Les nouveaux outils pour maitriser la mise

en bouteille stérile

Risque de « relargage »

Pollution du matériel

Vin avec une forte population levurienne

Filtration = réduction proportionnelle

de la charge

La filtration de mise

si élimination de 99,9999% des levures par filtration de mise

levures/ml avant filtration

levures /ml levures / bouteille

100 0,0001 0,075

1000 0,001 0,75

10 000 0,01 7,5

100 000 0,1 75

1 000 000 =début de FA

1 750

Mise en bouteille stérile = levures/bouteille <10 (voir <1)

• Adaptation du traitement de mise

•Adaptation du type de filtration à la population levurienne

•Suivi microbiologique de la mise en bouteille

Risque de « relargage »

Pollution du matériel

Augmentation des risques de

contamination du matériel

Vin avec une forte population levurienne

• Analyses de la population levurienne par cytométrie de flux

•Analyse du SO2 moléculaire, libre et total

= Maîtrise des risques

= garantie de qualité de la mise en bouteille stérile

1 vin contaminé peu mettre en cause tout le

travail d’une journée

Filtration = réduction proportionnelle

de la charge

La cytométrie de flux

• Quoi ?

• Pourquoi ?

• Comment ?

Partec: l’innovation en marche depuis 40 ansPrincipes des appareils de Cytométrie en Flux Partec: l’innovation en marche depuis 40 ansPrincipes des appareils de Cytométrie en Flux

Pascal Brunou, David BastienPartec France

1968 2008 1968 2008

La cytométrie : quoi ?

Agrosciences:

• Recherche vétérinaire• Aquaculture• Biologie végétale• Sélection variétale

Applications Industrielles:

• Agroalimentaire (jus de fruit, bière…)• Produits cosmetiques• Pharmaceutique• Industrie du papier

Domaines d’applications (2)

Analogie entre microscopie et cytométrie de fluorescence

Echantillon liquide focalisé sous l’objectif et le trajet optique du cytomètre

Echantillon fixe sur lame au microscope

Cytométrie: = « mesure des cellules »

PMT 1

PMT 2

LASER

Système fluidique - Focalisation hydrodynamique

Cellule de mesure = cœur du système

Excitation par un laser des particules injectées

Side Scatter (SSC) + Fluorescence

Forward Scatter(FSC)

Laser

Source d’excitation lumineuse ultra-performante type laser

pour une excitation et analyse des signaux d’émission en quelques microsecondes

Différentes approches pour le marquage des cellules

Anticorps Anticorps

Sondes intra-cytoplasmiquesSondes intra-cytoplasmiques

Marqueurs de surface - organites cellulairesMarqueurs de surface - organites cellulaires

Sondes ADN Sondes ADN

Configuration simple ou multi-couleurs

Système Mono-paramétrique Système Multi-paramétrique

source d’excitation simple / sources multiples

Représentation des résultats en 3 dimensions :

* taille-structure (FSC) / activité fermentaire de la levure (Fluorescence)

* Densité de population = couleur

- taille-structure (FSC)

- population

- Activité levurienne (fluorescence)

- population

La cytométrie : quoi ?

10X

100X

1000X

Zone 1 Zone 2 Zone 3 Total

30.040 317.610 136.780

300.400 3.176.100 1.367800 4.844.300

Zone 1 Zone 2 Zone 3 Total

2.670 29.810 11.330

267.000 2.981.000 1.133.000 4.381.000

Zone 1 Zone 2 Zone 3 Total

330 4.580 1.620

330.000 4.580.000 1.620.000 6.530.000

Caractéristiques de la méthode

• Gamme de mesure : 100 à 500.000 levures/ml (sans dilution)

• Limite de détection : 100 à 1000 levures/ml

• Répétabilité : <10% de la mesure

• Bonne corrélation entre l’activité fermentaire de la levure et l’intensité de la fluorescence mesurée

La cytométrie de flux, un outil qui :

Permet un comptage rapide et précisPermet de connaître la viabilité et l’activité

fermentaireApporte une solution efficace pour la

maitrise des mises en bouteille stériles