Pseudomonas Pseudomonas aeruginosaaeruginosa

La bactérie ,

sa sensibilité aux antibiotiques ,

son antibiogramme.

INTRODUCTION

• Bactérie de l’environnement• Pathogène opportuniste• Infections graves• Résistance aux antibiotiques

La bactérieLa bactérie

1882 Charles GESSARD

En latin : puons =pus cyaneus = bleu foncé

Espèce – type du genre PSEUDOMONAS

Bactérie ubiquitaire Saprophyte environnement humide : eau et sol Pathogène opportuniste chez les malades immunodéficients

Facteurs de pathogénicité+++ Résistance +++ (ATB et ATS)

Infections nosocomiales (8 à 10% selon ACAR) et communautaires

Habitat Réservoirs EAUX : Rivière , eaux usées , boues activées , eau de piscine,

eaux minérales , eaux thermales, eaux de boisson .

VEGETAUX : Légumes , Salades , fruits , fleurs et aliments

ENVIRONNEMENT HOSPITALIER : Matériel chirurgical ( humidificateur , barbotteur , KT , endoscopes…) ,

Solutions antiseptiques (Eosine aqueuse)

Solutions de nettoyage des lentilles de contact

Médicaments et produits cosmétiques

Lieux humides , lavabos , baignoires , cuvettes , éponges , porte-savon…

HOMME : Expectorations, urines , pus ORL , pus articulaires , PV , liquide pleural , selles ,

zones humides (périné , creux axillaire ) : Colonisation

Pouvoir pathogène : Infections :• Infections oculaires: kératites, abcès de cornée, endophtalmies

• Infections cutanées bénignes ou graves : Ectyma Gangrenosum, infections de plaies chirurgicales, infections chez les brûlés

• Infections respiratoires (mucoviscidose)

• Otites– externes aiguës ou malignes– moyennes chroniques

Colonisation• Origine endogène ++– muqueuses pharyngées et intestinales colonisées• adhésion et multiplication• Transmission– croisée manuportée– solution aqueuse ou équipement contaminé

Mortalité des IN : Très élevée

– jusqu’à 50-70 % au cours des pneumopathies

– jusqu’à 30-50 % au cours des septicémies

P. aeruginosa : CARACTERES BACTERIOLOGIQUES

MORPHOLOGIE :

petit bacille fin

1.5-3µ x 0.5-0.8 µ

Gram – très mobile (vol de moucheron) en AEROBIOSE

asporulé ,

SLIME : Couche mucoïde donnant un aspect muqueux à la

culture et une plus grande virulence ( s’oppose à la phagocytose)

Caractères morphologiques

Caractères culturaux

Colonies ‘la ’

Colonies ‘M’

Colonies ‘sm’

Culture facile sur milieu nutritif simple

Bactérie aérobie stricte

Culture entre 8°C et 41°C

Production de pyocyanine et de Pyoverdine

Dégage une odeur arome de Jasmin par production

d’orthoamino-acétophénone

Caractères biochimiques

Oxydase + , Catalase + , réduction des nitrates jusqu’au stade N2Métabolisme respiratoire (MEVAG :Oxydatif)TSI : Lactose - , Saccharose - , H2S –, Gaz- (pente gris métallisée)Citrate +, ADH + , Acetamide +

Sa sensibilité aux Sa sensibilité aux antibiotiquesantibiotiques

Résistances Naturelles :

• Pénicillines G, A et M• C1G, C2G et certaines C3G• Cotrimoxazole• Macrolides, Cyclines• Chloramphénicol• Quinolones de première génération• Kanamycine• Rifampicine, glycopeptides, ac. fusidique

Molécules actives :• Carboxypenicillines : ticarcilline• Ureidopenicillines : Piperacilline• Ticarcilline+Acide clavulanique• piperacilline +Tazobactam• Monobactames : Aztreonam• Carbapénèmes : Imipénème , Méropénème• ceftazidime, cefsulodine, céfépime, cefpirome

• Aminosides : gentamicine, tobramycine, amikacine, nétilmicine,isépamicine

• Fluoroquinolones : Ciprofloxacine

• colimycine • fosfomycine

Résistance naturelle

1. imperméabilité2. Systèmes d’efflux actifs3. Hydrolyse enzymatique( ex:céphalosporinase chromosomique bas niveau)

Mécanismes de résistance de P. aeruginosa

Résistance acquise

1. Modification de la perméabilité2. Hyper expression efflux actif3. modification de la cible4. Hydrolyse enzymatique

ATB

++++

Inactivation enzymatique (naturelle ou acquise)

Efflux actifs (naturels)hyper expression (acquise)

Imperméabilité(naturelle ou acquise)

Modification de la cible (acquise)

Cellule bactérienne

Mécanismes de R. acquise Mécanismes de R. acquise aux aux β-Lactaminesβ-Lactamines

ENZYMATIQUES:

-Penicillinases transférables (PSE , OXA ,TEM)

-Cephalosporinases déreprimées

-BLSE (PER-1 , OXA , TEM, SHV)

-Imipénèmase (IMP-1)

NON ENZYMATIQUES :

- perte de la porine D2 (modification de la perméabilité)

- Hyper expression d’efflux actif

- modification structurale du LPS (modification de perméabilité)

- modification d’affinité des PLP (modification de cible)

Résistance aux AminosidesRésistance aux Aminosides RESISTANCE

NATURELLE ACQUISE

Kanamycine - Non enzymatique

- Enzymatique

Résistance non enzymatique : • Inhibition du transport actif (perméabilité) ++• Efflux (Mex XY-OprM) +++• Mutation ribosomale (cible) +

Résistance enzymatique +++ (AAT , ANT , autres enzymes )

Associations fréquentes

Mécanismes de résistance acquise

• Diminution d’affinité de la cible – DNA gyrase- topoisomérase II, sous-unités A (gyrA) – topo-isomérase IV (parC)

• Imperméabilité – porines (oprF) , LPS

• Hyper expression de divers systèmes d’efflux

• Associations fréquentes

Résistance aux FluoroquinolonesRésistance aux Fluoroquinolones

Son antibiogrammeSon antibiogramme

Technique : Méthode de diffusion en géloseFiche technique n°1 : Bactéries non exigeantes (fascicule: Standardisation

de l’antibiogramme en Médecine humaine à l’échelle nationale selon les recommandations de l’OMS 4ème édition 2005)

Inoculum : 0,5 MF

Ensemencement de 2 boîtes rondes (90mm ø) de milieu Mueller-Hinton

CIP

GM

AN

FOS

TOBCAZ

IMP

PIPTIC

ATM

TCC24mm

Liste des antibiotiques à tester

Ticarcilline (TIC)Ticarcilline + Acide Clavulanique (TCC)Pipéracilline (PIP)Ceftazidime (CAZ)Aztreonam (AZM)Imipeneme (IMP)Gentamicine (GM)Tobramycine (TOB)Amikacine (AN)Ciprofloxacine (CIP)Fosfomycine (FOS)

Contrôle de qualité : souche Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

Lecture : Mesurer avec précision à l’aide d’un pied à coulisse , les diamètres des zones d’inhibition , à l’extérieur de la boîte fermée. Comparer ces diamètres aux valeurs critiques de la table de lecture n°10 page 100 du fascicule de Standardisation . Classer la bactérie dans l’une des catégories S , I , R

Lecture interprétative : nécessite de connaître les mécanismes de résistances de Pseudomonas aeruginosa .

Lecture et interprétation

Molécules à tester

BêtalactaminesBêtalactamines

PhénotypeSauvage TIC S PIP S TCC S CAZ S ATM S IPM S

Phénotype sauvage

Présence d’une céphalosporinase chromosomique inductible Amp C(Antagonisme entre TIC : substrat et l’inducteur IPM)antagonis

me

Phénotype sauvage :Céphalosporinase chromosomique inductible :Substrats : TIC , CAZInducteur : IMP

Expression d’une pénicillinaseHaut niveau

Résistance à la TIC et à la PIPRestauration par l’Acide Clavulanique de l’activité de la TIC

Pseudomonas aeruginosa PSE-1

Pseudomonas aeruginosa PSE-3

Expression d’une Pénicillinase bas niveau:

•Résistance à la TIC et sensibilité à la PIP•Restauration de l’activité de la TIC par l’acide clavulanique

Pseudomonas aeruginosa OXA-4

Expression d’une autre Pénicillinase bas niveau:

•Résistance à la TIC et à la PIP•Restauration faible de l’activité de la TIC par l’acide clavulanique

Phénotype : Céphalosporinase déréprimée

Phénotype Céphalosporinase déréprimée :Hyperproduction de la Céphalosporinase chromosomique (mutation)

Phénotype BLSE

BLSE : Image de Synergie entre TCC (Ticarcilline+Acide Clavulanique) et Aztreonam (ou Ceftazidime)

Phénotype BLSE

Altération Porine D2

Altération Porine D2

Phénotype : Carbapénèmase VIM-2

Phénotype hyper expression d’efflux actif

Autres moléculesAutres molécules

Phénotype SauvageGM STOB SAMK S

Antibiotiques 2005 (n=2228)

Ticarcilline 17%

Pipéracilline 17,2%

Ceftazidime 13,2%

Imipenem 10,7%

Gentamicine 20,3%

Tobramycine 17%

Amikacine 9,2%

Pefloxacine 31,7%

Ofloxacine 21,6%

Ciprofloxacine 15%

Données de résistance (R+I) aux antibiotiques de P.aeruginosa pour l’année 2005 -Réseau AARN

CONCLUSIONBactérie saprophyte donc

naturellement multi résistante

Nombreux mécanismes de résistance acquise avec fréquente

intrication de plusieurs mécanismes

Difficultés thérapeutiques car Multi résistance+terrain