biologique

7/25/2019 biologique

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Universit Amar Telidji LaghouatDpartement de biologie

COMPOSANTS ANTIOXYDANTS DE VIBURNUM RMINS EN LIGNE PAR HPLC-UV-ABTS PIGEAG

ET DES MTHODES LC-UV-ESI-MS

EXPOS PAR :

o ASMA BENHAMIDA

o BEN AICHA NADIA

PROPOS PAR:

MELLE: BOUSSO


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PLAN DE TRAVAILLE:

une tude !"!#$%&'(!)ue

"e *&t%!e" et "e+ *t(#de+

%+u"t&t+ et d!+,u++!#n+.

,#n,"u+!#n

Int%#du,t!#n


3/28

INTRODUCTION

P&%*! ,e+ n#ue&u ,#*'#++ '#tent!e""e*ent !nt%e++&nt+/ "e+ &nt!#0d&nt1"n#2de+/ #nt t '&%t!,u"!3%e*ent tud!+ en %&!+#n de "eu% ut!"!+&t!#n d'(&%*&,eut!)ue+/ ,#+*t!)ue+ et &"!*ent&!%e+

Ce+ de%n!3%e+ &nne+/ n#u+ n+ &++!+t 4 un %e$&!n d5!nt%6t de+ ,#n+#**'%#du!t+ n&tu%e"+. C5e+t '#u% ,e"& )ue "e+ !ndu+t%!e"+ de"#''ent de '"u+ e*ett&nt en 7u%e de+ et%&!t+ et de+ '%!n,!'e+ &,t!1+ d5#%!$!ne $t&"e.

L5&''#%t %$u"!e% en '(0t#nut%!*ent+ '#++d&nt de+ ,&'&,!t+ &nt!-#0d&nt&++#,! 4 une 1&!"e '%&"en,e de *&"&d!e+ "!e+ &u +t%e++ #0d&t!1 8,&n,e,&%d!#&+,u"&!%e+ 9 et 4 un 1&!"e t&u de *#%t&"!t

C5e+t '#u%)u#! n#u+ n#u+ +#**e+ !nt%e++ de 1&!%e une tude '(0t#,(!*!)uV!u%nu* #'u"u+ L. '#u++&nt & "& %$!#n d;E+t de "& *e% n#!% &!n+! d&"ue%&nt!#0d&nte.


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O


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Premire partieEtude

bibliographique


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Le+ &nt!#0d&nt+

Un &nt!#0d&nt e+t t#ute +u+t&n,e/ '%+ente 4 une ,#n,ent%&t!#n !n1%!eu

+u+t%&t #0d&"e/ )u! e+t ,&'&"e de %et&%de% #u de '%en!% "5#0d&t!#n et neut%&"!+e% "e+ %&d!,&u "!%e+

=ue")ue+ &nt!#0d&nt+ +#nt 1&%!)u+ '&% "e ,#%'+ (u*&!n/ d5&ut%e+ te"+ "e'#"0 '(n#"+/ d#!ent 6t%e &''#%t+ '&% ";&"!*ent&t!#n.

Une d1!,!en,e #u une &+en,e de '%#du,t!#n d;&nt!#0d&nt+ ent%&>ne un +

'#u&nt end#**&$e% #u dt%u!%e "e+ ,e""u"e+et ent%&!ne e&u,#u' de *&"'&t(#$3ne+

"e+ ,#*'#++ '(n#"!)ue+ +#nt de+ &nt!#0d&nt+ ,&'&"e+ de d#nne% un &t#%&d!,&" "!%e et "e ,#ne%t!% en un ,#*'#+ +t&"e n#n %&d!,&"&!%e.
https://fr.wikipedia.org/wiki/Stress_oxydanthttps://fr.wikipedia.org/wiki/Cellule_(biologie)https://fr.wikipedia.org/wiki/Cellule_(biologie)https://fr.wikipedia.org/wiki/Stress_oxydant


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P!$e&$e du %&d!,&" @/@-d!'(n0"-'!,%0"(0d%&0" 8DPPH

L& %du,t!#n du %&d!,&" DPPH '&% un &nt!#0d&nt 'eut 6t%e +u!!e '&% +'e,!+!"e/ en *e+u%&nt "& d!*!nut!#n de "5&+#%&n,e '%##)ue '&% "& '%+en,'(n#"!)ue+.

Le DPPH e+t !n!t!&"e*ent !#"et/ +e d,#"#%e "#%+)ue "5"e,t%#n ,"!&t&!%e %&d!,&" "!%e e+t neut%&"!+. Cette d,#"#%&t!#n *#nt%e "& ,&'&,!t de+ ,#*'!$e% ,e+ %&d!,&u "!%e+ .

P!3$e&$e du ABTS 8@/@5-&0n#!+--et(0"en#t(!"!ne--

D&n+ "& *t(#de TEAC 8T%#"# e)u!&"ent &nt!#!d&nt ,&'&,!t0/ "5&,t!!t &d5une *#",u"e e+t ddu!te '&% +& ,&'&,!t 4 neut%&"!+e% "e %&d!,&" ABTS #"5ABTS ,#*'&%&t!e*ent 4 un &nt!#0d&nt de %1%en,e : "e T%#"#


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"& ,&'&,!t de Rdu,t!#n du 1e%: RAP

,ette te,(n!)ue & t de"#''e '#u% *e+u%e% "& ,&'&,!t de %du!%e "e 1en 1e% 1e%%eu 8e@.

Le e@1#%*e un ,#*'"ee &e, "& @/J/-t%!+8@-'0%!d0"-//K-+-t%!&!ne "eue ."& 1#%*&t!#n de ,e ,#*'"ee !nd!)ue%& un '#u#!% %du,teu% 8&nt!#0

Le+ &"eu%+ d;&+#%&n,e d;,(&nt!""#n+ #tenu+ +#nt ,#*'&%+ &e, ,e""e %&,t!#nne" ,#nten&nt une ,#n,ent%&t!#n ,#nnue en e@


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Etude #t&n!)ue de Viburnum- opulus .

L& !#%ne #!e% 8V!u%nu* #'u"u+ e+t un &%u+te8'"&nte "!$neu+e d

de+C&'%!1#"!&,e&e

&''e" &u++! B#u"e de ne!$e/ ,&nnee%$e eu%#'en/ %#+e de Gue"d%e&u!e%

L& !#%ne #!e% e+t %'&%t!+ en A*%!)ue du N#%d 8&u t&t+-Un!+ C&n&d&/ en Eu%#'e et d&n+ une $%&nde '&%t!e de ";A+!e

L;#!e% en %u++e n#**/ Q 8&"!n&/ 4 ";#%!$!ne de "& ,"3%e ,(&n+#n&!e d;#!e% . L;#!e% ,(e "e+ U%&!n!en+ n#t&**ent/ e+t un +0*#"e d;&%et%#ue d&n+ de n#*%eu ,#nte+ et ,(&n+#n+.
https://fr.wikipedia.org/wiki/Arbustehttps://fr.wikipedia.org/wiki/Caprifoliaceaehttps://fr.wikipedia.org/wiki/Caprifoliaceaehttps://fr.wikipedia.org/wiki/Caprifoliaceaehttps://fr.wikipedia.org/wiki/Arbuste


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Le 1%u!t & une ,#u"eu% %#u$e 1#n, et ut!"!+e ,#**e n#u%%!tu%e #u de #!+n#*%eu+e+ 1#%*e+ d!11%ente+/ 0 ,#*'%!+ "e+


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deuxime partiMatriel etmthodes


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Le *&t%!e" $t&" et "& '%'&%&t!#n de+ ,(&nt!""#n+:

L;,(&nt!""#n de+ 1%u!t+ #nt t ,#""e,t+ 4 ";t @WW 4 T%

Le 1%u!t & t 1%&,t!#nn en ''!n+/ '%!,&%'e+ et


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P%#du!t+ ,(!*!)ue+ et %&,t!1+:

HPLC-$%&de Z&te%8"5e&u de )u&"!t HPLC

HPLC +#"&nt de)u&"!t

A,t#n!t%!"e

*t(&n#"

";&,!de 1#%

N&C"

C"N

H@POJ

MnO@ A

HPLC +t&nd&%d+ de)u&"!t

&,!de $&""!)ueA,!de '%#t#,&t,(u!)ue

";&,!de '-OH en#2)ue

"& ,&t,(!ne

";&,!de ,&1!)ue

";&,!de

";"& &n!""!ne

"& J-OH ,!nn&*!)u

"& %ut!n"e t-%e+%&t%#"


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@.K *L e&ud!+t!""

@KW [L %&,t!1de #"!n-C!#,&"teu

In,u&t!#n &

*!n

]KW [L N&@CO

A$!t&t!#n '&%#%te

!n,u&t!#n 'end&nt @ ( 4te*'%&tu%e &*!&nte.

L;&+#%&n,e & t

*e+u%e 4 ]K n*

Dte%*!n&t!#n de+ ,#*'#++ '(n#"!)ue+ t#t&u:

C P t#t&u de+ et%&!t+ de V. #'u"u+ #nt t dte%*!ne+ &e, "e %&,t!1 d+e"#n "& *t(#de de+ S"!n&%d et S!n$"et#n en ut!"!+&nt ";&,!de $&""!)ue ,#*


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"e te+t 8RAP '#u#!% &nt!#0d&nt de %du,t!#n de e%%e :

.K *" %&,t!1de RAP

t&*'#n&,t&teTPT

eC"

H@O

!n,u&t!#n 'end&nt@W *!n 4

te*'%&tu%e&*!&nte.

L;&+#%&n,e & t*e+u%e 4 K^K n*

Et&"!% "& ,#u%edt&"#nn&$e #n

ut!"!+&nt "e TROLOX)u!&"ent ,#**e

%1%en,e


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L& ,&'&,!t de '!$e&$e de+ %&d!,&u ABTS :

ABTS ";t(&n'%'&%e

EeOHEeOH

@/JK *M de 'e%+u"1&te de '#t&++!u*d&n+ ";t(&n#": e&u 8: et #n "&!++e

%e'#+e% d&n+ ";#+,u%!t 4 "&te*'%&tu%e &*!&nte 'end&nt -@W (

'#u% '%'&%e% ABTS

ABTS & t d!"u '#u%"e te+t (#%+ "!$ne.L;&+#%&n,e & t

*e+u%e 4 ]J n*.

ABTS e+t +t&"e'end&nt '"u+ de deu


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"5&n&"0+e d;&,t!!t de '!$e&$e de+ %&d!,&u HPLC-UV-ABT"!$ne :

W.W@$

T&'#n

de

,!t%&te

@KW *" 8JW *M t&'#nde ,!t%&te de PH`

L& +#"ut!#n deDPPH e+td$&e%

'end&nt W *!n

Y $

.J $ N

W.K

W.@] $

T&

ABTS

ABTS '%e'&%e% '&% @ $MnO@ L 8W.W@ *M

ABTS d&n+ "e t&*'#n PBS

M!e% 'd W *!n& T &*!&nte

1!"t%e%

DPPH et ABTS #nt t

'%'&%e+ )u#t!d!enne*entet '%#t$+ de "& "u*!3%eet %e1%#!d!+ d&n+ "& $"&,e.

P%'&%&t!#n de DPPH et ABTS

" "


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"5&n&"0+e d;&,t!!t de '!$e&$e de+ %&d!,&u HPLC-UV-ABT"!$ne :

"& +'&%&t!#n et "& 'u%!1!,&t!#n de n#t%e ,(&nt!""#n e+t e11e,tu '&% HPLCCYOn ut!"!+e "& '#+t ,#"#nne '#u% "& *!+e en !den,e de+ ,#*'#++ '#++3dent&nt!#0d&nte 8'!$eu%+ de+ %&d!,&u du DPPH et ABTS d&n+ de+ +#"ut!#n dte,teu% ,;e+t "& %&,t!#n de De%!&t!+&t!#n

Deu dte,teu%+ UV #nt t ut!"!++ un dte,teu% de VP WA '#u% ";&n&"0,#*'#++ et un dte,teu% de WA '#u% "& dte,t!#n de+ ,#*'#++ #nt ";&,

L& '(&+e *#!"e d#!e 6t%e d$&e% &1!n d"!*!ne% "e+ 1#%*e+ de #u""e+ /C8+#"&nt A d;&,!de 1#%*!)ue 4 W/_ d&n+ ";e&u et 8+#"&nt B ";&,!de 1#%*de ";&,t#n!t%!"e/ Le d!t de ";"u&nt :W/K *L \ *!n et "& dte,t!#n & @YW

L& ,#"#nne de $&%de 8'% ,#"#nne ut!"!+e '#u% "& '%ent!#n ,#nt%e "e+ ,#n

Le #"u*e d;!n


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L;&n&"0+e '&% HPLC-ESI-MS:

A1!n d;!dent!1!e% "e+ ,#*'#++ '(n#"!)ue+ &,t!1+ '%+ent+ d&n+ ";et%&!t d&e, une !#n!+&t!#n "e,t%#+'%&0 8ESI & t ut!"!+.

Le+ ,#nd!t!#n+ du +0+t3*e HPLC 8"& te*'%&tu%e de "& ,#"#nne/ "& "#n$ueu%

*6*e+ )ue d,%!t '%,de**ent.

Une ,#"#nne Lun& CY & t ut!"!+ '#u% t#ute+ "e+ &n&"0+e+

Le d!t t&!t de W/ *L\*!n

Le ("!u* et ";te #nt t ut!"!++ ,#**e $& de ,#""!+!#n et de nu"!+&t

%e+'e,t!e*ent.


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Troisime partiRsultats et

disussions

! !t t! d t d < d


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!$ue. . ,&'&,!t+ &nt!#0d&nte+ de+


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!$ue. @. &n&"0+e+ HPLC en "!$ne d;un *"&n$e de ,#*'#++ '(n#"!)ue+ +t&nd&%d+ du V. #'u"u+ 8VOa 8B.

Le+ +t&nd&%d+: 8& ";&,!de $&""!)ue/ 8 ";&,!de /J-d!(0d%#0en#2)ue/ 8, '-OH de ";&,!de

8d "& ,&t,(!ne/ 8e ";&,!de &n!""!)ue/ 81 ";&,!de ,&1!)ue/ 8$ de ";&,!de +0%!n$!)ue/ 8( '!,8! "& &n!""!ne/ 8 ";&,!de ,!nn&*!)ue J-OH/ 8* "& %ut!ne/ 8n t-%e+%&t%#"/ 8# "& )ue%,t!n

CP &$"0,#ne+CP $"0,#+!"+


23/28

!$ue. . L;&n&"0+e en "!$ne de ";&,t!!t &nt!#0d&nte de "et%&!t de "& $%&8A ,(%#*&t#$%&**e+ UV #tenue 4 @YW n*/ 8B ,(%#*&t#$%&**e+ de '!$

ABTS #tenue 4 JJ n*.


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!$ue. J. An&"0+e en "!$ne de ";&,t!!t &nt!#0d&nte #n& ut!"!+: *t&,t#n!t%!"e 8VOA et de ";e&u 8VOb '#u% "e+ et%&!t+ de 'e&u d8A ,(%#*&t#$%&**e+ #tenu '&% UV 4 @YW n*/ 8B ,(%#*&t#$%&**

de+ %&d!,&u ABTS ABTS 4 JJ n*.


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T&"e&u:

,#*'#++ '(n#"!)ue+ !dent!1!+ '&% HPLCcUVcESI-MS de "et%&!t du


26/28

!$ue. K. Re'%+ente "e ,(%#*&t#$%&**e HPLC-UV-ESI-MS de


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Le te+t dABTS e+t '"u+ +en+!"e 4 ";!dent!1!,&t!#n de+ &nt!#0d&nt+ ,&% +&%&,t!#n e+t '"u+ %&'!de/ et +& %'#n+e &u &nt!#0d&nt+ e+t '"u+ "e.

"e *t(&n#" et%&!%e '"u+ "e+ ,#*'#++ &nt!#0d&nt+ '&%& '#%t & "A,t#n!t%

A '&%t!% de+ te+te+ &nt!#0d&nt+ ABTS (#%+-"!$ne et en "!$ne/ "e+ et%&!t+V. #'u"u+ #nt une &,t!!t &nt!#0d&nte '"u+ "e+ )ue ,e""e de "5'

Le+ ,#*'#++ !dent!1!+ '&% HPLC-UV-ESI-MS +#nt : ";&,!de ,("#%#$n!)u";'!,&t,(!ne/ "& %ut!ne/ "& )ue%,t!ne 1"n#2de+/ '%#,0&n!d!ne B@/ '%#,0'%#&nt(#,0&n!d!ne+ d!*3%e *#n# $"0,#+!de.

Le+ %+u"t&t+ #tenu+ d&n+ ,ette tude *#nt%ent )ue ";et%&!t+ du


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Merci pour votreAttention

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