dr a.loucif la coloration...extemporané: il s'agit d'une technique rapide de moins de 10...
TRANSCRIPT
LA COLORATION
DR A.LOUCIF
LA COLORATION
Les colorations histologiques sont très
nombreuses et variées mais se résument
schématiquement en trois types de
coloration:
1. Les colorations topographiques.
2. Les colorations histochimiques .
3. Les colorations structurales.
Spéciale
s
Les colorations topographiques :
Ce sont des colorations standards associant à
la fois :
une coloration nucléaire :l’hématoxyline est le
colorant nucléaire fondamental de la
technique histologique.
Il colore les noyaux en bleu violet foncé.
et une coloration cytoplasmique dite de
fond (faite à l’aide de colorants acides :
Eosine, érythrosine et Orange G)
Le cytoplasme est éosinophile
Les colorations histochimiques :
Elles visent à mettre en évidence dans le
tissu examiné : glycogène, mucus, graisse,
pigments ferriques, mélaniques…
Les colorations structurales :
Elles mettent en évidence les
composants intimes de certaines structures
tissulaires : fibres élastiques, fibres
réticulaires, névroglie.
D’une manière générale la qualité des
colorants dépend de plusieurs facteurs :
La nature de la pièce : les tissus très cellulaires
se colorent plus rapidement que les moins
cellulaires.
L’épaisseur de la coupe : les coupes fines se
colorent rapidement.
La fixation : les pièces qui ont séjourné
longtemps dans les fixateurs dits
« oxydants » perdent rapidement leurs
affinités tinctoriales.
La qualité du produit colorant : la présence
d’impuretés dans un colorant influe d’une
manière importante sur la coloration.
Le degré de maturation de certaines solutions
colorantes. L’hématoxyline n’acquiert ses
qualités tinctoriales optimum qu’après
plusieurs jours, alors que d’autres doivent être
utilisées immédiatement.
La fréquence d’utilisation et l’âge des
solutions colorantes : plus l’utilisation est
fréquente et plus les temps doivent être
allongés.
La température ambiante du laboratoire :
il est connu que la chaleur active les
colorations. A l’inverse, quand
l’atmosphère est froide, il faut allonger les
temps.
La coloration standard, (de routine)
universellement adoptée en anatomie
pathologique, est celle dite « Hemalin-Eosine »
dont la technique est la suivante :
Technique :
1) Xylène……………………………10 mn pour déparaffiner
2) Xylène……………………………10 min
3) Alcool 100°………………………5 mn
4) Alcool 100°………………………passage
5) Alcool 100°………………………passage
6) Eau courante……………………blanchissement (faire disparaître la couleur jaune des lames)
7) Hemalun (hématoxyline de Harris)………..10 à 20 s (allonger le temps avec une utilisation accrue du produit)
8) Eau courante ……………………bleuissement (les lames deviennent bleu pâle)
9) Eosine……………………………5 mn
10) Eau courante…………………….jusqu’à la disparition de la couleur rouge sur les bords des lames.
11) Alcool 100°………………………….passage
12) Alcool 100°………………………….passage
13) Xylène……………………………….passage
14) Xylène……………………………….passage éclaircissement des lames
15) Xylène……………………………….10 mn
16) Montage (EukittR ou EtelanR)
Réactifs :
Hémalum (hématoxyline de Harris) est
vendue prête à l’emploi. C’est une
composition de : Hématoxyline, Alun
potassique, Acide acétique et Eau.
Eosine: Orange G (20 g) + Eosine pure (10
g) + 100cc eau.
Résultats :
Noyau bleu violet (basophile)
Cytoplasme rose (éosinophile)
COLORATION SPECIALE :
Les colorations spéciales se comptent
par dizaines. Elles mettent en évidence
certaines substances ou des
constituants tissulaires.
Nous proposons, pour illustration,
quelques unes des plus utilisées.
Trichome de Masson.
Noir de soudan .
PAS .
ZIEHL NEELSON.
GIEMSA.
Rouge congo.
Coloration de perls.
Fontana.
LES COLORATIONS TRICHROMIQUES :
La coloration de trichrome de Masson
utilise trois colorants différents :
Un colorant des noyaux.
Un colorant du cytoplasme.
Un colorant des structures de soutien, tissu
conjonctif en particulier.
Résultats :
Noyaux : noirs
Cytoplasme : rose violacé
Muscles : rose rouge
Tissus conjonctif : bleu ou vert
Les lipides :
La coloration la plus utilisée est le noir
SoudanB.
Les polysaccharides :
La coloration classique qui met en évidence les polysaccharides est le P.A.S (Periodic – acid – Schiff) HIO4, réaction introduite par Mc. Manus (1946) et Hotchkiss (1948).
Le matériel PAS positif est coloré en magenta (rouge pourpre).
Les substances PAS + sont :
Polysaccharides : glycogène.
Mucopolysaccharides neutres.
Mucoprotéines = (mucine, sécrétions mucoïdes du tractus intestinal, TSH, les cylindres hyalins protéiques du rein, corps de Russel).
Glycoprotéines, les membranes basales, la réticuline, le collagène. Glycolipides.
La coloration classiquement utilisées est appelée réaction du P.A.S (Periodic Acid Schiff).
Résultats :
Le matériel P.A.S positif est coloré en
rouge pourpre.
Une autre coloration hautement
spécifique pour la mise en évidence du
glycogène est le Carmen de Best; elle le
colore en rouge.
Méthode de Giemsa :
C’est une coloration très efficace pour mettre en évidence les mastocytes.
Résultats :
Mastocytes et éosinophiles : rouges briques.
Noyaux : violets.
Cytoplasme basophile : bleu ciel à bleu foncé.
Granulations neutrophiles : violacées ;basophiles (bleu violet foncé).
Coloration de ZIEHL NEELSON modifiée (pour la mise en évidence des BK dans les tissus) :
Bacille BK : rouge vif.
Tissu en bleu.
Caséum en gris bleu très pâle.
Les globules rouges doivent présenter une teinte rougeâtre très claire et sont un bon témoin de décoloration trop poussée.
Substances amyloïdes :
Substance homogène, hyaline semi-translucide et de distribution extracellulaire au cours de certains états pathologiques.
La substance amyloïde primitive est constituée par :
Une fraction glucidique.
Des constituants protéiques.
Des groupements sulfatés.
Les fixateurs de choix sont les fixateurs alcooliques (liquide de Carnoy, Ethanol absolu).
Les meilleurs résultats sont obtenus sur coupe à congélation.
Rouge Congo :
Résultats :
Substance amyloïde : rose vif à rouge.
Collagène : rose.
Coloration du fer :
Coloration de Perls (la plus utilisée) :
Résultat :
Fer ferrique (Fe+++) se colore en bleu vert,
les noyaux en rouge.
Pigments mélaniques :
Les pigments mélaniques sont noirs ou brun jaunâtre.
La coloration qui les met en évidence est la coloration au liquide de Fontana (nitrate d’argent ammoniacal).
Résultats :
Les grains de mélanine ou de sérotonine sont colorés en noir sur un fond rouge pâle.
Coloration de Fontana mettant en évidence les pigments mélaniques
(en noir)
LE MONTAGE:
Le montage se fait classiquement entre
lame et lamelle en utilisant les media
classiques Baume du canada (utiliser le toluène ou le xylène)
Huile de cèdre (utiliser le toluène ou le xylène)
Eukitt (utiliser le toluène ou le xylène)
Clearium (utiliser le propanol)
Autres milieux synthétiques.
LECTURE DES LAMES
La lecture des lames se fait aux faibles
grossissements en utilisant impérativement
des objectifs plans pour avoir une bonne
vue d'ensemble des tissus.
Extemporané:
Il s'agit d'une technique rapide de moins de 10 minutes
permettant d'obtenir des préparations microscopiques analysables
pendant le temps opératoires. Ces techniques ont pour but
principalement de déterminer la nature de la lésion abordée
chirurgicalement ou d'évaluer les limites d'exérèse ou l'extension
d'une tumeur.
L'examen extemporané s'effectue sur tissu frais. Le prélèvement
est congelé à -30°, coupé dans un cryostat, permettant d'obtenir
des préparations de 5 à 8 mm d'épaisseur. La coupe est colorée
par un colorant monochrome, le plus souvent par bleu de
toluidine.
L'examen extemporané est systématiquement contrôlé par un examen histologique standard.
le fragment analysé étant fixé après décongélation