Marquage des poissons

Table des matires

I. Les techniques de marquage .............................................................................................. 2

A. Les marques externes ..................................................................................................... 2 1. Marque mchoire........................................................................................................ 2 2. Marque Carlin ............................................................................................................ 3 3. Marque spaghetti-ancre .............................................................................................. 3 4. Tatouages ................................................................................................................... 4

a) Colorants vitaux ..................................................................................................... 4 b) Injection ponctuelle de colorants (bleu alcyan)...................................................... 4

5. Implants visibles......................................................................................................... 5 6. Ablation de nageoires................................................................................................. 6

B. Les marques internes...................................................................................................... 6 1. Micromarques magntiques ....................................................................................... 7 2. Marques lectroniques................................................................................................ 8

C. Les marques chimiques .................................................................................................. 8 1. Marquage des otolithes............................................................................................... 9

a) Otolithomarquage thermique.................................................................................. 9 b) Principe du fluoromarquage des otolithes............................................................ 10 c) Fluomarquage la ttracycline avec choc osmotique .......................................... 11 d) Fluomarquage l'alizarine ................................................................................... 12

D. Les marques naturelles ................................................................................................. 13 E. Les marques gntiques ............................................................................................... 13 F. Les marques acoustiques.............................................................................................. 13

II. Planification et mise en uvre dune campagne de marquage ........................................ 14 A. Planification initiale et choix de la technique de marquage......................................... 14 B. Marquage...................................................................................................................... 15 C. Stabulation post-marquage et relcher des poissons marqus ..................................... 16 D. Recapture des poissons marqus .................................................................................. 17 E. Analyse et diffusion des rsultats................................................................................. 18

Bibliographie.20

Une marque est quelque chose d'externe ou d'interne, prsent ou incorpor au poisson et qui permet de le reconnatre. Les techniques de marquage sont des outils importants pour connatre la biologie des poissons (ex.: mouvements, isolement ou mlange de populations, comportements, croissance, validation de l'ge, etc.) et pour la gestion piscicole (valuation de la taille d'une population, taux de mortalit, efficacit de repeuplements, etc.). Les publications rapportant des expriences sur la mise au point ou bien utilisant telle ou telle technique de marquage sont trs nombreuses. Il existe quelques ouvrages traitant du marquage de manire plus gnrale, mais ces documents sont dj anciens (VIBERT et LAGLER, 1961; JONES, 1979; CRISTAU-QUOST, 1980; WYDOSKI et EMERY, 1983) alors que de nouvelles techniques sont rcemment apparues. Les deux ouvrages les plus rcents et complets sont en anglais (publications: PARKER et al.,1990; manuel pratique: NIELSEN, 1992).

I. Les techniques de marquage

A. Les marques externes Cela peut tre des marques attaches au poisson et visibles l'extrieur de son corps (ex.: marque mchoire, marque Carlin, spaghetti-ancre, tatouages, implants visibles. Cela peut aussi tre une altration de l'apparence du poisson qui permet de l'identifier de l'extrieur (ex.: ablation de nageoires).

1. Marque mchoire

La marque est fixe grce une pince spciale au niveau de la mchoire infrieure. Il existe plusieurs grandeurs de marques qui doivent tre choisies en fonction de la taille du poisson marquer de mme que les pinces correspondantes. La marque porte un code alpha numrique.

Avantages: marquage individuel bien visible de l'extrieur; bon march, pose assez rapide.

Limites: le marquage peut affecter la croissance et induire des blessures et des pertes de marques si la croissance est trs forte entre le marquage et la recapture.

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2. Marque Carlin

La marque Carlin est une tiquette plastique relie un fil (mtallique ou nylon) double. Elle est gnralement insre juste sous la dorsale grce un systme de deux aiguilles creuses. L'insertion juste sous la dorsale permet de profiter d'une solidit accrue lie la prsence de la base des rayons de la nageoire dorsale.

Avantages: un temps de rtention lev, marque aisment reprable de l'extrieur, marquage individuel, possibilit d'une information additionnelle sur la marque (adresse de retour de la marque).

Limites: la pose de ce type de marque n'est pas rapide. La marque peut dans certains cas gner la croissance, s'accrocher des obstacles, se charger d'algues, accrotre la capturabilit (par les filets), augmenter la visibilit par les prdateurs.

3. Marque spaghetti-ancre

Il s'agit d'une sorte de marque tiquette pour vtement en forme de T dont la partie verticale a la forme d'un morceau (1 2,5 cm) de spaghetti color portant un code alphanumrique et ventuellement une adresse. Elle est insre grce un pistolet manuel se terminant par une aiguille creuse et un poussoir interne celle-ci.

Le site d'insertion de la barre horizontale du T est juste en dessous de la dorsale, juste aprs avoir travers la base des rayons et sans traverser totalement le dos. Il faut s'assurer du bon ancrage de la marque en tirant lgrement sur celle-ci. L'angle d'attaque de l'aiguille est d'environ 45 degrs (avec l'arrire du corps) de manire ce que la marque soit proche de l'axe du corps quand le poisson nage.

Avantages: l'apprentissage et l'application sont rapides. La marque permet une identification individuelle et elle est trs visible de l'extrieur. Elle a une bonne tenue si l'application est bien ralise et contrle au dpart.

Limites: la visibilit par les prdateurs est accrue. La marque n'est pas utilisable sur de petits poissons et elle peut produire des plaies dorsales. Ces problmes sont en partie vits par

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l'utilisation de marques plus petites ayant un fil plus fin et qui sont donc injectables avec une aiguille creuse plus fine.

4. Tatouages

a) Colorants vitaux

Dans certains cas il est utile de disposer de techniques de marquage de larves ou de juvniles sans qu'il y ait besoin d'une longue prennit. Deux exemples peuvent tre cits: l'estimation de taille d'une population par la mthode de capture-recapture, les tudes trs brves sur la distribution ou les mouvements des poissons.

Deux colorants ont t tests (BOUTRY, 1983) dans le cas de larves et d'alevins de corgones la Station INRA de Thonon: le brun Bismark, le rouge neutre avec les conditions de balnation suivantes: 1) 1/25000 pendant 0,5 heure, 2) 1/50000 pendant 1 h et 3) 1/100000 pendant 2 h. L'utilisation du brun Bismark s'est avre intressante pour marquer avec des mortalits nulles ou ngligeables la totalit des larves pendant 2 jours (condition 1) ou trois jours (conditions 2 et 3). Le rouge neutre est plus visible mais il a une tenue totale moins longue (1 jour dans les conditions 2 et 3).

Avantages: rapidit, faible cot, possibilit de marquer des larves et alevins.

Limites: marquage de groupe, trs faible dure de rtention.

b) Injection ponctuelle de colorants (bleu alcyan)

La technique consiste en l'injection dans les nageoires ou la paroi ventrale d'une solution de bleu alcyan 8 GX (64 mg/ml) avec un injecteur haute pression sans aiguille. La dissolution se fait dans l'eau distille et il est recommand de laisser sdimenter ou filtrer pour enlever les grosses particules. L'utilisation de prolongateurs d'embout de diffrentes longueurs permet d'adapter la distance d'injection, par exemple pour ne pas perforer les nageoires trop fines.

La vitesse de marquage est de 300-500 poissons par heure si le marqueur est aliment en injecteurs dj arms ou s'il dispose d'un injecteur rptition (type vaccination collective). Il est recommand de passer sous l'eau les poissons marqus pour immdiatement vrifier la prsence d'une marque nette et de recommencer le marquage en cas de besoin.

Il y a souvent des besoins de marquages diffrentiels de groupes de poissons. L'inoculation de bleu alcyan en spot unique ou avec plusieurs spots sur une seule ou plusieurs nageoires donne

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des possibilits d'identification de lots sans entraner des effets diffrentiels lis au marquage. Selon l'usage du marquage, il faut prendre en compte les problmes d'rosion des nageoires (ex.: cas de la dorsale). Dans le cas d'injection sur les nageoires, il y a trs peu de mortalits et d'effets ngatifs associs. Le taux de rtention de la marque est gnralement bon jusqu' un an au minimum, mais il doit tre valu pour chaque espce.

Avantages: possibilit de marquage de lots sans biais, pas d'effets ngatifs connus, peu coteux.

Limites: perte de lisibilit avec le temps, peu adapt au poissons de moins de 10 cm.

5. Implants visibles Les implants visibles (marques VI) ont t dvelopps par NMT (Northwest Marine Technology Inc.). Il s'agit de morceaux rectangulaires de mylar portant un code alphanumrique. La marque est implante sous un tissu transparent et peut donc tre lue sur des poissons vivants. Deux tailles sont disponibles (standard: 1,0*2,5 mm pour les poissons de 15-30 cm et grande: 1,5*3,5 mm pour les poissons de plus de 30 cm; paisseur: 0.1 mm) ainsi que 6 couleurs.

Plusieurs sites d'implantation des implants visibles ont t tests: lentille de tissu adipeux en arrire (salmonids) ou autour de l'oeil, nageoire adipeuse, sous la mchoire infrieure, entre les rayons de nageoires de certains gros poissons. Pour chaque espce il est recommand de consulter la bibliographie des donnes dj acquises la concernant.

Dans le cas de l'implantation en arrire de l'oeil, le point d'attaque de l'injection est dorsal, et la poche doit tre la plus longue possible vis vis de la surface disponible. La marque est insre dans le fond de la poche, positionne perpendiculairement l'axe antro-postrieur. L'utilisation d'un linge ou d'une toile ponge humidifie avec une fentre l'aplomb de l'oeil peut faciliter l'injection de la marque. Le taux de rtention d'implants post-oculaires (1,0*2,5 mm) chez la truite fario s'accroit avec la taille. Avant d'utiliser la technique, il faut bien distinguer deux types de problmes: la rtention de la marque et sa lisibilit. La vitesse de marquage varie entre 50/h et 150-200/h dans le cas de personnes exprimentes.

Avantages: marquage individuel lisible de l'extrieur sur des poissons vivants, cot moyen, pas d'impact ngatif connu.

Limites: non recommand pour des poissons de moins de 18 cm, marque pouvant s'opacifier avec le temps, ce qui peut annuler la lisibilit de l'extrieur et ncessiter l'extraction de la marque.

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6. Ablation de nageoires

Ces techniques englobent l'enlvement partiel ou total de nageoires. Mis part la nageoire adipeuse des salmonids bien coupe ras, les autres nageoires repoussent (sont rgnres) plus ou moins fortement et diffremment selon le type de coupe. Il faut donc bien distinguer si les objectifs du marquage sont court ou long terme.

En cas de suivi court terme, des ablations partielles peuvent tre suffisantes mais il faut savoir que la rgnration peut se faire en quelques semaines quelques mois. Pour les suivis de longue dure, une ablation proche de la base de la nageoire est recommande car elle permet une identification permanente. Il faut alors utiliser des ciseaux fins (ex.: type irdectomie).

D'aprs les donnes bibliographiques on peut prconiser par ordre de traumatisme croissant l'ablation de: l'adipeuse, d'une pelvienne, puis ensuite d'une pectorale alors que l'ablation de la dorsale, de la caudale et de l'anale est dconseille.

Alors que la croissance est gnralement peu altre, les effets sur la mortalit sont plus variables.

Dans le cas plus simple o l'on souhaite comparer entre deux lots marqus on peut utiliser l'ablation d'une nageoire paire (prfrentiellement une pelvienne), la gauche pour un lot et la droite pour un autre.

Dans le cas des salmonids on peut ajouter l'ablation de l'adipeuse (marque supplmentaire) ou non, ce qui permet d'accrotre le nombre de lots pouvant tre compars entre eux.

Aux petites tailles (3-6 cm) il est trs difficile de couper rapidement et totalement l'adipeuse des salmonids avec de simples ciseaux, mme trs fins. CHAMPIGNEULLE et ESCOMEL (1984) ont mis au point et dcrit une technique permettant le marquage de petits salmonids partir d'une taille de 3 cm par cautrisation de l'adipeuse.

B. Les marques internes Ce sont des marques (objets) entirement implants dans le corps du poisson (ex.: micromarques magntiques, marques lectroniques). Selon les cas, la reconnaissance de certaines d'entre elles ncessite le sacrifice du poisson ou bien l'information totale ou partielle peut tre obtenue sans sacrifier ou dnaturer le poisson.

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1. Micromarques magntiques La marque est un petit morceau d'un fil d'acier inoxydable (diamtre: 0,25 mm). La longueur la plus courante (marque entire) est 1,1 mm, mais pour les poissons plus petits des demi-marques peuvent utilises. Les micromarques sont injectes l'aide d'une machine permettant la dcoupe du fil et l'injection de la marque au travers d'une aiguille creuse. Il existe galement un injecteur semi-manuel. Avec un ruban de fil cod on peut marquer environ 10000 poissons et identifier un groupe donn. Cependant il existe de nouveaux rubans dit squentiels qui donnent des possibilits de marquer des groupes diffrents avec le mme rouleau de fil.

Le poisson est ensuite pass dans un autre quipement qui magntise et spare les poissons ayant ou non retenu la marque. L'implantation la plus courante est ralise dans le cartilage nasal aprs avoir positionn le poisson grce un embout ajust sa taille et la forme de la tte. Les poissons doivent tre tris avant marquage et l'on doit avoir une srie d'embouts bien ajusts aux diffrentes gammes de taille d'une espce donne.

Sur le terrain, la prsence d'une marque est contrle par un dtecteur. Si l'on souhaite reconnatre le code de la marque, il faut gnralement l'extraire, ce qui implique de travailler sur des poissons morts. Il y a cependant des possibilits de distinguer des groupes de poissons en les laissant vivants:

quand le constat que le poisson porte une micromarque est suffisant. pour des poissons assez grands, il est possible de positionner la marque diffrents

emplacements du corps et d'utiliser un dtecteur rayon d'action prcis. De nouveaux positionnements de la marque pour la rendre visible de l'extrieur et/ou l'extraire sans avoir sacrifier le poisson ont t tests avec succs: tissu transparent autour de l'oeil, nageoire adipeuse et entre les rayons de nageoires, dans le dos juste sous la dorsale.

il existe un embout permettant l'injection de marques plates lisibles aux rayons X. Cependant la technique de lecture est trs lourde et contraignante. Par ailleurs le fait que, pour les marques plates lisibles aux rayons X la taille de l'aiguille d'injection est plus grosse, limite les possibilits de marquage de petits poissons.

L'utilisation de la technique de marquage magntique a t teste par CHAMPIGNEULLE (1987) sur de trs petits alevins d'omble chevalier. Le marquage a t pratiqu l'aide du systme Northwest Marine Technology avec la version MKII permettant l'injection de demi-marques codes (longueur: 0,5 mm; diamtre: 0,25 mm) dans le cartilage nasal. L'tude a montr que cette technique est praticable sur des alevins de trs petite taille (2 3 cm) condition d'implanter la demi-marque dans le cartilage situ juste en arrire de la ligne (fictive) joignant les deux cavits olfactives. En cas d'implantation juste en avant de cette ligne, le taux de rtention des marques un mois est trs faible, voisin de 18%, alors qu'il passe 98% dans le cas de l'implantation plus profonde (CHAMPIGNEULLE, 1987). Pour avoir une bonne implantation il faut par ailleurs avoir un embout spcifique (bouche ferme), une aiguille trs aiguise selon un angle trs faible. En conditions de pisciculture, aprs un mois d'levage, la survie des alevins marqus magntiquement est leve (>95%) et non significativement diffrente de celle des individus non marqus. Aprs un mois d'levage suivant le marquage, la taille moyenne des alevins marqus magntiquement n'est pas significativement diffrente de celle des individus non marqus.

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Pour une personne entrane, la vitesse de marquage est de 250-300/heure/personne pour les trs petits (2-3 cm) alevins d'omble et de 400-500/heure/personne pour des petits ombles de 4-5 cm. Pour de gros juvniles (8-10 cm) la vitesse de marquage atteint 600-800/personne/heure (CHAMPIGNEULLE, donnes non publies). CHAMPIGNEULLE (donnes non publies) a test avec succs le marquage de corgones de 3-5 cm avec des demi-marques (0,5 mm).

Avantages: peu d'effets ngatifs connus, possibilit d'utilisation sur des petits poissons (idal partir de 5-7 cm, mais possible ds 2,5-3 cm), bonne rtention des marques si l'emplacement est optimis, bonne vitesse de travail (500-700/machine/heure), contrle des poissons marqus pouvant tre semi-automatis, cot minime des marques (environ 0,4 F pice).

Limites: marquage de groupes, les meilleurs sites d'implantation varient selon les espces et les classes de taille, ncessit d'un personnel form, ncessit de travailler sur des poissons morts dans le cas de certaines implantations dont la plus courante dans le cartilage nasal. Le cot de l'quipement est lev mais il peut tre lou. La marque n'est gnralement pas visible de l'extrieur, ce qui implique d'ajouter une autre marque (ex: ablation d'adipeuse) pour permettre une reconnaissance rapide sur les sites non quips en dtecteurs.

2. Marques lectroniques La marque lectronique (parfois appele PIT: passive integrated transponder) comprend une micropuce permettant une identification individuelle et une antenne, le tout scell dans une enveloppe en verre de 12*2,1 mm. Elle ne comprend pas de source d'nergie propre et c'est le systme de lecture fixe ou manipul la main courte distance ( moins de 10 20 cm selon les marques) qui permet de fournir l'nergie ncessaire pour reconnatre le code de la marque. Il existe des dtecteurs immergeables (plaques ou cylindre d'identification ou fil) pouvant tre placs en tant que passage oblig dans une passe poissons.

La marque est gnralement introduite dans la cavit gnrale par une injection ventrale pratique entre pectorales et pelviennes avec un trocart spcial ou un injecteur semi-automatique (vitesses respectives de 150 poissons/h et 300/h). L'angle d'attaque est de 45 degrs (et la pntration initiale est de 2-3 mm pour accder la cavit gnrale, puis l'aiguille est ensuite redresse paralllement au corps pour ne pas endommager les viscres en dposant la marque. Un contrle de rtention et de lecture de la marque est ensuite ralis.

Avantages: marquage individuel permanent permettant des lectures rptes, peu d'effets ngatifs connus, bon taux de rtention, bien adapt au suivi individuel de poissons.

Limites: cot relativement lev (30 FF pice), distance de dtection rduite, marque non visible extrieurement.

C. Les marques chimiques Ce sont des composs, soit accumuls naturellement soit introduits artificiellement par l'homme, qui permettent d'identifier les poissons marqus. Par extension, ce peut tre galement des variations induites par lhomme dans les dpts des substances constituant certaines structures, otolithes par exemple. L'otolithomtrie et le marquage des otolithes sont en pleine expansion.

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1. Marquage des otolithes

Les otolithes sont des concrtions calcaires situes dans l'oreille interne des poissons. Ils interviennent dans l'quilibre des poissons. Ils sont prsents ds la fin du stade embryonnaire (en fin d'incubation pour les oeufs de salmonids) et s'accroissent ensuite avec le dveloppement de l'organisme. Il existe trois paires d'otolithes: les sagittae, les asterici et les lapillii. Les sagittae, loges dans la partie ventropostrieure de la capsule auditive sont les plus utilises chez les Salmonids car ce sont les plus volumineuses et les plus faciles prlever.

Les otolithes de poisson sont formes de cristaux de carbonate de calcium (aragonite) disposs de manire concentrique autour des nucli (partie centrale de l'otolithe) et enrobs dans une matrice d'otoline. L'otolithe crot par apposition d'un nouveau matriel sa priphrie. Les variations structurales et chimiques des zones concentriques sont contrles par des changements dans la physiologie du poisson et des fluctuations de l'environnement. Ce phnomne conduit la formation d'une alternance de zones (macro et microstuctures) plus ou moins larges et espaces hyalines (apparaissant noires) alternant avec des zones opaques (apparaissant blanches) qui sont visibles sur des otolithes polis observs en microscopie optique.

Des marques peuvent tre faites sur les otolithes de deux principales facons:

Otolithomarquage thermique (modification des microstries par la temprature) Fluoromarquage des otolithes (2 exemples donns)

o principe du fluoromarquage des otolithes o fluoromarquage au chlorhydrate de tracycline o fluoromarquage l'alizarine

a) Otolithomarquage thermique Des premires expriences ralises par MOSEGAARD et al. (1985) avaient suggr la possibilit de marquer des alevins vsiculs de saumon atlantique (Salmo salar) par des modifications de la photopriode et de la temprature de l'eau qui entranaient des modifications reconnaissables de la microstructure des otolithes. Deux tudes ont ensuite montr la possibilit de marquer en masse des oeufs en fin du stade oeill et des alevins de cristivomer (Salvelinus namaycush) (BROTHERS, 1990) et de saumon chum (Oncorhynchus keta) (VOLK et al., 1990). ROJAS BELTRAN et al. (1993) ont montr dans une tude prliminaire qu'il tait possible de provoquer sur des otolithes de larves de corgones des variations de microstries par un choc thermique (passage de 10,5 5,5 C en 2 heures).

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VOLK et al. (1994) ont montr la possibilit de marquer des otolithes de juvniles des cinq espces de saumon du Pacifique (Oncorhynchus sp) une semaine aprs l'closion et la persistance des marques pendant au moins 5 ans. Les alevins en rsorption dans une eau 12 C subissent des expositions de 4 h. Un laps de temps de 44 heures ou de 92 heures entre deux passages en eau refroidie produit sur l'otolithe une bande optiquement peu dense et dont la largeur varie du simple au double entre les stries sombres (zone optiquement dense) marquant les passages en eau froide. L'closion ne doit pas arriver en cours de traitement car la marque d'closion ressemble la marque de choc froid. Il faut s'assurer qu'embryons et alevins supportent bien les chocs thermiques imposs. La sagitta est incluse dans de la rsine puis polie jusqu'au nucleus. Le marquage de type code barres peut tre lu au microscope en lumire transmise (gross. x 200) le long d'un axe de la sagitta. La lecture peut tre faite par analyse d'images mais il faut avoir au pralablement ralis une lame mince (paisseur de 80 microns) de l'otolithe passant par le nucleus. MUNK et al. (1993) dcrivent une installation de contrle de la temprature utilise dans une closerie pour marquer thermiquement plusieurs dizaines de millions d'oeufs et d'alevins vsiculs de saumons du Pacifique.

Le marquage thermique offre la possibilit thorique de diffrencier plusieurs dizaines de lots diffrents et mme plusieurs centaines dans le cas des espces des genres Salmo, Salvelinus et Oncorhynchus en raison d'une longue priode de rsorption pour l'alevin vsicul.

b) Principe du fluoromarquage des otolithes Les techniques de fluoromarquage des otolithes connaissent un dveloppement rcent car elles permettent la pratique de marquage de masse. Cependant, les conditions de leur emploi ne sont pas encore totalement matrises. Les ractions des poissons (mortalits au moment du marquage ou diffres), le taux de marquage et la rtention des marques peuvent changer d'une espce l'autre pour un mme protocole de marquage. Il est donc ncessaire de raliser des exprimentations spcifiques. Par ailleurs mme dans le cas d'espces dj values, il est expressment recommand de toujours faire un essai prliminaire en situation avant de se lancer dans une opration de marquage chimique grande chelle. En effet des effets lis au changement d'chelle, la qualit d'eau (pH, oxygne, etc.), l'tat physiologique des poissons peuvent parfois induire des mortalits importantes.

Le marquage chimique des otolithes a t pratiqu avec succs avec trois principaux marqueurs: la ttracycline, l'alizarine et le chlorure de strontium. Trois types d'administration sont utilisables (balnation, alimentation et injection). Le prsent article traite principalement de la technique par balnation qui est la plus adapte au marquage en masse ralisable ds les stades prcoces ne se nourrissant pas encore. Ces nouvelles techniques ouvrent la possibilit de marquer en masse et rapidement les oeufs oeills avancs ou des larves lorsqu'ils sont rassembls et facilement disponibles sous un faible volume dans les closeries. Par ailleurs, la mthode offre la possibilit de pratiquer plusieurs marquages pour tenter de distinguer des lots, par exemple en fin du stade oeuf oeill et en fin de la rsorption pour les salmonids.

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Le fluorochrome se fixe sur les structures en voie de minralisation (os, dents, cartilages calcifis, otolithes). Les substances utilises ont la proprit d'absorber les rayons UV et d' mettre une fluorescence dans le spectre visible. Cette proprit est utilise pour le reprage du marqueur l'chelle microscopique avec un microscope quip pour l'pifluorescence.

La tte est dissque jusqu' faire apparatre le plancher des capsules auditives. Ce dernier est ensuite ouvert pour accder aux sacculi contenant les otolithes (sagittae). Les 2 sagittae sont prleves avec des pinces fines et dbarrasses des matires organiques rsiduelles. Chaque otolithe est coll (cot convexe vers l'extrieur) sparment sur une lame de verre avec une thermocolle (colle CRYSTALBOND 509 AREMCO/TTA) chauffe 121C. Il faut veiller enlever les bulles d'air existant sous l'otolithe car celles-ci peuvent mettre une fluorescence parasite. Les otolithes sont polis sur des plaques de granulomtrie diffrente, la finition s'effectuant avec une solution d'alumine hydrate (1 3 microns). L'volution du polissage pour atteindre et ne pas dpasser le centre de l'otolithe est suivie par plusieurs contrles sous microscope.

c) Fluomarquage la ttracycline avec choc osmotique Cette technique a t utilise pour la premire fois par ALCOBENDAS et al. (1991) sur des civelles de 7-8 cm. Le laboratoire INRA de Thonon (ROJAS BELTRAN et al.1995 a et b) a test cette technique sur des oeufs oeills avancs de corgone, omble chevalier et truite commune et des alevins vsiculs d'omble chevalier et de truite commune. La pratique d'une balnation avec choc osmotique permet de forcer le fluorochrome a rapidement passer l'intrieur des embryons ou des alevins.

La technique a donn de bons rsultats grande chelle (faible mortalit et bonne rtention des marques) dans le cas d'alevins vsiculs d'omble chevalier et de truite commune. Ces derniers subissent une balnation rapide (3 min 3,5 mm) dans une solution sale (5% NaCl/l) de chlorhydrate de ttracycline (1% CHTC/l). Les lots d'alevins vsiculs de truite ou omble sont manipuls dans des clayettes. La solution de marquage est ralise en remplissant un bac pouvant contenir les clayettes avec l'eau de l'closerie. Le sel est ensuite ajout (5% de NaCl). La solution est alors bien mlange afin de bien dissoudre le sel. Ensuite le chlorhydrate de ttracycline est incorpor petit petit jusqu' obtenir alors une solution bien homogne dans tout le bac. Les clayettes d'incubation-rsorption contenant les alevins sont alors immerges dans cette solution pendant 3 3,5 minutes selon le comportement des alevins.

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Si les alevins sont dj immobiles au bout de 3 min le lot est retir du bain, sinon la balnation est poursuivie jusqu' l'immobilisation mais jamais au del de 3,5 min. La clayette est esuite immdiatement remise en eau claire.

Les oeufs au stade oeill avanc de corgone, truite ou omble chevalier ont t marqus avec succs dans le mme type de solution de chlorhydrate de ttracycline mais avec un temps de balnation plus long (10 30 min). Des taux de rtention voisins de 100 % 3 ans ont dj t obtenus. Cependant la ralisation de marquages grande chelle dans des conditions varies (eaux, oeufs, temprature, pH, etc.) a montr une grande variabilit dans les taux de mortalit initiale et de rtention des marques. Ces variations inexpliques conduisent prconiser la prudence dans l'utilisation du fluoromarquage avec choc osmotique au stade oeuf chez les salmonids.

d) Fluomarquage l'alizarine Mme si le marquage ralis avec la ttracycline des stades prcoces permet de minimiser les effets possibles indsirables dus l'usage d'antibiotiques, il est apparu important de s'orienter vers l'utilisation de fluoromarqueurs de substitution. L'alizarine complexone (AC) a t utilise avec succs en balnation et le plus souvent dans la gamme 12-24 h en solution de 25 200 ppm pour les salmonids. TSUKAMOTO et al. (1989 a) ont marqu avec succs des oeufs oeills avancs (200-400 AC mg/l; balnation de 24 heures), des alevins vsiculs (50-100 mg AC/l en 24 h) et des alevins en fin de rsorption (50-200 mg AC/l en 24 h) provenant de plusieurs espces (saumons du Pacifique, truite arc en ciel et omble). TSUKAMOTO et al. (1989 b) ont marqu des larves et juvniles de Pagrus major (7 25 mm) par balnation de 24 h dans une solution de 50-200 mg AC/l. La bonne rtention des marques a t confirme aprs deux ans, de mme que l'absence d'effet ngatif sur la croissance et la survie. TSUKAMOTO et al. (1989 a et b) ont par ailleurs montr la possibilit de rpter plusieurs fois (3 6 fois) la balnation pour permettre de distinguer plusieurs lots. Deux tudes rcentes (BLOM et al., 1994; BECKMAN et SCHULZ, 1996) comparent l'utilisation de l'alizarine complexone (AC) et l'alizarine redS (ARS). L'intrt de l'ARS est multiple: a) l'ARS est certifie par la BSC (Biological Stain Comission) pour son usage pour le marquage des squelettes de petits vertbrs et diffrencier os et cartilage chez les mammifres (BLOM et al., 1994). L'AC n'a pas cette certification. b) son prix est trs infrieur (2 9 F/g selon la quantit et le degr de puret) celui de l'AC (160 F/g). c) comme l'AC, il produit une couleur de marque facilement distinguable de la fluorescence naturelle. Cependant, contrairement au cas de l'AC, il y a encore peu de recul et d'tudes sur l'utilisation de l'ARS. BLOM et al. (1994) ont marqu avec succs (100% de marquage et persistance minimale contrle de 5 mois) des juvniles (1,25 g) de morue (Gadus morhua) par une balnation de 24 heures dans une solution d'ARS 100 mg/l. Des taux de mortalit faibles et une bonne qualit des marques ont t obtenus pour l'ARS 100 mg/l utilise en balnation de 24 h sur les oeufs et larves mais des concentrations suprieures (200-400 mg/l) ont provoqu de trs fortes mortalits sur les larves de morue (BLOM et al., 1994). BECKMAN et SCHULZ (1996) ont marqu avec succs (100% de

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marquage et mortalits faibles: 0-3%) des larves de Catostomus commersoni par une balnation de 12 ou 24 heures dans une solution d'ARS de 200-300 mg/l. Les marques ont persist au moins pendant 160 jours. Le succs du marquage avec l'ARS a t, pour les mmes conditions d'emploi, identique celui obtenu avec l'AC. L'AC ou l'ARS ont surtout t utilises en balnation longue (gnralement 24 h et parfois 12 h). Quelques auteurs (ROJAS BELTRAN, donnes non publies; JOURDAN, 1995; NAGIEC et al., 1995; CACHERA 1997) ont men des exprimentations visant utiliser l'ARS sur des dures plus courtes (1 h ou 3-4 h) susceptibles de faciliter la mise en oeuvre et la surveillance du marquage dans les conditions pratiques en pisciculture. NAGIEC et al. (1995) font tat de trois expriences o l'ARS a t utilise avec succs en balnation de 3-4 h dans une solution de 70 mg ARS/l pour marquer des larves (14-15 mm) d'ombre commun (Thymallus thymallus). Les pertes au marquage ont t infrieures 1%. Les auteurs indiquent un taux de rtention allant jusqu' 718 jours post-immersion pour une taille atteinte de 250 mm. JOURDAN et ROJAS BELTRAN (donnes non publies) et CACHERA (1997) ont russi le marquage d'oeufs oeill avancs de corgones par balnation de 3 heures dans des solutions d'ARS de 200 mg/l. Des marquages ont t pratiqus grande chelle avec des alevins vsiculs de truite commune par balnation de 3 heures dans des solution de 100 200 mg d'ARS/l (ROJAS BELTRAN et CHAMPIGNEULLE, donnes non publies).

D. Les marques naturelles Les marques naturelles peuvent tre regroupes en trois principaux groupes, sachant que les marques gntiques en font partie mais que leur potentiel justifie d'en faire une catgorie part. Les marques morphomtriques sont des caractristiques de la forme du corps ou de certains lments du corps (ex.: cailles, otolithes, couleur ou autres caractristiques de la robe). Les marques mristiques sont des diffrences intraspcifiques quantitatives par exemple dans le nombre de vertbres, de branchiospines, de rayons de nageoires, de caeca pyloriques, de marques de parrs, de ponctuations de la robe. La prsence-absence ou la diffrence de frquences de macroparasites variant d'un lieu ou d'un groupe de poisson l'autre.

E. Les marques gntiques Elles identifient le profil gntique d'un poisson partir de tests biochimiques raliss sur des fragments du corps du poisson. Pour les marques gntiques, l'internaute pourra consulter le numro spcial 302 du Bulletin franais de pche et pisciculture portant plus gnralement sur la gntique des poissons.

F. Les marques acoustiques Ce sont des marques (externes ou internes) qui transmettent un signal (radio ou ultrasons) qui est rceptionn par une station fixe ou mobile. Pour les marques acoustiques, l'internaute pourra consulter le numro spcial 314 du Bulletin franais de pche et pisciculture.

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II. Planification et mise en uvre dune campagne de marquage La phase de marquage proprement dite n'est qu'une tape d'une campagne de marquage. Cette dernire comprend les tapes suivantes (Figure): Planification initiale et choix de la technique de marquage Marquage Stabulation post-marquage et relcher des poissons marqus Recapture des poissons marqus Analyse et diffusion des rsultats Etapes d'un programme de marquage

A. Planification initiale et choix de la technique de marquage La phase de planification initiale permet de fixer les objectifs de la campagne de marquage en les replaant dans leur contexte gnral (recherche, gestion). Il est conseill de se poser la question de la relle utilit de la campagne de marquage et d'valuer les techniques

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alternatives. Par exemple dans les valuations de repeuplements, les alternatives peuvent tre: l'tude des statistiques de dversement et de pche, l'annulation de certains relchers pour une priode donne ou selon une frquence donne, la ralisation d'un plan d'exprience lorsque l'on dispose de plusieurs milieux pour tester des stratgies diffrentes. Parmi les critres prendre en compte pour dfinir la technique de marquage, on peut citer: marquage individuel ou de groupe (combien de groupes ?). espce, forme, taille et nombre de poissons. moyens humains, techniques et financiers pour le marquage et le contrle des recaptures. la dure de l'tude (consquences pour la croissance et les migrations des poissons marqus). si le poisson marqu doit tre identifi une seule fois ou plusieurs fois. si les poissons marqus doivent tre gards vivants ou non. le processus de contrle des poissons. L'valuation des risques encourus (ex.: faible probabilit de pouvoir conclure, moyens insuffisants, risque pour la population tudie, etc.) fait partie de la diagnose initiale. Dans les campagnes de marquage on cherche minimiser les effets ngatifs du marquage sur le comportement, la croissance et la survie. De mme lorsque l'on compare des lots marqus diffremment, il faut valuer ou viter les ventuels effets diffrentiels lis aux divers types de marquage pratiqus. Des campagnes de marquage ralises trop ponctuellement peuvent conduire des conclusions errones. Encore trop peu de campagnes de marquages sont rptes dans le temps et/ou l'espace. Il est parfois possible de concevoir pour un lot source donn des marquages diffrents pour des sous- lots, ce qui permet une approche de la variabilit. Il faut savoir si le mme type de marquage n'est pas simultanment pratiqu dans la mme zone sur d'autres lots par d'autres personnes, ce qui apporterait un risque de confusion. L'utilisation pendant plusieurs annes de suite d'un mme type de marque non distinguable d'une anne l'autre implique la reconnaissance des cohortes et donc la dtermination de l'ge des poissons contrls. On peut faire appel des donnes publies sur la vitesse de travail de manire cadrer le nombre d'heures-personnes ncessaires et donc mieux valuer les cots et les moyens. Lorsque l'option du marquage est prise et la technique choisie, toutes les phases allant du marquage au suivi complet des poissons marqus doivent tre prises en compte, values et planifies. Il est conseill d'avoir un protocole crit suffisamment prcis qui soit soumis d'une part une analyse critique sur le plan scientifique et d'autre part l'avis des diverses parties prenantes.

B. Marquage Echantillonnage des poissons marquer Lorsqu'une seule fraction de la population tudie est marque, il est dterminant qu'elle soit la plus reprsentative possible de cette dernire. Par ailleurs il faut faire des valuations du nombre de poissons marquer en prenant en compte des donnes sur la taille de la population non marque rceptrice, ou des hypothses sur les taux de contribution attendus des marqus et sur l'effort d'chantillonnage pouvant tre mobilis sur la population cible. Il faut que le nombre de poissons marqus soit assez grand pour fournir la prcision statistique dsire.

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Le marquage proprement dit Les oprations de stabulation et marquage doivent tre supervises sur place par la prsence d'une personne exprimente et si possible habilite l'exprimentation animale. Tout doit tre mis en oeuvre pour manipuler les poissons dans de bonnes conditions et minimiser les pertes (respect de l'animal et de son bien-tre). Il faut un grand soin dans les conditions de stabulation (temprature, qualit et renouvellement d'eau) et de marquage pour limiter au maximum les stress pouvant affecter le comportement et la survie des poissons marqus relchs. Il est recommand d'viter des chocs thermiques (par exemple un passage en eau trop froide est mal support si l'cart dpasse 3-4 C. Lorsque c'est possible, il est conseill de ne commencer le marquage qu'aprs au moins un jour de stabulation pralable aprs le transfert. Les manipulations sur des juvniles de salmonids sont plus faciles quand la temprature de l'eau est infrieure 15 C. Il est dconseill de faire du marquage par temps trs orageux car les alevins semblent alors moins bien rsister aux manipulations. Pour bien les manipuler sans les blesser, il est gnralement ncessaire d'anesthsier les poissons, cette technique doit donc tre bien matrise. Aprs le marquage, un traitement sanitaire (dsinfectant externe, bactricide, voire antibiotique en cas de risques d'infection) est effectu. On recommande de striliser certains quipements entre les diffrentes tapes du marquage. Il faut galement que la procdure de marquage soit standardise de manire maximiser les chances que tous les poissons soient galement marqus. Dans beaucoup de cas il faut du personnel bien entran ou bien une phase de formation initiale pour limiter les variations entre les marqueurs. Il est important d'introduire une procdure de contrle de la qualit du marquage au cours de la campagne de mme qu'un contrle permanent de la bonne rcupration des poissons aprs marquage. Il doit y avoir une valuation immdiate du taux de perte de marques de manire pouvoir corriger au plus vite un ventuel dfaut dtect.

C. Stabulation post-marquage et relcher des poissons marqus

Lors des relchers de poissons marqus (ex.: repeuplements) il est souhaitable de dissocier dans le temps les oprations de marquage-transport-relcher de manire ne pas cumuler des stress, ce qui est nfaste la survie des poissons dverss. Par ailleurs le temps de stabulation post-marquage va permettre d'valuer les effets ngatifs (mortalit ou stress diffr) li au marquage et l'on aura ainsi une meilleure estimation du nombre et des caractristiques des poissons marqus dverss en bon tat. La stabulation post-marquage permet aussi parfois de limiter les effets diffrentiels potentiels pouvant tre introduits par la pratique de marquages diffrents. Il est ncessaire de raliser, juste avant le dversement, un chantillonnage de poissons marqus pour recueillir les donnes de taille, poids et faire un dernier contrle de rtention de marques. Par ailleurs il ne faut pas oublier de prlever sur un chantillon de poissons les structures (cailles, otolithes, opercules, cleitrum) permettant leur caractrisation au moment du dversement. Ces informations seront utilises et compares celles des poissons marqus et non marqus ultrieurement capturs (schma de croissance, marques et faux anneaux divers, distinction de populations).

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Il faut connatre le nombre prcis de poissons marqus dverss, c'est dire qu'il faut soit refaire un comptage juste avant leur dversement, soit avoir suivi prcisment les mortalits au cours de la phase de stabulation post-marquage si le nombre de poissons initialement marqus tait connu. Il ne faut pas oublier de comptabiliser les morts au cours de la phase transport-dversement. Les conditions physico-chimiques des milieux de stabulation/transport/milieu rcepteur, le mode de dispersion et les sites, heures, priodes de dversement des poissons marqus jouent probablement un rle essentiel sur le succs du relcher de poissons marqus, c'est dire leur meilleure insertion possible dans la population et le milieu rcepteur. On peut dans certains cas prvoir une stabulation pralable in situ avant de procder la phase de relcher proprement dite. Des recherches restent faire pour optimiser la phase prparatoire au relcher et le relcher des poissons marqus en fonction des types de campagnes de marquage. Il peut tre utile et mme ncessaire dans certains cas de garder un lot tmoin en pisciculture de manire valuer les problmes de mortalit diffre, de quantifier en fonction du temps les pertes de marque ou l'volution de leur lisibilit au cours du temps.

D. Recapture des poissons marqus C'est souvent une phase laborieuse sous-value (en temps, moyens) dans beaucoup de campagnes de marquage. Or dans tous les cas, la qualit de la phase finale d'chantillonnage des poissons marqus est dterminante. La faon de raliser cette phase est trs variable et dpend des objectifs du marquage, des techniques utilises, du rapport poissons marqus/population totale et du niveau d'exploitation ou d'chantillonnage dvelopp sur la population tudie. Dans tous les cas il faut avoir un plan d'chantillonnage qui permette la rcolte d'une information statistiquement valide. Lorsque les informations sont fournies par des personnes extrieures la campagne de marquage (pcheurs non volontaires pour le suivi, ngociants en poissons), le niveau de prcision des informations collectes doit tre valu. Il faut par exemple s'assurer que les pcheurs reconnaissent bien la droite et la gauche d'un poisson et fournir un schma de prlvement explicite.

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La phase d'information et de soutien de l'intrt port au suivi est donc essentielle. Par ailleurs il faut viter un cueil frquent qui est celui de personnes signalant la capture de poissons marqus sans les remettre dans le contexte de l'chantillon contrl. Il faut en effet pouvoir valuer le nombre de marqus et de non marqus et prciser la composition de l'chantillon examin. Il faut enfin avoir un site de centralisation des donnes.

E. Analyse et diffusion des rsultats La dtection et l'analyse de la marque sont dans certains cas une affaire de spcialistes quand il y a besoin d'analyses complmentaires (marquages chimiques, gntiques, etc.) ou des problmes de lisibilit des marques ncessitant une formation et/ou un quipement particulier. L'utilisation d'analyses statistiques est ncessaire pour l'obtention de conclusions fiables. La qualit des donnes dpend beaucoup de la planification initiale et de l'adquation entre l'objectif (contribution un stock, estimation d'abondance, tude de migration ou de croissance, etc.) et les techniques mises en oeuvre. Enfin il est important qu'il y ait un retour d'information sur les rsultats du marquage qui soit fait l'ensemble des participants.

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Bibliographie BOUTRY E. 1983 - Les corgones du Lman: pche, repeuplement et essais dlevage de juvniles en cages immerges. Rapport Institut de Limnologie de Thonon, 10, 32p. CHAMPIGNEULLE A. 1987 - Note technique. Marquage d'omble chevalier (Salvelinus alpinus) de petite taille par injection de micromarques magntises. Bull. Fr. Peche Piscic., 304, 22-31. CHAMPIGNEULLE A. et ESCOMEL J. 1984 - Marquage des salmonids de petite taille par ablation de l'adipeuse ou des nageoires pelviennes. Bull. Fr. Piscic., 293-294, 52-58. CRISTAU-QUOST I. 1980 - Essais d'tude comparative de diffrents types de marquage de poissons. Observations histologiques prliminaires de l'effet du cryomarquage. Thse Doct. 3 me cycle Univ. Lyon I Ecologie fondamentale et applique aux eaux continentales. 1 vol., 643 pp. JONES R. 1979 - Materials and methods used in marking experiments in fishery research. FAO Fish. Tech. Pap., 190, 134 p. NIELSEN L.A. 1992 - Methods for marking fish and shellfish. Am. Fish. Soc. Spec. Pub., 23, 208 pp. PARKER N.C., GIORGI A.E., HEIDINGER R.C., JESTER D.B., PRINCE E.D., WINANS G.A. 1990 - Fish marking techniques. Am. Fish. Soc.Symp., 7, Bethesda, Maryland USA, 1 vol, 879 pp. VIBERT R., LAGLER K.F. 1961 - Pches continentales. Biologie et amnagement. Dunod ed, Paris. WYDOSKI R., EMERY L. 1983 - Tagging and marking. In: Fisheries techniques, NIELSEN L.A. and JOHNSON D.L. (eds), 215-237, Amer. Fish.Soc., Bethesda, Maryland.

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I. Les techniques de marquage A. Les marques externes 1. Marque mchoire 2. Marque Carlin 3. Marque spaghetti-ancre 4. Tatouages a) Colorants vitaux b) Injection ponctuelle de colorants (bleu alcyan)

5. Implants visibles 6. Ablation de nageoires

B. Les marques internes 1. Micromarques magntiques 2. Marques lectroniques

C. Les marques chimiques 1. Marquage des otolithes a) Otolithomarquage thermique b) Principe du fluoromarquage des otolithes c) Fluomarquage la ttracycline avec choc osmotique d) Fluomarquage l'alizarine

D. Les marques naturelles E. Les marques gntiques F. Les marques acoustiques II. Planification et mise en uvre dune campagne de marquage A. Planification initiale et choix de la technique de marquage B. Marquage C. Stabulation post-marquage et relcher des poissons marqus D. Recapture des poissons marqus E. Analyse et diffusion des rsultats