Du peptide P140 au Lupuzor®,

un futur médicament pour le lupus?

Sylviane Muller, CNRS StrasbourgImmunologie & Chimie Thérapeutiques

► Manifestations multiples

peau (rash)

articulations

reins (glomérulonéphrite)

cerveau, coeur

système immunitaire

Epidémiologie Europe US

Prévalence/100 000/an 25-68 24-50

Incidence/100 000/an 2-5 7

Total: ~1.4 M

80 000 en France

90% sont des femmes

Lupus érythémateux disséminé (LED)

► Etiologie multiple

► Multigénique

90% sont des femmes

Equipe Immunologie et immunomodulation du lupus

Nos objectifs:

Comprendre les mécanismes moléculaires et cellulaires impliqué s dans l’induction (rupture de

tolérance au soi) et le développement du lupus.

Etudier les mécanismes moléculaires liés à la physiopatholo gie de certaines formes de lupus

(identification de cibles; diagnostic) (identification de cibles; diagnostic)

Proposer de nouvelles stratégies thérapeutiques capables de cibler spécifiquement les cellules

délétères impliquées dans la pathologie lupique

Thérapies du lupus

Thérapies actuelles• Immunosuppresion

• Corticoïdes• Cyclophosphamide• Mycophenolate mofetil

Effets indésirables• Infections• Risque de cancer

Stratégies futures• Molécules visant des cibles spécifiques impliquées dans la

physiopathologie de la réponse autoimmune

anti-BAFF

anti-IFN-α

Cellule présentatrice d’Ag

Panoplie de stratégies thérapeutiques en cours d ’év aluation dans le lupus

B7CD28

CD40L CD40CD20

CD22

CTLA4-Ig

LJP-394

anti-CD20 (ADCC,

apoptose, complément)

anti-CD22Peptides

immunomodulateurs

LTCD4+ LB

d’Ag

anti-CD40L

Modèles murins spontanés de lupus

MRL-lpr/lpr mice (H-2 k)Mutation lpr mutation + Fas

½ vie 4-5 mois

Syndrome lymphoprolifératif

Lymphocytes T CD4 -/CD8-/B220+

Néphrite à CI, vasculite

AAN, Ac anti-ADN, FR

Peptides de la protéine nucléaire U1-70K

Fanny MonneauxDoctorat 2001

pept

ides

Peptide 131-151- Reconnu par les Ac et les lymphocytes T CD4+ de souris lupiques (prolifération + IL2)- Motif RNP1- 2 sites potentiels de phosphorylation

R I H M V Y S K R S G K P R G Y A F I E Y

Index de prolifération

L’administration iv du peptide P140 à des souris MR L/lpr

- réduit la vasculite (moins d’infiltrat inflammatoire pé rivasculaire)

NaCl P1400

1

2

3 ***

vasc

uliti

s gr

ade

Saline P140

- ralentit l’apparition de la dermatiteNaCl P140

- améliore la survie des souris lupiques

60

80

100NaCl (n=33)P140 (n=29)non phosphorylé (n=9)

% s

urvi

e

Médiane de survie(semaines)

2446

26,5

MRL/lpr

-100 µµµµg P140 en NaCl /injection/souris- Voie iv- 4 injections : semaines 4, 6, 8, 12

↓ Protéinurie : 25% vs 75%

↓ Ac anti-ADNdb : 29% vs 75% (24sem)

0 10 20 30 40 500

20

40

% s

urvi

e

semaines

p=0,0017

0

2

4

6

8

10

12

x10

6 cel

ls/m

LMRL/lpr

ganglion

rate

CBA/J5 jours après injection

-réduit l’hypercellularité périphérique

MAIS

- les lymphocytes restants se comportent normalement lors d’une stimulation

- les souris MRL/lpr traitées résistent normalement à une infection par le v. de la grippe

le peptide P140 n’est pas un immunosuppresseur !

MRL/

lpr N

aCl

MRL/

lpr P

140

CBA/J N

aCl

CBA/J P

140

0

Monneaux et al. Eur. J. Immunol. 2003; Monneaux et al. ART 2007; Page et al. PloS ONE 2009; Page et al. ARD 2010

Chez l’homme , le peptide P140

-se lie à un grand nombre de molécules HLA - dans une étude longitudinale, est reconnu par les cellules T de 50% de patients lupiques

Monneaux et al. J Immunol 2005

HLA

lymphocyte T CD4+

cellule présentatrice d’antigènes (CPA)

●

●

●● ● ●

● ●● ●● ●

↑ IL-10

Essais cliniques peptide P140(Lupuzor®)

- Brevet CNRS 2001- Start-up ImmuPharma 2002- Recherche de fonds ( ► UK)- Licence du CNRS à ImmuPharma 2005- Peptide GMP / NeoMPS 2005- Tox: rats, lapins, chiens Sept. -Déc. 2005- Tox: rats, lapins, chiens Sept. -Déc. 2005- Phase I: 24 individus sains; 2 mg s.c. Fév.-Mai 2006- Phase IIa: 20 patients LED Juin-Oct. 2006- Phase IIb : 134 patients LED Janv.-Nov. 2008

Essai de Phase IIb

- double-aveugle, randomisée, multicentrique (1)- administrations sc- 3 groupes:

1. 200µg 1x/mois 2. 200µg 2x/mois3. placebo

- traitement 12 semaines + observation 12 semaines(1) Argentine, Bulgarie, Roumanie, Espagne

134 patients avec un lupus modéré à sévère (SLEDAI cl inique ≥ 6)

A 24 semaines:

� 62% de patients répondeurs dans le groupe 1 contre 41% dans le groupe placebo

[ baisse de ≥ 4 points du SLEDAI]

� aucun effet adverse significatif

2èmephase IIb USA et Europe 2010

Phase III 2011

Séquence 131–151 de la protéine U1-70K phosphorylée sur le résidu Ser140 (conservée)

pS10 pS10K

P13

R14

G15

Y16

A17

F18I19

E20

Y21

Y21E20

I19

F18

A17

Y

G15

R14

P13

K12G11 MT Cung, ENSIC Nancy

Peptide P140

S7

S7

Y6

V5M4

H3

R1I2

I2

R1

H3V5

M4

Y6

K8

K8

R9

pS10

G11

K12

Y1619F18Y16

G11

R9

La séquence est phosphorylée in vivo en position Ser140 dans les cellules apoptotiquesDieker et al. Cell Death Diff 2008

MT Cung, ENSIC Nancy

0’ 4’ 8’

Biodistribution du peptide P140

high

2’

4’

6

8’

P140

1h post -injection iv souris MRL/lpr

15’ 20’ 30’

low

6

’

15’ 30’

Accumulation dans la rate:zone marginale et dumanteau du follicule

P140-rhodamine et DAPI

Confirmation chez le rat normal avec du peptide P14 0 14C

► sur le récepteur des cellules T CD4?

Mécanisme d’action du P140 ?

lymphocyte T CD4+

cellule présentatrice d’antigènes

► sur certaines sous-populations régulatrices ou cytotoxiques ?

► sur un autre récepteur qui influence une cascade d'activation intracellula ire ?

Mécanisme d’action du P140

P140 lie une protéine de choc thermique constitutiv ement exprimée, HSC70(précipitation, ELISA, BIAcore, microscopie flurore scence et microscopie électronique)

DAPI P140 MHCII P140 + MHCII HSC70 P140 + HSC70

Lymphocytes B spléniques

Modélisation HSC70-peptide P140

P140 inhibe la capacité de HSC70

à renaturer la luciferase dénaturée

P140 µM

Dans le lupus, HSC70 est surexprimée:

- P140 ↓ surexpression- P140 interfère avec les propriétés de HSC70

P140

Mécanisme d’action du P140

Lymphocyte T CD4+

HSC70

Page et al ARD 2010

Cellule présentatrice d’antigènes

HLA-DR Dimer

HLA-DRα

actin β

P140 (µM) 20 40-

En résumé,

P140 est un immunomodulateur de la réponse autoimmu ne dans le lupus murin

- Régule l’hypercellularité du sang périphérique par un effet pro-apoptotique

- Se localise dans la rate et module des processus c ellulaires gouvernant la présentation

peptidique par les molécules du CMH (vu aussi sur d es cellules Raji humaines)

réactivité des LT CD4 + autoréactifs, en respectant les autres sous-populat ions lymphocytaires

- Nombreuses questions fondamentales à approfondir e t d’études pharmacologiques à réaliser!

2èmephase IIb USA et Europe en cours

Phase III pour 2011

CNRSUnité Immunologie et Chimie Thérapeutiques

StrasbourgMarion Décossas

Olivier Chaloin

Jean-Paul Frédéric Jürgen Nicolas Christophe NicolasBriand Gros Dieker Page Macri Schall

Monique Duval