle se produit la fusion palatine (DOMOSLAWSKA et al, 2013).

d) Facteurs environnementaux

Des interactions gène-environnement existent et entrent en jeu dans l’étiologie des fentes

oro-faciales. Ainsi l’exposition de la femme enceinte aux dioxines, à l’alcool, au tabagisme et

aux œstrogènes environnementaux constituent un facteur de risque par altération de

l’expression de certains gènes (JIANG et al, 2006; MOSSEY et al, 2009).

Les enzymes métaboliques des vitamines A, B6 et B9 (folates) semblent avoir une

influence sur l’apparition de fentes oro-faciales (JIANG et al, 2006; MOSSEY et al, 2009).

Des interactions entre ces facteurs environnementaux et nutritionnels et MSX1, TGFA,

TGFB3 et MTHFR sont étudiées. La vitamine A induirait des fentes oro-faciales alors que les

vitamines B6 et B9 entraineraient une diminution de leur taux d’incidence (JIANG et al, 2006;

MOSSEY et al, 2009). En effet, dans un grand nombre d’études, la supplémentation multi-

vitaminique de la femme enceinte est en lien avec une diminution du risque de fentes oro-

faciales. La prévalence diminuerait alors de 25% (MOSSEY et al, 2009).

54

Une carence en zinc entraine des fentes palatines isolées ainsi que d’autres anomalies chez

l’animal. Une étude aux Pays-Bas montre que les femmes ayant eu un enfant avec fente oro-

faciale ont des concentrations sanguines en zinc inférieures à la normale. Il en est de même

aux Philippines (MOSSEY et al, 2009; WEHBY et MURRAY, 2010).

L’administration de corticoïdes, agents alkylants, phenytoine et trimethadione-troxidone

entrainent l’apparition de fentes oro-faciales chez le chien (GUILLOTEAU et al, 2006).

e) Les folates

(1) Définition, description et provenance

Le terme folates regroupe différentes molécules dont la structure et l’activité

biologique sont proches. L’acide folique ou vitamine B9 en est le composé principal (HAND et

al, 2010).

L’acide folique a été découvert en 1943. Sa structure est divisée en 3 parties : le noyau

d’acide para-aminobenzoique, la ptéridine et la chaine d’acide polyglutamique (Figure 33). La

concentration sanguine en folate est de 3.2 à 34 ng/mL. Les besoins quotidiens sont de 0.18

mg /kg chez les chiens et 0.8 mg/kg chez les chats. Cette vitamine n’est jamais toxique (HAND

et al, 2010).

Figure 33 : Molécule d’acide folique.

On rencontre l’acide folique ou ptéroïglutamique dans les aliments suivants : foie,

jaune d’œuf, légumes verts tels que les lentilles, épinards, salades, asperges, graines (noix,

châtaigne, pois chiche, arachides) et agrumes. Cette vitamine étant détruite par la chaleur, le

froid prolongé ou un conditionnement aqueux. L’alimentation commerciale pour nos animaux

de compagnie est donc supplémentée (VIDAILHET et al, 2008; HAND et al, 2010; BEAUFRERE

et al, 1992).

(2) Métabolisme des folates

Le cycle métabolique de l’acide folique débute par l’hydrolyse en polyglutamate par

l’enzyme intestinale y-glutamyl hydrolase. Le monoglutamate est alors formé puis absorbé

55

par les entérocytes. C’est sous sa forme réduite, dihydro ou tétrahydrofolate que l’acide

folique prend part aux réactions métaboliques. L’enzyme dihydrofolate réductase DHFR

transforme le dihydrofolate en tétrahydrofolates. Après méthylation, c’est sous forme de 5-

méthyltetrahydrofolate que les folates atteignent la veine porte. Ils sont ensuite transportés par

l’albumine, la macroglobuline alpha 2, la transferrine et la protéine de transport des folates

(folate-binding protein). Le foie joue alors un rôle dans leur homéostasie. Les récepteurs aux

folates sont spécifiques et permettent l’entrée dans les cellules. Le 5-méthyltetrahydrofolate

sert alors de donneur de groupement méthyl et de source de tétrahydrofolate. Ce dernier agit

comme accepteur d’un atome de carbone et produit un grand nombre de coenzymes

spécifiques à des réactions intracellulaires. Le 5,10-methylenetetrahydrofolate est réduite en

5-methyltetrahydrofolate par la 5,10-methylenetetrahydrofolate réductase MTHFR (Figure

34). Le 5-methyltetrahydrofolate apporte un groupement méthyl nécessaire à la conversion

d’homocystéine en méthionine (reméthylation) avec intervention de l’enzyme méthionine

synthase (Figure 36). Ainsi, une mutation du gène MHTFR (méthylenetetrahydrofolate

réductase) entraine des dysfonctionnements métaboliques liés aux folates (HAND et al, 2010;

ALFARRA et al, 2011).

Figure 34 : Cycle métabolique des folates (CZEIZEL et MEDVECZKY, 2003).

56

(3) Rôles généraux des folates

Combiné à des enzymes spécifiques, les folates ont un rôle de coenzymes lors du

transfert d’un atome de carbone lors de nombreuses réactions biochimiques telles que celles

du métabolisme d’acides aminés. Ils sont fondamentaux à la synthèse des bases purine et

pyrimidine de l’ADN et ARN (HARTRIDGE et al, 1999; HAND et al, 2010).

Comme les tissus à prolifération rapide ont un fort besoin en ADN, une carence en

folates sera mise en évidence au niveau du système hématopoïétique, des surfaces épithéliales

et des gonades dans un 1er

temps. On observera alors des anémies (HARTRIDGE et al, 1999).

Une carence en folates entrainera également une élévation du taux d’homocystéine

dans un deuxième temps. En effet, des enzymes folates-dépendantes permettent la

méthylation de cet acide aminé et ainsi la synthèse de méthionine. La vitamine B12 intervient

également dans ce mécanisme (HARTRIDGE et al, 1999; HAND et al, 2010).

Les symptômes lors d’une carence en acide folique sont une anorexie, un

amaigrissement, une glossite, une leucopénie, une anémie et une hyper-homocystéinémie (la

plus marquée chez le chat). Un risque d’atteinte du tube neural est connu chez l’homme et

sera développé plus en détail par la suite (HAND et al, 2010).

Les folates sont également nécessaires à la synthèse d’un grand nombre de

neurotransmetteurs : dopamine, noradrénaline et adrénaline et sont ainsi fondamentaux au bon

fonctionnement du système nerveux central (HAND et al, 2010).

Enfin, une carence en acide folique modifie l’expression de certains gènes et entraine

des anomalies lors du développement embryologique. Cela résulte d’une modification de

structure de la chromatine par modification des histones suite à une acétylation et une

méthylation. Cette méthylation de l’ADN rencontrée chez les mammifères correspond au

phénomène de régulation épigénétique ayant lieu uniquement durant l’embryogenèse. Or les

folates pourraient influencer ces méthylations et ainsi entrainer des désordres

morphogénétiques (FINNELL et al, 2004).

En médecine humaine, la relation entre facteurs nutritionnels et génétiques causant des

malformations congénitales lors du développement embryonnaire est bien documentée.

Comme dit précédemment, l’acide folique est un facteur essentiel à l’activité des enzymes

modulant la synthèse d’ADN et la méthylation de l’homocystéine en méthionine. Une

déficience métabolique en folates peut causer des fentes oro-faciales, des anomalies du tube

neural comme le spina bifida et entrainer un effet général négatif sur le développement fœtal.

Il augmente également le nombre de dystocie et donc l’incidence de césariennes

(DOMOSLAWSKA et al, 2013). Enfin, l’acide folique prévient l’hyper-homocystéinémie

impliquée dans les lésions de l’endothélium vasculaire et entrainant de l’athérome et des

accidents thromboemboliques (VIDAILHET et al, 2008).

57

C’est l’effet de l’acide folique sur l’apparition de spina bifida chez l’enfant qui a été le

plus étudié.

3. Acide folique et spina bifida chez l’homme

a) Anomalies du tube neural et spina bifida

La fermeture du tube neural a lieu du 21 au 28ème

jour de grossesse. Ainsi, le tube

neural se ferme au moment où la plupart des femmes ne sont pas encore conscientes d’être

enceinte. Les cellules des crêtes neurales ont un rôle important dans la fermeture du tube

neural mais également dans le développement des structures orales telles que le palais. Un

défaut de fermeture entraine des malformations telles qu’une anencéphalie (défaut en portion

crâniale) ou une spina bifida (défaut en portion caudale) ou bien un avortement. L’incidence

d’anomalies du tube neural est de 0.6 à 3.7 sur 1000 naissances, elles sont donc fréquentes

chez l’homme (HARTRIDGE et al, 1999).

Le spina bifida est une anomalie du développement vertébral. Elle consiste en la

présence d’une fente sur la ligne médiane de l’arc vertébral d’une ou plusieurs vertèbres

(Figure 35) (HYTTEL et al, 2010b). Elle est fréquente chez l’homme, chez qui elle intervient

entre les 22 et 28èmes

jours après la conception. Une herniation de la moelle épinière

(myéloméningocèle) peut être présente en plus de celle des méninges (méningocèle). Des

malformations secondaires urinaires, rénales, orthopédiques et neurologiques sont alors

observées. Le spina bifida concerne une grossesse sur 2000 en Europe (GILLEROT, 2004).

Chez nos animaux domestiques, le spina bifida est plus fréquente chez les Bulldogs et

les chats Manx (HYTTEL et al, 2010c).

Figure 35 : Spina bifida chez un fœtus humain (JOYEUX, 2011).

58

b) Effet de l’acide folique

Il a été démontré que des traitements antagonistes des folates tels que des

antiépileptiques ou des molécules contre le psoriasis ou certains cancers (méthotrexate,

aminoptérine) chez la femme enceinte, entrainent une forte augmentation (5 à 20%)

d’apparition de défaut de fermeture du tube neural (HARTRIDGE et al, 1999; LLOYD et al,

1999; KALTER, 2000; JOYEUX, 2011). Expérimentalement, chez des animaux de laboratoire

(rats et souris) l’administration de traitements anti-folates ou d’alimentations carencées en

folates a permis la même conclusion (LLOYD et al, 1999). De plus, il a été prouvé qu’une

carence en acide folique durant la grossesse, révélée par une anémie mégaloblastique, entraine

des avortements et des malformations du tube neural (KALTER, 2000).

Depuis les années 80, de nombreuses études ont mis en évidence l’action préventive

d’une supplémentation péri-conceptionnelle en acide folique contre l’apparition de défauts de

fermeture du tube neural tel que le spina bifida chez l’enfant (HERNANDEZ-DIAZ et al, 2001;

CZEIZEL, 2004; PULIKKUNNEL et THOMAS, 2005; VIDAILHET et al, 2008; CZEIZEL, 2009;

WEHBY et MURRAY, 2010; CZEIZEL et al, 2011; CZEIZEL et al, 2013; BEAUFRERE et al,

1992). La diminution du risque pourrait atteindre 70% (FINNELL et al, 2004). Néanmoins,

d’autres études sérieuses remettent en question ces résultats sans contredire le fait qu’une

carence en folates entraine de telles anomalies (KALTER, 2003).

Cette supplémentation était d’abord recommandée aux femmes avec antécédents ou

sous traitement anti-épileptique à la dose de 4 mg/j. Puis elle a été conseillée à toutes les

femmes pouvant procréer à la dose de 400 µg/j (HARTRIDGE et al, 1999; VIDAILHET et al,

2008; DE VIGAN et al, 1996). Cependant, à cause des problèmes d’observance, plusieurs pays

ont décidé de rendre obligatoire l’enrichissement des farines en acide folique (enrichissement

entrainant un apport moyen de 100 µg/j). C’est le cas notamment des Etats-Unis, du Canada

et du Chili. Une supplémentation spécifique en période péri-conceptionnelle a été conservée

aux mêmes dosages. Une diminution de 30% à 46% des anomalies de fermeture du tube

neural a alors été observée aux Etats-Unis et de 47 à 54% au Canada (CANFIELD et al, 2005;

PULIKKUNNEL et THOMAS, 2005; VIDAILHET et al, 2008). En revanche, cela a semblé

entrainer une augmentation du nombre de cancers colorectaux et de l’altération cognitive des

personnes âgées carencées en vitamine B12. Remarquons qu’à ce sujet, les études apportent

des résultats contradictoires (BEAUFRERE et al, 1992).

A ce jour, 39 pays suivent cette politique d’enrichissement des farines. Aucun pays

d’Europe ne fait de même, mais la supplémentation aux doses précédentes est fortement

recommandée de 8 semaines avant à 8 semaines après la conception. Le Réseau European

Surveillance of Congenital Anomalies (EUROCAT) n’a pas mis en évidence de diminution de

prévalence des anomalies du tube neural. Cela semble avoir deux raisons : la fermeture du

tube neural se termine le 28ème

post conception donc à un moment où les femmes ignorent

souvent qu’elles sont enceintes et l’observance inadéquate. Ainsi, le réseau EUROCAT

conclut en la nécessité d’enrichissement des farines européennes et donc de l’alimentation

courante (pain, céréales) (VIDAILHET et al, 2008). La possibilité d’un rôle protecteur contre

les malformations cardiaques, les fentes labio-palatines et l’imperforation anale et la non-

59

toxicité certaine de l’acide folique sont deux arguments supplémentaires à cet enrichissement

(GILLEROT, 2004).

Pour conclure, les recommandations européennes sont les suivantes :

- s’alimenter de façon générale avec suffisamment de fruits et légumes verts.

- supplémenter à la dose de 400 µg/j 1 à 2 mois avant la conception programmée

jusque 1 à 2 mois de grossesse ;

- supplémenter à la dose de 4 mg/j sur la même période en cas d’antécédents ou de

traitement anti-épileptique (AFSSA, 2003; GILLEROT, 2004).

Il existe cependant des cas d’anomalie du tube neural malgré la supplémentation, ce

qui prouve l’implication de facteurs génétiques en plus des facteurs nutritionnels sur lesquels

il est possible d’influer. Une étude française réalisée chez des femmes ayant porté un enfant

atteint de défaut de fermeture du tube neural a d’ailleurs révélé des concentrations sériques en

acide folique non significativement différentes de celles de femmes témoins. Il en est de

même pour la vitamine B12. Ainsi, les statuts vitaminiques semblent bien ne pas permettre à

eux-seuls d’expliquer l’apparition de défaut de fermeture du tube neural (WANAT et al, 2005).

D’autres études européennes ont ensuite également mis en évidence cette absence de lien

entre concentration sanguine en acide folique chez la femme et apparition d’anomalie de

fermeture du tube neural chez le fœtus (KALTER, 2000).

Récemment, il a été émis l’hypothèse selon laquelle la diminution du taux de défaut de

fermeture du tube neural accompagnée de la supplémentation en acide folique pourraient ne

pas être due, ou pas entièrement due, à cette prévention vitaminique, mais plutôt à des

avortements spontanés des embryons atteints. En effet, le taux d’avortement est de 15 à 20%

et peut-être sous-estimé du fait des grossesses non conscientes, et la fréquence de

malformations chez l’embryon avorté est plus bien élevé : 10 fois plus dans le cas de spina

bifida. On parle alors de térathanasie. La question du rôle de l’acide folique dans ce

phénomène est posée. En effet, trois études récentes vont dans le sens d’une augmentation du

taux d’avortement chez des femmes supplémentées en acide folique. Cela reste une possibilité

à explorer davantage (KALTER, 2000).

Les variations métaboliques des folates ainsi que des interactions sur la susceptibilité

génétique des anomalies du tube neural sont des hypothèses à considérer (KALTER, 2000). Le

polymorphisme des gènes mis en jeu dans le métabolisme de l’homocystéine doit entrer en

compte, sans oublier la possibilité d’autoanticorps contre les récepteurs aux folates bloquant

leur absorption intracellulaire (WANAT et al, 2005).

c) Mécanisme d’action

On trouve un grand nombre d’hypothèses expliquant le rôle de l’acide folique dans la

prévention des anomalies du tube neural parmi lesquelles une réduction du taux

60

d’homocystéine et une facilitation de la méthylation de l’ADN et de la synthèse de

thymidylate à partir de l’uracile. Mais le mécanisme exact reste encore incertain et

controversé (VIDAILHET et al, 2008).

Des désordres du métabolisme de l’homocystéine sont supposés être la cause de défaut

de fermeture du tube neural (ALFARRA et al, 2011; CZEIZEL, 2011; JOYEUX, 2011). Or,

l’hyper-homocystéinémie est consécutive à une diminution d’apport en acide folique. En

effet, ce dernier intervient dans la reméthylation de l’homocystéine en méthionine grâce à

l’enzyme méthionine synthase. La vitamine B12 entre également en jeu (WANAT et al, 2005).

Des mères d’enfants avec anomalie du tube neural et notamment atteints de spina bifida ont

bien des valeurs hautes d’homocystéine dans le sang et le liquide amniotique (MILLS et al,

1995; CZEIZEL, 2004; FINNELL et al, 2004).

Plus précisément, lors de consommation de protéines, des acides aminés, dont la

méthionine, sont relâchés dans l’organisme. La méthionine est ensuite convertie en cystéine et

un métabolite toxique est alors formé : l’homocystéine. Cette molécule doit alors être

neutralisée rapidement et cela a lieu par deux moyens. L’homocystéine peut être métabolisée

en cystathionine grâce à la cystathionine synthase ou être reméthylée en méthionine grâce à la

méthionine synthase nécessitant la vitamine B12 comme cofacteur et le 5-methyl-

tetrahydrofolate comme donneur de groupement méthyl (Figure 36). Cette 2ème

évolution

explique, au moins partiellement, le rôle des folates dans l’apparition d’anomalie du tube

neural. Remarquons qu’au sein des compléments vitaminiques, seul l’acide folique est

susceptible de diminuer le taux d’homocystéine. Ainsi, les anomalies de fermeture du tube

neural ne seraient pas dues à une carence en folates primaire mais à une anomalie du

métabolisme folates-homocystéine. Une interaction entre prédispositions génétique et

nutritionnelle serait en cause : une carence nutritionnelle pourrait déclencher une

prédisposition génétique et l’acide folique pourrait neutraliser cette déficience métabolique.

Le polymorphisme MTHFR observé va également dans ce sens. Tout récemment, certains

auteurs ont proposé de renommer l’ensemble acide folique-folates sous le terme de vitamine

B11 (CZEIZEL, 2009).

Une variante génétique de MTHFR transmise selon un mode autosomique récessif est

à l’origine d’une enzyme partiellement inactive. Les individus homozygotes présentent alors

des taux de folates diminués, une hyper-homocystéinémie et ainsi un risque augmenté de

défaut de fermeture du tube neural et de cardiopathie ischémique. La fréquence de cet allèle

est de 24 à 40% en Europe. Une étude rapporte 3 fois plus d’homozygotie chez des individus

atteints d’anomalie du tube neural. Cependant, il s’agit d’un facteur de risque parmi d’autres

car des individus ne l’ont pas et présentent tout de même une telle anomalie. Des recherches

sont en cours afin d’étudier l’existence d’autres variantes de MTHFR et de déficits

héréditaires d’autres enzymes du métabolisme des folates telles que la méthionine synthase

(JOYEUX, 2011).

61

Figure 36 : Cycle métabolique méthionine-homocystéine et folates (CZEIZEL, 2011).

Des mutations et un polymorphisme des gènes codant des protéines impliquées dans le

métabolisme de l’acide folique seraient à l’origine de l’apparition de défaut de fermeture du

tube neural. Cela concernerait le récepteur alpha aux folates, l’enzyme RFC1, la 5.10-

méthylenetetrahydrofolate réductase (MTHFR), la cystathionine B-synthase (CBS), la

méthionine synthase, la méthionine synthase réductase et la méthylènetétrahydrofolate

déshydrogénase (MTHFD) (FINNELL et al, 2004; ALFARRA et al, 2011).

Le gène MTHFR a été le premier trouvé. La mutation C677T de ce gène, transformant

une alanine en valine est responsable de l’apparition de défaut de fermeture du tube neural.

De plus, un des effets de la réduction de l’activité de l’enzyme MTHFR due à sa mutation est

l’hyper-homocystéinémie. Or, comme dit précédemment, une augmentation de concentration

sanguine en homocystéine est observée chez les mères d’enfants avec ouverture du tube

neural. Cela valide ainsi l’implication de l’acide folique dans le risque d’apparition d’une telle

anomalie (MARTINELLI et al, 2001; FINNELL et al, 2004).

Récemment, l’hypothèse d’un mécanisme auto-immun avec anticorps anti-récepteurs

de l’acide folique a été évoquée par une étude américaine mais elle a ensuite été contredite par

une étude en Irlande (ROTHENBERG et al, 2004; VIDAILHET et al, 2008; MOLLOY et al, 2009).

62

Un autre mécanisme (évoqué précédemment) est décrit dans de récents articles : la

méthylation de l’ADN comme phénomène épigénétique. Des études expérimentales sur des

abeilles et des souris valident que l’exposition maternelle précoce à des facteurs

environnementaux et diététiques durant l’embryogenèse influe le phénotype des fœtus. Ces

changements phénotypiques par méthylation de l’ADN seraient en lien avec le métabolisme

des folates puisqu’il est connu que l’acide folique est directement impliqué dans le transfert

de groupement méthyl à l’ADN en tant que coenzyme. Plus précisément, l’épigénétique est un

phénomène affectant l’expression génétique sans altérer le génome. Son mécanisme majeur

est la méthylation de l’ADN transformant la base cytosine au niveau de son carbone 5. Cette

méthylation de l’ADN est essentielle à l’embryogenèse et au développement fœtal, on parle

de totipotence cellulaire. Cependant, elle peut entrainer des anomalies ou des maladies

développementales et même à l’âge adulte (cancers) si elle est inadéquate. Cela serait le cas

lors d’apports diététiques maternels insuffisants tels qu’une carence en acide folique (KIM et

al, 2009).

En effet, l’hypothèse selon laquelle l’inhibition du transfert de groupement méthyl ou

d’une carence maternelle en folates diminuerait le risque de défaut de fermeture du tube

neural chez l’homme par réduction de méthylation d’ADN se base sur des études

expérimentales animales. Ces études démontrent l’importance d’une méthylation adéquate

durant la fermeture du tube neural mais également que le statut gestationnel en folates est

proportionnellement relié à la méthylation d’ADN (KIM et al, 2009).

4. Acide folique et fentes labio-palatines

a) Effet chez l’homme

La supplémentation en folate aurait pour effet de diminuer la prévalence des fentes

oro-faciales chez l’homme selon de nombreuses études (SHAW et al, 1995; ITIKALA et al,

2001; SCHUBERT et al, 2002). Cependant, ces résultats portent à controverse car d’autres

études les contredisent (HARTRIDGE et al, 1999). De plus, le mécanisme n’est pas réellement

connu (JIANG et al, 2006).

L’administration d’antagoniste des folates chez l’homme est responsable d’un risque

plus élevé de fente oro-faciale chez le fœtus (SHAW et al, 1995; MOSSEY et al, 2009). En

effet, une étude rétrospective réalisée sur des milliers d’enfants américains durant 22 ans, a

montré que l’administration d’antagonistes des folates tels que les triméthoprime, triamtèrene,

carbamazépine, phénytoine, phénobarbital et primidone durant la grossesse entraine une

augmentation du risque d’anomalie du tube neural mais également de malformations des

membres, des systèmes cardiovasculaire et urinaire et de fentes oro-faciales (HARTRIDGE et

al, 1999; HERNANDEZ-DIAZ et al, 2000). Ce risque d’apparition de telles fentes est le plus

élevé lors des 2ème

et 3ème

mois de grossesse. De plus, le tabagisme de la femme enceinte

63

entraine un risque plus élevé de fente orale chez le fœtus, or le tabagisme est responsable

d’une baisse du taux de folates (HARTRIDGE et al, 1999).

Des études Hongroise et Danoise ont mis en évidence l’effet bénéfique d’une

supplémentation en acide folique sur l’apparition d’anomalies congénitales telles que des

fentes labio-palatines, à condition qu’elle ait lieu précocement, c’est-à-dire avant conception

et durant les 7 premières semaines de grossesse (période critique) (ROLSCHAU et al, 1999;

CZEIZEL et al, 2004).

Une autre étude américaine a permis de mettre en évidence un risque d’apparition de

fente labio-palatine réduit de 48% (et de 19% pour les fentes palatines mais avec peu de cas)

chez les femmes supplémentées en vitamines dont l’acide folique en période péri-

conceptionnelle et/ou durant le 1er mois suivant la conception. Le risque est cependant

inchangé lorsque la supplémentation est débutée le 2ème

ou 3ème

mois post conception. Les

garçons ont plus de risque d’être atteint (66% des fentes labio-palatines) et 4% d’entre eux

naissent au sein de famille avec antécédent de fente oro-faciale (ITIKALA et al, 2001).

A l’inverse, une troisième étude américaine a conclu en l’absence de lien entre la

supplémentation péri-conceptionnelle (1 mois avant la conception à 12 semaines de grossesse)

de la femme enceinte et le risque de fente orale chez l’enfant à naitre. Elle l’explique par le

délai beaucoup plus long de formation de la face et du palais par rapport à celle du tube neural

et le grand nombre de mécanismes et molécules en jeu, malgré la même origine cellulaire des

2 évènements embryonnaires (HAYES et al, 1996).

En revanche, de nombreuses études ont prouvé que la supplémentation en acide

folique de la femme enceinte présentant des antécédents de fente oro-faciale, c’est-à-dire

ayant déjà eu un enfant atteint de cette anomalie, permet de diminuer de façon significative le

risque de récidive. Les doses sont alors élevées et varient entre 5 et 10 mg par jour.

L’administration doit débuter 3 mois avant la conception et se poursuivre durant la grossesse

(WEHBY et MURRAY, 2010).

Contrairement aux études concernant la diminution du risque d’atteinte du tube neural

suite à l’enrichissement des farines en acide folique aux Etats-Unis et au Canada qui sont

assez homogènes, celles portant sur le risque de fente oro-faciale sont très contradictoires.

Certaines ne montrent clairement pas de diminution significative du risque (WEHBY et

MURRAY, 2010). En revanche, l’étude réalisée par le programme National Health and

Nutrition Examination Survey a mis en évidence une diminution significative de 12% de la

prévalence des fentes labio-palatines chez les enfants américains suite à l’enrichissement des

farines en acide folique (CANFIELD et al, 2005; VIDAILHET et al, 2008).

Enfin, les résultats d’une étude française récente renforcent le rôle des folates dans la

prévention des fentes orales. En effet, elle a permis de mettre en évidence une relation dose-

réponse significative entre le risque de fente oro-faciale et une diminution de l’apport

alimentaire moyen en folates. Cette relation se révèle plus marquée pour les fentes palatines

sans fente labiale associée. Lors de cette étude, très peu de femmes (< 1 %) ont déclaré avoir

64

pris des suppléments vitaminiques avec acide folique en période pré-conceptionnelle. Les

apports moyens quotidiens estimés de 270 mg/j sont inférieurs aux apports nutritionnels

conseillés de 400 mg/j pour la prévention des anomalies du tube neural (études plus

unanimes). Ces apports insuffisants étant, malgré les recommandations, peu compensés

actuellement par des suppléments vitaminiques, le programme d’enrichissement des farines

proposé par l’AFSSA en 2003 présente une alternative à prendre sérieusement en

considération (AFSSA, 2003; ROUGET et al, 2005).

Tout récemment une étude hongroise a confirmé qu’une supplémentation multi-

vitaminique contenant de l’acide folique réduisait le risque d’apparition d’anomalies

congénitales tel qu’un défaut de fermeture du tube neural et des fentes oro-faciales. Elle s’est

plus particulièrement interrogée sur le choix d’une supplémentation multi-vitaminique ou en

acide folique seul ainsi que sur la posologie la plus adéquate. Les effets d’une administration

de 5mg d’acide folique par jour et d’une supplémentation multi-vitaminique avec 0.4-0.8 mg

par jour ont alors été comparés. Ainsi, cette dernière apparait plus efficace contre les défauts

de fermeture du tube neural. Les 2 options entrainent une diminution équivalente du risque de

malformations cardiovasculaires congénitales. Et, seul l’acide folique à forte dose a un effet

sur la prévention de fentes oro-faciales (CZEIZEL et al, 2004).

Ainsi, même si les nombreuses études réalisées chez l’homme ne sont pas totalement

unanimes, leurs résultats vont dans le sens d’un intérêt de la supplémentation péri-

conceptionnelle en acide folique afin de diminuer le risque d’apparition de fente oro-faciale

chez l’enfant. C’est suite à cette conclusion que cette supplémentation a été mise en place

chez la chienne gestante et notamment au sein du CERREC, Centre d’Etude et Recherche en

reproduction et Elevage Canin, au sein de l’Ecole Vétérinaire de Lyon dite VetAgro Sup

désormais. Les études concernant cette espèce sont bien moins nombreuses.

b) Effet chez le chien

De façon générale, une carence en folates chez l’animal est responsable d’un risque

plus élevé de fente oro-faciale chez les fœtus. Cela a clairement été mis en évidence sur des

animaux de laboratoires (ELWOOD et COLQUHOUN, 1997; LLOYD et al, 1999; MOSSEY et al,

2009). De même, l’administration d’antagonistes des folates augmente ce risque. De

nombreuses études utilisant notamment le méthotrexate traitant l’arthrite l’ont mis en

évidence (LLOYD et al, 1999).

Des études expérimentales chez le chien ont prouvé que l’administration d’un

antagoniste de l’acide folique, le diazo-oxonorleucine, du 25 au 28ème

jour de gestation

induisait des fentes palatines (GUILLOTEAU et al, 2006).

Une étude a été réalisée sur la race Boston terrier. Une supplémentation en acide

folique à 5mg/jour a été administrée à des chiennes Boston terriers gestantes. La présence de

fente palatine chez les chiots a alors été étudiée. Une fréquence de 17.6% a été observée sans

65

supplémentation alors qu’elle était de 4.2% avec : cela correspond à une diminution de 76%.

L’acide folique a été administré de l’accouplement jusqu’à 3 jours après la naissance.

Seulement 2 fentes palatines concernaient le palais mou et 2 cas présentaient une fente

palatine et labiale. La différence entre les 2 sexes n’était pas significative. L’hypothèse selon

laquelle l’acide folique interviendrait dans le mécanisme de fusion du palais chez le chien

parait ainsi valide (ELWOOD et COLQUHOUN, 1997).

Une autre étude a été réalisée chez le Bouledogues français. 45 chiennes étaient

réparties en 2 groupes : l’un nourri avec Royal Canin premium (teneur en acide folique=0.9

mg/kg) et le second nourri avec Royal Canin supplémenté en acide folique (5 mg par jour) de

l’accouplement jusqu’à la fin de la gestation. Les résultats montrent un taux de fentes

palatines significativement différent entre les 2 groupes : 8.57% pour le 1er et 4.41% pour le

second. Cela correspond à une réduction de 48.5%. Le nombre de chiots par portée ne diffère

pas significativement entre les 2 groupes (GUILLOTEAU et al, 2006).

Enfin, une 3ème

étude avait pour but de comparer la fréquence de d’apparition de fente

labio-palatine chez des chiots nouveau-nés de races Carlin et Chihuahua. Un premier groupe

de 25 chiennes a reçu une supplémentation en acide folique du début des chaleurs jusqu’au

40ième

jour de gestation. Le 2ème

groupe de 12 chiennes a reçu une diète traditionnelle,

constituant ainsi le groupe témoin. Les observations montrent alors que le pourcentage de

chiots avec fente palatine est diminué lors de supplémentation en acide folique (10.86 contre

15.78 chez le Carlin, 4.76 contre 4.8 chez le Chihuahua) mais il semble que cela puisse être

mis en doute en analysant les méthodes et données statistiques (p-values supérieures à 0.05

notamment). Ainsi, cette étude n’apparait pas clairement concluante. De plus, des mesures de

la concentration sanguine en acide folique chez la chienne gestante complémentée ou non ont

été réalisées. Le sang a été prélevé au début des chaleurs puis 14 jours plus tard puis au 30ième

jour de gestation. Au jour 0, la concentration est d’environ 8 ng/mL (physiologique) ; aux

jours 14 et 30 elle est augmentée et plus élevée chez les chiennes supplémentées mais

diminuées chez celles du groupe témoin (environ 6 ng/mL). Or, chez l’homme, on sait que la

diminution physiologique de la concentration en acide folique du début jusqu’au milieu de la

grossesse est associé au le développement du fœtus. Les résultats de cette étude concernant le

groupe témoin laisse penser qu’il en est de même chez le chien (DOMOSLAWSKA et al, 2013).

c) Mécanisme d’action

Afin d’élucider le mécanisme d’action de l’acide folique sur l’apparition de fentes oro-

faciales, des expérimentations animales ont été réalisées. Grâce à des expériences in vitro,

l’intervention de l’acide folique dans la fusion palatine a été mise en évidence. De plus, des

souris génétiquement modifiées présentant un défaut de transporteur en acide folique se sont

révélées atteintes d’anomalies cranio-faciales sévères. L’évidence la plus fondamentale du

lien entre les fentes faciales et l’acide folique consiste en la même origine cellulaire du tube

neural et de la région cranio-faciale (cellules des crêtes neurales). Enfin, les fermetures labiale

et palatine mettent en jeu des divisions cellulaires rapides nécessitant un fort taux

66

intracellulaire d’acide folique. Ainsi, le mécanisme d’action de la supplémentation en folates

reste incertain mais une récente hypothèse a été suggérée : la prise d’acide folique diminuerait

le risque de fentes en compensant la prédisposition génétique individuelle. Concrètement, une

élévation transitoire de la concentration sanguine en folate chez la mère compenserait un

défaut métabolique (FINNELL et al, 2004).

Une déficience en acide folique est prouvée comme étant responsable de fente palatine

chez la souris. Afin d’élucider ce mécanisme, une étude a été réalisée chez cette espèce. Le

potentiel tératogène d’une déficience en vitamine durant toute la durée de la gestation (jours 1

à 18) et les effets d’une restriction vitaminique durant la période de palatogenèse (jours 12 et

13) sont étudiés chez 2 sortes de souris (NMRI et A/WySn). Les résultats montrent qu’une

déficience en vitamine B entraine une augmentation du taux de fente palatine (25% au lieu de

3.8%) chez les souris NMRI mais pas de changement chez les souris A/WySn. Une déficience

de chaque vitamine B entraine un tel effet, et lorsque la déficience les concerne toutes il est

encore plus important. Le fait que les résultats soient si différents entre les 2 types de souris

met en évidence l’importance des facteurs génétiques dans le déterminisme des fentes

palatines chez la souris. Les effets tératogènes concernent principalement les déficiences en

vitamine B1 et toutes vitamines B mais sont peu présents lors de déficiences en vitamine B12

et acide folique. Une supplémentation multi-vitaminique B semble ainsi la mesure préventive

recommandée pour diminuer le taux de fente palatine (SCHUBERT et al, 2002).

Enfin, différents gènes candidats à l’apparition de fentes labio-palatines ont été testés

chez l’homme. Les gènes TGFA en région 6p23, RARA en 17q21, BCL3 en 19q13.2, MSX1

en 4p16 et TGF3 en 14q24 ont progressivement été identifiés. Etant donné le rôle potentiel de

l’acide folique, une étude italienne récente s’est concentrée sur le gène 5.10-

methylenetetrahydrofolate réductase MTHFR, enzyme intervenant dans le cycle des folates.

Et, en effet, une mutation C->T transformant une alanine en valine intervient sur ce gène

significativement plus fréquemment chez les femmes ayant eu un enfant atteint de fente labio-

palatine. Ainsi, ce résultat va dans le sens d’une implication de l’acide folique puisque cette

mutation entraine un défaut d’utilisation de cette vitamine. De plus, un des effets de la

réduction de l’activité de l’enzyme MTHFR due à sa mutation est l’hyper-homocystéinémie

(MARTINELLI et al, 2001). Or, une augmentation de concentration sanguine en homocystéine,

dont le métabolisme est relié à celui de l’acide folique (comme décrit précédemment), est

observée chez les mères d’enfants avec fente oro-faciale (MOSSEY et al, 2009). Ainsi, le

polymorphisme du gène MTHFR maternel semble donc bien en cause dans l’apparition de

fente labio-palatine chez l’enfant et valide l’importance de sa supplémentation péri-

conceptionnelle en acide folique (MARTINELLI et al, 2001).

67

La relation entre les facteurs nutritionnels et génétiques et leur impact sur les désordres

embryologiques n’est pas encore clairement élucidée mais les phénomènes épigénétiques

décrits précédemment semblent en être l’explication. La supplémentation en acide folique de

la chienne gestante apparait comme un bon moyen préventif pour diminuer l’incidence des

fentes oro-faciales, et spécialement chez les races canines prédisposées. Cependant, peu

d’études s’y sont consacrées et les résultats ne sont pas toujours exploitables. Ainsi, l’étude

rétrospective décrite dans la partie suivante a vu le jour et a été réalisée grâce aux nombreuses

chiennes gestantes vues au CERREC.

Partie III : Etude rétrospective des facteurs de risques

nutritionnels et génétiques mis en jeu dans l’apparition de fentes

oro-faciales chez le chien

Depuis quelques années, l’hypothèse d’une supplémentation de la chienne gestante

comme facteur diminuant le risque de fente palatine chez les chiots à naitre se développe et

fait l’objet de quelques études. Etant donné, l’absence de toxicité de cette supplémentation,

elle est proposée au CERREC depuis 2007 mais aucune certitude quant à son efficacité n’a été

objectivée. Ainsi, cette étude rétrospective a pour but de déterminer les facteurs causant

l’apparition de fentes palatine et notamment d’étudier l’impact de l’alimentation et plus

particulièrement du facteur nutritionnel qu’est la supplémentation en acide folique.

70

A. Matériel et Méthodes

I. Mise en place du questionnaire

La première étape de cette étude a été la mise en place d’un questionnaire portant sur

les caractéristiques de la chienne gestante (race, primiparité ou multiparité, âge, antécédents et

pédigrées), les modalités de mise bas (naturelle ou par césarienne, présence de morts nés),

l’alimentation durant la gestation (alimentation du commerce, ménagère ou mixte) ainsi

qu’une supplémentation éventuelle en folates (connaissances, posologie, durée, observance)

ou d’autres traitements. De plus, pour chaque portée, il était alors fondamental de savo ir si des

chiots présentaient des anomalies congénitales et notamment des fentes palatines. Ce

questionnaire est présenté en Annexe 1.

II. Echantillonnage et recueil de données

Les individus sélectionnés ont été les chiennes de races Bouledogue français et Boxer

venues au CERREC de 2007 à 2013 pour un suivi de chaleur, une insémination artificielle

et/ou une césarienne. Ces chiennes ont été listées, puis leurs dossiers respectifs ont été

analysés afin de récupérer un maximum d’informations relatives au questionnaire élaboré en

amont. Les informations manquantes ont été ensuite demandées aux éleveurs par téléphone.

Les pédigrées de chaque reproducteur ont également été récupérés.

Cela représente ainsi 114 portées de Bouledogues français, soit 544 chiots, et 58

portées de Boxers avec 375 chiots.

Lors de ce recueil de données, il n’a pas été fait de distinction entre fentes labiales,

labio-palatines et palatines. Nous emploierons ainsi dans le reste de la rédaction le terme de

« fente palatine » au sens large, regroupant ces 3 caractéristiques.

III. Analyse statistique

Nous avons d’abord réalisé une analyse descriptive du jeu de données ainsi que des

calculs de prévalences avec intervalle de confiance à 95%.

Puis une analyse uni-variée a été mise en œuvre pour comparer les prévalences de

fente palatine entre les groupes et calculer les risques relatifs et rapports de chance (odds ratio

ou OR) correspondants ainsi que leurs intervalles de confiance à 95%.

Enfin, nous avons réalisé une analyse multi-variée à l’aide d’une régression logistique

pour estimer les OR ajustés afin de prendre en compte les différents facteurs de confusion.

Les facteurs de confusion sont les différents indicateurs de risque qui sont liés à la fois entre

eux et avec la pathologie. Le meilleur modèle de régression a été choisi en utilisant une

méthode mixte descendante et ascendante qui minimisait le critère d’Akaike afin de ne

71

conserver que les variables significatives (principe de parcimonie). L’effet des interactions

entre les différents indicateurs de risques a été pris en compte. La qualité du modèle a été

appréciée en étudiant les distances de Cook et le test de Hosmer (P>0.05).

L’analyse statistique a été réalisée grâce au logiciel R Version 3.0.2 (2013-09-25) et le

package « epitools » a permis de calculer les risques relatifs et OR. Les packages « MASS »

et « rms » ont été utilisés dans la régression logistique.

B. Analyse des résultats

I. Résultats relatifs aux deux races

1. Analyse descriptive

a) Analyse par portée

L’étude concerne un total de 172 portées. Le nombre moyen de chiots par portée est de

5.4. Les mises-bas ont eu lieu naturellement dans 38.4% des cas et une césarienne

programmée ou d’urgence a été réalisée à hauteur de 59.3% (2.3% non renseignées). L’âge

moyen de la mère lors de la mise bas est de 35.1 mois. Durant la gestation, les femelles sont

nourries soit avec une alimentation issue du commerce spécialisé (différentes marques

existantes) majoritairement sèche (croquettes) et parfois humide (82.6% des portées), soit

avec une ration ménagère préparée par l’éleveur en grande partie carnée (4.7% des portées)

soit avec une ration mixte combinant ces deux constituants (11.6% des portées) (1.1% non

renseignées). La ration ménagère correspond principalement au régime BARF (Biologically

Appropriate Raw Food ou « Nourriture crue biologiquement appropriée ») composé de viande

blanche (poulet) et d’abats en grande majorité et d’un ajout potentiel de poisson, d’huiles,

d’œufs et de légumes en quantité moindre. Un résumé des données récoltées est rapporté dans

le Tableau 2.

b) Analyse des données individuelles

L’étude comporte 919 chiots (544 chiots Bouledogues français et 375 chiots Boxers).

Les chiots vivants à la naissance représentent 81.6% des cas. Pour 81.95% des chiots, la mère

a été nourrie durant la gestation avec une alimentation industrielle constituée de croquettes,

pour 5.8% d’entre eux il s’agit d’une ration carnée et pour 11.4% d’une ration mixte

industrielle/carnée. Un résumé des données récoltées est rapporté dans le tableau ci-après

(Tableau 2).

72

Nombre de chiennes 111

Nombre de portées 172

Nombre de chiots 919

Age moyen de la chienne lors mise bas (mois) 35.1

Nombre moyen de chiots par portée 5.4

Chiots vivants (%) 81.6

Mise bas naturelles (%) 38.4

Césarienne (%) 59.3

Alimentation commerciale (% portée/% individuels) 82.6/81.95

Alimentation ménagère (%portée/% individuels) 4.7/5.8

Alimentation mixte (%portée/% individuels) 11.6/11.4

Tableau 2 : Description de la population totale étudiée.

2. Fentes palatines et effet de l’acide folique

a) A l’échelle des portées

Dans 41 portées, un chiot au moins était atteint de fente palatine. Un maximum de 5

chiots avec fente palatine a été rapporté dans une même portée. Seize portées comportent au

moins un chiot atteint d’une autre malformation congénitale (anasarque, imperforation

anale…). Aucun chiot n’a présenté de fente palatine accompagnée d’une autre malformation.

Il a été mis en évidence que le nombre de chiots est plus élevé dans une portée atteinte d’au

moins une malformation (dont la plus commune est la fente palatine) : 6.37 vs 4.96

(p=0.000124) (Figure 37).

Figure 37 : Lien entre nombres de chiots dans la portée et présence de malformations.

73

Pour 63.4% des portées, la chienne a reçu une supplémentation en acide folique. Cette

supplémentation n’a pas été administrée dans 26.2% des cas (10.4% non renseignés) (Tableau

3). Les doses d’administration étaient variables et sont représentées sur la Figure 38 ci-après.

Il en est de même des produits utilisés : acide folique CCD 500, Speciafoldine et Pet Phos

(produit multi-vitaminique). L’administration a été débutée au début des chaleurs ou lors de la

saillie et a été poursuivie entre 40 et 65 jours.

La prévalence de portées comportant au moins un chiot atteint de fente palatine est de

24%. Lorsque la chienne est supplémentée en acide folique durant la gestation, cette

prévalence est de 22.9%, alors que si cette supplémentation n’est pas mise en place, elle est de

27% (pas de différence significative mise en évidence) (Tableau 4).

La prévalence de portées comportant au moins un chiot atteint d’une autre

malformation congénitale est de 9.3%. Celle de portées comportant au moins une fente

palatine et au moins une autre malformation est de 3.5% (Tableau 4).

Figure 38 : Histogramme des doses d’acide folique administrées en mg/kg/j.

b) A l’échelle individuelle

Un total de 73 chiots présente une fente palatine et 35 une autre malformation

congénitale. Une supplémentation en acide folique de la chienne gestante a été administrée

dans 65.2% des cas. Pour 26%, cette supplémentation n’a pas eu lieu (8.8% non renseignés)

(Tableau 3).

74

Nombre de portées avec fente(s) palatine(s) 41

Nombre de portées avec autre(s) malformation(s) 16

Nombre de chiots avec fente palatine 73

Nombre de chiots avec autre(s) malformation(s) 35

Supplémentation en acide folique (% portée/% individuels) 63.4/65.2

Absence de supplémentation en acide folique (% portée/%

individuels)

26.2/26

Tableau 3 : Fentes palatines et supplémentation en acide folique de la population totale

étudiée.

Ainsi la prévalence des fentes palatines chez le Bouledogue et le Boxer est de 7.9%.

Celle d’apparition d’une autre anomalie congénitale est de 3.9% (Tableau 4).

Lorsque la chienne gestante reçoit une supplémentation en acide folique, cette

prévalence est de 7.0%, alors qu’en son absence elle est de 9.6% (Tableau 4). Ainsi, la

prévalence des fentes palatines semble diminuée lorsque la chienne a reçu une

supplémentation durant la gestation en acide folique (Figure 39). Cependant, le recours à des

tests de comparaison (tests binomiaux) ne permet pas de conclure en une différence

significative entre ces deux prévalences.

Portées Individuelles

Fentes palatines 24 [17.7 ; 30.9] 7.9 [6.3 ; 9.9]

Fentes palatines + acide

folique

22.9 [15.4 ; 32] 7.0 [5.1 ; 9.3]

Fentes palatines sans acide

folique

27 [14.6 ; 41.9] 9.6 [6.2 ; 14]

Autre(s) malformation(s) 9.3 [5.4 ; 14.7] 3.9 [2.8 ; 5.4]

Fentes palatines + autre(s)

malformation(s)

3.5 [1.3; 7.4] /

Tableau 4 : Prévalences des fentes palatines et autres malformations avec intervalles de

confiance (%).

Figure 39 : Prévalences de chiots atteints de fente palatine avec ou sans supplémentation en

acide folique (%).

0

2

4

6

8

10

12

2 races

Sans acide folique

Avec acide folique

75

Ainsi, les valeurs de prévalences des fentes palatines diminuées en cas de

supplémentation en acide folique de la chienne Bouledogue ou Boxer vont dans le sens d’un

effet bénéfique de cette vitamine, diminuant l’apparition de fentes palatines, mais ne

permettent pas de conclure catégoriquement (p-value trop élevées). L’analyse doit être

poursuivie séparément pour chacune des races.

3. Fentes palatines et effet de l’alimentation maternelle

a. A l’échelle des portées

Lorsque l’alimentation maternelle est industrielle, la prévalence d’apparition de

fente(s) palatine(s) est de 19.7%. Cette prévalence est de 50% s’il s’agit d’une ration

ménagère et de 40% si la ration est mixte (Tableau 5).

Le risque relatif d’apparition de fentes palatines dans une portée dont la mère a été

nourrie avec une alimentation commerciale est de 0.48 [0.15 ; 1.61] et significativement

inférieur à 1 (p=0.0459). Avec une ration ménagère, ce risque est de 1.49 [0.78 ; 2.83] et lors

d’alimentation mixte, il vaut 1.05 [0.43 ; 2.57] (Tableau 6).

b. A l’échelle individuelle

En cas d’alimentation commerciale de la chienne gestante, la prévalence des fentes

palatines est de 6.1%. Elle est significativement inférieure à celle en cas de ration ménagère

qui est de 17% (p<2,2.10^-16) et à celle en cas de ration mixte qui vaut 16.2% (p<2,2.10-16

)

(Tableau 5).


Alimentation commerciale 19.7 [13.5 ; 27.2] 6.1 [4.5 ; 8.0]

Alimentation ménagère 50 [15.7 ; 84.3] 17 [8.0 ; 29.8]

Alimentation mixte 40 [19.1 ; 63.9] 16.2 [9.7 ; 24.7]

Tableau 5 : Prévalences des fentes palatines avec intervalles de confiance, selon

l’alimentation maternelle (%).

Le risque relatif d’apparition de fente palatine chez un chiot dont la mère a été

alimentée avec une ration commerciale durant la gestation est de 0.44 [0.23 ; 0.84] et

significativement inférieur à 1 (p=0.031) (Tableau 6).


alimentée avec une ration ménagère est de 1.95 [1.19 ; 3.19] et significativement supérieur à

1 (p=0.0161) (Tableau 6). De plus, si l’on calcule ce risque relativement à celui lorsqu’il

s’agit de croquettes, on obtient 2.72 [1.41 ; 5.25] (p=0.00792). Cela signifie ainsi qu’un chiot

dont la mère est nourrie exclusivement avec une ration ménagère a 172% de plus de risques

d’être atteint de fente palatine.


alimentée avec une ration mixte est de 2.33 [1.40 ; 3.85] et significativement supérieur à 1

76

(p=0.0033) (Tableau 6). De même, relativement à celui lorsqu’il s’agit d’une ration

commerciale, ce risque est de 2.59 [1.55 ; 4.35] (p=0.00106). Cela signifie ainsi qu’un chiot

dont la mère est nourrie avec une ration mixte a 159% de plus de risques d’être atteint de

fente palatine.

Un effet de l’alimentation de la chienne gestante est également mis en évidence grâce

au test de Fisher. Ainsi lorsqu’il s’agit d’alimentation commerciale, l’OR est de 0.34 [0.19 ;

0.59] significativement inférieur à 1 (p=0.0000786). Si la chienne est nourrie exclusivement

une ration ménagère, l’OR est de 2.53 [1.04 ; 5.56] significativement supérieur à 1

(p=0.03103). S’il s’agit d’une ration mixte, l’OR vaut 2.58 [1.34 ; 4.75] de même

significativement supérieur à 1 (p=0.003269) (Tableau 6).

Portées Chiots

RR IC 95% p-

value

RR IC 95% p-

value

OR IC 95% p-

value Alimentation

commerciale 0.48 [0.15 ; 1.61] 0.0459

*

0.44 [0.23 ; 0.84] 0.031* 0.34 [0.19 ; 0.59] 7.86.10^

-5* Alimentation

ménagère 1.49 [0.78 ; 2.83] 0.3005 1.95 [1.19 ; 3.19] 0.0161

* 2.53 [1.04 ; 5.56] 0.03103

* Alimentation mixte

1.05 [0.13 ; 2.57] 0.89 2.33 [1.40 ; 3.85] 0.0033

* 2.58 [1.34 ; 4.75] 0.00327

*


gestationnelle (p-value* significative)

En conclusion, l’alimentation de la femelle gestante semble bien influencer

l’apparition de fentes palatines chez les chiots à naitre. Les rations ménagères et mixtes

semblent ainsi représenter un véritable risque, contrairement à l’alimentation commerciale.

Les résultats concernant les deux races canines mettent ainsi en évidence un effet de

l’alimentation maternelle sur l’apparition de fentes palatines chez les fœtus mais ne

permettent pas de conclure avec certitude quant à l’existence d’un effet bénéfique de la

supplémentation en acide folique. Il s’agit maintenant d’expliciter les résultats relatifs à

chaque race puis de les comparer.

77

II. Résultats relatifs aux Bouledogues français


a) Analyse par portées

L’étude concerne 114 portées de Bouledogues français. Le nombre moyen de chiots

Bouledogues par portée est de 4.8. Les mises-bas ont eu lieu naturellement dans 25.4% des

cas et une césarienne programmée ou d’urgence a été réalisée à hauteur de 72.8% (1.8% non

renseignés). L’âge moyen de la mère lors de la mise bas est de 33.8 mois. Durant la gestation,

les femelles sont nourries soit avec une ration commerciale pour 80.7% des portées, soit avec

une ration ménagère pour 4.4% des portées, soit avec une ration mixte combinant ces 2

constituants pour 14.9% des portées (Tableau 7).


L’étude comporte 544 chiots Bouledogues français. Les chiots de cette race vivants à

la naissance représentent 81.9% des cas. Les chiots dont la mère a été nourrie avec une

alimentation industrielle constituée de croquettes représentent 78.9% des cas, pour 5.5%

d’entre eux il s’agit d’une ration carnée et dans 15.6% des cas d’une ration mixte

industrielle/carnée (Tableau 7).












Tableau 7 : Description de la population de Bouledogues français étudiée.

2. Fentes palatines et génétique

Une analyse des pédigrées a été réalisée chez le Bouledogue. Elle met en évidence un

mode de transmission autosomal récessif du caractère fente palatine. En effet, les parents de

chiot avec fente palatine n’en présente pas eux-mêmes, ce qui exclue une transmission

dominante. De plus, les chiots atteints peuvent être mâle ou femelle mais la possibilité d’une

transmission autosomale liée à l’X est de même exclue par le fait que les pères de femelles

avec fente palatine n’en soient pas atteints. Sur la Figure 40, pour des conditions pratiques,

une portée contenant une fente palatine ou plus est représentée par un seul chiot atteint (chiot

homozygote « présence de fente »).

78

Figure 40 : Analyse des pédigrées de Bouledogues français.



Un total de 22 portées s’est révélé contenir au moins un chiot atteint de fente palatine.

12 portées comportent au moins un chiot atteint d’une autre malformation congénitale

(anasarque, imperforation anale…).

Un lien entre le nombre de chiots composant la portée et la présence de malformation

(fente palatine ou autre) a été mis en évidence. Ainsi, lorsqu’une portée de Bouledogues

comporte plus de 5 chiots (médiane), le risque relatif d’apparition de malformation(s) est de

2.69 [1.47 ; 4.92] significativement supérieur à 1 (p=0.00266). Plus précisément, si l’on

considère uniquement les fentes palatines, le risque relatif vaut 2.46 [1.17 ; 5.17] dans une

portée de plus de 5 chiots, il est de même significativement supérieur à 1 (p=0.02217).

A l’inverse, lorsqu’une portée comporte 5 chiots ou moins, le risque relatif de

malformation est de 0.37 [0.20 ; 0.68] significativement inférieur à 1 (p=0.00266). Et plus

précisément, le risque relatif de fente palatine est alors de 0.41 [0.19 ; 0.85] également

significativement inférieur à 1 (p=0.02217). Ainsi, l’apparition de malformations et

notamment de fentes palatines dans une portée de Bouledogues semble reliée au nombre de

chiots la composant (Figure 41).

Male homozygote « absence de fente »

Femelle homozygote « absence de fente »

Male hétérozygote

Femelle hétérozygote

Chiot homozygote « absence de fente» ou hétérozygote. Chiot homozygote « présence de fente »

79

Figure 41 : Risque relatifs de malformations et fentes palatines en fonction du nombre de

chiots composant une portée de Bouledogue français.

Pour 52.6% des portées, la chienne a reçu une supplémentation en acide folique dont

la variabilité de dose d’administration est illustrée sur la Figure 42 ci-après. Cette

supplémentation n’a pas été administrée dans 34.2% des cas (13.2% non renseignés) (Tableau

8).


Bouledogues français

La prévalence de portées de Bouledogues comportant au moins un chiot atteint de

fente palatine est de 19%. La prévalence de portées comportant au moins un chiot atteint

0 0,5 1 1,5 2 2,5 3

Risque de malformations

Risque de fentes palatines

Plus de 5 chiots

5 chiots ou moins

80

d’une autre malformation congénitale est de 10.5%. Celle de portées comportant au moins une

fente palatine et au moins une autre malformation est de 3.5% (Tableau 9).

Lorsque la chienne Bouledogue est supplémentée en acide folique durant la gestation,

la prévalence de portées avec au moins une fente palatine est de 16.7% ; et si cette

supplémentation n’est pas mise en place, elle est de 26% (Tableau 9).

De plus, le risque d’apparition de fente(s) palatine(s) dans une portée de Bouledogues

relatif à une supplémentation en acide folique de la mère durant la gestation est de 0.65

[0.298 ; 1.42] mais le test ne permet pas de conclure quant à une différence significative à 1

(p>0.05) (Tableau XI). On ne peut ainsi pas conclure quand à un effet préventif de l’acide

folique avec ces résultats.


Un total de 35 chiots Bouledogues français présente une fente palatine et 25 une autre

malformation congénitale. Une supplémentation de la chienne gestante en acide folique a été

administrée dans 63.5% des cas. Pour 34.6%, cette supplémentation n’a pas eu lieu (Tableau

8).







individuels)

34.2/34.6

Tableau 8 : Fentes palatines et supplémentation en acide folique chez les Bouledogues

français.

La prévalence de fente palatine chez un chiot Bouledogue français est de 6.4%. Celle

d’apparition d’une autre anomalie congénitale est de 4.6% (Tableau 9).

Lorsque la chienne Bouledogue reçoit une supplémentation en acide folique, la

prévalence de fente palatine est de 5.1% alors qu’en son absence elle est de 9.6% (Tableau 9).

Ces deux prévalences sont significativement différentes (p=0.0113). Ainsi, chez le

Bouledogue, la comparaison des prévalences permet de conclure à un effet bénéfique de la

supplémentation en acide folique, avec une diminution du nombre de fentes palatines (Figure

43).

81


Fentes palatines 19 [12.5 ; 27.7] 6.4 [4.5 ; 8.8]


folique

16.7 [8.3 ; 28.5] 5.1 [2.9 ; 8.4]


folique

26 [13 ; 42] 9.6 [5.8 ; 14.7]



malformation(s)

3.5 [0.9; 8.7] /

Tableau 9 : Prévalences des fentes palatines et autres malformations avec intervalle de

confiance chez les Bouledogues.

Figure 43 : Prévalences des chiots Bouledogues français atteints de fente palatine en fonction

de la supplémentation en acide folique (%) (Différence significative, p=0.0133).



Lorsque l’alimentation maternelle est issue du commerce, la prévalence d’apparition

de fente(s) palatine(s) est de 16.3%. Cette dernière est de 20% s’il s’agit d’une ration

ménagère et de 35.3% si la ration est mixte (Tableau 10). Ainsi, chez le Bouledogue français,

la prévalence de portées avec au moins une fente palatine est significativement supérieure

lorsque l’alimentation maternelle est mixte (p=0.0458).


En cas d’alimentation commerciale de la chienne Bouledogue français gestante, la

prévalence de fente palatine est de 4.9%. S’il s’agit d’une ration ménagère, cette prévalence

est de 6.7% et en cas de ration mixte elle vaut 14.1% (Tableau 10). Ainsi, lorsque

0

2

4

6

8

10

12

Bouledogues français

Sans acide folique

Avec acide folique

82

l’alimentation est composée d’une ration mixte, la prévalence des fentes palatines est

significativement supérieure à celle lorsque la chienne gestante est nourrie avec une

alimentation du commerce (p=9,83.10^-10

) (Figure 44).


Alimentation commerciale 16.3 [9.4 ; 25.5] 4.9 [3.0 ; 7.4]

Alimentation ménagère 20 [0.5 ; 71.6] 6.7 [0.8 ; 22.1]

Alimentation mixte 35.3 [14.2 ; 61.7] 14.1 [7.5 ; 23.4]

Tableau 10 : Prévalences des fentes palatines, avec intervalles de confiance, selon

l’alimentation gestationnelle de la chienne Bouledogue français (%).

Figure 44 : Prévalences des chiots Bouledogues français atteints de fente palatine selon

l’alimentation gestationnelle (%) (Différence significative, p-value=9,83.10^-10).

Un effet bénéfique de l’alimentation commerciale de la chienne gestante Bouledogue

est mis en évidence grâce au calcul de l’OR qui est de 0.38 [0.18 ; 0.83] et significativement

inférieur à 1 (p=0.00942) (Tableau 11).

Si la chienne gestante est nourrie exclusivement avec une ration ménagère, l’OR est de

1.03 [0.11 ; 4.39] et le risque relatif d’apparition de fente palatine chez un chiot Bouledogue

est de 1.15 [0.52 ; 2.56] (Tableau 11).

S’il s’agit d’une ration mixte, l’OR vaut 3.06 [1.33 ; 6.75] et est significativement

supérieur à 1 (p=0.00617). De plus, Le risque relatif d’apparition de fente palatine chez un

chiot Bouledogue dont la mère a été alimentée avec une ration mixte est de 2.78 [1.44 ; 5.37]

de même significativement supérieur à 1 (p=0.0062) (Tableau 11). Ainsi, le calcul des risque

relatif et OR confirme que l’alimentation mixte durant la gestation constitue un facteur de

risque d’apparition de fente palatine chez le chiot Bouledogue français.

De plus, le risque d’apparition de fente palatine chez un chiot Bouledogue dont la

mère a été alimentée avec une ration mixte a été calculé relativement à celui lorsqu’il s’agit

d’une ration du commerce. Il est alors de 2.84 [1.45 ; 5.56] (p=0.0058). Cela signifie ainsi

0

2

4

6

8

10

12

14

16

Alimentation commerciale Alimentation mixte

83

qu’un chiot dont la mère est nourrie avec une ration mixte a 184% de de plus de risques d’être

atteint de fente palatine relativement à l’alimentation commerciale.

RR IC 95% p-value OR IC 95% p-value Alimentation commerciale 0.97 [0.25 ; 3.87] 0.91 0.38 [0.18 ; 0.83] 0.00942* Alimentation ménagère 1.15 [0.52 ; 2.56] 0.655 1.03 [0.11 ; 4.39] 1 Alimentation mixte 2.78 [1.44 ; 5.37] 0.0062* 3.06 [1.33 ; 6.75] 0.00617*


gestationnelle chez les Bouledogues français (p-value* significative)

Ainsi, il apparait que chez le Bouledogues français, l’alimentation maternelle mixte

constitue un facteur de risque quant à l’apparition de fentes palatines, contrairement à

l’alimentation commerciale. La supplémentation en acide folique de la chienne gestante

permet une diminution de la prévalence de fente palatine chez les chiots à naitre. L’ensemble

de ces résultats a permis la rédaction d’un article scientifique (Annexe 2) actuellement

proposé pour publication. Les résultats concernant la race Boxer sont maintenant à détailler et

à comparer à ceux relatifs au Bouledogue français.

III. Résultats relatifs aux Boxers


a) Analyse des portées

L’étude comporte 58 portées de Boxers. Le nombre moyen de chiots Boxers par portée

est de 6.7. Les mises-bas ont eu lieu naturellement dans 63.8% des cas et une césarienne

programmée ou d’urgence a été réalisée à hauteur de 32.8% (3.4% non renseignés). L’âge

moyen de la mère lors de la mise bas est de 37.6 mois. Durant la gestation, les femelles sont

nourries soit avec une alimentation du commerce pour 86.5% des portées, soit avec une ration

ménagère majoritairement carnée pour 5.2% des portées, soit avec une ration mixte

combinant ces 2 constituants pour 5.2% des portées (3.1% non renseignés) (Tableau 12).


L’étude comporte 375 chiots Boxers. Les chiots de cette race vivants à la naissance

représentent 81.1% des cas. Pour 86.7% des chiots, l’alimentation gestationnelle a été

composée d’une ration commerciale, pour 6.1% d’entre eux il s’agit d’une ration ménagère et

pour 5.3% d’une ration mixte (1.9% non renseignés) (Tableau 12).

84












Tableau 12 : Description de la population de Boxers étudiée.

2. Fentes palatines et génétique

De la même façon que pour les Bouledogues Français, une analyse des pédigrées

récupérés a été effectuée et a permis de mettre en évidence une transmission autosomale

récessive du caractère fente palatine. En effet, les parents de chiot avec fente palatine n’en

présente pas eux-mêmes, ce qui exclue une transmission dominante. De plus, les chiots

atteints peuvent être mâle ou femelle mais la possibilité d’une transmission autosomale liée à

l’X est de même exclue par le fait que les pères de femelles avec fente palatine n’en soient pas

atteints. Sur la Figure 45 suivante, pour des questions pratiques, une portée contenant un

chiot avec fente palatine ou plus est représentée par un seul chiot atteint (chiot homozygote

« présence de fente »).

85

Figure 45 : Analyse des pédigrées de Boxers.



Un total de 19 portées s’est révélé contenir au moins un chiot atteint de fente palatine.

Quatre portées comportent au moins un chiot atteint d’une autre malformation congénitale

(anasarque, imperforation anale…). Pour 84.5% des portées, la chienne a reçu une

supplémentation en acide folique. La dose administrée a varié de la façon décrite sur la Figure

46 ci-après. Cette supplémentation n’a pas été donnée dans 10.3% des cas (5.2% non

renseignés) (Tableau 13).

86


Boxers

Ainsi chez la race Boxer, la prévalence de portées comportant au moins un chiot

atteint de fente palatine est de 32.7% (Tableau 1). Elle est significativement plus élevée que

celle de 19% chez les Bouledogues Français (p=0.01143) (Figure 47).

La prévalence de portées comportant au moins un chiot Boxer atteint d’une autre

malformation congénitale est de 6.9%. Celle de portées comportant au moins une fente

palatine et au moins une autre malformation est de 3.4% (Tableau 14).

Figure 47 : Prévalence (%) des portées avec fente(s) palatine(s) selon la race (différence

significative, p=0.01143)

0

5

10

15

20

25

30

35

Bouledogues Boxers

87

De plus, le risque relatif d’apparition de fente(s) palatine(s) dans une portée de Boxers

est de 1.77 [1.05 ; 2.99] et il est significativement supérieur à 1 (p=0.037). Cela signifie

qu’une portée de Boxers a 77% de plus de risques de comporter au moins un chiot atteint de

fente palatine qu’une portée de Bouledogues français. Ainsi, la race Boxer apparait plus à

risque.

Lorsque la chienne Boxer est supplémentée en acide folique durant la gestation, la

prévalence de portées avec au moins une fente palatine est de 30.6% alors que si cette

supplémentation n’est pas mise en place, elle est de 33% (Tableau 14).


Un total de 38 chiots Boxers présentent une fente palatine et 10 une autre

malformation congénitale. Une supplémentation de la chienne gestante en acide folique a été

administrée dans 82.4% des cas alors que pour 13.6%, cette supplémentation n’a pas eu lieu

(4% non renseignés) (Tableau 13).







individuels)

10.3/13.6

Tableau 13 : Fentes palatines et supplémentation en acide folique chez les Boxers.

La prévalence de fente palatine chez les chiots Boxers est de 10.1% (Tableau XVI).

Elle est significativement supérieure à celle chez les Bouledogues français (6.4%, p=0.0057)

(Figure 48). L’exécution du test de Fisher a permis de mettre en évidence un effet de la race

Boxer sur l’apparition de fente palatine puisque l’OR est alors de 1.67 [1.01 ; 2.79] et

significativement différent de 1 (p=0.03515). Ainsi, la race Boxer présente plus de fentes

palatines à la naissance.

Enfin, le risque relatif d’apparition de fente palatine chez un chiot Boxer est de 1.60

[1.03 ; 2.49], significativement supérieur à 1 (p=0.035). Ainsi, un chiot Boxer a 60% de plus

de risques d’être atteint de fente palatine qu’un chiot Bouledogue français.

La prévalence d’autres anomalies congénitales est de 2.7% chez le Boxer (Tableau

14).

88

Figure 48 : Prévalences des fentes palatines selon la race (%) (Différence significative,

p=0.0057)

Lorsque la chienne Boxer reçoit une supplémentation en acide folique, la prévalence

de fente palatine chez les chiots est de 8.7%, alors qu’en son absence elle est de 9.8%

(Tableau 14 et Figure 49).


Fentes palatines

32.7 [21 ; 46.3] 10.1 [7.3 ; 13.6]


folique

30.6 [18.2 ; 45.4] 8.7 [5.8 ; 12.5]


folique

33 [4.3 ; 78] 9.8 [3.2 ; 21]



malformation(s)

3.4 [0.4; 11.9] /

Tableau 14 : Prévalences des fentes palatines et autres malformations avec intervalle de

confiance chez les Boxers (%).

0

2

4

6

8

10

12

Bouledogues Boxers

89

Figure 49 : Prévalences des chiots Boxers atteints de fente palatine selon la supplémentation

de la mère en acide folique (%).

Ainsi, nous pouvons regrouper les résultats relatifs à nos trois groupes sur la Figure 50

ci-après.

Figure 50 : Prévalences des chiots atteints de fente palatine avec ou sans supplémentation de

la mère en acide folique (%) (Différence significative pour le Bouledogue français).

8

8,2

8,4

8,6

8,8

9

9,2

9,4

9,6

9,8

10

Boxers

Sans acide folique

Avec acide folique

0

2

4

6

8

10

12

2 races Bouledogues français Boxers

Sans acide folique

Avec acide folique

90



Lorsque l’alimentation maternelle est issue du commerce, la prévalence de portées

avec fente(s) palatine(s) est de 26%. Cette prévalence est de 100% et significativement

supérieure (p=0.0176) s’il s’agit d’une ration ménagère, mais le faible effectif est à prendre en

considération. Enfin, cette prévalence est de 66.7% si la ration est mixte (Tableau 15).

Le risque relatif d’apparition de fentes palatines dans une portée de Boxers dont la

mère a été nourrie avec une alimentation commerciale est de 0.29 [0.19 ; 0.45] et

significativement inférieur à 1 (p=0.0329) (Tableau 16).

Le risque relatif d’apparition de fentes palatines dans une portée de Boxers dont la

mère a été nourrie avec une ration ménagère est de 3.08 [1.71 ; 5.53] et significativement

supérieur à 1 (p=0.0127). Si l’on calcule ce risque relativement à celui lors d’alimentation

commerciale, on obtient 3.69 [2.32 ; 5.87] et une différence significative (p=0.0269). En cas

d’alimentation mixte, ce risque vaut 2.13 [0.87 ; 5.21] (Tableau 16).

Ainsi, chez les portées de Boxers, l’alimentation ménagère de la chienne gestante

semble être en faveur de l’apparition de fentes palatines, contrairement à l’alimentation

commerciale.


La prévalence de fentes palatines lorsque l’alimentation gestationnelle est issue du

commerce est de 7.7%. Elle est significativement inférieure à la prévalence lorsque cette

alimentation est ménagère qui vaut 30.4% (p<2,2.10^-16) et à celle lorsque l’alimentation est

composée d’une ration mixte valant 25% (p=9,33.10^-16) (Tableau 15). Cela est représenté

sur la Figure 51.


Alimentation commerciale 26 [14.6 ; 40.3] 7.7 [5.0 ; 11.1]

Alimentation ménagère 100 [29.2 ; 100] 30.4 [13.2 ; 52.9]

Alimentation mixte 66.7 [9.4 ; 99.2] 25 [8.7 ; 49.1]

Tableau 15 : Prévalences des fentes palatines, avec intervalles de confiance, selon

l’alimentation gestationnelle de la chienne Boxer (%).

91

Figure 51 : Prévalences des fentes palatines chez les Boxers selon l’alimentation

gestationnelle (%) (Différences significatives).

Un effet de l’alimentation commerciale de la chienne gestante Boxer est mis en

évidence. L’OR est alors de 0.22 [0.097 ; 0.54] significativement inférieur à 1 (p=0.000415).

Et le risque relatif d’apparition de fente palatine chez un chiot Boxer dont la mère a été nourri

avec une telle alimentation durant la gestation est de 0.3 [0.15 ; 0.60] (p=0.0052) (Tableau

16).

Si la chienne est nourrie exclusivement avec une ration ménagère, l’OR est de 4.40

[1.42 ; 12.46] significativement supérieur à 1 (p=0.00519). Le risque relatif d’apparition de

fente palatine chez un chiot Boxer dont la mère a été alimentée avec cette ration durant la

gestation est de 3.5 [1.90 ; 6.45] et de même significativement supérieur à 1 (p=0.00041). De

plus, si l’on calcule ce risque relativement à celui lorsqu’il s’agit d’une alimentation du

commerce, on obtient 3.82 [1.85 ; 7.88] avec une supériorité significative (p=0.00296)

(Tableau 16).

S’il s’agit d’une ration mixte, l’OR vaut 3.16 [0.84 ; 9.95] et est significativement

supérieur à 1 (p=0.0442). Et, le risque relatif d’apparition de fente palatine chez un chiot

Boxer dont la mère a été alimentée avec une ration mixte est de 2.63 [1.15 ; 6.02] (p=0.044)

(Tableau 16). De plus, si l’on calcule ce risque relativement à celui lorsqu’il s’agit d’une

alimentation du commerce, on obtient 3.14 [1.34 ; 7.33] avec une supériorité significative

(p=0.025).

Ainsi l’alimentation maternelle est bien un facteur influençant l’apparition de fentes

palatines chez les chiots Boxers à naitre. Les alimentations ménagère et mixte semblent

néfastes contrairement à l’alimentation commerciale.

0

5

10

15

20

25

30

35

Croquettes Viande Ration mixte

92

Portées Chiots

RR IC 95% p-

value

RR IC 95% p-

value

OR IC 95% p-value

Alimentation commerciale

0.29 [0.19 ; 0.45] 0.0329

* 0.3 [0.15 ; 0.60] 0.0052

*

0.22 [0.097 ; 0.54] 0.000415

* Alimentation

ménagère 3.08 [1.71 ; 5.53] 0.0127

*

3.5 [1.90 ; 6.45] 0.0004

1* 4.40 [1.42 ; 12.46] 0.00519*

Alimentation mixte

2.46 [0.97 ; 6.21] 0.203 2.63 [1.15 ; 6.02] 0.044* 3.16 [0.84 ; 9.95] 0.0442*


gestationnelle chez les Boxers (* p-value significative).

Nous pouvons conclure en illustrant ces risques relatifs pour nos trois groupes avec la

Figure 52 ci-dessous.

Figure 52 : Risques relatifs d’apparition de fente palatine selon l’alimentation maternelle.

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

3,5

4

2 races Bouledogues Boxers

Alimentation commerciale

Alimentation ménagère

Alimentation mixte

93

IV. Analyse multi-variée

La recherche d’un modèle de régression logistique a été entreprise. Ainsi, à partir des

données individuelles relatives aux deux races canines, un premier modèle comportant les

facteurs influençant l’apparition de fente palatine chez les chiots à naitre a été trouvé.

1. Premier modèle

Ce modèle met en évidence et confirme ainsi que la race Boxer est plus atteinte par

cette anomalie congénitale. Ainsi pour un chiot Boxer, l’OR ajusté (ORa) d’atteinte de fente

palatine est de 1.80 [1.03 ; 3.16] significativement supérieur à 1 (Tableau 17).

Un effet bénéfique de la supplémentation en acide folique est observé. En effet,

lorsque la chienne Boxer ou Bouledogue Français en reçoit, l’ORa d’apparition de fentes

palatines chez les chiots à naitre est de 0.56 [0.30 ; 1.03] (Tableau 17).

Un effet néfaste des alimentations gestationnelles ménagères et mixtes est retrouvé. En

effet, chez les chiots Bouledogues Français et Boxers, l’ORa d’apparition de fente palatine en

cas de ration ménagère est de 2.96 [1.31 ; 6.71] significativement supérieur à 1. Et s’il s’agit

d’une alimentation mixte, cet ORa vaut 3.23 [1.66 ; 6.27] significativement supérieur à 1

également (Tableau 17).

De plus, l’âge de la chienne Boxer ou Bouledogue Français lors de la mise-bas semble

influencer l’apparition de fentes palatines chez les fœtus. Il apparait que lorsqu’elle est âgée

de plus de 4 ans, l’ORa est de 0.28 [0.09 ; 0.84] significativement inférieur à 1 (Tableau 17).

La visualisation des distances de Cook (Figure 53) et la réalisation du test de Hosmer

(P=0.5229912) a alors permis de valider ce modèle.

ORa IC 95% Pr(>|z|)

Race Boxer 1.80 [1.03 ; 3.16] 0.040102*

Acide Folique (2 races) 0.56 [0.30 ; 1.03] 0.063522.

Alimentation ménagère (2 races) 2.96 [1.31 ; 6.71] 0.009066**

Alimentation mixte (2 races) 3.23 [1.66 ; 6.27] 0.000537***

Chienne de plus de 4 ans (2 races) 0.28 [0.09 ; 0.84] 0.023294*

Tableau 17 : Odds Ratio ajustés d’apparition de fente palatine et intervalles de confiance à

95% calculés par régression logistique selon le modèle 1 (*=significativité).

94

Figure 53 : Distances de Cook utilisées comme méthode d’appréciation du modèle 1 de

régression logistique.

Afin de préciser ces résultats, la recherche d’autres modèles mettant en jeu des

interactions entre les différents facteurs d’influence d’apparition de fente palatine a été

entreprise. Un deuxième modèle complémentaire du premier présenté a ainsi été trouvé.

2. Deuxième modèle

Ce modèle de régression logistique diffère du précédent car il comprend comme

facteur d’influence l’interaction race-alimentation.

De même que pour le modèle précédent, un effet bénéfique de la supplémentation en

acide folique est observé puisque lorsque la chienne Boxer ou Bouledogue en reçoit, l’ORa

d’apparition de fentes palatines chez les chiots à naitre est de 0.53 [0.27 ; 1.05] (presque

identique) (Tableau 18).

Nous retrouvons également l’influence de l’âge de la mère lors de la mise-bas.

Lorsqu’elle est âgée de plus de 4 ans, l’ORa est de 0.29 [0.09 ; 0.93] significativement

inférieur à 1 (Tableau 18).

Cependant, les résultats de ce second modèle précisent ceux du premier. En effet, ils

mettent en évidence une distinction concernant l’alimentation gestationnelle relativement aux

deux races. Ainsi, l’alimentation mixte constitue un facteur de risque d’apparition de fente

palatine chez les Bouledogues français avec un ORa de 3.21 [1.51 ; 7.22] significativement

supérieur à 1. Alors que pour les Boxers, il s’agit de l’alimentation ménagère avec un ORa de

7.66 [1.16 ; 50.63] significativement supérieur à 1 également (Tableau 18).

95

Ce second modèle a également été validé par la visualisation des distances de Cook

(Figure 54) et la réalisation du test de Hosmer (P=0.2379625).

ORa IC 95% Pr(>|z|)

Acide Folique (2 races) 0.53 [0.27 ; 1.05] 0.06745.

Alimentation ménagère chez Boxers 7.66 [1.16 ; 50.63] 0.03458*

Alimentation mixte chez Bouledogues 3.31 [1.51 ; 7.22] 0.00273**

Chienne de plus de 4 ans (2 races) 0.29 [0.09 ; 0.93] 0.03645*

Tableau 18 : Odds Ratio ajustés d’apparition de fente palatine et intervalles de confiance à

95% calculés par Régression logistique selon le modèle 2 (*=significativité).

Figure 54 : Distances de Cook utilisées comme méthode d’appréciation du modèle 2 de

régression logistique.

96

C. Discussion des résultats

I. Causes d’exclusion et données manquantes

Au début du projet, 12 races ont été sélectionnées parmi les races brachycéphales.

Etaient ainsi concernées les Boxer, Bouledogue français, Bulldog anglais, Carlin, Boston

Terrier, Dogue argentin, American Staffordshire terrier, Staffordshire Bull terrier, Cane

Corso, Dogue de Bordeaux, Rottweiler et Bull terrier. Cependant, la tache se révéla

compliquée à cause de certaines races trop faiblement représentées ou de données

difficilement récupérables. Ainsi, il a été décidé de limiter l’étude à 2 races présentant le plus

d’individus rencontrés durant ces 6 ans: les Bouledogues français et les Boxers. Puis,

considérant ces deux races, une trentaine de chiennes ont été sorties de l’étude car les

propriétaires étaient injoignables ou n’étaient plus capables de répondre au questionnaire de

façon précise.

Dans un souci éthique, et en accord avec son propriétaire, tout chiot ayant une

malformation jugée trop importante (spina bifida et fente palatine essentiellement) a été

euthanasié le plus rapidement possible après identification de la malformation. De ce fait,

certaines autres anomalies ont pu ne pas être détectées. Aucun chiot n’a donc été observé avec

une fente palatine et une autre malformation. Ainsi, il a été impossible de conclure quant à

l’importance des fentes palatines associées à d’autres malformations.

De plus, il n’a pas été fait de distinction entre fente labiale, fente palatine et fente

labio-palatine lors du recueil des informations. En effet, les éleveurs ne se rappelaient pas de

ce détail. Nous avons ainsi étudié les chiots atteints de fente palatine au sens large.

II. Critiques de l’étude réalisée

Une des limites de cette étude est le manque d’informations concernant le sexe des

chiots atteints de fente palatine. En effet, il a bien été rapporté que les deux sexes pouvaient

être concernés (aide à la compréhension du déterminisme de transmission génétique) mais

cette connaissance aurait permis l’élaboration d’arbres généalogiques plus rigoureux et un

calcul intéressant du ratio males : femelles atteints.

De plus, cette étude étant rétrospective, les cas étudiés n’ont donc pas été choisis.

Nous avons ainsi eu des effectifs très différents concernant l’alimentation maternelle. Pour les

Bouledogues français notamment, le nombre de chiennes nourries avec une ration ménagère

était faible et n’a pas permis une étude statistique significative. De plus, un nombre élevé de

Boxers est nourri avec le régime BARF correspondant à un type de ration ménagère

exclusivement constitué de viande crue. Ainsi, l’alimentation maternelle considérée chez nos

deux races n’est en réalité pas tout à fait équivalente. Une carence vitaminique existe

certainement chez les Boxers nourris avec ce régime particulier.

97

De même, les connaissances concernant l’acide folique chez la chienne gestantes étant

peu nombreuses, différentes doses de cette vitamine ont été administrées aux chiennes durant

la gestation (absence de consensus contrairement à la femme enceinte). Cela n’a pas permis

de considérer à juste titre cette caractéristique. Dans le cas d’une étude prospective, il serait

judicieux de comparer des groupes avec doses d’administration d’acide folique fixée. Enfin,

même si la question de l’observance a été discutée avec les éleveurs, nous ne pouvons être

certains qu’elle a été parfaite dans tous les cas.

Nous nous sommes finalement rendu compte que la nature de la mise-bas ne nous

donnait que peu d’informations et n’intéressait finalement pas directement le sujet. En effet, la

présence de fente palatine pourrait être reliée à une prévalence élevée de dystocie chez la

chienne à cause d’une augmentation de la largeur crânienne des fœtus (cela fait d’ailleurs

partie des hypothèses expliquant la prédisposition des races canines brachycéphales). Il

s’agirait donc d’une cause commune à l’apparition de fentes palatines et dystocies et non pas

d’une modalité de mise-bas comme facteur de risque de fentes palatines. De plus, les

césariennes réalisées chez nos deux races considérées sont en majorité programmées,

notamment chez le Bouledogues français (total de 248 césariennes programmées et de 149

césariennes d’urgence). Etant donné le risque élevé de dystocie chez le Bouledogue, il était

difficile de différencier les vraies dystocies nécessitant une césarienne d’urgences par rapport

aux césariennes « programmées en urgence » suite à un déroulement de mise-bas imparfait et

inquiétant vu la race concernée. En revanche, le Boxer, de par son gabarit plus élancé et la

taille plus importante des portées (hypothèses non statistiquement prouvées ici), justifie moins

le recours à la césarienne planifiée. Ainsi, nos données relatives aux modalités de mise-bas

n’ont donc pas forcément été exploitées dans le contexte de cette thèse mais sont, bien-sûr,

conservées et une réflexion sur leur analyse ultérieure est en cours.

III. Critique des résultats de l’étude

1. De l’étude descriptive et l’analyse des pédigrées

Il apparait clairement que le Boxer est plus atteint de fente palatine que le Bouledogue

français. Pour ces deux races, le déterminisme génétique de transmission du caractère fente

palatine semble autosomal récessif. Mais il faut préciser que l’analyse des pédigrées

aboutissant à ce déterminisme a été faite avec l’hypothèse d’un seul gène responsable. De

plus, l’analyse des pédigrées a été plus concluante chez le Boxer pour lequel un grand nombre

de liens de parenté a pu être observé. Ainsi, cette prévalence des fentes palatines

significativement supérieure chez cette race pourrait aussi être en lien avec le recours à un

plus faible nombre de reproducteurs et donc une moindre diversité génétique. D’autant plus,

que le nombre de Boxers présentés est inférieur à celui de Bouledogues. Cependant, le

deuxième modèle de régression logistique intégrant l’interaction race-alimentation va dans le

sens non pas d’un effet race en tant que tel mais d’un effet « Boxer nourri avec une ration

ménagère BARF». Cela peut signifier que c’est en fait le régime alimentaire carné plus

fréquent chez cette race qui la prédispose aux fentes palatines.

98

Le risque de fente palatine chez le chiot apparait diminué lorsque la mère est âgée de

plus de 4 ans. En élevage, les chiennes sont généralement mises à la reproduction plus jeune.

Ainsi, une hypothèse pouvant expliquer ce résultat est qu’une chienne ayant eu des chiots

présentant une fente palatine ne continue pas à reproduire ou bien est accouplée avec plus de

précaution avec un mâle à priori non porteur de ce caractère c’est-à-dire, ayant eu des chiots

non atteints.

2. Des résultats relatifs à l’effet de l’acide folique sur les fentes

palatines

La supplémentation en acide folique de la chienne Bouledogue français gestante

apparait comme un facteur diminuant l’apparition de fente palatine chez les fœtus de façon

significative. Chez le Boxer, les résultats laissent à penser que cet effet bénéfique de l’acide

folique existe mais sont moins significatifs.

Chez les deux races, les portées contenant des chiots malformés (majoritairement

atteints de fente palatine) présentent en moyenne un nombre plus élevé de chiots. De plus,

chez le Bouledogue français, les risques relatifs d’apparition de malformations et plus

précisément de fentes palatines sont significativement plus élevés lorsqu’une portée comporte

plus de 5 chiots. Si l’on interprète ces résultats en lien avec l’effet préventif de l’acide folique,

il est possible qu’en cas d’un grand nombre de fœtus, l’apport en acide folique ne soit pas

suffisant. Cela serait également cohérent avec le fait que les portées de Boxers contiennent

plus de chiots et ont également un risque plus élevé de contenir au moins un chiot atteint de

fente palatine.

3. Des résultats relatifs à l’effet de l’alimentation maternelle sur les

fentes palatines

Une corrélation entre l’acide folique et l’alimentation maternelle doit être faite. En

effet, l’alimentation issue du commerce considérée dans cette étude est pour une large

majorité une alimentation premium achetée en animalerie ou en clinique vétérinaire (les

propriétaires sont en grande majorité des éleveurs). Or, cette alimentation est enrichie en acide

folique à hauteur de 0.9 à 4 mg/kg selon la marque. Cela s’explique par la thermo-sensibilité

de cette vitamine qui disparait à des températures trop basses ou trop élevées intervenant lors

de la fabrication de ces « croquettes ». Ainsi, nos résultats en faveur d’une diminution du

risque de fente palatine en cas d’utilisation de cette alimentation durant la gestation semblent

en lien avec sa teneur quasi systématique en acide folique. Il serait intéressant de procéder aux

mêmes observations et analyses sur deux groupes distincts : l’un nourri avec une alimentation

issue du commerce spécialisée, dite premium, et l’autre avec une alimentation moins

spécifique, dite de grande distribution.

99

A l’inverse, les rations ménagère et mixte apparaissent comme des facteurs de risque

importants. Plus précisément, la première concernerait plus spécifiquement les Boxers et la

seconde les Bouledogues. Cependant, ceci est à nuancer car le nombre de chiennes

Bouledogues nourries avec une ration ménagère est peu important. Ainsi, les résultats

statistiques ont probablement été non significatifs à cause d’un trop faible effectif (effectif du

chi2 inférieur à 3.5).

De plus, comparativement à l’alimentation du commerce, les rations ménagères et

mixtes contiennent très probablement une teneur en acide folique plus faible. En effet,

l’alimentation ménagère est majoritairement carnée et le seul produit carné contenant de

l’acide folique est le foie (100 g de foie cuit contient 260 µg d’acide folique), produit coûteux

peu souvent destiné au chien. Et si des légumes sont ajoutés, ils sont le plus souvent cuits et

leur teneur en acide folique est donc moindre. Ainsi, préparer une ration ménagère avec un

apport d’acide folique suffisant ne semble pas aisé (pour information, une cuillère à soupe de

levure de bière contient 400 µg de folates).

Ainsi, une analyse précise de la teneur en acide folique des différents types de rations

pourrait être envisagée afin de poursuivre cette étude. En cas de supplémentation

gestationnelle, cette teneur serait augmentée. Puis, les mêmes calculs statistiques que décrits

précédemment (prévalences, RR, OR, régression logistique) pourraient être réalisés en tenant

compte de cette teneur en tant que variable quantitative. Une teneur optimale de la ration en

acide folique à apporter à la chienne gestante pourrait ainsi être trouvée en cas de résultats

significatifs.

101

Bibliographie

1 Afssa. Enrichissement de la farine en vitamine B9 en France - proposition d'un programme

pilote. Adresse URL: http://www.afssa.fr. 2003.

2 Alfarra HY, Alfarra SR, Sadiq MF. Neural tube defects between folate metabolism and genetics. Indian J Hum Genet. 2011;17:126-131.

3 Barone R, Anatomie comparée des mammifères domestiques, tome 3 : Splanchnologie 1 :

appareils digestif et respiratoire. Paris: Vigot; 1996:761pp. 4 Beaufrere B, Bresson JL, Briend A. Acide folique et grossesse. Arch Pédiatr. 1992;2:173-

181.

5 Canfield MA, Collins JS, Botto LD, Williams LJ, Mai CT, Kirby RS, Pearson K, Devine

O, Mulinare J, National Birth Defects Preventin N. Changes in the birth prevalence of selected

birth defects after grain fortification with folic acid in the United States: findings from a multi-state

population-based study. Birth Defects Res A Clin Mol Teratol. 2005;73:679-689.

6 Crepel S. Le développement embryonnaire du chien : de la fécondation à la naissance PMCA. 1998;33:25-30.

7 Czeizel AE. The primary prevention of birth defects: Multivitamins or folic acid? Int J Med

Sci. 2004;1:50-61. 8 Czeizel AE. Periconceptional folic acid and multivitamin supplementation for the prevention

of neural tube defects and other congenital abnormalities. Birth Defects Res A Clin Mol Teratol.

2009;85:260-268. 9 Czeizel AE. Periconceptional folic acid-containing multivitamin supplementation for the

prevention of neural tube defects and cardiovascular malformations. Ann Nutr Metab. 2011;59:38-40.

10 Czeizel AE, Dobo M, Vargha P. Hungarian cohort-controlled trial of periconceptional

multivitamin supplementation shows a reduction in certain congenital abnormalities. Birth Defects Res A Clin Mol Teratol. 2004;70:853-861.

11 Czeizel AE, Dudas I, Paput L, Banhidy F. Prevention of neural-tube defects with

periconceptional folic acid, methylfolate, or multivitamins? Ann Nutr Metab. 2011;58:263-271. 12 Czeizel AE, Dudas I, Vereczkey A, Banhidy F. Folate deficiency and folic acid

supplementation: the prevention of neural-tube defects and congenital heart defects. Nutrients.

2013;5:4760-4775.

13 Czeizel AE, Medveczky E. Periconceptional multivitamin supplementation and multimalformed offspring. Obstet Gynecol. 2003;102:1255-1261.

14 De Vigan C, Raoult B, Vodovar V, Goujard J. Prévention de l’anencéphalie et du spina

bifida par l’acide folique. Journal de Pédiatrie et de Puériculture. 1996;5:314-317. 15 Denis B. Génétique et sélection chez le Chien. Paris: Pratique Médicale et Chirurgicale de

l’Animal de Compagnie; 1997:134pp.

16 Domoslawska A, Jurczak A, Janowski T. Oral folic acid supplementation decreases palate and/or lip cleft occurrence in Pug and Chihuahua puppies and elevates folic acid blood levels in

pregnant bitches. Pol J Vet Sci. 2013;16:33-37.

17 Dreyer CJ, Preston CB. Classification of cleft lip and palate in animals. Cleft Palate J.

1974;11:327-332. 18 Dumon C. Pathologie néonatale du chiot. EMC-Vétérinaire. 2005;2:30-53.

19 Elwood JM, Colquhoun TA. Observations on the prevention of cleft palate in dogs by folic

acid and potential relevance to humans. N Z Vet J. 1997;45:254-256. 20 Finnell RH, Shaw GM, Lammer EJ, Brandl KL, Carmichael SL, Rosenquist TH. Gene-

nutrient interactions: importance of folates and retinoids during early embryogenesis. Toxicol Appl

Pharmacol. 2004;198:75-85. 21 Fossum T.W. Manual of Small Animal Surgery. Mosby, St-Louis: WB Saunders;

2007:1640pp.

22 Gillerot Y. Prévention du Spina Bifida et d’autres malformations congénitales par l’acide

folique. Communication de l’ASBBF (Association Spina Bifida Belge Francophone). 2004:4pp.

102

23 Grandage J. Functional anatomy of the respiratory system. In: SLATTER DH, ed. Textbook

of Small Animal Surgery. Philadelphia: Saunders, 2003;47:763-781.

24 Grau H, Walter P. Precis d’histologie et d’anatomie microscopique des animaux domestiques. Paris: Vigot; 1975:188pp.

25 Guilloteau A, Servet E, Biourge V, Ecochard C. Folic acid and cleft palate in

brachycephalic dogs. . Waltham Focus. 2006;16:30-33. 26 Haegel P, Tuchmann-Duplessis H. Embryologie travaux pratiques et enseignement dirigé;

fascicule 2: Organogenèse. Paris: Masson; 1979:157pp.

27 Hand MS, Thatcher CD, Remillard RL, Roudebush P. Micronutients: Minerals and

Vitamins. Small Animal Clinical Nutrition, 5th Edition. Grandview: Mark Morris Institute, 2010:107-148.

28 Hartridge T, Illing HM, Sandy JR. The role of folic acid in oral clefting. Br J Orthod.

1999;26:115-120. 29 Hayes C, Werler MM, Willett WC, Mitchell AA. Case-control study of periconceptional

folic acid supplementation and oral clefts. Am J Epidemiol. 1996;143:1229-1234.

30 Hernandez-Diaz S, Werler MM, Walker AM, Mitchell AA. Folic acid antagonists during pregnancy and the risk of birth defects. N Engl J Med. 2000;343:1608-1614.

31 Hernandez-Diaz S, Werler MM, Walker AM, Mitchell AA. Neural tube defects in relation

to use of folic acid antagonists during pregnancy. Am J Epidemiol. 2001;153:961-968.

32 Hoskins JD. Dental Disease and Care. In: ED. HJD, ed. Veterinary Pediatrics : dogs and cats from birth to six months 3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders Company, 2001a:147-199.

33 Hoskins JD. The Digestive System. In: ED HJD, ed. Veterinary Pediatrics : dogs and cats

from birth to six months 3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders Company, 2001b:149-151. 34 Hoskins JD. The Respiratory System. In: ED. HJD, ed. Veterinary Pediatrics : dogs and cats

from birth to six months 3rd ed Philadelphia: W.B. Saunders Company, 2001c:83-85.

35 Hyttel P, Sinowatz F, Veilsted M. Development of the gastro-pulmonary system. Essential of

Domestic Animal Embryology. Toronto: Saunders Elsevier 2010a:455pp. 36 Hyttel P, Sinowatz F, Veilsted M. Musculo-skeletal system. Essential of Domestic Animal

Embryology. Toronto: Saunders Elsevier, 2010b:286-316.

37 Hyttel P, Sinowatz F, Veilsted M. Teratology. Essential of Domestic Animal Embryology Toronto: Saunders Elsevier, 2010c:338-382.

38 Itikala PR, Watkins ML, Mulinare J, Moore CA, Liu Y. Maternal multivitamin use and

orofacial clefts in offspring. Teratology. 2001;63:79-86. 39 Jiang R, Bush JO, Lidral AC. Development of the upper lip: morphogenetic and molecular

mechanisms. Dev Dyn. 2006;235:1152-1166.

40 Joyeux L. Etiopathologie et traitements de quatre malformations congénitales curables en

antenatal. Faculté de Médecine de Dijon, 2011:513pp. 41 Jurkiewicz MJ, Bryant DL. Cleft lip and palate in dogs: a progress report. Cleft Palate J.

1968;5:30-36.

42 Kalter H. Folic acid and human malformations: a summary and evaluation. Reprod Toxicol. 2000;14:463-476.

43 Kalter H. Teratology in the 20th century: environmental causes of congenital malformations

in humans and how they were established. Neurotoxicol Teratol. 2003;25:131-282. 44 Kemp C, Thiele H, Dankof A, Schmidt G, Lauster C, Fernahl G, Lauster R. Cleft lip

and/or palate with monogenic autosomal recessive transmission in Pyrenees shepherd dogs. Cleft

Palate Craniofac J. 2009;46:81-88.

45 Kim KC, Friso S, Choi SW. DNA methylation, an epigenetic mechanism connecting folate to healthy embryonic development and aging. J Nutr Biochem. 2009;20:917-926.

46 König H E, Liebich H-G. Veterinary Anatomy of Domestic Mammals, Textbook and Color

Atlas. Stuttgart: Schattauer GmbH; 2004:681pp. 47 Lagamba D, Nawshad A, Hay ED. Microarray analysis of gene expression during epithelial-

mesenchymal transformation. Dev Dyn. 2005;234:132-142.

48 Lecocq S. Les affections juvéniles du chien : Application au diagnostic raisonné du 15ème

jour au 3ème mois. Université Lyon 1, 2007:59.

103

49 Letra A, Menezes R, Fonseca RF, Govil M, Mchenry T, Murphy MJ, et al. Novel cleft

susceptibility genes in chromosome 6q. J Dent Res. 2010;89:927-932.

50 Lidral AC, Romitti PA, Basart AM, Doetschman T, Leysens NJ, Daack-Hirsch S et al. Association of MSX1 and TGFB3 with nonsyndromic clefting in humans. Am J Hum Genet.

1998;63:557-568.

51 Lloyd ME, Carr M, Mcelhatton P, Hall GM, Hughes RA. The effects of methotrexate on pregnancy, fertility and lactation. QJM. 1999;92:551-563.

52 Martinelli M, Scapoli L, Pezzetti F, Carinci F, Carinci P, Stabellini G et al. C677T variant

form at the MTHFR gene and CL/P: a risk factor for mothers? Am J Med Genet. 2001;98:357-360.

53 Mcgeady TA, Quinn PJ, Fitzpatrick ES, Ryan MT. Veterinary Embryology. Oxford: Blackwell Publishing; 2006:377pp.

54 Mills JL, Mcpartlin JM, Kirke PN, Lee YJ, Conley MR, Weir DG, Scott JM.

Homocysteine metabolism in pregnancies complicated by neural-tube defects. Lancet. 1995;345:149-151.

55 Molloy AM, Quadros EV, Sequeira JM, Troendle JF, Scott JM, Kirke PN, Mills JL.

Lack of association between folate-receptor autoantibodies and neural-tube defects. N Engl J Med. 2009;361:152-160.

56 Mossey PA, Little J, Munger RG, Dixon MJ, Shaw WC. Cleft lip and palate. Lancet.

2009;374:1773-1785.

57 Moura E, Cirio SM, Pimpao CT. Nonsyndromic cleft lip and palate in boxer dogs: evidence of monogenic autosomal recessive inheritance. Cleft Palate Craniofac J. 2012;49:759-760.

58 Mulvihill JJ, Mulvihill CG, Priester WA. Cleft palate in domestic animals: epidemiologic

features. Teratology. 1980;21:109-112. 59 Peterson ME, Kutzler M. Small Animal Pediatrics, the first 12 months of life. St Louis:

Saunders Elsevier; 2011:494pp.

60 Pulikkunnel ST, Thomas SV. Neural tube defects: pathogenesis and folate metabolism. J

Assoc Physicians India. 2005;53:127-135. 61 Richtsmeier JT, Sack GH, Jr., Grausz HM, Cork LC. Cleft palate with autosomal

recessive transmission in Brittany spaniels. Cleft Palate Craniofac J. 1994;31:364-371.

62 Rolschau J, Kristoffersen K, Ulrich M, Grinsted P, Schaumburg E, Foged N. The influence of folic acid supplement on the outcome of pregnancies in the county of Funen in Denmark.

Part I. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 1999;87:105-110.

63 Rothenberg SP, Da Costa MP, Sequeira JM, Cracco J, Roberts JL, Weedon J, Quadros

EV. Autoantibodies against folate receptors in women with a pregnancy complicated by a neural-tube

defect. N Engl J Med. 2004;350:134-142.

64 Rouget F, Monfort C, Bahuau M, Nelva A, Herman C, Francannet C, Robert-Gnansia E,

Cordier S. [Periconceptional folates and the prevention of orofacial clefts: role of dietary intakes in France]. Rev Epidemiol Sante Publique. 2005;53:351-360.

65 Roux C, Guittin P, Stadler J, Morin A, Boutemy C, Hiss D et al. Atlas comparatif des

malformations externes chez les animaux de laboratoire et l’homme. Paris: Boeck Wesmael Editions

2003:148. 66 Schubert J, Schmidt R, Syska E. B group vitamins and cleft lip and cleft palate. Int J Oral

Maxillofac Surg. 2002;31:410-413.

67 Schutte BC, Murray JC. The many faces and factors of orofacial clefts. Hum Mol Genet. 1999;8:1853-1859.

68 Shaw GM, Lammer EJ, Wasserman CR, O'malley CD, Tolarova MM. Risks of orofacial

clefts in children born to women using multivitamins containing folic acid periconceptionally. Lancet.

1995;346:393-396. 69 Shell LG. Diseases of the Cerebrum. In: LEIB M.S. MWEE, ed. Practical Small Animal

Internal Medicine. Philadelphia: W.B. Saunders Company, 1997:479-515.

70 Vanderas AP. Incidence of cleft lip, cleft palate, and cleft lip and palate among races: a review. Cleft Palate J. 1987;24:216-225.

71 Vaziri Sani F, Hallberg K, Harfe BD, Mcmahon AP, Linde A, Gritli-Linde A. Fate-

mapping of the epithelial seam during palatal fusion rules out epithelial-mesenchymal transformation. Dev Biol. 2005;285:490-495.

104

72 Vidailhet M, Bocquet A, Bresson JL, Briend A, Chouraqui JP, Dupont C et al. Folic acid

and prevention of neural tube closure defects: the question is not solved yet. Arch Pediatr.

2008;15:1223-1231. 73 Wanat S, Brazier M, Boitte F, Lemay C. Etude des concentrations sériques en vitamins B9

et B12 dans une population de femmes ayant porté un foetus atteint de malformation du tube neural.

Immuno-analyse et Biologie spécialisée. 2005;20:28-31. 74 Warzee CC, Bellah JR, Richards D. Congenital unilateral cleft of the soft palate in six dogs.

J Small Anim Pract. 2001;42:338-340.

75 Wehby GL, Murray JC. Folic acid and orofacial clefts: a review of the evidence. Oral Dis.

2010;16:11-19.

105

Annexes

Annexe 1 : Questionnaire mis en place afin de récupérer les données de l’étude rétrospective.

CERREC

Etude clinique :

N° :

Version 1

06/10/2012

Fiche d’appel

Bonjour madame, monsieur, (nom de l’appelé)

(nom de l’appelant) de VetAgro Sup, campus vétérinaire de Lyon.

Je me permets de vous appeler car nous faisons une étude au Cerrec.

Nous étudions l’incidence des fentes palatines chez les chiens brachycéphales sur les six

dernières années.

Tous les données (inhérents) relatives à votre chienne seront strictement réservées à notre

étude et en aucun cas divulguées.

(Nom du chien) …………………………apparait dans nos listing de chiennes suivies ici au Cerrec

depuis le 1ER janvier 2007.

Race :

□ Bouledogue Français □ Bulldog anglais □ Dogue Argentin □ Boston Terrier □ Bull Terrier □ Rottweiler □ Cane corso □ Boxer □ Dogue de bordeaux □ American Staffordshire Terrier □ Staffordshire Bull Terrier □ Carlin

Je souhaiterais (vais) vous poser quelques questions sur sa portée du …………………………….(

mois et ans)

Combien de portées cette chienne a-t-elle eu ? ………………………………

Quelle était la position de la portée par rapport aux autres ? (Celle-là était la

combientième) ? ……………………………....

Quel type d’alimentation avez-vous donné à votre chienne à l’époque de la portée en

question ? □ croquettes □ ménagère □ BARF ?

Quel type de croquettes avez-vous distribué (administré) ? □base □ premium

(Est-ce-que vous) avez-vous donné des compléments (complémentations) dans la ration de

votre chienne ?

□oui □ non

Si oui : quels types des supplémentations avez-vous utilisés ?

(vitamines, minéraux)……………………………………………………………………………………….

106

Quel est le nom de l’étalon utilisé pour la saillie ?

……………………………………………………………………………………………………………………..

Pouvez-vous nous fournir une copie du pedigree de votre chienne et de l’étalon ?

□oui □ non

Mise bas Comment a eu lieu la mise bas ? □ naturelle □ par césarienne

Dans le cadre d’une césarienne, était-elle réalisée :

□ en urgence □ programmée

Combien de chiots, considérant aussi les mort-nés et les malformés, constituaient la portée ?

□vivants ………………… □ morts …………………

Des chiots avec une malformation étaient-ils présents (Est-ce que étaient présents des

chiots avec malformations) ? □oui □ non

Si oui : quels types d’anomalies vous avez remarqué ?

……………………………………………………………………………………………………………………………………

Acide Folique :

Êtes-vous informé de l’utilité de l’acide folique pendant la gestation comme outil de

prévention des fentes palatines ? □oui □ non

Avez-vous opté pour une supplémentation en acide folique pendant cette gestation?

□oui □ non

Si oui: Quel type de médicament avez-vous administré ? ………………………………..

Avec quelle posologie et voie d’administration? ………………………………..

Durée du traitement ? …………………………………………………………..

L’administration a été régulière pendant cette période ? □oui □ non

Votre chienne a-t-elle reçu d’autre traitement à base de médicaments ou de

compléments pendant la gestation ? □oui □ non

Si oui : Lesquels ? ……………………………………………………………………….

………………………………………………………………………

Merci beaucoup d’avoir pris le temps de nous répondre. Au revoir.

Réservé au Cerrec

Date d’appel ……………………………………………………………..

Personne ayant appelé :

Totalité des informations □oui □ non

Pedigree de la chienne □oui □ non

Pedigree de l’étalon □oui □ non

Antécédents de la chienne dans l’étude □oui □ non

107

Annexe 2: Article rédigé à partir des résultats relatifs aux Bouledogue Français

Oro-Facial clefts in French bulldog newborns: a retrospective study

Del Carro AP, Briand Q, Josson-Schramme A, Buff S, Rosset E.

Université de Lyon, CHEVAC - VetAgro Sup – Campus vétérinaire de Lyon

Abstract

Oro-facial cleft (OFC) is the most frequent congenital abnormality affecting newborn

dogs of brachycephalic breeds. The aim of this study was to evaluate the effects of maternal

folic acid supplementation and type of nutrition of the bitch on the development of OFC in

French Bulldog newborns. Records of 114 litters and 544 puppies were reviewed. The age

and the rank of litters of the bitch, folic acid supplementation and the type of nutrition during

pregnancy, others drugs administration, the total number of puppies per litter and the presence

of OFC or other malformed pups were documented. A pedigree analysis was also performed.

Prevalence of OFC was 6.4%. Folic acid supplementation of the bitch during pregnancy

significantly reduces the prevalence of OFC in puppies (5.1% vs 9.6%). The relative risk of

OFC after maternal supplementation with folic acid was 0.54. Prevalence of OFC in puppies

whose mothers were fed with commercial food compared with homemade diet or a mixed of

commercial and homemade food was 16.3% vs 20% and 35.3% respectively. The relative risk

of OFC after maternal nutrition with commercial food was 0.97 and 1.15 in case of

homemade nutrition. The relative risk significantly increases to 2.78 when bitches were fed

with mixed diet. Logistic regression analyses were used to assess association of maternal folic

acid supplementation and nutrition with OFC, adjusting for potential confounders. Folic acid

was significantly inversely related to risk of OFC (aOR= 0.51). Maternal feeding with

homemade food or mixed diet had an increased risk to development OFC (aOR equals to 1.54

and 2.95 respectively). An autosomal recessive inheritance for OFC is strongly suspected.

These results demonstrate the benefit of maternal folic acid supplementation to reduce OFC in

French Bulldog. The type of nutrition of the bitch plays an essential role on the development

of congenital OFC.

Keywords:

Dog, French bulldog, Oro-facial cleft, Folic acid, Diet

1. Introduction

Cleft palate is historically the most common congenital defect in brachycephalic dogs.

This abnormality is often compatible with life but most animals are systematically euthanized

at birth. The term oro-facial cleft (OFC) regroups different maxilla-facial pathologies. The

most common in the dog is palate cleft in association or not with upper lip, gingival and nasal

clefts.

OFCs are not an open subject amongst veterinarians and breeders. The real incidences of

these abnormalities still remain unknown. This makes it really hard for veterinarians to study

this subject. Only a few publications are reported about these congenital affections in dogs.

(Fig.1 picture of OFCs).

The development of oro-facial region in the fetus of the dog is a complex process that

happens between 23 and 35 days of fetal life [1]. Palate development ends with the fusion of

the palate processes in the midline around day 33 of gestation in the dog [2].

108

OFCs include palate cleft as well as lip and/or nose clefts. Incidence of oro-facial cleft in

human medicine is about 1 case in 700 livebirths [3]. The incidences reported in canine

medicine are higher than in human but very different depending from the publications. Higher

incidences are present mostly in brachycephalic breeds where the length of the cranium is

shorter than the width, (i.e. Boxer, French and English Bulldog, Pugs, Chihuahua) [4]. These

breeds have up to a 30% increased risk of cleft palate [5]. The presence of an autosomal

recessive Mendelian inheritance is described for particular breeds [6].

Different risk factors are identified in human as environmental risk factors and maternal

exposure to tobacco smoke, alcohol, poor nutrition, viral infection and medical drugs. A high

dose folic acid supplementation has a preventive effect on recurrence of Neural tube defects

(NTD) and OFC in infants [7] [8].

Folic acid is a one-carbon (methylene, methenyl and methyl) donor and acceptor molecule

in intermediary metabolism. Specific pathways include nucleotide and phospholipids

synthesis, creatinine formation, neurotransmitter production and amino acid metabolism. This

enzyme needs the presence of vitamin B12 as a cofactor and 5-methyl-THF as a methyl

donor.

Increased levels of homocysteine were detected in human newborns affected by

NTD. Hyperhomocysteinemia could cause embryonic toxicity [9]. From 5 to 20% of human

populations present polymorphism of the methylene-THF reductase THFR) gene that can

reduce the efficiency of homocystein metabolism [10]. This genetic pattern in association

with folate deficiency leads to fetal hyperhomocysteinemia and greater risk for NTD and OFC

in newborns.

Numerous studies tried to show the efficiency of folate supplementation during pregnancy

on OFC with controversies results in human medicine [11]. The aim of our retrospective study

was to determine the effects of folic acid supplementation and the type of nutrition of the

bitch during pregnancy on OFC incidence in French bulldog newborns.

2. Materials and methods

2.1. Animals

In our retrospective study we used the data from 74 French Bulldogs bitches presented to

Vetagro-Sup, Veterinary Campus of Lyon, from January 2007 to November 2013. The bitches

were initially presented to us for estrus or pregnancy monitoring, dystocia or C-section.

Owners completed a questionnaire that recorded the age of the bitch at delivery, the litter

ranking of the bitch, the total number of puppies for each litter and the presence of oro-facial

clefts and other congenital abnormalities in newborns.

The owners were questioned about supplementation of folic acid during the pregnancy.

The daily dose and the length of treatment from the day of mating/insemination were

recorded. Data about the type of feeding the bitch received during pregnancy were recorded

too by the questionnaire. Feeding types were classified as 1/ administration of commercial

food, 2/ administration of homemade diet and 3/ different combinations between the previous

options (mixed diet).

Data about administration of any other drugs during pregnancy (i.e. antibiotic or

anthelmintic) were also collected. A copy of the parents’ pedigree has been supplied for

pedigree analysis.

109

2.2.Statistical Analysis

Statistical analyses were performed using R software (R Development Core Team, 2011).

Numerical variables were expressed as the mean and standard deviation and compared by

Student’s test. Nominal variables were reported as relative (%) frequencies and absolute (n).

The prevalence of OFC relative to folic acid supplementation and type of nutrition of the

mother is presented as percentage (95% CI). Differences between prevalence were evaluated

with binomial test. The Odds Ratios (ORs), relative risks (RRs) and 95% CI were computed

using the “epitools” R package. Their significant difference to one has been calculated with

Fisher’s test.

The research of logistic regression model was performed using R packages “MASS” and

“rms”. Functions “glm” and “stepAIC” showed potential confounders. Final model was

appreciated by Cook’s distances, ANOVA. Adjusted OR (aOR) were calculated by Hosmer

test.

3. Results

A total of 114 litters from 74 different bitches were included in this study. Results of

pedigree analysis are showed in Figure 1.The average age at the time of delivery was 34 ± 16

months. Fifty-seven bitches were primiparous. Their average age at the first delivery was 26 ±

16 months. The number of puppies per litter does not change during the first 3 litters of bitch

career. A decrease is showed at the fourth litter. Only one bitch observed had 6 litters in her

life (Fig. 2).

The total number of puppies from the observed litters is 544. The average number of

puppies per litter was 4.8 ± 2.3. The mean number of pups per litter was significantly greater

(P < 0.05) in litters with the presence of at least one puppy malformed. The average number

of pups of these litters was 5.7 ± 2.3 puppies compared with an average of 4.4 ± 2.3 pups per

litters with only normal puppies (Fig. 3).

The presence of at least one puppy affected by OFC was observed in 22 litters. The

prevalence of litters with at least one OFC was 19% (CI 12.5-27.7). Presence of at least one

puppy with other congenital malformation has been observed in 10.5% of litters (n = 12).

The 11.0% of puppies (n=60) showed presence of congenital abnormalities at birth. The

most frequent congenital malformation was OFC that has been reported in 6.4% of puppies (n

= 35). The other abnormalities observed in the 4.6% of pups (n = 25) including water puppy

syndrome, brain hernia and atresia ani. Malformed puppies have been considered as died

because euthanasia has been performed immediately after birth.

Folic acid has been administered by oral tables of 5 mg. The average dose of

administration was 1.2 ± 0.9 tablets per bitch. The 46.5% of supplemented bitches received 1

tablet daily. Percentage of bitches that received respectively 2, 3 and 4 tablets was 1.75%.

Data was not available for the 48.25% of cases. The supplementation started at the day of

insemination/mating for an average length of 47 ± 12 days. The 40.5% (n = 46) of bitches

received also other drugs during pregnancy. Treatment consists in internal anti-parasite

medications in the 37% (n = 42) of bitches. Antibiotics have been used in the 3.5% of cases (n

= 4). Bitches have not received any treatment during pregnancy in the 33% of cases (n = 38).

Bitches has received oral supplementation with folic acid during pregnancy in the 52.6%

of cases (n = 49), giving birth at the 53.5% of puppies (n = 291). The 34.2% (n = 39) of

bitches had not folic acid supplementation during pregnancy. Non supplemented bitches gave

110

birth to the 35,6% (n = 188) of puppies. Data about folic acid supplementation were not

available for the 13.2% (n = 15) of litters.

Prevalence of OFC in litters were the bitch has been supplemented with folic acid was

16.7% (CI 8.3 - 28.5). In non-supplemented litters the prevalence of OFC was 26% (CI 13 -

42). The difference between the prevalences of the two groups was not significant.

The prevalence of puppies affected by OFC was 6.4% (CI 4.5 - 8.8). A significant

difference (P = 0.011) has been found between the prevalence of OFC in the case of

supplementation with folic acid or not. In presence of supplementation the prevalence was

5.1% (CI 2.9 - 8.4) versus 9.6% (CI 5.8 - 8.4) reported in absence of supplementation (Fig. 3).

The Odds Ratios (ORs) and Relative risks (RRs) for the development of OFC show a not

significant positive effect of folic acid supplementation of the mother during pregnancy (Tab.

1).

The most common type of nutrition of the bitch during pregnancy was commercial food

presented by kibbles. This type of food has been used in the 80.7% of the cases (n = 92).

Homemade nutrition has been used to feed bitches in the 4.4% of cases (n = 5). A mix of

commercial and homemade food has been used in the 14.9% of cases (n = 17). The

prevalence of litters with at least one OFC when the mother has been fed with commercial

food was 16.3% (CI 0.094 - 0.255). Significant difference with utilization of a mixed nutrition

has been found (0.353; CI 0.142 - 0.677) and not significant difference has been shown in the

case of nutrition with homemade diet (0.2; CI 0.05 - 0.716).

The repartition of puppies on the basis of the nutrition of the mothers was: 78.9% (n =

429) for the commercial nutrition group, 5.5% (n = 30) for homemade diet and 15.6% (n =

85) for mixed diet. A significant difference has been shown between the prevalence of pups

affected by OFC borned from mother fed with commercial food (4.9%; CI 0.030 - 0.074) and

mixed diet (14.1%; CI 0.075 - 0.234). Not significant difference has been founded concerning

homemade diet (6.7%; CI 0.008 - 0.221; Fig. 4).

The association between OFC and the type of nutrition of the mother has been calculated

performing OR and RR analysis. No significant effect has been shown considering presence

of OFC in litters (Tab. 1a). The development of OFC in a puppy seems to be negatively

correlated to the use of a commercial food to feed the mother. Homemade and mixed diet

seems to be positively correlated with OFC (Tab. 1b,c). These results are confirmed

confronting homemade and mixed diet effect in relation to commercial diet. (Tab. 1d)

The logistic regression model results show a significant positive effect of mixed nutrition

on OFC. Homemade diet seems to have no significant influence. A preventive effect of folic

acid supplementation has been showed (Tab. 3).

4. Discussion

The discovery of a palate cleft in adult dogs is not uncommon. Meler et al diagnosticated

the presence of cleft palate in the 8.7% of cases of persistent nasal disease in adult dogs.

Breeders usually choose to do not treat puppies affected by OFC for the high risk to

development of pneumonia in the first weeks of life, before that a surgical closure of the cleft

is possible. No effective treatments are described for other malformations as water puppy

syndrome, brain hernia or atresia ani. Prognosis for puppies affected by these abnormalities at

birth is poor.

111

In our study we discovered an average age at delivery of the bitches of 35 months. The

average number of litters per bitch was 1.69. These values indicate that the bitches included in

our study have not high reproductive performances. This is normal considering that the

typical owner who presents her bitches to our center of assisted reproduction is not a full time

dog breeder.

Fertility seems to not be influenced by the rank of pregnancy of the bitch until the fourth

pregnancy. An increased fertility between the first and second litter if the pregnancy could be

suspected if the dog has still not reach the total body development at the moment of

fertilization. Observing the average age of bitches at their first delivery we suppose that their

body development is finished and does not influence fertility. Detection of the ovulation day

by progesterone essay is a common practice for the breeders involved in this study. This

practice reduces the risk of infertility in bitches. Age and the “wear” of the reproductive

system may are responsible of the decreased fertility in older bitches. The realization of C-

section is common practice in brachycephalic breed like French bulldog. Damages to the

uterine wall after surgery could also explain the observed reduction of fertility.

We detected a significant difference between the total number of puppies in litters with

the presence of only normal puppies or at least one malformed pup (4.4 vs 5.7). The presence

of malformed pups in more numerous litters could be explained by a smaller ratio of nutrient

and micro-nutrient per puppy during the pregnancy. This relative deficiency could lead to a

higher risk to develop congenital malformations.

Approximately one litter on five (19%) presented one or more puppies affected by OFC.

The 6.4% of puppies evaluated was affected by OFC. The difference between the prevalence

of malformed puppies in relation to folic acid supplementation of the mother was significant.

A reduction from 9.6% to 5.1% has been reported. Previously, numerous studies tried to show

the efficiency of folate supplementation during pregnancy on OFC in the canine species. All

them show a significant reduction of OFC incidence after folic acid supplementation too. The

first study about this subject follows litters of Boston terrier in New Zealand from 1974 to

1997. As of 1982 all bitches received oral supplementation of 5mg of folic acid from the day

of the mating until the pups were 3 weeks old. This leads to a reduction of cleft palate from

17.6 to 4,2 % (P = 0.03) [12].

More recently two prospective studies were published. In 2006 Guilloteau et al compared the

effects of folic acid supplementation in 66 litters of French bulldog. The bitches were divided

in 2 groups: the control group was fed with commercial premium kibble food; the second

group was fed with the same commercial food supplemented with 34.48 mg of folic acid/kg

corresponding with a daily intake of 5 mg of folic acid for bitch. The prevalence of oro-facial

clefts in the 35 litters of the control group was 8.6%. A significant difference (P = 0.02) was

shown in the 31 litters of the supplemented group were the incidence of the cleft was 4.4%

[13].

The evaluation of OR (0.51) showed a preventive effect of folic acid supplementation to the

development of OFC. Similar result has been recently published in a prospective study where

the incidence of OFC in Chihuahua and Pug puppies has been evaluated. In this study a lower

incidence of OFC after folic acid supplementation has been shown in Pugs puppies (4.87% vs

15.78%, P = 0.1449) and in Chihuahua puppies and (4.76% vs 10.86%, P = 0.4373). The OR

showed a positive effect of folic acid supplementation for Pugs (OR = 0.23) and Chihuahua

(OR = 0.41). These values were no significant [14].

A reduction of the 47% in frequency (RR = 0.53) of OFC for puppies born from

mother supplemented with folic acid has been shown from our study. Elwood et al showed a

112

RR of 0.24 evaluating the effects of folic acid supplementation in Boston Terrier in New

Zealand [12]. The evaluation of two different breeds with different size of groups could be

responsible of this difference of risk. The two studies have also been performed at 17 years of

distance. A change in the genetic pool due to the breed selection could also influence these

parameters.

The effects of folic acid supplementation on development of OFC in puppies evaluated

by OR RR and logistic regression were not significant. All analysis has shown a positive

effect of the supplementation with a p-value of 0.07 approximately. This value is not far from

statistical significance. Commercial foods have routinely an addiction with folates. The large

purpose of this type of nutrition, as showed in our study, have may masked the real effects of

folic acid supplementation during pregnancy on the examined sample.

The evaluation of the effects of different types of nutrition on the presence of OFC in a

litter shows a significant higher prevalence of OFC when the bitch has been fed with mixed

diet or homemade diet than kibbles. Evaluation of these differences observing puppies

individually confirmed a significant difference between commercial nutrition of the bitch

versus mixed diet on the appearance of OFC. A negative association has been found between

nutrition with kibbles and the development of OFC in a puppy. Contrary to this a mild

positive association has been shown in the case of utilization of homemade diet to feed the

bitch during pregnancy. A strong positive association is present considering mixed nutrition.

This has been confirmed by logistic regression too. The sample of bitches fed by homemade

nutrition was too small to show a significant relevance.

The comparison of the results of our study and the study of Guilloteau et al about

French Bulldogs shows similar results about the advantage of folic acid supplementation in

this breed. Our research supply more details about the different types of nutrition of the bitch

during pregnancy. A large utilization of commercial food for the nutrition of bitches during

pregnancy has been shown. The purpose of kibbles is preferred for the facility of storage and

dosage of the ration. The employ of a homemade diet is reduced to the 4% of cases. Some

owners, 14.9%, prefer to use a mix of commercial food complemented with a homemade

food. This choice is justified from an increased desirability of the meal and the belief to add

natural supplements to the diet. Breeders may suppose that increased energetic or proteins

balance could increase reproductive performance as showed in other species [15].

We suppose that fresh ingredients may have a lower concentration in folates. Folates

are susceptible to high or low temperature. Thermic treatments as cooking or freezing foods

could highly decrease folates concentrations.

Genetic factors have an influence on OFC. In human medicine different syndromes are

described. Most of them have autosomal recessive transmission, but autosomal dominant and

few X-linked recessive syndrome are described too [16]. An autosomal recessive inheritance

has been showed in a Brittany Spaniels colony [6]. This condition has been confirmed by

pedigree analysis in our study. (Fig. 4) Children showing OFC have a higher incidence to

develop associated malformations. No data are available about this association in canine

species. Further studies are necessary to discover a possible correlation between development

of OFC and other congenital malformation on individual puppies or puppies on the same

litter. In our study we show the presence of OFC pups and malformed puppies in the same

litters in 4 litters.

Brachycephalic breeds have historically high predisposition to OFC. All studies

presents in bibliography about folic acid supplementation in dog has been made on small size

113

brachycephalic breeds as Boston terrier, French bulldog, Pug and Chihuahua. Following these

articles a chronological decrease of the number of pups affected by OFC. Breeders usually

exclude from reproduction programs stud dogs or bitches that show high incidence of OFCs

in their progeny. This simple way of selection could explain the chronological reduction of

the incidence of OFC. No data concerning incidence of OFC and effects of folic acid

supplementation in medium and giant size brachycephalic breeds are present in literature.

A study performed on mesocephalic dog as Brittany Spaniels showed that puppies

affected by OFC have larger skull than normal puppies [6]. This morphologic condition is

physiologic in brachycephalic dogs. A larger skull may imply a delayed fusion of palatine

process during embryonic life. Increased plasma levels of folates, secondary to folic acid

supplementation during pregnancy [14], may accelerate the growth of palatine preventing

cleft palate in predisposed breeds

5. Conclusions

The type of nutrition of the bitch during pregnancy plays an essential role on the

development of congenital OFC. Risk of OFC is increased in case of use of homemade or

mixed diet. Thermic treatment of storage or preparation of these feeds may decrease

concentrations in folates with serious effects on newborns. Pet commercial foods seem to be

adequately supplemented in folates to supply physiologic gestational deficiency. Maternal

folic acid supplementation of the bitch remains recommended during pregnancy to reduce

OFC. More trials about the effects pre-pregnancy supplementation are necessary to evaluate a

potential increase of benefits of the treatment.

References

[1] Pretzer SD. Canine embryonic and fetal development: a review. Theriogenology. 2008;70:300-3. [2] Hyttel P SF, Vejlsted M, Betteridge K. Development of the gastro-pulmonary system. In: Essentials of Domestic Animal Embryology, Saunders Elvesier editor. 2009. p. 216-22. [3] Mossey PA, Little J, Munger RG, Dixon MJ, Shaw WC. Cleft lip and palate. Lancet. 2009;374:1773-85. [4] Hussein AK, Sullivan M, Penderis J. Effect of brachycephalic, mesaticephalic, and dolichocephalic head conformations on olfactory bulb angle and orientation in dogs as determined by use of in vivo magnetic resonance imaging. American journal of veterinary research. 2012;73:946-51. [5] McGeady TA QP, FitzPatrick ES, Ryan MT, Cahalan S. Structures in the Head and Neck. In: Veterinary Embryology , Blackwell Publishing editor. 2006. p. 268-77. [6] Richtsmeier JT, Sack GH, Jr., Grausz HM, Cork LC. Cleft palate with autosomal recessive transmission in Brittany spaniels. The Cleft palate-craniofacial journal : official publication of the American Cleft Palate-Craniofacial Association. 1994;31:364-71. [7] Prevention of neural tube defects: results of the Medical Research Council Vitamin Study. MRC Vitamin Study Research Group. Lancet. 1991;338:131-7. [8] Wehby GL, Murray JC. Folic acid and orofacial clefts: a review of the evidence. Oral diseases. 2010;16:11-9. [9] de la Calle M, Usandizaga R, Sancha M, Magdaleno F, Herranz A, Cabrillo E. Homocysteine, folic acid and B-group vitamins in obstetrics and gynaecology. European journal of obstetrics, gynecology, and reproductive biology. 2003;107:125-34. [10] Wilcken B, Bamforth F, Li Z, Zhu H, Ritvanen A, Renlund M, et al. Geographical and ethnic variation of the 677C>T allele of 5,10 methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR): findings from over 7000 newborns from 16 areas world wide. Journal of medical genetics. 2003;40:619-25. [11] Kalter H. Folic acid and human malformations: a summary and evaluation. Reproductive toxicology. 2000;14:463-76.

114

[12] Elwood JM, Colquhoun TA. Observations on the prevention of cleft palate in dogs by folic acid and potential relevance to humans. New Zealand veterinary journal. 1997;45:254-6. [13] Guilloteau AG SE, Biourge V, Ecochard C. Folic acid and cleft palate in brachycephalic dogs. Waltham Focus. 2006;16:30-3. [14] Domoslawska A, Jurczak A, Janowski T. Oral folic acid supplementation decreases palate and/or lip cleft occurrence in Pug and Chihuahua puppies and elevates folic acid blood levels in pregnant bitches. Polish journal of veterinary sciences. 2013;16:33-7. [15] Van Emon ML, Schauer CS, Lekatz LA, Eckerman SR, Maddock-Carlin K, Vonnahme KA. Supplementing metabolizable protein to ewes during late gestation: I. Effects on ewe performance and offspring performance from birth to weaning. Journal of animal science. 2014;92:339-48. [16] Eppley BL, van Aalst JA, Robey A, Havlik RJ, Sadove AM. The spectrum of orofacial clefting. Plastic and reconstructive surgery. 2005;115:101e-14e.

Figure 55 : Evolution of fertility in bitches. A decrease of the number of puppies per litter is showed in bitches

at their 4th litter. Only one bitch in the study had more than 4 litters.

115

Figure 56 : Increased number of puppies per litter in presence of least one malformed pup in the litter (4.40 vs

5.7). Difference was significant (P < 0.05).

Figure 57 : Prevalence of litters with at least one puppy affected by OFC (on the left) and puppies affected by OFC (on

the right). † Difference between nutrition with commercial food and mixed diet was significant (P < 0.05) for both

groups. †† Prevalence of OFC in case of employ of folic acid supplementation or not in the bitch during pregnancy was

significant considering puppies (P < 0.05). This difference was not significant considering presence of at least one OFC

in the litter.

116

Litters Puppies

a) Relative Risk b) Odds Ratio c) Relative Risk d) Adjusted Odds

Ratio

RR 95%CI p-

value

OR 95%

CI

p-

value

RR 95%CI p-

value

RR 95%CI p-value

Folic acid

suplementation

0.72 0.26-

1.96

0.47 0.51 0.32-

1.11

0.067 0.54 0.28-

1.04

0.067

Nutrition:

Commercial Inf NaN-Inf 0.20 0.38 0.18-

0.83

0.009 0.97 0.25-

3.87

1 1.00 Referent Referent

Mixed 1.64 0.53-5.1 0.10 3.06 1.33-

6.75

0.006 2.78 1.44-

5.37

0.006 2.84 1.45-

5.56

0.006

Homemade 0.40 0.06-

2.85

0.30 1.03 0.11-

4.39

1 1.15 0.51-

2.55

0.65 1.34 0.33-

5.45

>0.05

Table 1 : RR calculated considering the presence of at least one puppy affected by OFC in the litter (a). RR and

OR calculated considering the development of OFC in a puppy in function of folic acid supplementation and type of nutrition of the bitch during pregnancy (b, c). Adjusted OR considering mixed the effect and homemade

diet on OFC in relation to commercial diet (d).

aOR 95%CI Pr

Commercial food 1.00 Referent Referent

Mixed nutrition 2.95 1.36-6.35 0.00594

Homemade diet 1.54 0.34-7.09 0.57742

Folic acid supplementation 0.51 0.25-1.07 0.07453

Table 2: Logistic regression considering presence of OFC in puppies. A Significant negative effect is showed if

mixed diet is used compared to commercial diet. Folic acid supplementation in the bitch has a positive effect on

the development of OFC in newborn.

Figure 4: Pedigree analysis showed an autosomal recessive inheritance of OFC

NOM PRENOM : BRIAND QUENTIN

TITRE : Les fentes oro-faciales congénitales chez le chien : étude rétrospective des facteurs

de risques nutritionnels et génétiques chez les Bouledogues français et les Boxers présentés au

CERREC de 2007 à 2013.

Thèse d’Etat de Doctorat Vétérinaire : Lyon, 2014.

RESUME : La fente labio-palatine constitue une des malformations congénitales les plus

fréquentes chez le chien. Les races canines brachycéphales telles que les Bouledogues

français et Boxers en sont les plus atteintes. Cette anomalie résulte d’un défaut de fermeture

lors du développement embryonnaire ayant lieu avant le 33ème

jour de gestation. Son étiologie

multifactorielle n’est pas clairement élucidée. L’étude rétrospective réalisée à partir des

individus de ces deux races présentés au CERREC a permis de mettre en évidence un

déterminisme autosomal récessif de cette malformation. L’influence de facteurs nutritionnels

a également été démontrée. En effet, l’alimentation de la chienne gestante constitue un facteur

de risque d’apparition de fentes oro-faciales chez les fœtus. Ainsi, en cas d’alimentation

ménagère ou mixte (ménagère et commerciale), ce risque apparait augmenté. A l’inverse, si

l’alimentation gestationnelle provient du commerce spécialisé, ce risque est moindre. De plus,

l’effet préventif d’une supplémentation péri-conceptionnelle en acide folique (vitamine B9),

déjà démontré chez l’Homme en cas de spina bifida et de fente oro-faciale, a été étudié. Ainsi,

cet effet bénéfique semble également exister chez le chien avec notamment des résultats

relatifs au Bouledogue français plus significatifs. Le mécanisme d’action permettant ce rôle

protecteur de l’acide folique mettrait en jeu une interaction avec le métabolisme de

l’homocystéine.

MOTS CLES : - Embryologie

- Maladies congénitales

- Génétique

- Alimentation

- Folique, Acide

JURY :

Président : Monsieur le Professeur Olivier CLARIS

1er Assesseur : Monsieur le Docteur Samuel BUFF

2ème Assesseur : Madame le Professeur Karine CHALVET-MONFRAY

Membre invité : Madame le Docteur Emilie ROSSET

DATE DE SOUTENANCE : 19 septembre 2014

ADRESSE DE L’AUTEUR : 245 chemin du Marronnier, 69280 Marcy l’Etoile.

these - vetagro sup vetagro sup campus veterinaire de lyon année 2014 - thèse n° les fentes...

Documents