TP 4 - 5 |

2016-2017

L'EXAMEN DE LABORATOIRE

DANS LES TROUBLES DU

MÉTABOLISME CELLULAIRE

LES MÉCANISMES DES TROUBLES DU MÉTABOLISME DES GLUCIDES

Le prélèvement de sang

- est util isé très fréquemment en médecine vétérinaire et de

nombreuses analyses sont réalisables au laboratoire.

Après des analyses plus poussées mais dont les résultats sont

plus longs à obtenir, il est possible de faire un traitement étiologique.

Le sang permet de relier les fonctions entre elles par le

transport des molécules et des anticorps.

- i l est possible de diagnostiquer certaines maladies par des

analyses réalisées sur ce substrat et les résultats permettent de

mettre en place par la suite des prélèvements plus adaptés.

L’EXAMEN DE LABORATOIRE

DOSAGE DU GLUCOSE SANGUINE

En fonction de l’analyse demandée, il faut un tube avec un conservateur particulier ou sans conservateur le cas échéant.

On utilise ainsi:

- un tube à EDTA pour l ’hématologie;

- un tube ci traté pour l ’étude de la coagulation (f ibrinogène);

- un tube hépariné pour l ’équi l ibre acido-basique ;

- un tube hépariné si l ’analyse se fai t sur sang total;

- un tube sec si c’est sur sérum pour les analyses biochimiques - un tube avec oxalate pour éviter la glycolyse (glucose , lactates) et conserver les plaquettes.

Les conditions de prélèvement ont également leur importance car en cas de stress, on observe une hausse de la glycémie et neutrophi l ie .

- I l faut en tenir compte lors de l ’ interprétation .

La conservation doit se faire dans l’idéal au froid.

Il ne faut pas que la glace rentre directement en contact avec le tube de verre sous peine de faire geler le sang, rendant l’analyse ininterprétable.

DES BONNES PRATIQUES

Le dosage du glucose plasmatique est réalisé

par une méthode enzymatique colorimétrique.

En présence de la glucose-oxydase, le glucose est

oxydé en acide gluconique et peroxyded’hydrogène.

Ce dernier, en présence de la peroxydase et du

phénol, oxyde un chromogène (4-aminoantipyrine)

incolore en un colorant rouge à structure quinoneimine.

L’absorption est mesurée à une longueur d’onde

de 505 nm et l’intensité de la coloration est

proportionnelle à la concentration en glucose.

DOSAGE DU GLUCOSE

(METHODE | STAT-FAX 1904)

- L’animal doit être à jeun depuis au moins 12 heures et 16 heures au plus.

Le glucose peut être mesuré dans le plasma, dans le sérum ou dans le sang après déprotéinisation ou directement.

Les valeurs obtenues dépendent du type de prélèvement:

- les valeurs plasmatiques sont environ 12 à 13 % plus élevées que la glycémie mesurée sur le sang, étant donnée la différence de contenu en eau des érythrocytes et du plasma.

Le sang prélevé est recueilli dans des tubes contenant l ’EDTA préalablement étiquetés et numérotés pour chaque patiente, puis centrifugés à 3000 tours pendant 15 min.

Le plasma est conservé pour le dosage de glucose, des triglycérides , du cholestérol total.

Le dosage du glucose se fait le jour même du prélèvement.

Les échantil lons ont été stockés au congélateur pendant un temps très court, nedépassant pas un mois, afin d’éviter la dégradation des protéines et des lipides.

GLUCOSE DANS LE SANG

Dosage de:

- l ipides sanguine totales;

- triglycerides;

- cholestérol totale;

- acides gras libres;

- l ipides complexe ou les lipoides;

- Lécithine

- Phosphatidyl-glycérol

- Phosphatidyl- inositol

- Sphingomyéline

- Sphingolipides

- Céramide

- Sphingolipidoses

- Cérébroside.

L’EXAMEN DE LABORATOIRE

DANS LES DYSLIPIDEMIES

Les triglycérides du plasma sont dosés par une

méthode colorimétrique-enzymatique.

Les triglycérides plasmatiques sont déterminés

après hydrolyse-enzymatique en présence d’une lipase.

L'indicateur est la quinoneimine formée à partir de

peroxyde d'hydrogène, de 4-amino-antipyrine sous

l'action catalytiquede la peroxydase.

La concentration est déterminée à une longueur

d’onde 505 nm et s’exprime en g/L.

DOSAGE DES TRIGLYCÉRIDES

(METHODE | STAT-FAX 1904)

Le cholestérol du plasma et sont dosés par une

méthode colorimétrique-enzymatique (STAT-FAX 1983).

Les esters de cholestérol sont hydrolysés par la

cholestérol-ester-hydrolase encholestérol l ibre et acides gras.

Le cholestérol libre produit et celui préexistant est

oxydé par une enzyme la cholestérol-oxydase en 4

cholesterone et peroxyde d’hydrogène.

Ce dernier enprésence de peroxydase, oxyde le

chromogène en un composé coloré en rouge.

La concentration en quinoneimine colorée mesurée à

505 nm est directement proportionnelle à la quantité de

cholestérol contenue dans le plasma et est exprimée en g/L.

DOSAGE DU CHOLESTÉROL TOTAL

(METHODE | STAT-FAX 1904)

ENREGISTRER LES RESULTATS

Parameter

Equipe

Glucose

(mg/dl ou mMol/l)

Hyperglycemie

Glucose

(mg/dl ou mMol/l)

Hypoglycemie

Cholesterol

()

Tryglycerides

()

Equipe 1

Equipe 2

Equipe 3

Valeurs de

référence

OBJECTIVES:

Dosage des protéines plasmatiques totales:

- méthode colorimétrique.

- méthode par réfractométrie.

Dosage des fractions des protéines plasmatiques:

- dosage de l’Albumine;

- détermination des Globulines.

Determination du rapport Albumines/Globulines:

- 0.8 – 2 chez les chiens

Dosage des paraprotéines ou de paraproteinemie:

-proteine C reactive, protéines tumoralles.

L’EXAMEN DE LABORATOIRE

MÉTABOLISME DES PROTÉINES

L’analyse des protéines sériques (du sérum) est utile dans de nombreuses situations pour:

1) orienter un diagnostic,

2) préciser la gravité d’une maladie,

3) suivre l’efficacité d’un traitement.

- dans le cas de n’importe quelle type de maladie (bactérienne, virale, tumorale etc, etc)

- dans le cas d’une maladie qui affecte le métabolisme de protéines (glucose, lipide etc)

POURQUOI FAIRE UNE ANALYSE

DES PROTÉINES SÉRIQUES/PLASMATIQUES ?

- un syndrome inflammatoire;

- l’altération de l’état général;

- les anomalies de l’hémogramme;

- les douleurs osseuses ou articulaires qui ne peuvent pas être expliquées;

- différents forme clinique de néoplasies;

- des troubles hépatiques;

- manifestation d’insuffisance rénale.

CE DOSAGE PEUT ÊTRE PRESCRIT EN CAS DE:

Les méthodes de dosage des protéines totales sont nombreuses et présentent chacune des caractéristiques différentes:

- sensibilité,

- interférents,

- réponse plus ou moins différente selon la composition en acides aminés.

Le choix d'une méthode dépend donc du contexte.

- par l'intermédiaire du dosage de l'azote total,

- par mesure de l'absorbance intrinsèque à 280 nm,

- par méthodes photométriques après mise en œuvre d'une réaction chimique ou d’une coloration.

LA DOSAGE DES PROTÉINES TOTALES

Les Hyper protidémies – l’augmentation des protéines plasmatiques totales est observée dans de nombreuses situations cliniques, comme une altération:

- relative - une déshydratation (coup de chaleur, diarrhée, vomissements);

-absolu - au cours de diverses maladies comme le myélome, les inflammations corniques qui entrainent une augmentation de la masse de protéines circulantes.

Les hypo protidémies - diminutions de la concentration de protéines totales peuvent être causées par:

- un défaut d'apport (malnutrition), un défaut d’absorption ou de synthèse (insuffisance hépatique),

- par une perte anormale au niveau du rein;

- par une surcharge hydrique (hémodilution).

RÉSULTATS D’UNE ANALYSE DES PROTÉINES SÉRIQUES

L'électrophorèse sérique des protéines est une technique qui consiste à séparer les différentes classes ou fractions des protéines qui se trouvent dans le sang.

- permet d'observer une diminution ou une augmentation relative ou absolue de chacune de ces classes ou fractions (albumines et globulines).

Comme le dosage des protéines totales, elle est utilisée pour évaluer l'état général , notamment:

- le bon fonctionnement du foie,

- pour étudier différents états pathologiques tels qu'une inflammation ou une altération des défenses immunitaires ou une prolifération tumorale maligne etc.

L'ÉLECTROPHORÈSE SERIQUE

L'électrophorèse est une technique biochimique de séparation fondée sur le fait que des molécules portant des charges électriques différentes migrent à des vitesses différentes lorsqu'elles sont placées dans un champ électrique.

- l’électrophorèse est une technique de routine dans les laboratoires où on l’utilise pour séparer notamment les protéines et les acides nucléiques.

PRINCIPE DE L'ÉLECTROPHORÈSE

Le protocole d'électrophorèse comporte le dépôt des échantillons,

la mise en place des gels, la migration électrophorétique, la

fixation du gel et sa coloration puis une décoloration du fond.

- Une fois séchés, les gels peuvent être conservés indéfiniment.

PROTOCOL D'ÉLECTROPHORÈSE

Piste d'électrophorèse et analyse densitométrique

ENREGISTRER LES RESULTATS

Parameter

Equipe

Proteines totales

(g/dl ou g/l)

Hyperproteinemia

Proteines totales

(g/dl ou g/l)

Hypoproteinemia

Albumines

(g/dl ou g/l)

Globulines

(g/dl ou g/l)

Rapport

A/G

Equipe 1

Equipe 2

Equipe 3

Valeurs de

référence

L’analyse par électrophorèse sérique ou plasmatique montre la répartition des principales protéines sanguines et trace un profil caractéristique, qui pourra être interprété par le médecin.

- en cas de syndrome inflammatoire, par exemple, le tracé sera typique, montrant une augmentation des alpha-globulines (hyperalphaglobulinémie) et une diminution de l’albumine.

- L’augmentation des bêta-globulines, quant à elle, peut signifier la présence d’une carence en fer, d’une hypothyroïdie ou d’une obstruction biliaire.

- Le syndrome néphrotique (dysfonctionnement des reins) sera quant à lui caractérisé par une hypoalbuminémie et une hyperalphaglobulinémie.

L’INTERPRETATION D’ÉLECTROPHORÈSE