Leucémies Aïgues Lymphoblastiques T:diagnostic et oncogenèse :diagnostic et oncogenèse :

« a TCR-centric view »

Elizabeth Macintyre MD PhDElizabeth Macintyre, MD PhDHematology Necker-Enfants Malades, Paris, FR

Hémopathies MalignesLAL = 3% d’HM

7% Cancers (ad et péd) MyeloproliferativesyndromesAcute MyeloidLeukemia

45% Pédiatriques>75% lymphoïde

Acute LymphoblasticLeukemiaLymphoproliferativesyndromesLymphoma 75% lymphoïdeSolid tumors

Cancers Pédiatriques

Age specific IncidenceAge specific Incidence

Acute LeukemiaAcute Leukemia : all ages

ChildrenFRALLE 93

160180200

6080

100120140160

B

T

02040

<1 2-3 4-5 6-7 8-910-1

112-1

314-1

516-1

718-1

9

Why Ig/TCR-centric?« Le raison d ’être d ’un lymphocyte »« Le raison d être d un lymphocyte »

Ig or TCR receptor,Preceeded by a pre-T/BCR, c = c

M. Espeli …. C. Schiff, Seminars in ImmunologyVolume 18, 2006, 56-66

Deregulated cellular homeostasisg

ProliférationClonogenic leukemic stem cell ???

DifférentiationDifférentiation Tumour

ApoptosisMultiple hits p pp« Dam / Reservoir»

Involves master regulatorsIn accessible loci

Long latency:Decades in MyelomaIn accessible loci Decades in Myeloma

Years for ALL

Thymus

Pro-T

Cellule dendritique

Pré-TT auxiliaire

P NK NK

T cytotoxique

Pro-B Pré-B Lymphocyte BPlasmocyteCLP

Cellules souches Cellule dendritique

Pro-NK NK

Pro-Monocyte MonocyteMacrophage

GMP

Progéniteuréosinophile

Progéniteurneutrophile

neutrophile

éosinophileCMP

GMP

ériq

ue

éosinophile

Progéniteurbasophile

basophileMastocyte

Moelle osseuse

Tiss

u pé

riphéBFU-MK Mégacaryocyte Plaquettes

Érythroblaste Érythrocytesang

EMP

BFU-E

Représentation schématique classique des différents compartiments du système hématopoïétique

Ty sangCSH Progéniteurs Cellules matures

Leucémies aiguës lymphoblastiquesg yProliférations malignes, clonales ou oligo-clonales,

développées à partir de précurseurs lymphoïdes avec blocage du processus de maturationprocessus de maturation. Accumulation de cellules immatures appelées « blastes » dans le sang et/ou la moelle osseuse.

Clinique• Tableau souvent riche mais non spécifique

Syndrome tumorale :– Syndrome tumorale : Organomégalie, adénopathies, atteinte cutanéo-muqueux...

– Syndrome d’insuffisance médullaire+++NFS Anémie neutropénie thrombopénie+++NFS, Anémie, neutropénie, thrombopénie….

Le diagnostic positif est biologique• examen cytologique des frottis sanguin et médullaire• examen cytologique des frottis sanguin et médullaire • > 20% de blastes médullaires = LA• Immunophénotypage qualitatif

Leucémie aiguës lymphoblastiquesLAL

• La cytologie +/- cytochimie (MPO-) oriente le diagnostic• L’immunophénotypage FAIT le diagnostic

LAL-B LAL-T

Classification immunologique des LAL-T selon EGIL

CD7+T-ILAL pro-T

CD1a+T-IIILAL corticale

CD2+/CD5+/CD8+T-IILAL pré-T

CD3+ mb et CD1a-T-IVLAL mature

/+Groupe b

/+Groupe a

– T/My+ si marquers myéloïdes (CD13 et CD33, CD117/c-kit)

Leucémies aiguës biphénotypiques (EGIL)Leucémies aiguës biphénotypiques (EGIL)

P i t Li é B Li é T Li é él ïdPoints Lignée B Lignée T Lignée myéloïde

2 CD79a cIgM cCD22 CD3 (cyt/m) TCR MPO

1 CD19 CD10 CD20 CD2 CD5 CD8CD10

CD13 CD33 CD117CD65CD10 CD65

0,5 TdT CD24 TdT CD7 CD1a CD14 CD15 CD64

* Chaque marqueur a une valeur (2 1 ou 0 5 points) Le score (lymphoïde ou myéloïde) résulte Chaque marqueur a une valeur (2, 1 ou 0,5 points). Le score (lymphoïde ou myéloïde) résulte de l’addition de ces points.Une leucémie aiguë est définie comme biphénotypique si le score est >2 pour la lignée myéloïde et l’une des lignées lymphoïdes, c’est à dire score myéloïde >2 + score lymphoïde T>2 (M+T) ou bien score myéloïde >2+ score lymphoïde B>2 (M+B). (Les leucémies lymphoïde B + T sont exceptionnelles).

LA avec ambiguité de lignéeg g• LA indifférenciées (DR/CD34/CD38+)• LA biclonales : coexistence de deux populations

blastiques distinctes• LA « biphénotypiques » EGIL

– Infidélité ou promiscuité de lignée?

• LA « bilineal »• MPAL = Mixed Phenotype Acute Leukemia (OMS 2008)y (

• Critères plus stringentes par rapport à l’EGIL • 1.6% de 7637 AL, par rapport à 2.8% avec l’EGIL

K Weinberg and D A Arber

• LAM M0• LAL-T pro-T ou IM0/D

Evolution des concepts de l’hématopoièse précoce murine

Modèle classique : 1ere décision : myéloide ou lymphoide?

Modèle alternatif

+ =

CLP : n’a pas de potentiel myéloïde

LMPP: lymphoid-primed multipotent progenitors n’a plus le potentiel erytho-MK: séparation précoce avant myélo/lympho

Adolfsson et al. Cell. 2005

précoce avant myélo/lympho

Schéma classique de l’hématopoïèseSchéma « révisé » de l’hématopoïèse humaine

Schéma classiquede l’hématopoiese

Schéma « révisé »de l’hématopoiese

Doulatov et al. Nat. Immunol. 2010

H

CD34+ CD38- Thy1+ CD45RA- Modèle proposé de l’hématopoïèse chez

HSC

l

hématopo èse chez homme

ETPCMP MLP

?CD34+ CD38+ Flt3+ CD45RA-

CD34+ CD38-Thy1- CD45RA+

CD34 CD38 Flt3 CD45RA

Thy1 CD45RA+

CD34+ CD38+

MEP GMP B/NK

CD34+ CD38+ Flt3+ CD45RA+ CD45RA+ CD10+

CD34+ CD38+Flt3-CD45RA-

MDP

Cellules Granuleux Cellules B, NK

CD45RA

u s E/MK Mono, Macroph, DC

Doulatov et al. Nat. Immunol. 2010

T lymphoid development occurs in the thymus T lymphoid development occurs in the thymus, at least for the TCR lineage.Thymic mass in 50% of T-ALL

T ALL or Thymic lymphoma with dissemination ?T-ALL or Thymic lymphoma with dissemination ?

ThymusThymus

Classical model of early lymphoid development

Schéma classique de l’hématopoïèseLymphopoïèse T intra‐thymique

TCRTCRTCRTCRTCR

V.Rothenberg, Nature Reviews 2008 (8) 9-21

Ontogénie Thymique

P éPrécurseur

Th Th t Th ThPrécurseurT/NKCD34+CD2/5 +/-

multipotentCD34 ++CD2/5+/-CD45 RA+

Thymocyte pré-TCD34+/-CD2/5 +

Thymocyte ISPCD34-CD4+/CD8-

Thymocyte DPCD34-CD4+/CD8+

Thymocyte CD3/TCR+OuCD3/TCR+

TdT

cCD3CD13/33

TdT

CD13/33 CD1a

Panels d’immunophénotypage des LAPanels d immunophénotypage des LA• Méritent standardisation et modernisation

– Les scores dépendent du nombre d’Mab utilisés– Évolution technologique et informatique

Évolution conceptuelle de l’hématopoièse– Évolution conceptuelle de l hématopoièse– Données du transcriptome– Optimisation des panels MRD…

Elaine Coustan-Smith1, ....Dario Campana1 Blood 2011To identify new markers for minimal residual disease (MRD) detection in acute lymphoblasticTo identify new markers for minimal residual disease (MRD) detection in acute lymphoblastic leukemia (ALL), we compared genome-wide gene expression of lymphoblasts from 270 patients with newly diagnosed childhood ALL to that of normal CD19+CD10+ B cell progenitors (n = 4). Expression of 30 genes differentially expressed by ≥3-fold in at least 25% of cases of ALL (or 40% of ALL subtypes) was tested by flow cytometry in 200 B-lineage ALL and 61 non-leukemic bone of ALL subtypes) was tested by flow cytometry in 200 B lineage ALL and 61 non leukemic bone marrow samples, including samples containing hematogones. Of the 30 markers, 22 (CD44, BCL2, HSPB1, CD73, CD24, CD123, CD72, CD86, CD200, CD79b, CD164, CD304, CD97, CD102, CD99, CD300a, CD130, PBX1, CTNNA1, ITGB7, CD69, CD49f) were differentially expressed in up to 81.4% of ALL cases; expression of some markers was associated with the presence of genetic abnormalities. Results of MRD % ; p p gdetection by flow cytometry with these markers correlated well with those of molecular testing (52 follow-up samples from 18 patients); sequential studies during treatment and diagnosis-relapse comparisons documented their stability. When incorporated in 6-marker combinations, the new markers afforded the detection of one leukemic cell among 105 bone marrow cells. These new markers should allow MRD studies in all B-lineage ALL patients, and substantially improve their sensitivity.

Ludovic LhermitteAmélie TrinquandVahid AsnafiAlberto OrfaoJacques van Dongen

ALOT Single 8 color Acute Leukemia Orientation tube, Lhermitte et al. 2012, Leukemia

CD7 31.03%CyMPO 23 54%CyMPO 23.54%CyCD3 23.23%CD34 11.28%SmCD3 6.26%CD45 1.87%CD19 1.66%

CyCD79a 1.12%

MLP and Acute LeukemiaMLP and Acute Leukemia

M/Meg/E

M

E/Meg

T/B

T

gCMP

CSH

BBCLP

Meg/E

B/M

BMLP-AL?M/T/B

T/MM

B/M

CMLPT

CMLP

Intraclonal heterogeneity at diagnosis in T-ALL

V(D)J recombination : « RAG dependent physiological genetic instability »

V J

AGCTATGATCGATACT

CAGTAAGGTCATTC1. canonicalTCGATACT GTCATTC

AGCTATGATCGATACT

CAGTAAGGTCATTC+ +Signal junction2.

canonical

AGCTATGATCTCAGATCTAG

GCAGTAAGCGTCATTC

Exonuclease activity3.

4.AGCTATGATTCGATACTAGCCTGACGGACT CATTC

GTAAG

P N addition (TdT)TCGATACTA CGGACT CATTC

Coding junctionV J

Complementarity Determining Region (CN-D1-N-D2-N-D3-N

N

T‐ALLs reproduce thymic T cell maturation

ETP Pro‐T Pré‐T ISP ISP/DP SP

TCR

sCD3

D‐D D‐J V‐DJ

TCR

cTCR

l i

D‐J V‐DJTCR

selection

IM (sCD3 - cTCR -)( )IM0 IM IM IM Pre- (sCD3- cTCR +) sCD3/TCR+

Asnafi et al Blood 2004

An Ig/TCR view of ALLAn Ig/TCR view of ALL• Expansion of «morphologically immature » recombinase competent lymphocytes

– TdT+, (RAG+, VDJ+)80% B C ll P ALL• 80% B Cell Precursor ALL

– ≈ 1% sIg+, 10-20% cIg+ / « pre-BCR »• CD79a, CD19, c/mCD22, CD10 (B I/II), CD20

• 20% T-ALL20% T ALL – ≈ 40% sTCR+, > 60% cTCRB / « pre-TCR »– 50% of TCR+ express a TCRGD (cf 5% in normal TL)

• cCD3, CD7, CD2/CD5 (T II), CD1a (TIII)

100%

1000%

Immature T-ALL T-ALL lineage T-ALL

PTRAG-1

ControlHBP-ALL

1%

10%

100% Mean

0 01%

0.1%

1%

0.001%

0.01%

IM 0 IM IM IM pre- sCD3+ TCR-

TCR TCR PBMC BM AML

Ig/TCR informativity in ALL, ill it t VJ t i B th Tmore illegitemate VJ rearrangement in B than T

Target T ALLB ALLTargetIgH VDJIgH DJ

T-ALL<5%30%

B-ALL90%5 10%IgH DJ

IgK/KDE30%0%

5-10%30%

TCR GTCR B

90%90%

60%40%TCR B

TCR D/A90%50%

40%40%

varies with genotype

I - Qualitative change

1 2 3

1

DNA 2

3 Bone marrow

RNA 1-3

fusion transcript.

Ig/TCR "proto-oncogene"

II - Quantitative change

P V J E C

Secondary

CACGG

N

Secondary Lymphoid tissue

N

non-coding exon coding exon translocation break point PCR primer

More recombinase translocations in T than BCP-ALL (Recombinase errors)(Recombinase errors)

Children Adults

85% BCP-ALL– 25% TEL-AML1

75% BCP-ALL– 25% BCR-ABL

– 3% BCR-ABL– 5% E2A-PBX1– <3% MLL (INTERFANT)

– < 3%TEL-AML1– 5% E2A-PBX1– 5% MLL-AF43% MLL (INTERFANT) 5% MLL AF4

15% T-ALL 25% T-ALL15% T-ALL– 10-15% SIL-TAL1 – 5% TCR-Hox11/TLX1

25% TCR Hox11L2/TLX3

25% T-ALL– 10% SIL-TAL1 – 15% TCR-Hox11/TLX1

10% TCR Hox11L2/TLX3– 25% TCR-Hox11L2/TLX3– 7% CALM-AF10– 6% MLL

– 10% TCR-Hox11L2/TLX3– 7% CALM-AF10– 6% MLL

Sous‐types de LAL pédiatiques: l’embarras du choix de marqueurs pas tous égaux!tous égaux!

Identification

C t /FISH

Origine

GenetiqueCaryotype/FISHCGHa

Transcriptome

Genetique somatique

Physiologique ouTranscriptome RQ‐PCR

Pui CH et al. Blood 2012; Okamoto et al. Haematologica 2010

Physiologique ou pathologique?

SIL-TAL90 Kb

TAL1+ - toujours une erreur de la recombinase ?

T-ALLgermline 1p32SIL TAL-1

90 Kb

90kb

SIL-TAL90 Kb

rearranged 1p32

SIL-TAL fusion RNA

90 Kb

SIL-TAL, 20% children T-ALLt(1:14), TCR-TAL1, <1%

100%

1000%Immature T-ALL T-ALL lineage T-ALL

PTRAG-1

Mean

Control

0.1%

1%

10%

0.001%

0.01%

IM 0 IM IM IM pre- sCD3+ TCR

TCR TCR PBMC BM AML

LAL-T : oncogenèse

Soulier et al. Blood 2005

Ferrando et al. Cancer cell 2002

Transcrits TAL1 physiologiques et pathologiques ne sont pas la même choseLAL-T adulte GRALLE

Touzart, Asnafi et, en révision

T-ALL : Age and maturation arrest Asnafi Blood 2004

60%

IM Pré-ab +TCR

40%

50%

30%

40%

10%

20%

0%

10%

1 à 10 ans 11 à 20 ans Plus de 20 ans1 à 10 ans 11 à 20 ans Plus de 20 ans

CALM AF10 predominates in adolescent and adult T-ALL

ANS 10> ANS 11-20 ANS 20<

25%

15%

20%

10%

5%

0%SIL-TAL HOX11 HOX11L2 CALM-AF10

Les leucémies aigües myéloblastiques (LAM)Schéma classique de l’hématopoïèseOncogènes et stades d’arret de maturation

Immature« EGIL Pro‐Pré TI/II »

Pre‐« EGIL corticaleTIII »

Matures / TCR +« EGIL TIV »

cTCR -sTCR- cTCR+sTCR- sTCR+Non-T restreints Engagement T T «matures»

mCD3cTCRTCR : GL DD DJ/VD V(D)J

selection

TCRGL GL DJ V(D)J

TCRGL GL 3’V-5’J 5’V-3’J

sCD3+ TCR+

selection

HOX11 HOX11L2

SIL‐TAL

Pre- (sCD3- cTCR +)IM (sCD3 - cTCR -)

IM0 IM IM IM

sCD3+ TCR+HOX11

MLLsCD3+ TCR+

Asnafi et al., Blood 2003

MLL CALM‐AF10 CALM‐AF10

Clinical RelevancePrognostic impact of Oncogenic subtypes in adult LALA and GRAALL03/05 T-ALL

TLX1

TLX1

CALM-AF10TLX1 CALM-AF10

SIL-TAL1TLX3 SIL-TAL1

TLX3

Each subgroup corresponds to approximately 10% of GRAALL patients, ie 16/yr in FR !

Schéma classique de l’hématopoïèseCALM‐AF10 dans les LAL‐T  (7%), Abd l li l Hé l i 2013

‐51 patients CALM‐AF10 positifs (CA+‐223 LAL‐T adultes protocolaires parmi lesquels 16 patients CA+ ( 11 CA+ TCR‐ et 5 CA+ TCR+)

Ben Abdelali et al. Hématologica, 2013

‐Pas de différence de pronostic  entre les patients CA+ et CA‐

‐ Les patients CA+ TCR‐ ont un plus mauvais pronostic cf. CA+ TCR‐ et CA‐ ( EFS: 80% vs 27% vs45% , p=0.02 et OS : 100% vs 21% vs 59% , p=0.014) 

CA+ TCR+

CA+ TCR+

CA+ TCR+

CA‐ CA‐

CA+ TCR‐ CA+ TCR‐

A Ferrando et al Cancer Cell 2002

Pediatric ETP ALLA. Ferrando et al. Cancer Cell 2002

HOX_R TAL_RIMMAT

TAL_RB TAL_RA

IMMAT

HOXATLX3 TLX1

J. Soulier et al. Blood 2005

E. Coustan-Smith et al. Lancet Oncology 2009

CD1a-, CD4/8 DN, My+, CD5wSt. Judes

CD1a , CD4/8 DN, My , CD5wPoor prognosis

AIEOP

ETP in GMALL treated adult T-ALL

• Classically definedClassically defined• CD1aneg, CD8neg, CD5weak

• and expression of SC or myeloid markers• Represent 32% of adult early T-cell ALL (EGIL I/II + CD2-)Represent 32% of adult early T cell ALL (EGIL I/II CD2 )

– 8% overall T-ALL

• Low rate of NOTCH1/FBXW7 mutations• High rate of FLT3 mutations

f C• Low rate of clonal TCR rearrangementsNeumann et al, Blood Cancer 2012Neumann et al, PLoS ONE 2013

ETP in LALA/GRAALL treated adult42/189 defined as ETP : 22%

ETP in LALA/GRAALL treated adult T-ALL

Schéma classique de l’hématopoïèseLes ‘mauvais’ ETP chez l’adulte sont CALM‐AF10+ (Ben Abdelali et al. Hématologica 2013)

CA+ ETP‐ CA+ ETP‐

CA‐ ETP‐

CA+ ETP+CA‐ ETP+ 

CA+ ETP+

CA‐ ETP+ CA‐ ETP‐CA‐ ETP‐

CA+ ETP+

Table 1B : Principal somatic genetic markers in T- ALL Oncogene/ Chromosomal translocation

Protein family group Incidence Reviews

Fusion transcripts p

CALM-AF10 (11q14-21-10p12)

ENTH motif containing- Zinc fingers/leucine zipper containing

10% 10% [23, 50, 51]

SIL-TAL1 (1p32 deletion)

Proline-rich extension-bHLH type II

25% 5-10% [52, 53]

MLL-ENL/AF10/AF9/Chr4 (11q23-19p13.3/10p12/9p22/Chr4)

SET1 family of histone methyltransferases-nuclear targeting sequence/serine/proline-rich

Rare Rare [41, 42]

Ig translocations (TCR >TCR>>TCR) Soulier, J Ig translocations (TCR>TCR>>TCR)

HOXA cluster (7p15-q34)

Class I homeodomain-containing

Rare Rare [34, 54]

TLX1 (HOX11) (10q24) Class II homeodomain-containing

5-10% 15-20% [53, 55, 56]

,

Meijerink, JP

TLX3 (HOX11L2)3

5q35.1) Class II homeodomain-containing

25% 5-10% [28, 54, 55, 57, 58]

MYB3 (6q22-23)

Leucine zipper transcription factor

5-10% 5-10% [53, 59]

Kim de KeersmaekerCools, J

Point mutations/deletions

NOTCH1 (9q34.3) Notch receptor family 50% 50% [32, 60]

FBW7 Protein ubiquitin ligase 25 30% 25 30% [53 61]

Look, T

FBW7 Protein ubiquitin ligase 25-30% 25-30% [53, 61]

Schéma classique de l’hématopoïèseLes mutations de NOTCH1 et/ou FBXW7

Signalisation physiologique de NOTCH1

Mutations dans plus de 60% des LAL‐T de NOTCH1

Schéma classique de l’hématopoïèseLes mutations de NOTCH1 et/ou FBXW7

« Prognostic Implications of NOTCH1 and FBXW7 Mutations in Adults With T‐Cell Acute Lymphoblastic Leukemia Treated on the MRC UKALLXII/ECOG E2993 Protocol »Lymphoblastic Leukemia Treated on the MRC UKALLXII/ECOG E2993 Protocol »

Mansour et al. J Clin Oncol 2009; 27:435288 LAL‐T de l’adulte ( UKALLX11,n=54 ; ECOG2993,n=34)

P ti i li ti f NOTCH1 d FBXW7« Prognostic implications of NOTCH1 and FBXW7 mutations in adult acuteT‐lymphoblastic leukemia »

Baldus et al. Haematologica 2009;94:1383

100 LAL‐T de l’adulte ( GMALL 05/93 et 06/99)Pas de valeur pronostique des mutations de N/F

Schéma classique de l’hématopoïèseExpression d’E/B dans les LAL‐T de l’adulteSchéma classique de l’hématopoïèseExpression d’E/B dans les LAL‐T de l’adulteSchéma classique de l’hématopoïèseMutations de NOTCH1/FBXW7 

dans LALA et GRAALL03/05 (Ben Abdelali et al.)

La survie sans évènements et la survie globale sont significativements plus longues

dans LALA et GRAALL03/05 (Ben Abdelali et al.)

chez les patients N/F mutés comparés aux patients N/F non mutés (N/F GL)

EFS (52% versus 31% ; p=0.0001)                                 OS (62% versus 48% ; p=0.0002) 

N/F mutN/F mutN/F mut N/F mut 

N/F mut N/F mut 

N/F GL  N/F GL   N/F GL  N/F GL  

Schéma classique de l’hématopoïèseExpression d’E/B dans les LAL‐T de l’adulteSchéma classique de l’hématopoïèseMutations de NOTCH1/FBXW7 dans les LAL‐T de l’adulte

EFS : GRAALL  (65% versus 30% , p=0.0001) OS  : GRAALL  (74% versus 51% , p=0.002) LALA‐94  (35% versus 31% , p=0.10)

( , p )LALA‐94  (48% versus 26% , p=0.03)

N/F mut N/F mut N/F mut N/F mut 

N/F mut N/F mut N/F GL N/F GL 

N/F mut N/F mut 

N/F GLN/F GL N/F  GL N/F  GL N/F GL N/F GL 

N/F  GL N/F  GL 

L’impact pronostique des mutations de N/F dépend du protocole thérapeutique 

Voie NOTCH

Trends in Immunology, sept 2011

RAS/PTEN alterations abrogate the good prognosis associated with N/F mutations in adult T-ALL: A GRAALL study

Trinquand et al. JCO 2013

P<0.0001P<0.0001

Trinquand et al, JCO 2013

13% of the patients could be reclassified in the poor-prognosis subgroup.

Not shown: N/K-RAS mutations and PTEN genomic abnormalities predict similar poor outcome

A new oncogenetic risk classifierg(N= 189 patients classified)

• The classifier discriminates 51% good-risk and 49% high-risk patients– HR, 3.25 [2.0-5.3] for EFS and 3.3 [1.9-5.8] for OS.

Trinquand et al, JCO 2013

, [ ] [ ]– Similar HRs after allogeneic SCT censoring.

• The classifier remained predictive in allografted patients– HR, 4.7 [1.6-14.1] for EFS and 4.3 [1.2-15.2] for OS.

Th l ifi i d th l ti f t i lti i t l i• The classifier remained the only prognostic factor in multivariate analysis– HR= 3.2 [1.9-5.1] for EFS and 3.2 [1.9-5.6] for OS, after adjustment on age (35-year) and WBC (100.109/L).

PTENEx9Ex1

2A

UPN #274

UPN #254

UPN #2381.040 58

0.420.050 40

0.33

UPN #254

UPN #419

UPN #534

0.580.53

0.59

0.400.490.45

centromere telomereChr. 10q23

89.789.6

2BJURKATJURKAT DND 41

2C

PTEN germlin T-ALLs PTEN altered T-ALLscontrols

20

25p< 0.0001

UPN 547 UPN 547UPN 531

RFI = 2 RFI = 22

10

15

20

RFI

PTE

N

UPN 534 UPN 279

RFI = 3 RFI = 2

RFI = 12.5RFI = 15.9

Actine 43kDa

PTEN 54kDa

0

5

R

PTEN

RFI = 3 RFI = 2 PTENaltered

PTENnot

altered

T lymphoid development and T-ALL counterparts

cTCR

CD4+ SP selection Pos / neg selection

Pre-TCR TCR

HSC CLP Pro-T Pre-T1 CD4 ISP DP DP

or Ly/My precursor (Pre-T2) TCRlow

cTCR CD8+ SP

CD34or Ly/My precursor (Pre T2) TCRTCRhighCD34cCD3/CD7CD2/5CD1a

TCRTCRTCRTCR

Bi-pheno ALL or

Pro-Pre-T (EGIL I-II) Cortical (EGIL III) T Mature (EGIL IV)ALL Classification

I t TCR TCR TCRAML Immature cTCR neg pre-cTCR pos TCR+

Ad : 40%Ped: 15%

Rare Ad: 40%Ped: 40%

Ad: 20%Ped: 45%

Incidence

CALM-AF10* HOX11 TAL1Main genotype CALM AF10MLL*

HOX11HOX11L2

TAL1g yp

Notch1 et al.RAS PTEN

CNOT3?CNOT3?De Keersmaeker et al. Nat Genet. 2013 Feb;45(2):186-90. doi: 10.1038/ng.2508

Take home messages 1Take home messages 1• Les LAL-T sont hétérogènes• Les LAL-T sont hétérogènes• Les corticaux/HOX+/pré-AB sont globalement d’oncogénétique favorable

– Plus fréquent chez l’enfant que l’adulte– Place de la MRD spécifiquement dans cette catégorie?

• Les immatures EGIL I-II / cTCRB- sont plus proche des LAM– Oncogénèse indépendant de la recombinase– Une partie sont dit-ETP et probablement plus proche de MLL/HSC que d’un vrai ETP– Le classifier s’applique ici aussi, mais un peu moins de N/F et PTEN et plus de RASpp q p p– Place de la MRD spécifiquement dans cette catégorie?– L’interface myéloïde/lymphoïde mérite d’être reévalué

• La majorité de LAL-T est thymique– LCS d’origine médullaire ou thymique?LCS d origine médullaire ou thymique?– Tendance Protocoles avec LBL-T et pas LAL-B

• L’évolution technologique et conceptuelle dévoile la complexité « intra-clonale » mais le rend accessible à l’exploitation

Take home messages 2A diagnostic• Au diagnostic

– CMF modernisée et standardisée– SNP/CGHarrays et/ou Cytogénétique et FISH (MLL)

• Haut résolution à cause de l’oncogenèse délétionnelleg– Bilan moléculaire des marqueurs stratifiants individuellement (pronostic ou trt. Ciblé)

• Notch1, FBXW7, PTEN (mutation et délétion), RAS au moins– Ig/TCR pour MRD

• Interprétation intégrée• Interprétation intégrée– Plateformes LAL cellulaire et moléculaire– Interaction étroite avec groupes coopérateurs

• Transfer progressif du Sanger vers NGSTransfer progressif du Sanger vers NGS– « La NGS fait mieux que le Sanger, mais est-ce qu’il peut faire aussi bien »?

Vahid Asnafi et Patrick Villarese

Les leucémies aigües myéloblastiques (LAM)Schéma classique de l’hématopoïèseOncogenèse « multi‐hits »

Mutations Translocations

‘passenger’ DélétionsAmplifications

Prolifération Tumorale oncogène

LAL‐T

gène suppresseur de tumeur†

causatif

Phase pré‐clinique

LAL‐T

~4‐5 hits accumulés

Figure 4

ALOT Single 8 color Acute Leukemia Orientation tube

Figure 4: Pair-wise analysis of the T-ALL and AML cases after AML subsetting according to CD7 and MPO expression. AMLs are known to harbor major phenotypic heterogeneity.

Pair-wise analysis of AML phenotypic subsets demonstrates that the overlap is mainly observed with MPO- CD7- AML cases and immature forms of T ALLs (T ALL green; MPO+ AML red;immature forms of T-ALLs (T-ALL, green; MPO+ AML, red; MPO-CD7+ AML, orange; MPO-CD7- AML, yellow).

LAM 0 ( Myéloblastique avec différenciation myéloïde minime)

Caractères morphologiques (ne suffisant pas à poser le diagnostic):Blastes de taille moyenne à chromatine fineBlastes de taille moyenne à chromatine fineCytoplasme de basophilie variable, pas de corps d’AuerMPO –Aspect proche de lymphoblastes (L1 ou L2)

Immunophénotypage (important++):Présence d’au moins 2 Ag myéloides parmi CD13, CD33, CD14, MPOAg

Anomalie génétique:g qPas de spécifique.Mutations AML1Anomalies chromosome 5 ou 7, trisomies chromosomes 8 et 13,…