la cytomÉtrie en flux par serge sénéchal. comment définir la cytométrie en flux ? la...
Post on 04-Apr-2015
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LA CYTOMÉTRIE EN FLUXLA CYTOMÉTRIE EN FLUX
Par Serge Sénéchal
Comment définir la Cytométrie en flux ?
La Cytométrie en flux est une technologie qui nous permet de mesurer simultanément de multiples
caractéristiques physiques d’une cellule.
Le cytomètre enregistre le comportement de la cellule quand celle-ci passe devant le laser en mesurant:
1- La diffusion de la lumière incidente
2- L’émission de la fluorescence
Un Cytomètre est une combinaison de 3 différents systèmes :
1) Système fluidique : Flux laminaire qui permet aux cellules en suspension de passer une à une devant le laser.
2) Système optique : Rayon laser et différents filtres qui permettent de sélectionner les longueurs d’ondes appropriées.
3) Système électronique : PMT qui capte la lumière émise,digitaliseur qui la transforme en signal électrique puis en signal numérique et finalement l’ordinateur qui gère et entrepose les données.
Les renseignements transmis par le cytomètre à propos des cellules sont:
1- Sa taille relative (FSC)2- Sa granularité relative (SSC)3- L’intensité de la fluorescence émise (Fl)
FSC
SSC
Filtre: Passe-haut
LP 500
480 500 520
Filtre: Passe-bas
SP 500
480 500 520
Filtre: Passe-bande
480 500 520
500/40
460 540
Pics d’émission de fluorescence de différents fluorochromes
- +
Tri cellulaire
Tube de collecte
Laser
Plaques de déflexion
Veine liquide d’entraînement
Non sélectionnées
Cytométrie en flux
FL1
FL2
SSC
FSCLaser
Miroirsdichroïques
Filtres
PMT
PMT
PMT
Diode
Perspectives d’avenir
Des analyseurs avec 3 ou même 4 différents lasers nous permettant de détecter jusqu’à 8 fluorescences (couleurs) simultanément sur la même cellule.
Des trieurs encore plus rapides avec une vitesse atteignant 60,000 évènements/seconde. Des tris à 4 voies donc, possibilité de trier 4 sous-populations cellulaires en même temps, à partir du même échantillon. Ces appareils peuvent lire jusqu’à 15 paramètres différents (FSC + FL1 à FL14).Un système électronique digital au lieu d’analogique qui nous donne une plus grande sensibilité et une plus grande précision.
L ‘apparition de nouveaux fluorochromes conjugués à différents anticorps et des ordinateurs toujours plus puissants pour gérer le tout.
Des appareils encore plus performants sont déjà sur le marché:
Liens utiles
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