Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab 1 plaka – 96 72386 5 plaka – 480 72388 İNSAN SERUM/PLAZMASINDA ENZİM İMMÜNO TEST KULLANIMI İLE HIV-1 VE HIV-2'YE DÖNÜŞEN HIV P24 ANTİJENİ VE ANTİ BADİLERİNİN TESPİTİ İÇİN TARAMA KİTİ

883637 – 2013/10

2 [TR]

İÇİNDEKİLER

1. KULLANIM AMACI .................................................................................... 3 2. TESTİN ÖZETİ VE AÇIKLAMASI ............................................................... 3 3. PROSEDÜRÜN PRENSİPLERİ ................................................................. 3 4. REAKTİFLER ........................................................................................... 4 5. UYARILAR VE ÖNLEMLER ....................................................................... 5 6. ÖRNEKLER ............................................................................................. 6 7. PROSEDÜR ............................................................................................. 7 8. TEST KISITLAMALARI ............................................................................ 10 9. PERFORMANS KARAKTERİSTİKLERİ .................................................... 11 10. BİBLİYOGRAFİ VE REFERANSLAR. ....................................................... 14

3 [TR]

1. KULLANIM AMACI

Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab, insan serum veya plazmasında HIV-1 (M ve O grupları) ve HIV-2'ye dönüşen HIV p24 antijeni ve anti badilerinin tespiti için kalitatif bir enzim immüno test kitidir. Bu kit, hem kan bağışlarının HIV Ag ve HIV Ab taraması için, hem de teşhis için kullanılabilir.

2. TESTİN ÖZETİ VE AÇIKLAMASI

Kazanılmış bağışıklık eksikliği sendromu (AIDS), güçlü bir şekilde baskılanmış bağışıklık ile karakterize edilen, virüsle bulaşan bir enfeksiyon hastalığıdır. AIDS veya ön belirtilerinden şikayetçi hastaların lemfositlerinden lentivirüs grubu ile ilgili iki tip virüs izole edilmiştir. HIV-1 adı verilen ilki, Fransa'da ve daha sonra Birleşik Devletlerde izole edilmiştir. HIV-2 adı verilen ikincisi, Afrika'da yaşayan iki hastadan izole edilmiştir ve Batı Afrika'daki yeni AIDS odağından sorumlu olduğu kanıtlanmıştır. HIV virüsü suşlarının genetik değişkenliğine dair bilgiler, her alt tipi temsil eden suşların GAG, POL ve ENV genlerini sekanslayarak elde edilmiştir. HIV-1 virüsleri 2 gruba bölünmüştür: 9 alt tip (A-I) içeren M grubu ve O grubu. HIV-2 virüsü 5 alt tip içermektedir. Farklı alt tiplerin coğrafi dağılımı oldukça iyi tanımlanmıştır. Bazı HIV-1 değişkenleri ana izolatlar ile GAG ve POL genleri için yalnızca %70 ve ENV geni için yalnızca %50 homoloji sahibidir; bu farklar bazı hastalarda enfeksiyon tanısının başarısız olmasını açıklayabilir. Çeşitli HIV-2 izolatları bütün proteinlerde (kılıf proteinler ve çekirdek proteinler: heteroloji = %30) SIV simian virüsü ile ortak antijenler paylaşır ancak HIV-1 kılıf proteinleri ile %40'ın altında homoloji sergiler. HIV antijenleri ve anti badileri serokonversiyonun ve enfeksiyonun farklı aşamalarında görülür ve tespit edilebilir. Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab anti-HIV-1 (M ve O grupları) ve anti-HIV-2 anti badilerinin ve antijenlerinin eş zamanlı tespitine olanak sağlar (ayrıca bkz. prosedürün kısıtlanması).

3. PROSEDÜRÜN PRENSİPLERİ

Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab, insan serumunda veya plazmasında HIV antijeninin ve HIV-1 ve/veya HIV-2 ile ilişkili çeşitli antikorların tespiti için sandviç tekniği ilkesine dayanan kalitatif bir enzim immüno testidir. Solid faz şunlarla kaplanır:

• p24 HIV-1 antijenine karşı monoklonal anti badiler • Saf antijenler: gp160 rekombinant protein, tamamen yapay (yani mevcut bir virüs tarafından

kodlanmamış) HIV-1 grubu O-spesifik epitopu taklit eden bir sentetik peptid ve HIV-2 kılıf proteinin immünodominant epitopunu taklit eden bir peptid.

Konjugeler aşağıdakilerin kullanılmasına dayanır: • HIV Ag'ye dönüşen biyotinlenmiş poliklonal anti badiler (konjuge 1) • Streptavidin ve HIV antijenleri - peroksidaz konsuge (HIV-1 ve HIV-2 kılıf glikoproteinlerinin

immünodominant epitoplarını taklit eden gp41 ve gp36 peptidleri ile solid faz için kullanılan tamamen yapay bir HIV-1 grubu O-spesifik epitopunu taklit eden aynı sentetik peptid) (konjuge 2).

Test prosedürü aşağıdaki reaksiyon adımlarını kapsar:

1. Konjuge 1 (p24 HIV-1 Ag'ye dönüşen biyotinlenmiş poliklonal anti badiler) mikro plaka çukurcuklarına eklenir.

2. Test edilecek serum numuneleri ve kontroller çukurcuklara pipetlenir. • Varsa HIV antijenleri solid faza ve konjuge 1'e bağlı monoklonal anti badiye bağlanır. • Varsa HIV-1 ve/veya HIV-2 anti badileri solid fazda immobilize olan antijenlere bağlanır. • Konjuge 1'in ve numunenin birikimi sarı-yeşilden maviye renk değişimi ile doğrulanır.

3. 37°C'de inkübasyonu takip eden yıkamadan sonra, konjuge 2 ilave edilir: • Streptavidin, biyotinlenmiş Ab-Ag-Ab kompleksleri ile reaksiyona girer. • Peroksidaz etiketli, saf HIV-1 ve HIV-2 antijenleri sırayla solid fazda yakalanan IgG, IgM veya IgA

anti badilerine bağlanır. 4. 18-30°C'de inkübasyondan sonra, bağlanmamış konjuge 2 fraksiyonu yıkama ile temizlenir. Oda

sıcaklığında (18-30°C) substrat mevcutken inkübasyondan sonra, kompleks konjugenin mevcudiyeti bir renk değişimiyle gösterilir.

5. Reaksiyon durdurulur ve 450/620-700 nm'de bir spektrometre kullanarak absorbans okunur. Bir numune üzerinde ölçülen absorbans HIV Ag veya HIV-1 ve/veya HIV-2 anti badilerinin mevcut olup olmadığını belirler.

4 [TR]

4. REAKTİFLER 4.1. Açıklama

Etiket üzerindeki tanıtıcı Açıklama Sunum/Hazırlama

72386 72388

R1 Microplate

Mikro Plaka p24 HIV-1 (fare) ve saf HIV-1 ve HIV-2 antijenlerine dönüşen monoklonal anti badilerle kaplı 8 çukurcuktan oluşan 12 şerit. Spesifik ID numarası = 53.

1 plaka Kullanıma

hazır

5 plaka Kullanıma

hazır

R2 Concentrated washing solution (20X)

Konsantre yıkama çözeltisi (20X) Tris NaCl tampon pH 7.4 Koruyucu: ProClin™ 300 %0,04

1 şişe 70 ml

Seyreltilecek

1 şişe 235 ml

Seyreltilecek

R3 Negative control

Negatif kontrol Isıyla inaktive edilmiş insan plazması HBs antijeni, HIV antijeni, anti-HIV-1, anti-HIV-2 ve anti-HCV anti badileri için negatif Koruyucu: Sodyum azid < %0,1

1 şişe 2,5 ml

Kullanıma hazır

1 şişe 2,5 ml

Kullanıma hazır

R4 HIV Ab positive control

HIV Ab pozitif kontrol Isıyla inaktive edilmiş insan plazması anti-HIV anti badileri için pozitif, sentetik seyrelticide HBs antijeni ve anti-HCV anti badileri için negatif Koruyucu: ProClin™ 300 < %0,1

1 şişe 1 ml

Kullanıma hazır

1 şişe 1 ml

Kullanıma hazır

R5 HIV Ag positive control

HIV Ag pozitif kontrol Saf HIV-1 antijeni sentetik seyrelticide bir kaotropik ajan ile inaktive edilmiş Koruyucu: ProClin™ 300 < %0,1

1 şişe 1 ml

Kullanıma hazır

1 şişe 1 ml

Kullanıma hazır

R6 Conjugate 1 Konjuge 1 p24 HIV-1'e (koyun) dönüşen biyotinlenmiş poliklonal anti badiler, sarı – yeşil renkli Koruyucu: ProClin™ 300 %0,5

1 şişe 10 ml

Kullanıma hazır

2 şişe 2 x 10 ml

Kullanıma hazır

R7a Conjugate 2

Konjuge 2 Liyofilize peroksidaz etiketli Streptavidin ve saf HIV-1 ve HIV-2 antijenleri Koruyucu: ProClin™ 300 < %0,1

1 şişe q.s.ad

12,5 ml Tekrar

sulandırılacak

2 şişe q.s.ad

2 x 30 ml Tekrar

sulandırılacak

R7b Conjugate 2 diluent

Konjuge 2 seyreltici Kırmızı renkli yağı alınmış süt çözeltisi Koruyucu: ProClin™ 300 %0,5

1 şişe 12,5 ml Tekrar

sulandırılacak

2 şişe 2 x 30 ml Tekrar

sulandırılacak

R8 Substrate buffer

Substrat tamponu H2O2 (%0,015) ve dimetil sülfoksit DMSO (%4) içeren sitrat asidi ve sodyum asetat çözeltisi pH 4,0

1 şişe 60 ml

Tekrar sulandırılacak

2 şişe 2 x 60 ml Tekrar

sulandırılacak

R9 Chromogen: TMB solution (11X)

Kromojen: TMB çözeltisi (11X) 3,3’ , 5,5’ tetrametilbenzidin (TMB) içeren çözelti

1 şişe 5 ml

Tekrar sulandırılacak

2 şişe 2 x 5 ml Tekrar

sulandırılacak

R10 Stopping solution

Durdurma Çözeltisi Sülfürik asit çözeltisi (H2SO4 1N)

1 şişe 28 ml

Kullanıma hazır

3 şişe 3 x 28 ml

Kullanıma hazır

5 [TR]

4.2. Saklama ve kullanma için gerekenler

Bu kit +2-8°C arasında saklanmalıdır. Kitin +2-8°C arasında korunan her kalemi (aksi ifade edilmediği takdirde) ambalaj üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir. Açıldıktan sonra ve kontaminasyon söz konusu olmadığı takdirde, +2-8°C arasında saklanan R2, R3, R4, R6, R7, R8, R9 ve R10 reaktifleri etikette gösterilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir.

Tanımlama Saklama

R1 +2-8°C arasında saklanan mikro çukurcuk şeritleri vakumlu torba açıldıktan sonra dikkatle yeniden kapatılan orijinal torbalarında 1 ay boyunca kullanılabilir.

R2 Seyreltilmiş yıkama çözeltisi 2 hafta boyunca +2-30°C arasında saklanabilir. Konsantre yıkama çözeltisi (R2) +2-30°C arasında saklanabilir.

R7a + R7b

Reaktifler yeniden sulandırma sonrasında 1 ay boyunca +2-8°C arasında saklanabilir. Dondurulmuş yeniden sulandırma sonrasında, kitin son kullanma tarihine kadar 11 kereye kadar dondurulup yeniden eritilebilir.

R8 + R9 Yeniden sulandırma sonrasında, karanlıkta saklanan reaktifler oda sıcaklığında (18-30°C) 6 saate kadar kullanılabilir.

5. UYARILAR VE ÖNLEMLER

ın vitro teşhis içindir. Yalnız sağlık profesyonelleri tarafından kullanılmak içindir.

5.1. Sağlık ve Güvenlik önlemleri

• Bu test kiti sadece laboratuar prosedürleri konusunda eğitimli ve olası tehlikeleri bilen kalifiye personel tarafından kullanılmalıdır. Uygun kıyafetler, eldivenler, göz/yüz koruma kullanın ve İyi Laboratuar uygulamaları kurallarına uygun şekilde çalışma yapın.

• Test kiti insan kanı bileşenleri içerir. Negatif kontrolün (R3) hazırlanmasında kullanılan insan kaynaklı materyaller test edilmiş ve hepatit B yüzey antijen (HBs Ag), HIV antijeni, hepatit C anti badileri ve insan bağışıklık eksikliği sendromu virüsü (HIV1 ve HIV2) anti badileri için reaktif olmadıkları bulunmuştur. HIV-1 anti badilerinin pozitif kontrolünün (R4) hazırlanmasında kullanılan insan kaynaklı materyaller test edilmiş ve hepatit B yüzey antijeni (HBs Ag) ve hepatit C anti badileri için reaktif olmadıkları bulunmuştur. Bilinen hiçbir test yöntemi enfeksiyona yol açan maddelerin yokluğunu tam garanti edemez. Bu nedenle tüm insan kanı türevleri, realktifler ve insan kanu örnekleri, enfeksiyon hastalık bulaştırma kapasitesine sahip olarak kullanılmalı, yerel, bölgesel ve ulusal yönetmeliklerde tanımlanmış kan yoluyla bulaşan patojenler için Evrensel Önlemler alınarak kullanılmalıdır.

• Biyolojik döküntüler: İnsan kaynaklı malzemeler döküldüğünde, potansiyel bulaşıcı oldukları kabul edilmelidir. Asit içermeyen döküntüler derhal kontaminasyondan arındırılmalıdır: Döküntü gerçekleşen bölge, malzemeler ve kontaminasyona maruz kalan yüzeyler ve ekipmanlar, dökülen numunelerin içerebileceği potansiyel biyolojik tehlikeler üzerinde etkili olan uygun bir kimyevi dezefektan (1:10 seyreltilmiş çamaşır suyu, %70-80 Etanol veya İzopropanol ve iodofor örn. %0,5 Wescodyne™ Plus, vd.) ile kontaminasyondan arındırılmalı, ardından silinerek kurulanmalıdır. Asit içeren döküntüler uygun bir şekilde emilmeli (silinmeli) veya nötralize edilmeli, alan suyla yıkanmalı ve silinerek kurutulmalıdır; döküntüyü temizlemek için kullanılan malzemeler biyolojik atık işlemine tabi tutulması gerekebilir. Daha sonra, bu alan kimyasal dezenfektanlardan biri ile kontaminasyondan arındırılmalıdır.

NOT: Çamaşır suyu içeren çözeltileri otoklava koymayın! • Tüm örnekleri ve test için kullanılan malzemeleri enfeksiyon unsuru içeriyormuşçasına bertaraf edin.

Laboratuar kimyasalları ve biyolojik olarak tehlikeli atıklar yerel, bölgesel ve ulusal yönetmeliklere uygun şekilde atılmalıdır.

• Bu test kitinde bulunan kimyasal komponentlerle ilgili tehlikeler ve bunlardan korunma yöntemleri konusunda öneriler için lütfen etiketler üzerinde bulunan ve ayrıca bu kullanım talimatlarının sonunda yer alan resimli grafiklere başvurun. Güvenlik Veri Sayfası www.bio-rad.comadresinde bulunabilir.

6 [TR]

5.2. Prosedüre ilişkin önlemler

5.2.1. Hazırlama

Sonuçların güvenilirliği aşağıdaki İyi laboratuar Uygulamalarının uygulanmasına bağlıdır: • Son kullanma tarihi geçmiş reaktifleri kullanmayın. • Bir test çalışması içinde farklı lotlardan gelen reaktifleri karıştırmayın veya ilişkilendirmeyin. • Kullanmadan önce, reaktiflerin oda sıcaklığında (18-30°C) stabilize olması için 30 dakika bekleyin. • Testin adı ile test için spesifik tanımlama numarası her mikroplakanın çerçevesinde yazılıdır. Bu

spesifik tanımlama numarası ayrıca her şeritin üzerinde belirtilir. Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab: Spesifik ID numarası = 53

Kullanmadan önce spesifik tanımlana numarasını doğrulayın. Tanımlama numarası eksikse ya da test edilecek analize karşılık gelen numaradan farklı ise, şerit kullanılmamalıdır. AÇIKLAMA: Yıkama solüsyonu (R2, etiket tanımlaması: 20X yeşil renkli), peroksidaz substrat tamponu (R8, etiket tanımlaması: TMB tam., mavi renkli), kromojen (R9, etiket tanımlaması: TMB 11X mor renkli) ve durdurma çözeltisi (R10, etiket tanımlaması: 1N kırmızı renkli) için, belirli bir test çalışmasında aynı lotların kullanılması kaydıyla kitte bulunanlar dışındaki lotlar kullanılabilir. Bu reaktifler şirketimizin bazı diğer ürünleriyle kullanılabilir. Ayrıntılı bilgi için teknik servisimize ulaşın. • Reaktifleri kontaminasyona sebep olmadan dikkatle sulandırın. • Deiyonize su ile güzelce yıkanmış ve durulanmış cam kaplar veya tercihen tek kullanımlık kaplar

kullanın. • Mikro plakanın yıkama işleminin sonu ile reaktif dağıtımı arasında kurumasına izin vermeyin. • Numune dağıtımı konjuge 1 dağıtımından hemen sonra başlamalıdır. Konjuge 1'in ve numunelerin

verilmesi arasındaki bekleme süresi 30 dakikayı aşmamalıdır. • Enzim reaksiyonu metal iyonlarına karşı çok hassastır. Buna bağlı olarak, çeşitli konjuge veya

substrat çözeltilerinin herhangi bir metal ile temas etmesine izin vermeyin. • Geliştirme çözeltisi (substrat tamponu + kromojen) pembe renkli olmalıdır. Bu pembe rengin birkaç

dakika sulandırma içerisinde değişmesi reaktifin kullanılamayacağı ve değiştirilmesi gerektiği anlamına gelir.

Geliştirme çözeltisi, temiz tek kullanımlık plastik tepside veya önceden 1N HCl ile yıkanmış ve distile su ile tamamen çalkalanmış ve kurutulmuş cam kapta hazırlanabilir. Bu reaktif karanlıkta saklanmalıdır.

• Konjuge ve geliştirme çözeltisinin dağıtımı için asla aynı kabı kullanmayın.

5.2.2. İşleme

• Test prosedürünü değiştirmeyin. • Testleri reaktif buhar (asit, alkalin, aldehit buharları) veya konjugenin enzim aktivitesini

değiştirebilecek tozların bulunduğu ortamlarda yapmayın. • Her örnek için yeni dağıtım ucu kullanın. • Çukurcuk yıkaması bu prosedürün kritik bir adımıdır: tavsiye edilen sayıda yıkama döngüsüne uyun

ve tüm çukurcukların önce tamamen dolduğundan, sonra tamamen boşaldığından emin olun. Yanlış yıkamalar doğru olmayan sonuçlara yol açabilir.

• Maksimum test performansını elde etmek için tarif edilen yıkama prosedürlerini dikkatle takip edin. Negatif numune için kabul edilebilir bir optik yoğunluk altyapısı elde etmek amacıyla yıkama prosedürünün bazı araçlar ile iyileştirilmesi (yıkama adımı döngüsü sayısının ve/veya her döngü için yıkama tamponu hacminin artırılması) gerekebilir.

Uyarlamalar ve özel prosedürler için şirketimize ulaşın.

6. ÖRNEKLER Güncel uygulamalara göre bir kan numunesi alın. Test, (EDTA, Sodyum sitrat veya ACD üzerinde toplanan) seyreltilmemiş serum veya plazma üzerinde gerçekleştirilmelidir. Lityum heparinat içeren tüplerden alınan bir numunenin kullanılması önerilmez. Herhangi bir hemolizden kaçınmak üzere serumu veya plazmayı mümkün olduğu kadar kısa sürede pıhtıdan veya kırmızı hücrelerden ayırın. Aşırı hemoliz test performansını etkileyebilir. Agregalar içeren örnekler test öncesinde santrifüj ile arıtılmalıdır. Askıda kalan fibrin partikülleri veya agregalar yalancı pozitif sonuçlar verebilir.

7 [TR]

Tarama 7 gün içerisinde gerçekleştirilirse örnekler +2-8°C arasında saklanabilir ya da -20°C'de birkaç ay boyunca dondurulabilir. Plazma, 40°C'de bir su banyosunda birkaç dakika ısıtılarak hızla eritilmelidir (fibrin çökelmesini önlemek üzere). Üçten fazla dondurma/eritme döngüsü tekrarlamayın. En fazla 90 g/l albümin, 200 mg/l bilirubin, 50 µg/l biyotin içeren numuneler, en fazla 36 g/l trigliserit eşdeğeri içeren lipemik numuneler ve en fazla 10 g/l hemoglobin içeren hemolize numuneler sonuçları etkilemez. Bununla beraber, kontamine hiperlipemik veya hiperhemolize serum veya plazma numuneleri kullanılması önerilmez. Numunelerin ısıtılması önerilmez. Numuneler nakledilecekse, etiyolojik ajanların taşınmasıyla ilgili olarak geçerli düzenlemeler uyarınca paketlenmelidir ve tercihen donmuş halde nakledilmelidir.

7. PROSEDÜR

7.1. Gerekli olan ama sağlanmamış malzemeler

• Distile su. • Sodyum hipoklorit (çamaşır suyu) ve sodyum bikarbonat. • Emici kağıt. • Tek kullanımlık eldivenler. • Yapışkan bant • Koruyucu gözlük • Tek kullanımlık tüpler. • Otomatik veya yarı otomatik, ayarlanabilir veya önceden ayarlı, pipetler ya da çoklu pipetler, 25 µL,

75 µL, 80 µL ve 100 µL ölçmek ve vermek için. • 25 ml, 100 ml; 1000 ml kapasiteli dereceli silindirler. Vorteks karıştırıcı. • Otomatik, yarı otomatik veya manuel mikro plaka yıkama sistemi (*). • Su banyosu veya eşdeğer mikroplakalı inkübatör, termostatik olarak 37°C ± 1°C (*) ayarlı. • Biyolojik olarak tehlikeli atıklar için konteyner. • 490 nm, 490 nm ve 620-700 nm filtrelere sahip mikro plaka okuyucu (*). (*) Teknik departmanımız tarafından önerilen ekipman hakkında ayrıntılı bilgi için bize ulaşın.

7.2. Reaktif hazırlama

7.2.1. Kullanıma hazır reaktifler

Reaktif 1 (R1): Mikro Plaka 12 şerit içeren her çerçeve desteği kilitli bir folyo torbaya sarılıdır. Bir makas veya bisturi kullanarak kilidin 0,5 ila 1 cm üstünden torbayı kesin. Torbayı açın ve çerçeveyi çıkartın. Kullanılmayan şeritleri yeniden torbaya koyun. Torbayı dikkatlice kapatın ve yeniden +2-8°C sıcaklığında saklayın. Reaktif 3 (R3): Negatif kontrol Reaktif 4 (R4): HIV Ab pozitif kontrol Reaktif 5 (R5): HIV Ag pozitif kontrol Reaktif 6 (R6): Konjuge 1 Reaktif 10 (R10): Durdurma Çözeltisi

7.2.2. Sulandırılacak reaktifler

Reaktif 2 (R2): Konsantre yıkama çözeltisi (20X) Kullanıma hazır yıkama çözeltisi elde etmek için 1:20 distile suda seyreltin. 12 şeritlik bir plaka için 800 ml hazırlayın. Reaktif 7a (R7a) + Reaktif 7b (R7b): Konjuge 2 çalışma çözeltisi Kauçuk kapakta kalmış olabilecek herhangi bir maddeyi temizlemek için liyofilize konjuge 2 (R7a) şişesini hafifçe tezgaha vurun.

8 [TR]

Kapağı dikkatli bir şekilde çıkarın ve konjuge seyreltici şişenin (R7b) içeriğini liyofilize konjuge şişesine (R7a) boşaltın. Kapağı takın ve çözelmeyi kolaylaştırmak için çeşitli zamanlarda hafifçe çalkalayarak ve ters çevirerek 10 dakika bekletin. Reaktif 8 (R8) + Reaktif 9 (R9): Enzim geliştirme çözeltisi 12 şerit üzerinde işlem yapmak için 10 ml gerekli ve yeterli olduğunu dikkate alarak Substrat Tamponunda (R8) 1:11 kromojen (R9) seyreltin (ör. 1 ml reaktif R9 +10 ml R8 reaktif). Homojenize edin.

7.3. Test Prosedürü

Prosedüre harfiyen uyun. Test kalitesini doğrulamak için her determinasyon serisi için negatif (R3), HIV-1 Ab pozitif (R4) ve HIV Ag pozitif (R5) kontrollerini kullanın. Aşağıdaki İyi Laboratuvar Uygulamalarına uyun:

1) Numune dağıtım ve tanımlama planını dikkatli bir şekilde oluşturun. 2) Seyreltilmiş yıkama çözeltisi R2'yi ve konjuge 2 çalışma çözeltisini (R7a + R7b) hazırlayın (bkz.

7.2). 3) Destek çerçevesini ve gereken sayıda şeridi (R1) koruyucu ambalajdan çıkarın. Kullanılmayan

şeritleri yeniden ambalajlarına koyun. Ambalajı kapatın ve yeniden +2-8°C arasında saklayın. 4) Plakayı önceden yıkamadan çukurcuklara aşağıdaki sırada dağıtım yapın (tavsiye edilen plaka

dağıtımı): • Her çukurcuğa 25 µl of konjuge 1 (R6) • A1 çukurcuğuna 75 µl HIV Ag pozitif kontrol (R5) • B1 çukurcuğuna 75 µl HIV Ab pozitif kontrol (R4) • C1, D1 ve E1 çukurcuklarına 75 µl negatif kontrol (R3) • F1 çukurcuğuna 75 µl örnek 1 • G1 çukurcuğuna 75 µl örnek 2, vs.

Karışımı 75 µl pipet ile en az 3 aspirasyonla veya mikroplaka çalkalayıcı ile 5 saniye boyunca homojenize edin. Numune dağıtımı konjuge 1 dağıtımından hemen sonra başlamalıdır. Numune dağıtımı 30 dakikadan uzun sürerse, negatif ve pozitif kontrollerin test edilecek numunelerden sonra dağıtılması önerilir. Kullanılan sisteme bağlı olarak kontrollerin pozisyonunun veya dağıtım sırasının değiştirilmesi mümkündür. AÇIKLAMA: Numune dağıtımından sonra, konjuge 1'î içeren çukurcuk sarı-yeşilden maviye döner. Çukurcuklardaki (numune + konjuge 1) mevcudiyetinin 620 nm'de spektrommetrik okumayla doğrulanması mümkündür (bkz. §7.7).

5) Mümkün olduğunda mikroplakayı yeni yapışkan bant ile kaplayın. 6) Mikroplakayı 1 saat (± 4 dak) boyunca 37°C ± 1°C'e inkübe edin. 7) Gerektiği takdirde yapışkan bandı çıkarın. Bir sıvı atık konteynerindeki bütün çukurcukların

içeriğini aspire edin ve her çukurcuğa minimum 370 µl yıkama çözeltisi ilave edin. Yeniden aspire edin ve yıkamayı en az 5 kez tekrar edin. Kalıntı hacim 10 µl'den düşük olmalıdır (gerektiği takdirde şeritleri emici kağıt üzerinde ters çevirerek kurutun). Otomatik bir yıkayıcınız varsa, aynı çalışma döngüsünü izleyin.

8) Plakadaki her çukurcuğa hızla 100 µl konjuge 2 (R7a + R7b) verin. Konjuge kullanımdan önce hafifçe çalkalanmalıdır. Mümkünse, yeni bir yapışkan bant ile kaplayın ve 30 dakika (± 4 dak) boyunca oda sıcaklığında (18-30°C) inkübe edin.

AÇIKLAMA: Konjuge 2 kırmızı renklidir. Çukurcuklardaki konjuge 2 mevcudiyetinin 620 nm'de spektrommetrik okumayla doğrulanması mümkündür (bkz. §7.7).

9) Gerektiği takdirde yapışkan bandı çıkarın, bütün çukurcukları aspirasyon ile boşaltın ve en az 5 kez yukarıda tarif edilen şekilde yıkayın.

10) Enzimlerle ilgili geliştirme çözeltisini (reaktif R8 + R9) hazırlayın. 11) 80 µl enzim geliştirme çözeltisini (R8 + R9) hızlı bir şekilde bütün çukurcuklara dağıtın.

Reaksiyonun 30 dakika (±4 dakika) boyunca karanlık ortamda ve oda sıcaklığında (18 - 30°C) gelişmesine izin verin. Bu inkübasyon sırasında yapışkan bant kullanmayın.

AÇIKLAMA: Pembe renkli geliştirme çözeltisinin dağıtılması manipülasyonun bu aşamasında görsel olarak kontrol edilebilir. Boş çukurcuk ve pembe substrat çözeltisini içeren bir çukurcuk arasında açık bir renk farklı vardır. (bkz. §7.7)

9 [TR]

12) Geliştirme çözeltisi ile aynı diziyi ve dağıtım hızını kullanarak 100 µl durdurma çözeltisi (R10) ilave edin.

AÇIKLAMA: Renksiz durdurma çözeltisinin dağıtılması bu işleme aşamasında görsel olarak kontrol edilebilir. Substrat rengi olan pembe (negatif numuneler için) veya mavi (pozitif numuneler için), durdurma çözeltisi ilave edildikten sonra renksiz (negatif numuneler için) veya sarı (pozitif numuneler için) hale gelen çukurcuklardan kaybolur.

13) Her bir plakanın altını dikkatle silin. Durdurma çözeltisinin ilavesinden sonra en az 4 dakika bekleyin ve reaksiyonun durdurulmasından itibaren 30 dakika içerisinde bir plaka okuyucu kullanarak 450/620-700 nm'deki optik yoğunluğu okuyun.

14) Spektrometrik ve görsel okumalar ile uyuşma için ve plakaya ve numune dağıtımına ve tanımlama planına karşı kontrol gerçekleştirin.

7.4. Kalite kontrol

Testi doğrulamak için her dizi çalışmasında pozitif ve negatif kontroller kullanın. (Bkz. §7.5)

7.5. Test Doğrulama kriterleri

Aşağıdaki şartlara uyulursa bu test doğrulanır:

1) Negatif kontrol R3 için Her bir negatif kontrolün (R3) absorbansı 0,170 değerinden düşük olmalıdır: O.D. R3 < 0,170 Negatif kontrollerin (R3) ortalama absorbansı 0,150 değerinden düşük olmalıdır: O.D. R3 < 0,150 R3 Negatif kontrollerden biri bu norma uymadığı takdirde, değeri yok sayın ve kalan iki değeri kullanarak ortalamayı yeniden hesaplayın.

2) HIV anti badileri pozitif kontrolü R4 için HIV Ab pozitif kontrolü (R4) absorbansı 0,9 değerinden büyük olmalıdır: O.D. R4 > 0,9

3) HIV antijenleri pozitif kontrolü R5 için HIV Ag pozitif kontrolü (R5) absorbansı 0,9 değerinden büyük olmalıdır: O.D. R5 > 0,9

7.6. Sonuçların hesaplanması / yorumlanması Kesme, R3 negatif kontrolü ile belirlenir: Negatif kontrol R3 için ortalama ölçülen absorbans değerini hesaplayın.

OD (C1) + OD (D1) + OD (E1) OD R3 = —————————————

3 Kesme değerini hesaplayın: CO = OD R3 + 0,200 HIV-1'e ve/veya HIV-2'ye dönüşen algılanabilir HIV antijeninin veya anti badilerinin mevcut olup olmaması her bir numune için ölçülen absorbansın hesaplanan kesme değeri ile karşılaştırılması yoluyla belirlenir. Her bir numune için aşağıdaki oran hesaplanır: Oran = Numune O.D. / CO Değeri Kesme değerinden düşük optik yoğunluğa sahip numuneler Genscreen™ ULTRA HIV Ag Ab tarafından negatif (oran < 1) sayılır. Ancak kesme değerinin hemen altındaki sonuçlar (CO-%10 < O.D. < CO) dikkatle yorumlanmalıdır. Sistemler ve laboratuvar prosedürleri izin verdiğinde karşılık gelen numunelerin iki kez yeniden test edilmesi tavsiye edilir.

10 [TR]

Kesmeden yüksek veya kesmeye eşit optik yoğunluktaki numuneler (oran ≥ 1) Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab tarafından başlangıçta pozitif sayılır. Son yorumlamadan önce iki kez yeniden test edilmelidirler. Yeniden test ettikten sonra 2 tekrarın en azından birinin oran değeri 1'e eşit veya 1'den yüksek ise, ilk sonuç tekrarlanabilir ve Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab ile numunenin pozitif olduğu beyan edilir. 2 tekrarın oran değeri 1'den düşük ise ilk sonuçlar tekrarlanamaz ve numunenin negatif olduğu beyan edilir. Tekrarlanamayan reaksiyonlar genellikle şunlardan kaynaklanır:

• Yetersiz mikro plaka yıkaması, • Negatif örneklerin yüksek antibadi titresi içeren serum veya plazma ile kontaminasyonu. • Substrat çözeltisinin oksitleyici etken maddeler ile (çamaşır suyu, metal iyonları, vs...)

kontaminasyonu. • Durdurma çözeltisinin kontaminasyonu.

Genscreen™ ULTRA HIV Ab-Ag ile iki kere yeniden test edilen ve negatif bulunan ancak bir değeri kesme değerine (0,9 ve 1 arasında bir oran) yakın olan numuneler dikkatle ele alınmalıdır. Hastanın başka bir yöntemle veya başka bir numune ile yeniden test edilmesi önerilir. Test edilen numuneler için çok düşük optik yoğunluk (negatif O.D.) halinde ve numuneler ile reaktifin mevcudiyeti kontrol edildiğinde, sonuçlar negatif olarak yorumlanabilir. Pozitif numunelerin güncel ulusal tavsiyelere ve algoritmalara uyarak doğrulanması önerilir.

7.7. Numune ve konjuge pipetlemenin (isteğe bağlı) spektrometrik doğrulaması

Numune ve Konjuge 1 (R6) pipetleme doğrulaması Çukurcukta konjuge 1'in (R6) ve numunelerin eşzamanlı mevcudiyetinin 620 nm'de otomatik okuma ile doğrulanması mümkündür. Numune ve konjuge 1 (R6) içeren her çukurcuk 0,600'den yksek bir O.D. sahibi olmalıdır. Konjuge 2 çalışma çözeltisi pipetleme doğrulaması Konjuge 2'nin (R7a + R7b) mevcudiyeti 450 / 620 nm'de otomatik okuma ile doğrulanabilir. Her bir çukurcuğun optik yoğunluk değeri 0,100'den büyük olmalıdır (daha düşük bir optik yoğunluk konjuge 2'nin zayıf dağılımını gösterir). Geliştirme çözeltisi pipetleme doğrulaması Çukurcukta pembe geliştirme çözeltisi mevcudiyetinin 490 nm'de otomatik okuma yoluyla doğrulanması mümkündür. Geliştirme çözeltisi içeren bir çukurcuğun optik yoğunluk değeri 0,100'den büyük olmalıdır (düşük bir optik yoğunluk geliştirme çözeltisinin zayıf dağılımını gösterir).

8. TEST KISITLAMALARI HIV antijeninin veya anti badilerin çok düşük titresi enfeksiyonun ilk aşamasında tespit edilemeyebilir; sonuç olarak negatif bir sonuç Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab ile test edilen numunenin tespit edilebilir HIV antijeni veya anti-HIV anti badileri içermediğini gösterir.

Bununla beraber, böyle bir sonuç bir HIV-1 / HIV-2 enfeksiyonuna maruz kalmış olma olasılığını ortadan kaldırmaz. HIV-1 (grup M ve grup O) ve HIV 2 değişkenliği, yalancı negatif reaksiyonlar olasılığına imkan verir. Bilinen hiçbir test yöntemi HIV virüsünün bulunmadığının garantisini sunamaz.

Yüksek derecede hassas ELICA teknikleri yalancı pozitif sonuçlar verebilir. Reaksiyonun spesifikliğini doğrulamak üzere, (Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab testinin yorumlama kriterleri uyarınca) her pozitif sonuç uygun bir yöntemle doğrulanmalıdır (Genscreen HIV Ag EIA gibi spesifik bir HIV Ag testi, daha sonra HIV Ag mevcudiyetini kanıtlamak için nötralizasyon veya anti-HIV anti badilerin mevcudiyetini kanıtlamak için Western-Blot). Numunelerin ısıtılması sonuçların kalitesini etkileyebilir.

Numuneyi, konjuge geliştirme solüsyonu birikimini doğrulama amaçlı spektrometrik yöntem, numunelerin ve konjugenin dağıtılan hacminin doğruluğunu teyit etmeye izin verir. Bu yöntem yalnızca numunenin ve konjugenin mevcudiyetini gösterir. Bu yöntem ile hata oranı kullanılan sistemin doğruluğu ile yakından bağlantılıdır (dağılım ve okuma için %10'un üzerinde bir toplu sapma katsayısı bu adımın kalitesini önemli ölçüde düşürecektir).

11 [TR]

Bazı ikterik, hiperlipemik veya hiperhemolize numuneler konjuge 1 birikimini doğrulama amaçlı spektrometrik yöntemi etkileyebilir.

Bu durumda yalnızca numunenin mevcudiyeti doğrulanabilir. Konjuge inkübasyonundan sonra çok zayıf yıkama verimi halinde, geliştirme çözeltisi pipetlemesinin otomatik doğrulaması (490 nm'de çukurcukların optik yoğunluğunu okuyarak) geliştirme çözeltisinin bulunmadığı hallerde 0,100 üzerinde optik yoğunluk ile yanlış sonuçlar verebilir. Bununla beraber, bu fenomen test edilen 939 numunenin değerlendirmesi sırasında gözlemlenmemiştir.

9. PERFORMANS KARAKTERİSTİKLERİ 9.1. Hassasiyet Ölçümü

Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab testinin hassas ölçümü 10 numunenin analizi ile tespit edilmiştir: 1 negatif numune, 3 HIV-1 anti badi pozitif, 3 HIV-2 anti badi pozitif ve 3 HIV-1 antijen pozitif. Test içi tekrarlanabilirlik bu 10 numuneyi aynı çalışmada 30 kere test ederek değerlendirilmiştir. Ara hassasiyet bu 10 numuneyi 20 gün boyunca her gün 2 bağımsız çalışma ile tekrar test ederek değerlendirilmiştir. Oran ortalaması, standart sapmalar (SD) ve sapma katsayıları (CV) hesaplanmıştır.

9.1.1. Tekrarlanabilirlik

Numune Paneli N Ortalama Oran SS %CV

Negatif 30 0,28 0,02 5,37

HIV-1 Ab Düşük pozitif 30 1,62 0,07 4,32 Orta pozitif 30 2,98 0,13 4,33 Yüksek pozitif 30 5,37 0,18 3,32

HIV-2 Ab Düşük pozitif 30 2,5 0,18 7,20 Orta pozitif 30 5,35 0,45 8,48 Yüksek pozitif 30 11,19 0,58 5,21

HIV Ag Düşük pozitif 30 1,58 0,06 3,64 Orta pozitif 30 4,19 0,17 4,13 Yüksek pozitif 30 9,21 0,34 3,65

9.1.2. Ara hassasiyet

Çalışma dahilinde

Çalışma arasında

Çalışma/operatör arasında

Toplam hassasiyet

Numuneler N Ortalama Oran SS CV SS CV SS CV SS CV

Negatif 72 0,26 0,016 %6,2 0,014 %5,5 0,014 %5,5 0,025 %9,9

HIV-1 Ab

Düşük pozitif 72 1,04 0,029 %2,8 0,044 %4,3 0,056 %5,4 0,078 %7,5 Orta pozitif 72 2,67 0,076 %2,8 0,097 %3,6 0,170 %6,4 0,210 %7,9 Yüksek pozitif 72 4,91 0,114 %2,3 0,166 %3,4 0,328 %6,7 0,385 %7,8

HIV-2 Ab

Düşük pozitif 72 1,73 0,114 %6,6 0,121 %7,0 0,263 %15,2 0,311 %17,9 Orta pozitif 72 4,40 0,477 %10,8 0,000 N/A 0,484 %11,0 0,680 %15,4 Yüksek pozitif 72 10,94 0,427 %3,9 0,319 %2,9 0,633 %3,4 0,647 %5,9

HIV Ag

Düşük pozitif 72 1,29 0,052 %4,0 0,038 %3,0 0,053 %4,1 0,084 %6,5 Orta pozitif 72 3,47 0,085 %2,5 0,134 %3,9 0,068 %2,0 0,173 %5,0 Yüksek pozitif 72 8,89 1,272 %14,3 0,000 N/A 0,000 N/A 1,272 %14,3

12 [TR]

9.2. Teşhis performansı

Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab'nin performansları rastgele kan donörlerinden, HIV enfeksiyonlu hastalardan ve ticari serokonversiyon panellerinden alınan test numuneleri ile belirlenmiştir. Ayrıca, HIV Ag hassasiyet limiti French ANSM Standardı ve WHO Uluslararası Standardı (90/636) kullanılarak test edilmiştir.. HIV enfeksiyonu ile ilgisiz hastalıkları bulunan hastalar da test edilmiştir.

9.2.1. Teşhis Spesifikliği

3 farklı alandaki toplam 6038 rastgele kan donörü üzerinde belirlenen spesifiklik %99,95 şeklinde belirlenmiş olup, güven aralığı [%99,85 – 99,99'un] %95'indedir. (6035 negatif numune / 6038 test edilen numune). Tekrarlanan 3 reaktif numunenin negatif olduğu Western Blot ve HIV p24 Ag testi ile doğrulanmıştır.

2 hastane kliniği laboratuvarından alınan 409 numune de Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab testi ile test edilmiştir; 14 numunenin başlangıçta reaktif olduğu bulunmuştur ve bunlardan 12'si tekrarlayan bir şekilde reaktif çıkmıştır (ikinci bir testte pozitif): 11'inin HIV olduğu Western Blot ile doğrulanmıştır, 1'i doğrulanmamıştır ve yalancı pozitif sayılmıştır. Bu popülasyonun spesifikliği (397/398) %99,75, Cl %95 [%98,61 – 99,99] idi.

9.2.2. Teşhis Duyarlılığı

Duyarlılık, onaylanan HIV Ab pozitif numunelerini, akut enfekte hastalardan ve ticari serokonversiyon panellerinden alınan örnekleri ve HIV Ag numunelerini (seyreltilmeden veya seyreltilmiş( test ederek değerlendirilmiştir. 1) Onaylanan HIV Ab pozitif numuneleri HIV-1 ve HIV-2 enfekte hastanın takibinden alınan 763 pozitif numune test edilmiştir. Bu çalışma %100 duyarlılık göstermiştir.

Tipler Numune sayısı Reaktif numune

sayısı Hassasiyet

HIV-1

A, B, C (CDC sınıflandırması) 200 200 %100

Tam profilli veya hafif anti-gag Ab bantlı HIV-1 WB 200 200 %100

HIV 1 grup M (18A, 71B, 23C, 9D, 12E, 4F) 137 137 %100

Grup O 22 22 %100

Grup N 1 1 %100

BBI PRZ 204 paneli 7 7 %100

HIV-2 Tam profilli HIV-2 WB 196 196 %100

(Kan alımından sonraki 1 gün içerisinde) 25 ilave taze pozitif numune test edilmiştir ve tamamı pozitif çıkmıştır. 2) Akut enfekte hastalardan ve ticari serokonversiyon panellerinden alınan örnekler • Akut veya kısa bir süre önce HIV-1 olmuş enfekte hastalardan alınan 81 örnek (Western-Blot

serokonversiyon profilli 28 hastadan 35 numune ve kısa süre önceki serokonversiyondan alınan 46 numune) Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab ile pozitif çıkmıştır.

• Serokonversiyon başına 20 numune (negatif Western-Blot profilli veya Western-Blot üzerinde p24 ve/veya gp160 için çok hafif bantlı çok erken serokonversiyon numuneleri): 19'u pozitif çıkmıştır.

13 [TR]

• Toplam 90 belgelenmiş ticari HIV serokonversiyon paneli üzerinde de çalışılmıştır ve bunlar ticari olarak sunulan EIA testleri ile kıyaslanmıştır. Buradan elde edilen sonuçlar 85 panel üzerinde CE işaretli bir Ag-Ab test ile kıyaslanmıştır: Genscreen™ PLUS HIV Ag-Ab.

Genscreen™ ULTRA HIV

Ag-Ab Genscreen™ PLUS HIV Ag-

Ab ile karşılaştırılan sonuçlar

Erken tespit (en az bir kanama)

Eşdeğer tespit (Aynı numunenin pozitif olarak tanınması)

Geç tespit

Serokonversiyon sayısı 44 41 0

En az 170 erken serokonversiyon numunesi Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab ile test edilmiştir.

9.3. Analitik hassasiyet

HIV Ag Standartları Analitik hassasiyet 1. Uluslararası WHO HIV p24 Antijen Standardı (90/636) test edilerek hesaplanmıştır ve 0,85 IU/ml Cl %95 [0,73 – 1,01 IU/ml] olarak bulunmuştur. Testin limiti de seyreltilerin testi (başlangıç konsantrasyonu 100 pg/ml) ile elde edilen eğrinin ekstrapolasyonu yoluyla ANSM HIV p24 Antijen Standardı üzerinde belirlenmiştir ve < 25 pg/ml değerinde olduğu bulunmuştur. Harici değerlendirmeler sırasında, "Ag HIV SFTS 1998" panelinin (Fransız Kan Transfüzyonu Topluluğunun HIV Ag paneli) standart aralığının regresyonu ile tespit limiti 13,6 pg/ml olarak belirlenmiştir. HIV Ag pozitif numunelerin hassasiyeti 56 numune test edilmiştir: en az 25 pg/ml HIV Ag içeren 53 numune pozitif idi ve sırasıyla 13, 16 ve 19 pg/ml HIV Ag içeren 3 numunenin oranları (Optik Yoğunluk / Kesme) 0,9 ve 1,00 arasında idi. Kültür hücrelerinin üst fazının hassasiyeti Aşağıdaki genotiplerden elde edilen 83 üst faz test edilmiştir: 76 HIV-1 grup M numunesi (16 A, 16 B, 11 C, 7D, 13 E, 4 F, 4 G, 3 H, 2 J), 4 HIV-1 grup O, 1 HIV-1 grup N ve 2 HIV 2 numunesi. 0,60 oranlı (Optik yoğunluk / Kesme) bulunan 29 pg/ml HIV Ag konsantrasyonuna sahip bir grup O numunesi haricindeki HIV-1 numunelerinin tamamı reaktif idi.

9.4. Analitik Spesifiklik / Çapraz reaktivite çalışması

9.4.1 Çapraz reaktivite çalışması

Farklı patolojiler veya HIV ile bağlantılı olmayan durum (hamile kadın, romatoid faktör, otoimmün (SLE), sirotik, kronik böbrek yetmezliği, diyaliz, anti-mouse Ig veya diğer viral veya bakteriyel enfeksiyonlar (Hepatit A, B, C, Rubella, Toksoplazmoz, Kabakulak, Kızamık, CMV, HSV, EBV, VZV, HTLVI, Sıtma, Grip aşılı hastalar) sergileyen 404 hasta Genscreen™ UTLRA HIV Ag-Ab ile test edilmiştir. 4 numune yalancı tekrarlı reaktif (1 kızamık IgG, 1 HSV IgG, 1 rubella, 1 SLE) çıkmıştır. Spesifiklik %99,0 Cl95% [%97,5 – 99,7] (400/404) idi.

9.5. Kanca etkisi

HIV Ag pozitif numunesi: Seyreltilmemiş 1000ng/mL'den negatif serum matrisinde 3,125 pg/ml p24 HIV antijenine 19 seyrelti gerçekleştirilmiştir. Seyreltilmiş numunelere kıyasla seyreltilmemiş numunelerde negatif sonuç gözlemlenmemiştir. HIV Ab pozitif numunesi: Beş (5) çok yüksek anti HIV Ab pozitif numunesi seyreltilmemişten 1/512e seyreltmesine kadar test edilmiştir. Seyreltilmiş numunelere kıyasla seyreltilmemiş numunelerde negatif sonuç gözlemlenmemiştir.

14 [TR]

10. BİBLİYOGRAFİ VE REFERANSLAR. 1. BARRE-SINOUSSI F., CHERMANN J.C., REY F. et al. Isolation of a T.lymphotropic retrovirus from a patient at risk for acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), Science 1983, 220, 868-871.

2. BRUN-VEZINET F., ROUZIOUX C., BARRE-SINOUSSI F. et al. Detection of IgG antibodies to lymphadenopathy-associated in patients with Aids or lymphadenopathy syndrome. Lancet 1984, june, 1253-1256

3. CLAVEL F., GUYADER M., GUETARD D. et al. Molecular cloning and polymorphism of the human immune deficiency virus type 2. Nature 1986, 324, 691-695.

4. NORRBY E., BIBERFELD G., JOHNSON PR. et al. The chemistry of site-directed serology for HIV infections. AIDS Res Human Retroviruses 1989, 5, 487-493

5. MATHIESEN T., CHIODI F., BROLIDEN P.A., et al. Analysis of a subclass restricted HIV-1 gp 41 epitope by omission peptides. Immunology 1989, 67,1-7

6. PASQUALI J.L., KIENY M.P., KOLBE H. et al. Immunogenicity and epitope mapping of a recombinant soluble gp 160 of the human immunodeficiency virus type 1 envelope glycoprotein AIDS Res. Human Retroviruses 1990, 6, 1107-1113.

7. ZAAIJER H.L., EXEL-OEHLERS P.V., KRAAIJEVELD T. et al. Early detection of antibodies to HIV-1 by third-generation assays. The Lancet 1992, 340, 770-772.

8. COUROUCE AM. and the other members of the retrovirus study group of the french society of blood transfusion. Effectiveness of assays for antibodies to HIV and p24 antigen to detect very recent HIV infections in blood donors. AIDS 1992, 6, 1548-1550

9. LANGE J.M.A., TEEUWSEN V.J.P., VAHLNE A., BARIN F. et al. Antigenic variation of the dominant gp41 epitope in Africa. AIDS 1993, 7, 461-466.

10. CONSTANTINE N.T. Serologic tests for retroviruses: approaching a decade of evolution. AIDS 1993, 7, 1-13.

11. VANDEN HAESEVELDE M., DECOURT JL., DE LEYS R. et al. Genomic cloning and complete sequence analysis of a highly divergent african human immunodeficiency virus isolate. J. Virology 1994, 68, 1586-1596.

12. GURTLER L.G., HAUSER P.H., EBERLE J. et al. A new subtype of human immunodeficiency virus type 1 (MVP-5180) from Cameroon. J. Virology 1994, 1581-1585

13. NAIR B.C., FORD G., KALYANARAMAN V.S. et al. Enzyme immunoassay using native envelope glycoprotein (gp 160) for detection of human immunodeficiency virus type 1 antibodies. J. Clin. Microbio 1994, 32, 1449-1456.

14. GAO F., YUE L., ROBERTSON D.L. et al. Genetic diversity of human immunodeficiency virus type 2: evidence for distinct sequence subtypes with differences in virus biology. J.Virol. 1994, 68, 7433-7447.

15. BUSCH M.P., SATTEN G.A. Time course of viremia and antibody seroconversion following human immunodeficiency virus exposure. American J. Med. 1997, 102, 117-124.

15 [TR]

16. AUBUCHON J.P., BIRKMEYER J.D., BUSCH M.P. Cost-effectiveness of expanded human immunodeficiency virus-testing protocols for donated blood. Transfusion 1997, 37, 45-51.

17. WEBER B. et al. Reduction of diagnostic window by new fourth-generation human immunodeficiency virus screening assays. J. Clin. Microbio. 1998, 36, 2235-2239.

18. GURTLER L., MUHLBACHER A., MICHL U. et al. Reduction of the diagnostic window with a new combined p24 antigen and human immunodeficiency virus antibody screening assay. J.Virology Methods 1998, 75, 27-38.

19. SIMON F., MAUCLERE P., ROQUES P. et al. Identification of a new human immunodeficiency virus type 1 distinct from group M and group O. Nature med. 1998, 4, 1032-1037.

20. COUROUCE AM. et le groupe de travail Retrovirus de la Societe Francaise de Transfusion Sanguine. Tests de depistage combine des anticorps anti-VIH et de l’antigene p24. Spectra Bio. 1999, 18, 38-44. 21. GISLEFOSS RE, GRIMSRUD TK, MOKRID L. Stability of selected serum proteins after long-term storage in the Janus Serum Bank.

16 [TR]

17 [TR]

18 [TR]

19 [TR]

20 [TR]

Bio-Rad 3, Boulevard Raymond Poincare 92430 Marnes-la-Coquette - Fransa Tel.: +33 (0) 1 47 95 60 00 2013/10 Faks: +33 (0) 1 47 41 91 33 883637 www.bio-rad.com