manuel de prelevement - chu dinant godinne manuelprelevement.pdf · le manuel de prélèvement...

Mise en application : 08/05/2013 Code fichier ANN-QUAL-017

Rédigé par : Marie-Cécile Nollevaux sur 18 Vérifié par : Birgit Weynand Approuvé par : Monique Delos VERSION : 001

MANUEL DE PRELEVEMENT

1. OBJET Le manuel de prélèvement contient toutes les informations relatives aux traitements des échantillons primaires (prélèvements) ainsi qu’aux conditions de fixation et d’acheminement préconisées pour garantir un déroulement optimal des analyses.

2. DOMAINE D’APPLICATION Ce manuel est un document externe mis à la disposition des clients du SAP dans le but de fournir les informations précises concernant les processus pré-analytiques et ainsi d’obtenir les prélèvements dans des conditions optimales.

3. DEFINITIONS – ABREVIATIONS SAP : Service (laboratoire) d’Anatomie Pathologique. Prélèvement : Matériel humain confié au SAP pour réaliser une analyse anatomo-pathologique (macroscopie, cytologie, histologie, immunohistochimie, immunofluorescence, biologie moléculaire). EUS : Echo-endoscopie trans-digestive EBUS : Echo-endoscopie trans-bronchique

4. LOGIGRAMME – CONTENU

4.1. Renseignements administratifs:

Laboratoire d’Anatomie Pathologique et de Cytologie du CHU Mont-Godinne (UCL) Avenue du Docteur Thérasse, 1 5530 Yvoir Belgique Tél : +32 - 81.42.30.12. Fax : +32 - 81.42.30.16.

Heures d’ouverture : Le laboratoire est accessible en semaine de 8H00 à 18H. Un pathologiste est toujours accessible durant les heures ouvrables pour conseiller les prescripteurs quant aux modalités de prélèvements ou au choix d’analyse à effectuer mais également pour aider à interpréter le résultat des analyses. Le laboratoire est fermé le week-end et les jours fériés.

La réception des prélèvements se fait entre 8h et 16h30.




Localisation :

Le service d’Anatomie Pathologique (flèche rouge) se trouve dans un bâtiment non contigu à la clinique.

Service d’Anatomie Pathologique



MANUEL DE PRELEVEMENT Numéros de téléphone utiles :

Secrétariat : 081/42-30-12 Fax : 081/42-30-16 Pathologistes : Professeur Monique Delos (Chef de Service) :

Secteur de Gastro-Entérologie 081/42-30-10 [email protected] Docteur Caroline Fervaille : Secteurs de Dermatologie-chirurgie plastique, Cardio-vasculaire, Hématologie et Autopsies 081/42-30-14 [email protected] Docteur Marie-Cécile Nollevaux : Secteurs de Sénologie, Gynécologie et Urologie 081/42-30-11 [email protected] Professeur Birgit Weynand : Secteurs de Cytologie, ORL et Pneumologie 081/42-30-34 [email protected]

Types de prélèvements pris en charge par le SAP :

cytologiques histologiques :

• biopsies • pièces opératoires

examens extemporanés autopsies

Un flash résumé du manuel de prélèvement se trouve dans l’annexe ANN-QUAL-018 « Flash résumé du manuel de prélèvement ». (CTRL + clic gauche pour accéder au lien hypertexte).

mailto:[email protected]




http://chumontgodinne.be/files/ANNQUAL-018%20Flashresumemanuelqual.pdf





4.2. Formulaires de demandes d’analyse histologique et/ou cytologique: Pour être accepté à l’encodage, le prélèvement doit être accompagné d’une demande d’analyse (ANN-QUAL-015) qui doit comporter les informations suivantes :

1. Identification univoque du patient, à savoir : a. Nom, prénom b. Adresse c. Date de naissance d. NISS

2. Nom, Prénom, adresse et numéro INAMI du prescripteur 3. Type et origine du prélèvement 4. Tous les échantillons sont identifiés de manière univoque 5. Date de la prescription et signature du prescripteur 6. Renseignements cliniques et exposé du problème 7. Données utiles à l’exécution des prestations et à l’interprétation des résultats, notamment :

a. La date et l’heure de prélèvement et l’heure de fixation. (Ces informations permettent d’évaluer le temps de fixation, qui, pour certaines analyses, peut influencer la nature des résultats.)

b. Le cas échéant, d’éventuelles difficultés lors de la réalisation du prélèvement / de sa fixation, qui pourraient influencer le résultat de l’analyse

Le formulaire de demande d’analyse est disponible dans l’intranet et sur le site internet du CHU ; il ne peut en aucun cas y être apporté une modification. Le prélèvement lui-même est correctement identifié. L’encodeur du SAP a la responsabilité de vérifier la concordance des informations présentes sur la demande et le prélèvement (PR-QUAL-005). Toute discordance ou absence d’information conduit à une procédure de gestion de prélèvement non-conforme (PR-QUAL-006). Vous comprendrez aisément que certains prélèvements non-conformes aux indications reprises ci-dessus sont bloquants pour l’analyse alors que d’autres permettent l’analyse sous-réserve (ANN-QUAL-012 ; cette annexe est disponible dans l’intranet ainsi que sur le site internet du CHU). En cas de non-conformité bloquante, seule la correction des éléments manquants permettra la réalisation de l’analyse. Le compte-rendu anatomo-pathologique comportera un descriptif textuel exhaustif de toute non-conformité, afin d’en assurer la traçabilité.

http://chumontgodinne.be/files/ANNQUAL-015%20demandeanalyse.pdf

http://chumontgodinne.be/files/ANNQUAL-015%20demandeanalyse.pdf




4.3. Examen extemporané

L’objectif d’un examen extemporané est d’orienter le chirurgien au cours de son intervention afin qu’il puisse, en fonction du résultat de l’examen extemporané, adapter et éventuellement modifier le geste chirurgical prévu. La technique histologique de cet examen est basée sur une coupe en congélation réalisée à l’aide d’un cryostat. La coupe qui en résulte est de moins bonne qualité qu’une coupe histologique classique. Le diagnostic devra donc toujours être validé par la lecture du prélèvement après fixation et enrobage en paraffine. Une fois le prélèvement reçu (frais !), il faut compter entre 15 et 45 minutes pour que puisse être transmis un résultat (le délai dépend du nombre de prélèvements extemporanés à prendre en charge au même moment). En pratique :

- L’analyse est réalisée uniquement à partir de matériel frais ! Ne pas mettre de sérum physiologique ni de liquide fixateur

- Acheminer le prélèvement le plus rapidement possible au laboratoire et mentionner sur le bon de demande le numéro de téléphone de la salle opératoire.

- Le résultat est transmis par le pathologiste par téléphone dans les 45 minutes maximum sauf si un nombre important de prélèvements à réaliser en extemporané parviennent simultanément au laboratoire.

- Après fixation au formol et analyse histologique classique, le résultat de l’examen extemporané sera intégré au compte rendu final et accessible après validation définitive.

4.4. Examen histologique Les prélèvements biopsiques et les pièces opératoires relèvent d’une analyse histologique, associées de façon plus ou moins extensive à une analyse macroscopique. Ces analyses nécessitent une étape initiale de fixation, permettant de prévenir l’autolyse tissulaire. Seule une fixation au formol permet la réalisation d’analyses en biologie moléculaire et de techniques immunohistochimiques validées. Les prélèvements doivent être fixés au formol (10% tamponné – équivalent à formaldéhyde 4%). La durée de fixation, pour les biopsies, est de minimum 2 à 6h et de maximum 48h, dans un volume de fixateur égal à au moins deux fois le volume du prélèvement ; le fixateur doit couvrir complètement le prélèvement. Le délai avant fixation (= temps d’ischémie) doit être le plus court possible et ne pas dépasser 1h. La durée de fixation, pour les pièces opératoires dépend de la taille du prélèvement. En général, elle est comprise entre 24 et 48h. Le délai avant fixation (= temps d’ischémie) doit être le plus court possible et ne pas dépasser 1h.



MANUEL DE PRELEVEMENT CAS PARTICULIER : Les biopsies mammaires et pulmonaires. Ces prélèvements font fréquemment l’objet d’analyses complémentaires en biologie moléculaire. Afin de garantir la validité de ces analyses, les biopsies mammaires et pulmonaires doivent être fixées MINIMUM 6h et MAXIMUM 48h. En pratique :

- Du lundi au jeudi, les biopsies mammaires et pulmonaires, fixées avant 12h, entament le jour même de leur réception par le laboratoire le cycle d’inclusion en paraffine. Si le prélèvement a été fixé après 12h, il entamera le cycle d’inclusion en paraffine le lendemain soir ; le résultat sera donc différé d’un jour.

- Le vendredi, le prélèvement doit impérativement être réceptionné par le SAP à 16h30 au plus tard afin de pouvoir débuter le jour même le cycle d’inclusion en paraffine. Tout prélèvement du vendredi, réceptionné seulement le lundi, fera l’objet d’une non-conformité quant à la durée de fixation (sur-fixation) et les analyses en biologie moléculaire éventuellement réalisées dans un second temps seront, soit, non-contributives, soit non validées en termes d’accréditation.

Les prélèvements urgents sont acheminés directement au SAP ; la notion d’urgence est mentionnée sur la demande d’analyse et le médecin prescripteur contacte le pathologiste référent du domaine. Hors w-e et jours fériés, un résultat basé sur l’analyse histologique classique du prélèvement est transmis par téléphone le lendemain de la réception du prélèvement (pour autant que celui-ci soit réceptionné par le SAP à 16h30 au plus tard). L’examen macroscopique et l’analyse microscopique font l’objet d’un compte-rendu édité dans le logiciel Diamic, logiciel propre au SAP et rendu accessible (via passerelle informatique) dans le dossier médical du patient (Omnipro). Les médecins prescripteurs extérieurs au CHU peuvent recevoir les compte-rendus anatomo-pathologiques de manière électronique. Pour ce faire, il est nécessaire de contacter le service informatique du CHU, afin d’obtenir un accès à ce service. La personne de contact est Madame Sylvie Demoulin.




4.5. Examen cytologique L’examen cytologique concerne les prélèvements qui se présentent sous forme liquide ou d’un étalement. L’examen cytologique fera appel à diverses procédures techniques, spécifiques au type d’échantillon reçu. Il est particulièrement important de veiller à l’utilisation des fixateurs et contenants adéquats afin de permettre une prise en charge optimale de l’échantillon. Si celui-ci est volumineux (ex : liquide d’ascite), seule une partie du produit est analysée. Si l’échantillon est peu abondant, tout le matériel est analysé.

a. « Frottis » cervico-vaginaux Ces prélèvements sont en réalité des brossages mis en suspension (par agitation de la brossette) par le gynécologue dans un milieu liquide de préservation : Preservcyt®. Les échantillons sont ensuite traités selon la méthode ThinPrep®. Si une analyse en biologie moléculaire est nécessaire (typage HPV), le SAP utilise l’échantillon contenu dans ce même flacon, dont une partie seulement a été utilisée pour l’analyse cytologique initiale. Les disposables (brossette, flacon de Preservcyt) sont fournis par le SAP sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012). La durée maximale de préservation dans ce milieu est de trois mois.

b. EBUS et EUS Ces produits de ponction (ainsi que l’aiguille qui a servi à réaliser le prélèvement) sont placés dans les tubes fournis à cet effet (tubes coniques à capuchon bleu, renfermant du preservcyt®). Ces tubes sont fournis par le SAP sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012).

c. Liquide pleural, péritonéal

Doit être confié frais au laboratoire, dès que le prélèvement est réalisé. Si le prélèvement est réalisé hors jours ouvrables, il est préférable de fixer le liquide avec de l’éthanol à 50% (non fourni par le SAP ; 1 volume d’échantillon pour 1 volume de fixateur, minimum 2 tubes). A défaut, au minimum placer l’échantillon au frigo.

d. Ponctions de sein, ganglions, cavités intra-articulaires ou organes profonds Ces prélèvements peuvent nous parvenir soit sous forme d’étalements sur lames, fixées à la laque, soit sous forme liquide : l’échantillon est alors placé dans un tube à fond conique et bouchon bleu, renfermant le milieu Preservcyt®. Ce tube est fourni par le SAP et est donc disponible sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012).

e. Brossages bronchiques, pancréato-biliaires, oesophagiens Après avoir détaché la brossette qui a été utilisée pour réaliser le prélèvement, celle-ci est agitée dans le tube à fond conique et bouchon bleu contenant du Preservcyt®. Ce tube est fourni par le SAP et est donc disponible sur simple demande (Tél Secrétariat : 081/423012).




f. Urines Le produit des lavages vésicaux est placé dans des flacons contenant de l’éthanol à 50% (un volume d’alcool pour un volume d’urines). L’éthanol n’est pas fourni par le SAP. Le prélèvement peut également (en jours ouvrables) être apporté, dès obtention, au laboratoire.

g. Liquide céphalo-rachidien (LCR) Ces prélèvements doivent parvenir frais, le plus rapidement possible, au laboratoire. A défaut, au minimum placer l’échantillon au frigo.

h. Lavage bronchique

Les lavages sont placés dans un flacon type biopsie (capuchon rouge) qui renferme du formol 4% pH neutre.

Les prélèvements urgents sont acheminés directement au SAP ; la notion d’urgence est mentionnée sur la demande d’analyse et le médecin prescripteur contacte le pathologiste référent du domaine. Hors w-e et jours fériés, un résultat basé sur l’analyse cytologique classique du prélèvement est transmis par téléphone le jour même ou le lendemain de la réception du prélèvement (pour autant que celui-ci soit réceptionné par le SAP à 16h au plus tard), selon la procédure technique à mettre en œuvre pour le type d’échantillon reçu. L’examen cytologique fait l’objet d’un compte-rendu édité dans le logiciel Diamic, logiciel propre au SAP et rendu accessible (via passerelle informatique) dans le dossier médical du patient (Omnipro). Les médecins prescripteurs extérieurs au CHU peuvent recevoir le compte-rendu cytologique de manière électronique. Pour ce faire, il est nécessaire de contacter le service informatique du CHU, afin d’obtenir un accès à ce service. La personne de contact est Madame Sylvie Demoulin.




4.6. Analyses immunohistochimiques La plupart des analyses immunohistochimiques sont du ressort exclusif du pathologiste qui les prescrit en fonction des nécessités diagnostiques. Certaines analyses néanmoins doivent absolument être demandées par le médecin prescripteur de l’analyse: la recherche d’expression des récepteurs aux oestrogènes et à la progestérone et la recherche de sur-expression du récepteur HER2, dans le cadre du cancer du sein, la recherche d’expression du récepteur EGFR, dans le cadre du cancer pulmonaire non à petites cellules, la recherche d’expression du récepteur c-Kit, dans le cadre des tumeurs stromales du tractus gastro-intestinal (GIST).

4.3.1 : Facteurs pronostiques et prédictifs du cancer du sein L’expression des récepteurs hormonaux (récepteurs des oestrogènes et récepteur de la progestérone) sont des facteurs prédictifs quant à la réponse au traitement anti-hormonal (par ex, le tamoxifène). Ils sont recherchés systématiquement pour tout nouveau diagnostic de cancer mammaire ou après traitement adjuvant, afin de vérifier une éventuelle modification de leur statut par le traitement. La sur-expression du récepteur HER2 est non seulement un facteur pronostique mais il comporte également un caractère prédictif puisqu’il est directement corrélé à la réponse au traitement par thérapie ciblée anti-HER2 (Trastuzumab). Une sur-expression détectée en immunohistochimie doit être validée par la recherche d’une amplification du gène par FISH. Outre les éléments mentionnés au point 4.2, le prescripteur mentionne explicitement sur la demande d’analyse qu’il souhaite, si l’échantillon aboutit au diagnostic de néoplasie mammaire, que soient recherchés les facteurs pronostiques/prédictifs :

- Récepteurs hormonaux ER et PR - Sur-expression du récepteur HER2

En pratique : • L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou

pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures et le délai avant fixation doit être le plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande.

• Pour les prélèvements ayant nécessité une décalcification, l’analyse est réalisée mais nous ne pouvons garantir la validité du résultat.

• Pour des blocs envoyés de l’extérieur, aucun conditionnement particulier n’est nécessaire ; le compte-rendu anatomo-pathologique doit être associé. Le médecin prescripteur vérifie la fixation adéquate du prélèvement.

• Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire. Pathologistes référents : Docteur M-C. Nollevaux, 081/42 30 11 Docteur C. Fervaille, 081/42 30 14




4.3.2 : Recherche immunohistochimique de la présence de l’EGFR dans les néoplasies pulmonaires

Dans le cadre du diagnostic d’un carcinome pulmonaire non à petites cellules est recherchée l’expression de l’EGFR, un récepteur transmembranaire à activité tyrosine kinase, dont l’activation par le ligand, un facteur de croissance (de type EGF (Epidermal Growth Factor)) promeut la croissance tumorale. Son expression comporte un caractère prédictif. L’accès au remboursement de la thérapie ciblée par Erlotinib (Tarceva®), en deuxième ligne, demande une positivité d’au moins 10% des cellules tumorales en immunohistochimie, pour ce récepteur. Cette demande d’analyse immunohistochimique (ainsi que la demande de recherche de mutation – cfr infra Point 4.4, analyses en biologie moléculaire) doit être explicitement mentionnée sur la demande, soit librement sur la demande, soit à l’aide du document spécifique (usage interne au CHU), disponible dans l’intranet dans la rubrique Anatomie Pathologique. En pratique : • L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou

pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les cell-blocks, fixation formol 4%, pH neutre.

• La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Le délai avant fixation doit être le plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h.



• Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire.

Pathologistes référents : Professeur B. Weynand, 081/42 30 34 Professeur M. Delos, 081/42 30 10

4.3.3 : Recherche immunohistochimique de la présence du récepteur c-Kit (CD117)

La recherche de l’expression du récepteur tyrosinas-kinase c-Kit, en immunohistochimie, est un élément diagnostique positif des tumeurs stromales du tractus gastro-intestinal (GIST), tumeurs mésenchymateuses caractérisées par des mutations activatrices du proto-oncogène c-Kit. Son expression dans le cadre d’un GIST comporte également un caractère prédictif puisque corrélé à une probabilité de réponse au traitement par thérapie ciblée anti-c-Kit (Imatinib - Glivec

). En cas de suspicion clinique de tumeur stromale de type GIST, il est demandé au prescripteur de mentionner explicitement sur la demande qu’il souhaite une recherche de l’expression du récepteur c-Kit.



MANUEL DE PRELEVEMENT En pratique : • L’analyse immunohistochimique est réalisée à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou

pièces opératoires) ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre ou, en ce qui concerne les cell-blocks, fixation formol 4% pH neutre.

• La durée de fixation recommandée est comprise entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Le délai avant fixation doit être le plus court possible ; en aucun cas, il ne peut excéder 1h.



• Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique ou fera l’objet d’un protocole additionnel. Le médecin signataire est disponible pour tout renseignement complémentaire.

Pathologistes référents : Professeur M. Delos, 081/42 30 10 Professeur B. Weynand, 081/42 30 34

4.7. Analyses en biologie moléculaire La mise au point anatomo-pathologique de certaines lésions du col utérin demande le recours à la biologie moléculaire afin de préciser l’éventuelle présence d’un virus HPV à haut risque. En effet, une infection persistante par un HPV à haut risque entraîne, chez 5% des personnes qui en sont porteuses, le développement d’un carcinome épidermoïde. D’autre part, le diagnostic de certaines néoplasies (pulmonaires, coliques, mélanomateuses, hématologiques) implique le recours à la pathologie moléculaire afin d’évaluer l’éventuelle présence de mutations spécifiques qui ont un impact pronostique et/ou prédictif pour le patient qui en est porteur. La recherche de mutations est du ressort d’analyses spécifiques pratiquées à l’aide de méthodes de biologie moléculaire ou de génétique et réalisées par un laboratoire accrédité pour ces analyses.

4.4.1 Sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique des cliniques universitaires Saint-Luc à Woluwé.

La recherche d’HPV (accréditation BELAC ISO 15189 – 369-MED)

• S’effectue à partir de prélèvements de cytologie cervico-vaginale en milieu liquide

o (Preservcyt®). Le flacon de Preservcyt® contenant le matériel résiduel après réalisation de l’analyse cytologique initiale est confié au laboratoire sous-traitant, accompagné d’une demande spécifique.

o La durée maximale de préservation dans ce milieu est de trois mois. o La technique utilisée est une PCR de type Real Time High Risk HPV de Abbott o Le délai de réponse (TAT – jours ouvrables) est de 15 jours.



MANUEL DE PRELEVEMENT NB : La réponse mentionne la présence ou l’absence d’un HPV à haut potentiel oncogène, et dans ce cas de figure, précise s’il s’agit d’un sous-type 16 ou 18. L’éventuelle présence d’un HPV à faible risque oncogène n’est pas recherchée.

• S’effectue à partir de prélèvements d’histologie o Le bloc en paraffine à analyser est accompagné d’une lame colorée à

l’hémalun-éosine. o La technique utilisée consiste en une extraction, PCR et analyse par

Genescan, selon une méthode Home made. o Le délai de réponse (TAT – jours ouvrables) est de 20 jours.

NB : La réponse mentionne la présence et le type d’HPV, parmi une sélection de sous-types d’HPV à haut et faible potentiel oncogène, notamment les sous-types 6 et 11.

La recherche d’amplification du gène HER2 (accréditation BELAC ISO 15189 – 369-MED)

• S’effectue à partir de blocs en paraffine • Les lames d’immunohistochimie déterminant le score de la protéine Her-2/Neu

doivent être envoyées en même temps que le bloc. • La technique correspond à la méthode Silver in situ hybridization Automate

Benchmark. • Le délai de réponse (TAT- jours ouvrables) est de 8 jours.

4.4.2 Sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’Institut Bordet.

La recherche de mutation de c-Kit Les prélèvements doivent être fixés dans du formol tamponné, pour une durée comprise entre 6 et 48h. Les prélèvements ne peuvent être teintés à l’éosine avant leur mise en cassette sous peine d’un risque majeur de non-contributivité de l’analyse à cause de l’autofluorescence du prélèvement. Les prélèvements ne peuvent avoir subi un passage dans du décalcifiant.

4.4.3 Sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique de l’hôpital Erasme.

L’analyse mutationnelle de l’EGF-R, du Kras, de BRAF et de ALK-EML4 (accréditation

BELAC ISO 15189 – 387)



MANUEL DE PRELEVEMENT Ci-dessous, les prescriptions de ce laboratoire concernant les analyses sus-mentionnées (issues du manuel de prélèvement de l’hôpital Erasme/ Madame Marie Le Mercier, 02/555-85-08):

Analyse des mutations EGFR

Domaine d’application : Des mutations activatrices du domaine tyrosine Kinase de l’EGFR situées dans les exons 18 à 21 ont été mises en évidence chez environs 10% des patients atteints de cancer du poumon non à petite cellules. Les patients porteurs de ces mutations présentent une meilleure réponse aux inhibiteurs de tyrosine kinase de l’EGFR (EGFR-TKI), notamment au gefitinib. D’autres mutations, particulièrement celles situées dans l’exon 20 sont quant à elles associées à une résistance aux EGFR-TKI. Aspects pratiques : • Les tests sont réalisés à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ou « cell

block » ayant été préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée varie entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Les prélèvements fixés avec fixateur autre que le formol ou décalcifiés ne seront pas acceptés.

• Si les blocs sont envoyés de l’extérieur, il ne faut pas de conditionnement particulier ; le protocole anatomo-clinique complet doit être associé.

• Une demande d’analyse de biologie moléculaire doit être remplie par le prescripteur. Cette demande peut être envoyée par courrier interne, postal ou par email à l’adresse [email protected]. Remarque : Toutes les informations demandées sur l’échantillon sont primordiales afin de garantir la qualité optimale des résultats.

• Les tests sont réalisés une fois par semaine et le délai de réponse est de maximum 15 jours. • Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique. Le médecin signataire est disponible pour tout

renseignement complémentaire. Médecins responsables : Pr. P. Remmelink Myriam (02 555 33 35) [email protected] Pr. I. Salmon (02 555 31 15) [email protected]

Analyse KRAS

Domaine d’application : Les 7 mutations les plus fréquentes dans les codons 12 et 13 du gène K-RAS sont liées à la résistance au traitement anti-EGFR (Panitumumab) dans le cadre du cancer colorectal. Aspects pratiques : • Les tests sont réalisés à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été

préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée varie entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Les prélèvements fixés avec fixateur autre que le formol ou décalcifiés ne seront pas acceptés.






MANUEL DE PRELEVEMENT • Si les blocs sont envoyés de l’extérieur, il ne faut pas de conditionnement particulier ; le protocole anatomo-

clinique complet doit être associé. • Une demande d’analyse de biologie moléculaire doit être remplie par le prescripteur. Cette demande peut

être envoyée par courrier interne, postal ou par email à l’adresse [email protected]. Remarque : Toutes les informations demandées sur l’échantillon sont primordiales afin de garantir la qualité optimale des résultats.

• Les tests sont réalisés tous les 8 jours et le délai de réponse est de maximum 16 jours. • Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique. Le médecin signataire est disponible pour tout

renseignement complémentaire. Médecins responsables : Pr. P. Demetter (02 555 33 35) [email protected] Pr. I. Salmon (02 555 31 15) [email protected]

Analyse BRAF

Référence de la séquence : NT_007914.14 Domaine d’application : La mutation du gène BRAF est fréquente dans un grand nombre de cancers tels que les cancers colorectaux, les carcinomes papillaire de la thyroïde ou les mélanomes. Dans les carcinomes papillaires de la thyroïde la présence de la mutation BRAFV600E est corrélée au diagnostic et au pronostic. Dans les cancers colorectaux la présence de cette mutation est liée à la résistance au traitement anti-EGFR (Panitumumab). Enfin, dans le cadre du mélanome, la présence de la mutation BRAFV600E est un critère obligatoire d’inclusion pour les patients qui intègrent les essais cliniques de phase II et III pour un inhibiteur sélectif de BRAF. Aspects pratiques : • Les tests sont réalisés à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été

préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée varie entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande. Les prélèvements fixés avec fixateur autre que le formol ou décalcifiés ne seront pas acceptés.

• Si les blocs sont envoyés de l’extérieur, il ne faut pas de conditionnement particulier ; le protocole anatomo-clinique complet doit être associé.

• Une demande d’analyse de biologie moléculaire doit être remplie par le prescripteur. Cette demande peut être envoyée par courrier interne, postal ou par email à l’adresse [email protected]. Remarque : Toutes les informations demandées sur l’échantillon sont primordiales afin de garantir la qualité optimale des résultats.

• Les tests sont réalisés tous les 12 jours et le délai de réponse est de maximum 14 jours. • Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique. Le médecin signataire est disponible pour tout

renseignement complémentaire. Médecins responsables : Pr I. Salmon (02 555 31 15) [email protected]








MANUEL DE PRELEVEMENT Pr. P. Demetter (02 555 33 35) [email protected] Dr S. Rorive (02 555 33 35) [email protected]

Analyse FISH ALK Domaine d’application : Les réarrangements du gène ALK (Anaplastic lymphoma kinase) sont des altérations génétiques qui ont été observées dans différents types de cancer dont les NSCLC. La présence d’un tel réarrangement dans le NSCLC est associée à une réponse thérapeutique crizotinib, un inhibiteur de ALK. Aspects pratiques : • Les tests sont réalisés à partir de blocs en paraffine ; les tissus (biopsies ou pièces opératoires) ayant été

préalablement fixés au formol 4% pH neutre. La durée de fixation recommandée varie entre 6 et 48 heures. La date et l’heure de fixation doivent être indiquées sur la feuille de demande.

Si le fixateur ou le temps de fixation n’est pas précisé, l’analyse sera effectuée mais le prélèvement sera considéré comme non-conforme Les prélèvements fixés avec fixateur autre que le formol ou décalcifiés ne seront pas acceptés.

Récapitulatif des critères de non-conformité pour la technique FISH ALK :

Nature de la non-conformité Niveau

Utilisation d’un mauvais fixateur (autre que le formol tamponné 4%) Bloquant

Prélèvement décalcifié

Délai avant fixation supérieur à 1 heure ou non mentionné

Non Bloquant Temps de fixation non renseigné

Prélèvement coloré à l’éosine • Si les blocs sont envoyés de l’extérieur, il ne faut pas de conditionnement particulier ; le protocole anatomo-

clinique complet doit être associé. • Une demande d’analyse de biologie moléculaire doit être remplie par le prescripteur. Cette demande peut

être envoyée par courrier interne, postal ou par email à l’adresse [email protected]. Si les demandes sont faites par un autre biais que le formulaire spécifique, l’analyse sera effectuée mais le prélèvement sera considéré comme non-conforme. Remarque : Toutes les informations demandées sur l’échantillon sont primordiales afin de garantir la qualité optimale des résultats.

• Les tests sont réalisés une fois par semaine et le délai de réponse est de maximum 15 jours. • Le résultat est intégré au protocole anatomo-pathologique. Le médecin signataire est disponible pour tout

renseignement complémentaire. Médecins responsables : Pr. I. Salmon (02 555 31 15) [email protected] Dr. N. D’Haene (02 555 33 35) [email protected] Dr. M. Remmelink (02 555 31 16) [email protected]









4.4.3 Sous-traitance au laboratoire d’Anatomie Pathologique du CHU de Liège.

La recherche de clonalité T ou B dans les néoplasies hématologiques.

Dans le cadre du diagnostic d’une hémopathie, il est parfois nécessaire de recourir à la recherche de mise en évidence d’un réarrangement monoclonal du gène du récepteur T (« lymphomes T ») ou d’un réarrangement monoclonal des gènes des Immunoglobulines (« lymphome B »). En ce qui concerne la recherche d’un réarrangement monoclonal du gène du récepteur T, la méthode d’analyse repose sur une PCR à l’aide du kit Identiclone TCRB gene clonality assay-ABI fluorescence detection d’Invivoscribe pour chaînes β, γ, δ. En ce qui concerne la recherche d’un réarrangement des gènes des immunoglobulines, la méthode d’analyse repose sur une amplification qualitative à l’aide du kit Identiclone IGH Gene Clonality assay-ABI Fluorescence Detection. En pratique : (Renseignements issus du manuel de prélèvement du laboratoire d’Anatomie pathologique - CHU de Liège)

- L’analyse est réalisée sur tissus fixés : biopsies ganglionnaires ou liquides. - Le prélèvement doit être fixé au formol 10% dans l’heure qui suit le prélèvement et pour une

durée comprise entre 6 et 48 heures, à température ordinaire du local (ne pas congeler !). - La durée de fixation doit être notée sur la demande d’analyse. - Tout autre type de fixateur est interdit. - Le formol doit être en excès et doit au minimum couvrir complètement le prélèvement. - La fréquence de réalisation de l’analyse est hebdomadaire et les délais de réponse (hors we)

sont de 20 jours.




4.8. Autopsies Si une autopsie est souhaitée, il faut :

1. Remplir une demande d’autopsie à transmettre directement au préposé à la morgue (081/423015) lorsqu’il vient chercher le patient décédé. La demande spécifique est disponible sur l’intranet et le site internet de l’hôpital, dans la rubrique Anatomie Pathologique. 2. Si le décès a lieu la nuit ou le we, le souhait de demande d’autopsie est transmis à l’accueil de l’hôpital (081/422111) qui le transmettra au préposé à la morgue de garde à ce moment. 3. Si le décès a lieu en jours ouvrables, contacter le préposé de la morgue (Monsieur Vincent Battel ou Monsieur Philippe Mattot au 081/423015) et le pathologiste référent (Docteur Caroline Fervaille, 081/423014).

Les autopsies sont effectuées le matin à partir de 8h30 du lundi au vendredi. Il faut prévoir un délai de 4 heures par autopsie avant que la famille puisse revoir le défunt. Si le médecin prescripteur le souhaite, il peut assister à la réalisation de l’autopsie et l’analyse macroscopique qui y est liée. L’analyse microscopique des prélèvements a lieu après fixation. L’examen macroscopique et l’analyse microscopique font l’objet d’un compte-rendu édité dans le logiciel Diamic, logiciel propre au SAP et rendu accessible (via passerelle informatique) dans le dossier médical du patient (Omnipro). Le prélèvement du cerveau n’est réalisé que sur demande explicite, à mentionner sur le formulaire de demande d’autopsie. Le médecin prescripteur doit s’assurer du fait qu’il n’y a pas d’opposition à la réalisation de l’autopsie par le patient ou de la part de sa famille. En cas d’opposition en effet, le SAP ne pourra pas procéder à la réalisation de l’autopsie, en vertu du code de déontologie de l’Ordre des Médecins (Art. 133 – 1er janvier 1975) qui stipule explicitement que « sauf réquisition ou disposition légales particulières, une autopsie ne peut être pratiquée que s’il n’y a pas eu opposition explicite ou implicite du patient ou opposition de la part des proches.». D’autre part, seules les autopsies médicales peuvent être réalisées par les pathologistes ; vous devez certifier, par l’intermédiaire de la demande d’autopsie, qu’il n’y a aucune implication médico- légale dans le décès du patient. En cas de mort violente ou de suspicion d’implication médico-légale, il y a lieu d’alerter la Direction du CHU et la police d’Yvoir. En cas de suspicion d’agent infectieux particulier (ex : prion), l’autopsie ne peut être réalisée au CHU. Une infrastructure particulière est en effet nécessaire (centre de référence à Anvers).



MANUEL DE PRELEVEMENT Pour toute information complémentaire, vous pouvez joindre le Docteur Caroline Fervaille, pathologiste référent, au 081/423014.

2. INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES

Un flash résumé du manuel de prélèvement se trouve dans l’annexe ANN-QUAL-018 « Flash résumé du manuel de prélèvement ». (CTRL+ clic gauche pour accéder au lien hypertexte).

3. ANNEXES A.R. du 5 décembre 2011 relatif à l’agrément des laboratoires d’anatomie pathologique : ANN-QUAL-014 Demande d’analyse histologique ou cytologique : ANN-QUAL-015 Demande d’autopsie : ANN-QUAL-016 Procédure de contrôle à l’enregistrement des prélèvements : PRO-QUAL-005 Liste des non-conformités : ANN-QUAL-012

Date Version Historique des modifications du document



http://www.chumontgodinne.be/files/ANNQUAL-015%20demandeanalyse.pdf

http://www.chumontgodinne.be/files/ANNQUAL-016%20Demandeautopsie.pdf

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