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INSECTICIDE/LARVICIDE REMANENT REPULSIF www.agorbatiment.com DOSSIER TECHNIQUE DT-AG-003-OR AGOR Batiment 460 avenue Gaston Phoebus 64170 ARTIX Tel : 05 59 53 97 33 www.agorbatiment.com INSECTI-BIO H700

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INSECTICIDE/LARVICIDE REMANENT REPULSIF

www.agorbatiment.com

DOSSIER TECHNIQUEDT-AG-003-OR

AGOR Batiment460 avenue Gaston Phoebus 64170 ARTIX

Tel : 05 59 53 97 33www.agorbatiment.com

INSECTI-BIO H700

INSECTI-BIO Dossier technique

- 1 -

MESURE EN LABORATOIRE DE L'EFFICACITE D’UNE SPECIALITE INSECTICIDE

VIS-A-VIS DES MOUSTIQUESModèle biologique moustique : Aedes aegypti

1. PRINCIPE

2. MATERIEL

3.DEROULEMENT DE L’ESSAI

4. CONDITIONS EXPERIMENTALES

5. TEMOINS, REPETITIONS

6.RESULTATS

AvertissementLes résultats décrits dans ce dossier technique sont produits par un essai in vitro et sur les échantillons fournis. Les échantillons testés sont censés être représentatifs du ou des produits finis et les méthodes de test utilisées sont celles acceptées par le client et appropriées à l’objectif de l’essai à la date de réalisation des essais. Ainsi, les résultats trouvés ne doivent être pris que comme une indication du potentiel d’efficacité des produits en test. L’essai est mené sur une ou des souches de laboratoire servant de modèle et la sensibilité peut être différente de celle trouvée avec d’autres souches d’autres laboratoires ou de souches en conditions réelles d’utilisation. Ces résultats ne peuvent donc suffire à assurer que le ou les produits fonctionneront dans une application de terrain ou clinique et il conviendra de prouver une telle efficacité par des essais appropriés de terrain ou cliniques.

INSECTI-BIO Dossier technique

- 2 -

1. PRINCIPE

Il s'agit de mesurer l’efficacité insecticide de la spécialité par tir direct sur les moustiques.L’espèce modèle choisie est réputée pour sa capacité à être vectrice de maladies telles que le Chikungunya, la Dengue ou encore le paludisme.

2. MATERIEL

- Produit : INSECTI-BIO- dose : 4 ml pulvérisés en tir direct- Insectes : Moustiques adultes (Aedes aegypti) sensibles aux insecticides (souche standard ORSTOM/WHO) et provenant d'élevages d'adultes en cages parallélépipédiques de 0,40 à 0,50 cm de côté possédant quatre faces en tamis (textile artificiel). La cage est maintenue à 30+1°C de température et à 90+5%HR.Les moustiques utilisés pour les essais sont des lots de 50+/-1 femelles âgées de 2 à 4 jours.- Supports traités : carreaux de céramique faïence.

3. DEROULEMENT DE L'ESSAI

Les insectes sont contenus dans un cylindre en verre ouvert (diamètre 18 cm) et fermé par du voilesur ses deux faces (pour que le produit traverse le dispositif sans « coller » les insectes.Le produit est pulvérisé directement sur les insectes et la mortalité des insectes est enregistrée toutes les 30 secondes (suivant la rapidité d'action du produit) jusqu'à 1 heure. Passé ce délai, tous les insectes, morts et vivants, sont récupérés dans un bocal en verre avec eau et nourriture à disposition.La mortalité est re-contrôlée 24 heures plus tard afin de mettre en évidence soit une action lente duproduit, soit une récupération des insectes qui n'étaient qu'abattus (knock-down sans effet kill).

4. CONDITIONS EXPERIMENTALES

Les insectes et les surfaces traitées sont conservées à 20°c et 60% HR.

5. TEMOIN, REPETITIONS

4 répétitions de traitement sont effectuées.Témoin : 4 répétitions.

MESURE EN LABORATOIRE DE L'EFFICACITE D’UNE SPECIALITE INSECTICIDE

VIS-A-VIS DES MOUSTIQUESModèle biologique moustique : Aedes aegypti

INSECTI-BIO Dossier technique

- 3 -

6. RESULTATS

6.1. Présentation des résultats

Les tableaux en page suivante présentent les résultats obtenus.

6.2. Commentaires sur l'efficacité

La mortalité des lots TEMOIN étant nulle durant les différentes phases de l'essai, les résultats obtenus sont exploitables en l'état.

ESSAI EN PULVERISATION DIRECTE SUR LES MOUSTIQUES (EFFET CURATIF) :- mortalité totale en moins de 30 secondes après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

CONCLUSION

Dans les conditions de cet essai, avec les souches d’insectes et les échantillons reçus :- la spécialité insecticide « INSECTI-BIO » en pulvérisation directe sur les insectes, a montré desperformances excellentes vis-à-vis des moustiques (l’espèce modèle de moustique choisie est un des principaux représentants de vecteurs de maladies épidémiques telles que le Chikungynuya, la Dengue ou le paludisme).

ESSAI CURATIF EN TIR DIRECT SUR LES INSECTES MOUSTIQUES

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne30 sec 50 0 100,0 49 0 100,0 50 0 100,0 100,01 min 50 0 100,0 49 0 100,0 50 0 100,0 100,015 min 50 0 100,0 49 0 100,0 50 0 100,0 100,01 h 50 0 100,0 49 0 100,0 50 0 100,0 100,04 h 50 0 100,0 49 0 100,0 50 0 100,0 100,024 h 50 0 100,0 49 0 100,0 50 0 100,0 100,0

KT 100 < 30 secondesMortalité 24H = 100%

M = morts ou abattus V = vivants %KD = % abattement/mortalité

INSECTI-BIO Dossier technique

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MESURE EN LABORATOIRE DE L'EFFICACITE D’UNE SPECIALITE INSECTICIDE

VIS-A-VIS DES INSECTES ET ACARIENS NUISIBLES DANS LES BATIMENTSD’ELEVAGES DE VOLAILLES

Modèles biologiques :Alphitobius diaperinus (ténébrions)

Dermanyssus gallinae (poux rouges des volailles)Menopon gallinae (poux blancs des volailles)

1. PRINCIPE

2. MATERIEL

3.DEROULEMENT DE L’ESSAI

4. CONDITIONS EXPERIMENTALES

5. TEMOINS, REPETITIONS

6.RESULTATS

AvertissementLes résultats décrits dans ce dossier technique sont produits par un essai in vitro et sur les échantillons fournis. Les échantillons testés sont censés être représentatifs du ou des produits finis et les méthodes de test utilisées sont celles acceptées par le client et appropriées à l’objectif de l’essai à la date de réalisation des essais. Ainsi, les résultats trouvés ne doivent être pris que comme une indication du potentiel d’efficacité des produits en test. L’essai est mené sur une ou des souches de laboratoire servant de modèle et la sensibilité peut être différente de celle trouvée avec d’autres souches d’autres laboratoires ou de souches en conditions réelles d’utilisation. Ces résultats ne peuvent donc suffire à assurer que le ou les produits fonctionneront dans une application de terrain ou clinique et il conviendra de prouver une telle efficacité par des essais appropriés de terrain ou cliniques.

INSECTI-BIO Dossier technique

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1. PRINCIPE

Il s'agit d'exposer des insectes d'origine connue sur des supports traités à l'aide de la spécialité à étudier, et d'observer les mortalités à des intervalles de temps réguliers. Cette procédure est appliquée après traitement et jusqu’à 2 mois après application (mesure de la persistance d'action). La procédure s’inspire de la Méthode C.E.B. n°159 relative à la mesure de l’efficacité de spécialités insecticides destinées à la lutte contre les blattes des locaux.

2. MATERIEL

- Produit : INSECTI-BIO- dose : 4 ml pulvérisés en tir direct- Insectes : Ténébrions (Alphitobius diaperinus) provenant d'une souche de laboratoire réputée sensible auxprincipales familles d'insecticides (origine : INRA, c’est donc la souche officielle française) et dontles conditions d'élevage répondent aux critères de la Méthode n°159 C.E.B.. On utilise 25 adultesâgés de 1 à 2 semaines par répétition.Poux rouges (Dermanyssus gallinae) provenant d'un élevage industriel de volailles (origineSOGEVAL). La sensibilité de la souche aux principales familles d’insecticides (PYR + OP) estvérifiée. Par répétition, on utilise 100+/-10 individus de tous stades et récupérés comme les plusactifs (formes mobiles).Poux blancs (Menopon gallinae) provenant d'un élevage industriel de volailles (origine Louhosoa -France). La sensibilité de la souche aux principales familles d’insecticides (PYR + OP) est vérifiée.Par répétitions, on utilise 100+/-10 individus de tous stades et récupérés comme les plus actifs(formes mobiles).- Supports traités : carreaux de céramique faïence.

3. DEROULEMENT DE L'ESSAI

Après séchage des surfaces traitées, les nuisibles sont déposées sur le support et contraints à y rester par une boîte de Pétri les recouvrant.La mortalité des insectes est enregistrée toutes les 5 minutes (suivant la rapidité d'action du produit)jusqu'à 2 heures de contact avec le support traité. Passé ce délai, tous les insectes, morts et vivants,sont récupérés dans un bocal en verre avec eau et nourriture à disposition. La mortalité estrecontrôlée 24H et 48H plus tard afin de mettre en évidence soit une action lente du produit, soitune récupération des insectes qui n'étaient qu'abattus (knock-down sans effet kill).La même procédure est appliquée 2 mois après le traitement des supports afin d'évaluer lapersistance d'action du produit.

ESSAI CURATIF :Un essai complémentaire est réalisé en vaporisant la formule directement sur les insectes et enenregistrant le taux de mortalité en fonction du temps après application.

INSECTI-BIO Dossier technique

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4. CONDITIONS EXPERIMENTALES

Les nuisibles et les surfaces traitées sont conservées à 20+/-1°C, 60+/-5% HR, photopériode 16/8 800 lux.

5. TEMOIN, REPETITIONS

4 répétitions de traitement sont effectuées. (3 pour l’essai en tir direct).Témoin : 4 répétitions de supports non traités.

6. RESULTATS

6.1. Présentation des résultats

Les tableaux en page suivante présentent les résultats obtenus.

6.2. Commentaires sur l'efficacité

La mortalité des lots TEMOIN étant nulle durant les différentes phases de l'essai, les résultats obtenus sont exploitables en l'état.

ESSAI EN PULVERISATION DIRECTE (EFFET CURATIF) :TENEBRIONS :- mortalité totale en moins de 5 minutes après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)POUX ROUGES :- mortalité totale en moins de 2 minutes après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)POUX BLANCS :- mortalité totale en moins de 2 minutes après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

ESSAI SUR L'EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) : test à T0TENEBRIONS :- mortalité totale en moins de 1 heure après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)POUX ROUGES :- mortalité totale en moins de 1 heure après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)POUX BLANCS :- mortalité totale en moins de 1 heure après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

INSECTI-BIO Dossier technique

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ESSAI SUR L'EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) :test à T0 + 2 moisTENEBRIONS :- mortalité totale en moins de 3 heures après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)POUX ROUGES :- mortalité totale en moins de 2 heures après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)POUX BLANCS :- mortalité totale en moins de 2 heures après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

5. CONCLUSION

Dans les conditions de cet essai, avec les souches d’insectes et les échantillons considérés :- la spécialité insecticide « INSECTI-BIO » appliquée à la dose d’emploi en traitement desurfaces ou en pulvérisation directe sur les insectes, a montré des performances excellentes vis-à-visdes insectes et acariens nuisibles dans les élevages de volailles.- cette efficacité persiste jusqu’à au moins 2 mois après application.

6. RESULTATS

ESSAI CURATIF EN TIR DIRECT SUR LES NUISIBLES TENEBRIONS

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne5 min 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,015 min 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,01 h 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,04 h 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,024 h 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,0KT 100 < 5 minutesMortalité 24H = 100%

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ESSAI CURATIF EN TIR DIRECT SUR LES NUISIBLES POUX ROUGES

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne2 min 98 0 100,0 103 0 100,0 96 0 100,0 100,010 min 98 0 100,0 103 0 100,0 96 0 100,0 100,015 min 98 0 100,0 103 0 100,0 96 0 100,0 100,01 h 98 0 100,0 103 0 100,0 96 0 100,0 100,024 h 98 0 100,0 103 0 100,0 96 0 100,0 100,0KT 100 < 2 minutesMortalité 24H = 100%

ESSAI CURATIF EN TIR DIRECT SUR LES NUISIBLES POUX BLANCS

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne2 min 99 0 100,0 101 0 100,0 97 0 100,0 100,010 min 99 0 100,0 101 0 100,0 97 0 100,0 100,015 min 99 0 100,0 101 0 100,0 97 0 100,0 100,01 h 99 0 100,0 101 0 100,0 97 0 100,0 100,024 h 99 0 100,0 101 0 100,0 97 0 100,0 100,0KT 100 < 2 minutesMortalité 24H = 100%

EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) ESSAI A T0 TENEBRIONSdélai d'exposition sur les surfaces traitées 1 h 4 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 2 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 3 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 4 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 moy 100 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0non traité 2 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 3 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 4 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 moy 0 moy 0 moy 0 moy 0

INSECTI-BIO Dossier technique

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EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) ESSAI A T0 POUX ROUGESdélai d'exposition sur les surfaces traitées 1 h 4 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 96 0 100 96 0 100 96 0 100 96 0 100 2 100 0 100 100 0 100 100 0 100 100 0 100 3 99 0 100 99 0 100 99 0 100 99 0 100 4 102 0 100 102 0 100 102 0 100 102 0 100 moy 100 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 98 0 0 98 0 1 97 1,0 2 96 2,0non traité 2 0 93 0 0 93 0 2 91 2,2 2 91 2,15 3 0 101 0 0 101 0 1 100 1 3 98 3,0 4 0 98 0 0 98 0 0 98 0 3 95 3,1 moy 0 moy 0 moy 1 moy 2,6

EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) ESSAI A T0 POUX BLANCSdélai d'exposition sur les surfaces traitées 1 h 4 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 103 0 100 103 0 100 103 0 100 103 0 100 2 98 0 100 98 0 100 98 0 100 98 0 100 3 101 0 100 101 0 100 101 0 100 101 0 100 4 99 0 100 99 0 100 99 0 100 99 0 100 moy 100 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 93 0 0 93 0 1 92 1,1 2 91 2,2non traité 2 0 98 0 0 98 0 0 98 0 1 97 1,02 3 0 100 0 0 100 0 2 98 2 3 97 3,0 4 0 102 0 0 102 0 2 100 2 4 98 3,9 moy 0 moy 0 moy 1,3 moy 2,5

M = morts V = vivants %M = % mortalité rép = répétition

EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) ESSAI A T0 + 2 MOIS TENEBRIONSdélai d'exposition sur les surfaces traitées 3 h 4 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 2 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 3 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 4 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 moy 100 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0non traité 2 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 3 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 4 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 moy 0 moy 0 moy 0 moy 0

EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) ESSAI A T0 POUX ROUGESdélai d'exposition sur les surfaces traitées 2 h 4 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 99 0 100 99 0 100 99 0 100 99 0 100 2 98 0 100 98 0 100 98 0 100 98 0 100 3 102 0 100 102 0 100 102 0 100 102 0 100 4 100 0 100 100 0 100 100 0 100 100 0 100 moy 100 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 96 0 0 96 0 2 94 2,1 3 93 3,1non traité 2 0 99 0 0 99 0 1 98 1 2 97 2,02 3 0 102 0 0 102 0 2 99 2 2 100 2,0 4 0 100 0 0 100 0 1 99 1 3 97 3,0 moy 0 moy 0 moy 1,5 moy 2,5

EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) ESSAI A T0 POUX BLANCSdélai d'exposition sur les surfaces traitées 2 h 4 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 105 0 100 105 0 100 105 0 100 105 0 100 2 101 0 100 101 0 100 101 0 100 101 0 100 3 100 0 100 100 0 100 100 0 100 100 0 100 4 99 0 100 99 0 100 99 0 100 99 0 100 moy 100 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 100 0 0 100 0 1 99 1,0 2 98 2,0non traité 2 0 96 0 0 96 0 2 94 2,1 3 93 3,13 3 0 98 0 0 98 0 2 96 2 4 94 4,1 4 0 101 0 0 101 0 1 100 1 2 99 2,0 moy 0 moy 0 moy 1,5 moy 2,8

INSECTI-BIO Dossier technique

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INSECTI-BIO Dossier technique

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MESURE EN LABORATOIRE DE L'EFFICACITE D’UNE SPECIALITE INSECTICIDE

VIS-A-VIS DES INSECTES rampants et volants

Modèles biologiques insectes rampants :Blattella germanica (blatte germanique)Modèles biologiques insectes volants :Musca domestica (mouche domestique)

1. PRINCIPE

2. MATERIEL

3.DEROULEMENT DE L’ESSAI

4. CONDITIONS EXPERIMENTALES

5. TEMOINS, REPETITIONS

6.RESULTATS

AvertissementLes résultats décrits dans ce dossier technique sont produits par un essai in vitro et sur les échantillons fournis. Les échantillons testés sont censés être représentatifs du ou des produits finis et les méthodes de test utilisées sont celles acceptées par le client et appropriées à l’objectif de l’essai à la date de réalisation des essais. Ainsi, les résultats trouvés ne doivent être pris que comme une indication du potentiel d’efficacité des produits en test. L’essai est mené sur une ou des souches de laboratoire servant de modèle et la sensibilité peut être différente de celle trouvée avec d’autres souches d’autres laboratoires ou de souches en conditions réelles d’utilisation. Ces résultats ne peuvent donc suffire à assurer que le ou les produits fonctionneront dans une application de terrain ou clinique et il conviendra de prouver une telle efficacité par des essais appropriés de terrain ou cliniques.

INSECTI-BIO Dossier technique

- 12 -

1. PRINCIPE

Il s'agit d'exposer des insectes d'origine connue sur des supports traités à l'aide de la spécialité à étudier, et d'observer les mortalités à des intervalles de temps réguliers. Cette procédure est appliquée après traitement et jusqu’à 2 mois après application (mesure de la persistance d'action). Pour les insectes rampants, la procédure s’inspire de la Méthode C.E.B. n°159 relative à la mesure de l’efficacité de spécialités insecticides destinées à la lutte contre les blattes des locaux.Pour les insectes volants, la méthode s’inspire du protocole du C.N.E.V.A. relative à la mesure de l’éfficacité de spécialités insecticides destinées à la lutte contre les mouches.

2. MATERIEL

- Produit : INSECTI-BIO- dose : 4 ml pulvérisés en tir direct- Insectes : Blattes (Blattella germanica) provenant d’une souche de laboratoire réputée sensible aux principales familles d’insecticides et dont les conditions d’élevage répondent aux critères de la méthode n°159 C.E.B.. On utilise 25 adultes mâles âgées de 7 à 10 jours.Mouches (Musca domestica) provenant d’une souche de laboratoire réputée sensible aux principales familles d’insecticides et dont les conditions d’élevage répondent aux critères de la méthode C.N.E.V.A.. On utilise 100+/-10 adultes des deux sexes âgées de 4 à 6 jours.

-Supports traités : carreaux de céramique faïence.

3. DEROULEMENT DE L'ESSAI

Après séchage des surfaces traitées, 25 blattes sont déposées sur le support et contraintes à y rester par une boîte de Pétri les recouvrant.Pour les insectes volants, les plaques traitées sont disposées en fermeture de bocaux en verre de2 litres. Le phototropisme positif des insectes les amène à entrer en contact avec les supports traités.La mortalité des insectes est enregistrée toutes les 5 minutes (suivant la rapidité d’actin du produit)jusqu’à 2 heures de contact avec le support traité. Passé ce délai, tous les insectes, morts et vivants, sont récupérés dans un bocal en verre avec eau et nourriture à disposition. La mortalité est recontrôlée 24h et 48h plus tard afin de mettre en évidence soit une action lente du produit, soitune récupération des insectes qui n’étaient qu’abattus (Knock-down sans effet Kill).La même procédure est appliquée 2 mois après traitement des supports afin d’évaluer la persistanced’action du produit.

ESSAI CURATIF :Un essai complémentaire est réalisé en vaporisant la formule directement sur les insectes et enenregistrant le taux de mortalité en fonction du temps après application.

INSECTI-BIO Dossier technique

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4. CONDITIONS EXPERIMENTALES

Les nuisibles et les surfaces traitées sont conservées à 20+/-1°C, 60+/-5% HR, photopériode 16/8 800 lux.

5. TEMOIN, REPETITIONS

4 répétitions de traitement sont effectuées.Témoin : 4 répétitions de supports non traités.

6. RESULTATS

6.1. Présentation des résultats

Les tableaux en page suivante présentent les résultats obtenus.

6.2. Commentaires sur l'efficacité

La mortalité des lots TEMOIN étant nulle durant les différentes phases de l'essai, les résultats obtenus sont exploitables en l'état.

ESSAI EN PULVERISATION DIRECTE SUR LES CAFARDS (EFFET CURATIF) :- mortalité totale en moins de 5 minutes après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

ESSAI SUR L'EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES SUR CAFARDS(EFFET PREVENTIF) : test à T0- mortalité totale en moins de 25 minutes après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

ESSAI SUR L'EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES SUR CAFARDS (EFFET PREVENTIF) : test à T0 + 2 mois- mortalité totale en moins de 30 minutes après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

ESSAI EN PULVERISATION DIRECTE SUR LES MOUCHES (EFFET CURATIF) :- mortalité totale en moins de 2 minutes après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

ESSAI SUR L'EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES SUR MOUCHES (EFFET PREVENTIF) : test à T0- mortalité totale en moins de 1 heure après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

ESSAI CURATIF EN TIR DIRECT SUR LES NUISIBLES POUX ROUGES

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne2 min 98 0 100,0 103 0 100,0 96 0 100,0 100,010 min 98 0 100,0 103 0 100,0 96 0 100,0 100,015 min 98 0 100,0 103 0 100,0 96 0 100,0 100,01 h 98 0 100,0 103 0 100,0 96 0 100,0 100,024 h 98 0 100,0 103 0 100,0 96 0 100,0 100,0KT 100 < 2 minutesMortalité 24H = 100%

ESSAI CURATIF EN TIR DIRECT SUR LES NUISIBLES POUX BLANCS

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne2 min 99 0 100,0 101 0 100,0 97 0 100,0 100,010 min 99 0 100,0 101 0 100,0 97 0 100,0 100,015 min 99 0 100,0 101 0 100,0 97 0 100,0 100,01 h 99 0 100,0 101 0 100,0 97 0 100,0 100,024 h 99 0 100,0 101 0 100,0 97 0 100,0 100,0KT 100 < 2 minutesMortalité 24H = 100%

EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) ESSAI A T0 TENEBRIONSdélai d'exposition sur les surfaces traitées 1 h 4 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 2 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 3 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 4 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 moy 100 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0non traité 2 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 3 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 4 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 moy 0 moy 0 moy 0 moy 0

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ESSAI SUR L'EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES SUR MOUCHES (EFFET PREVENTIF) : test à T0 + 2 mois- mortalité totale en moins de 1 heure 15 minutes après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

CONCLUSIONDans les conditions de cet essai, avec les souches d’insectes et les échantillons considérés :- la spécialité insecticide « INSECTI-BIO » appliquée à la dose d’emploi en traitement desurfaces ou en pulvérisation directe sur les insectes, a montré des performances excellentes vis-à-visdes insectes rampants et volants en environnement domestique.- cette efficacité persiste jusqu’à au moins 2 mois après application.

ESSAI CURATIF EN TIR DIRECT SUR LES INSECTES MOUCHES

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne1 min 59 46 56,2 61 37 62,2 55 41 57,3 58,6 2 min 105 0 100,0 98 0 100,0 96 0 100,0 100,015 min 105 0 100,0 98 0 100,0 96 0 100,0 100,01 h 105 0 100,0 98 0 100,0 96 0 100,0 100,04 h 105 0 100,0 98 0 100,0 96 0 100,0 100,024 h 105 0 100,0 98 0 100,0 96 0 100,0 100,0KT 100 < 2 minutesMortalité 24H = 100%

ESSAI CURATIF EN TIR DIRECT SUR LES INSECTES BLATTES

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne5 min 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,010 min 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,015 min 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,01 h 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,024 h 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,0KT 100 < 5 minutesMortalité 24H = 100%

M = morts ou abattus V = vivants %KD = % abattement/mortalité

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ESSAI TEMOIN NON TRAITE MOUCHES

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne1 h 0 103 0,0 0 99 0,0 0 96 0,0 0.04 h 0 103 0,0 0 99 0,0 0 96 0,0 0,024 h 3 100 2,9 1 98 1,0 2 94 2,1 2,0

ESSAI TEMOIN NON TRAITE BLATTES

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne1 h 0 25 0,0 0 25 0,0 0 25 0,0 0,024 h 0 25 0,0 0 25 0,0 0 25 0,0 0,0

EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) MOUCHES A T0délai d'exposition sur les surfaces traitées 1 h 4 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 96 0 100 96 0 100 96 0 100 96 0 100 2 102 0 100 102 0 100 102 0 100 102 0 100 3 105 0 100 105 0 100 105 0 100 105 0 100 4 99 0 100 99 0 100 99 0 100 99 0 100 moy 100 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 93 0 0 93 0 1 92 1,1 2 91 2,2non traité 2 0 98 0 0 98 0 2 96 2 3 95 3,1 3 0 100 0 0 100 0 0 100 0 1 99 1 4 0 102 0 0 102 0 101 1 1 101 1 moy 0 moy 0 moy 1 moy 1,8

M = morts ou abattus V = vivants %KD = % abattement/mortalité

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EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) MOUCHES A T0 + 2moisdélai d'exposition sur les surfaces traitées 1 h 15 min 4 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 103 0 100 103 0 100 103 0 100 103 0 100 2 99 0 100 99 0 100 99 0 100 99 0 100 3 97 0 100 97 0 100 97 0 100 97 0 100 4 100 0 100 100 0 100 100 0 100 100 0 100 moy 100 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 101 0 0 101 0 1 100 1,0 2 99 2,0non traité 2 0 98 0 0 98 0 2 96 2 3 96 3,03 3 0 99 0 0 99 0 1 98 0 3 96 3.0 4 0 96 0 1 95 1.04 2 94 2.1 2 94 2.1 moy 0 moy 0.26 moy 1.5 moy 2,5

EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) BLATTES A T0 délai d'exposition sur les surfaces traitées 15 min 25 min 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 10 15 40 25 0 100 25 0 100 25 0 100 2 13 12 52 25 0 100 25 0 100 25 0 100 3 16 9 64 25 0 100 25 0 100 25 0 100 4 13 12 52 25 0 100 25 0 100 25 0 100 moy 100 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0non traité 2 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 3 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 4 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 moy 0 moy 0 moy 0 moy 0

M = morts ou abattus V = vivants %KD = % abattement/mortalité

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EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) BLATTES A T0 + 2moisdélai d'exposition sur les surfaces traitées 30 min 1 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 10 15 40 25 0 100 25 0 100 25 0 100 2 13 12 52 25 0 100 25 0 100 25 0 100 3 16 9 64 25 0 100 25 0 100 25 0 100 4 13 12 52 25 0 100 25 0 100 25 0 100 moy 100 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 25 0 0 25 0 1 24 4 1 24 4non traité 2 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 3 0 25 0 0 25 0 0 25 0 1 24 4 4 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 moy 0 moy 0 moy 1 moy 2,0

M = morts ou abattus V = vivants %KD = % abattement/mortalité

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MESURE EN LABORATOIRE DE L'EFFICACITE D’UNE SPECIALITE INSECTICIDE

VIS-A-VIS DES PUNAISES DE LITS (Cimex lectularius)

1. PRINCIPE

2. MATERIEL

3.DEROULEMENT DE L’ESSAI

4. CONDITIONS EXPERIMENTALES

5. TEMOINS, REPETITIONS

6.RESULTATS

AvertissementLes résultats décrits dans ce dossier technique sont produits par un essai in vitro et sur les échantillons fournis. Les échantillons testés sont censés être représentatifs du ou des produits finis et les méthodes de test utilisées sont celles acceptées par le client et appropriées à l’objectif de l’essai à la date de réalisation des essais. Ainsi, les résultats trouvés ne doivent être pris que comme une indication du potentiel d’efficacité des produits en test. L’essai est mené sur une ou des souches de laboratoire servant de modèle et la sensibilité peut être différente de celle trouvée avec d’autres souches d’autres laboratoires ou de souches en conditions réelles d’utilisation. Ces résultats ne peuvent donc suffire à assurer que le ou les produits fonctionneront dans une application de terrain ou clinique et il conviendra de prouver une telle efficacité par des essais appropriés de terrain ou cliniques.

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1. PRINCIPE

Il s'agit d'exposer des insectes d'origine connue sur des supports traités à l'aide de la spécialité à étudier, et d'observer les mortalités à des intervalles de temps réguliers. Cette procédure est appliquée après traitement et jusqu’à 2 mois après application (mesure de la persistance d'action). Pour les insectes rampants, la procédure s’inspire de la Méthode C.E.B. n°159 relative à la mesure de l’efficacité de spécialités insecticides destinées à la lutte contre les blattes des locaux.

2. MATERIEL

- Produit : INSECTI-BIO- dose : 4 ml pulvérisés en tir direct- Insectes : Punaises de lits (Cimex lectularius) provenant d’une souche de laboratoire sensible aux principalesfamilles d’insecticides (origine : PHARM’INSECT). on utilise 25 adultes âgés de 1 à 2 semaines parrépétition.-Supports traités : carreaux de céramique faïence.

3. DEROULEMENT DE L'ESSAI

Après séchage des surfaces traitées, les nuisibles sont déposées sur le support et contraintes à y rester par une boîte de Pétri les recouvrant.La mortalité des insectes est enregistrée toutes les 5 minutes (suivant la rapidité d’actin du produit)jusqu’à 2 heures de contact avec le support traité. Passé ce délai, tous les insectes, morts et vivants, sont récupérés dans un bocal en verre avec eau et nourriture à disposition. La mortalité est recontrôlée 24h et 48h plus tard afin de mettre en évidence soit une action lente du produit, soitune récupération des insectes qui n’étaient qu’abattus (Knock-down sans effet Kill).La même procédure est appliquée 2 mois après traitement des supports afin d’évaluer la persistanced’action du produit.

ESSAI CURATIF :Un essai complémentaire est réalisé en vaporisant la formule directement sur les insectes et enenregistrant le taux de mortalité en fonction du temps après application.

4. CONDITIONS EXPERIMENTALES

Les nuisibles et les surfaces traitées sont conservées à 20+/-1°C, 60+/-5% HR, photopériode 16/8 800 lux.

ESSAI SUR L'EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES SUR MOUCHES (EFFET PREVENTIF) : test à T0 + 2 mois- mortalité totale en moins de 1 heure 15 minutes après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

CONCLUSIONDans les conditions de cet essai, avec les souches d’insectes et les échantillons considérés :- la spécialité insecticide « INSECTI-BIO » appliquée à la dose d’emploi en traitement desurfaces ou en pulvérisation directe sur les insectes, a montré des performances excellentes vis-à-visdes insectes rampants et volants en environnement domestique.- cette efficacité persiste jusqu’à au moins 2 mois après application.

ESSAI CURATIF EN TIR DIRECT SUR LES INSECTES MOUCHES

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne1 min 59 46 56,2 61 37 62,2 55 41 57,3 58,6 2 min 105 0 100,0 98 0 100,0 96 0 100,0 100,015 min 105 0 100,0 98 0 100,0 96 0 100,0 100,01 h 105 0 100,0 98 0 100,0 96 0 100,0 100,04 h 105 0 100,0 98 0 100,0 96 0 100,0 100,024 h 105 0 100,0 98 0 100,0 96 0 100,0 100,0KT 100 < 2 minutesMortalité 24H = 100%

ESSAI CURATIF EN TIR DIRECT SUR LES INSECTES BLATTES

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne5 min 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,010 min 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,015 min 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,01 h 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,024 h 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,0KT 100 < 5 minutesMortalité 24H = 100%

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5. TEMOIN, REPETITIONS

4 répétitions de traitement sont effectuées (3 pour l’essai en tir direct).Témoin : 4 répétitions de supports non traités.

6. RESULTATS

6.1. Présentation des résultats

Les tableaux en page suivante présentent les résultats obtenus.

6.2. Commentaires sur l'efficacité

La mortalité des lots TEMOIN étant nulle durant les différentes phases de l'essai, les résultats obtenus sont exploitables en l'état.

ESSAI EN PULVERISATION DIRECTE (EFFET CURATIF) :- mortalité totale en moins de 5 minutes après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

ESSAI SUR L'EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) : test à T0- mortalité totale en moins de 20 minutes après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

ESSAI SUR L'EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) : test à T0 + 2 mois- mortalité totale en moins de 6 heures après traitement- pas de récupération après 24 heures (effet létal définitif)

CONCLUSIONDans les conditions de cet essai, avec les souches d’insectes et les échantillons considérés :- la spécialité insecticide « INSECTI-BIO » appliquée à la dose d’emploi en traitement desurfaces ou en pulvérisation directe sur les insectes, a montré des performances excellentes vis-à-visdes punaises de lits.- malgré une efficacité plus lente, cette efficacité persiste jusqu’à au moins 2 mois après application.

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ESSAI CURATIF EN TIR DIRECT SUR LES INSECTES BLATTES

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne5 min 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,015 min 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,01 h 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,04 h 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,024 h 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,0KT 100 < 5 minutesMortalité 24H = 100%

EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) A T0 délai d'exposition sur les surfaces traitées 20 min 4 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 2 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 3 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 4 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 moy 100 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0non traité 2 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 3 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 4 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 moy 0 moy 0 moy 0 moy 0

EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) A T0 + 2mois délai d'exposition sur les surfaces traitées 4 h 6 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 17 8 68 25 0 100 25 0 100 25 0 100 2 15 10 60 25 0 100 25 0 100 25 0 100 3 19 6 76 25 0 100 25 0 100 25 0 100 4 14 11 56 25 0 100 25 0 100 25 0 100 moy 65 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0non traité 2 0 25 0 0 25 0 0 25 0 1 24 4 3 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 4 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 moy 0 moy 0 moy 0 moy 1

M = morts ou abattus V = vivants %KD = % abattement/mortalité

INSECTI-BIO Dossier technique

Évaluation de la biodégradation de produit

www.agorbatiment.com- 22 -

SOMMAIRE

I. PRESENTATION DE L’ECHANTILLON

II. DESCRIPTION DU TEST DE BIODEGRADABILITE FACILE (OCDE 301 B)

III. DATES DE REALISATION

IV. INOCULUM BACTERIEN

V. RESULTATS

VI. CONCLUSION

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I. PRESENTATION DE L’ECHANTILLON

Dénomination : INSECTI-BIO PAE.

Teneur en carbone organique dissous (COD) d’une solution à 100 mg/L : 1,51 mg/L.L’essai de biodégradabilité de l’échantillon a été réalisé à une concentration théorique de10,0 mg/L de carbone organique dissous (COD) soit 662,3 mg/L d’échantillon.

II. DESCRIPTION DU TEST DE BIODEGRADABILITE FACILE (OCDE 301 B)

II.1 Principe

La biodégradabilité des composés organiques par des micro-organismes en milieuaquatique est déterminée à l’aide d’un système d’essai statique. Le mélange soumis àl’essai contient un milieu inorganique, le composé organique testé constituant la seulesource nominale de carbone et d’énergie à une concentration de 10 à 20 mg/L en carbonethéorique, ainsi qu’un ensemencement mixte provenant d’une usine traitant en majorité deseaux résiduaires urbaines (concentration en matières en suspension inférieure ou égale à30 mg/L dans le mélange final).Le CO2 formé pendant la dégradation microbienne est piégé dans des récipients externes.Le CO2 libéré est comparé à la quantité théoriquement (CO2Th) dégagée et exprimé enpourcentage.Le taux de dégradation à un temps donné est calculé suivant l’équation suivant :

% dégradation = x100

L’essai dure normalement 28 jours, mais peut être prolongé si la courbe de biodégradationn’a pas atteint de palier le 28ème jour.

CO2 Th(mg/xmL)

CO2 cumulé(mg/xmL)

Évaluation de la biodégradation de produit

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II.2 Définitions

CO2Th : dioxyde de carbone théorique. Quantité de dioxyde de carbone, calculée à partir de la teneur en carbone organique connue ou mesurée du produit d’essai, qui doit se dégager lors de la minéralisation complète de celui-ci ; le CO2Th en mg est calculé suivant l’équation suivante :

CO2Th = xVLxPc

où 44 et 12 sont respectivement la masse moléculaire relative du CO2 et la masse atomique du carbone, destinées à calculer la quantité de CO2 à partir du carbone organique du produit d’essai. VL : volume de solution d’essai contenu dans le récipient d’essai, en litres. Pc : concentration en carbone organique du produit à analyser dans le récipient d’essai en mg/L. Le CO2Th peut également s’exprimer en mg/mg de substance.Phase de latence : période qui sépare le moment de l’ensemencement de celui où lepourcentage de dégradation a atteint environ 10 %.Phase de dégradation : période qui commence à la fin de la phase de latence et se termineau moment où 90 % du taux maximal de dégradation est atteint.Intervalle de 10 jours : 10 jours qui suivent immédiatement le moment où le taux debiodégradation atteint 10 %.Facilement biodégradable : un produit est considéré comme facilement biodégradable si letaux de biodégradation a atteint au moins 60 % dans l’intervalle de 10 jours qui doit êtrecompris dans les 28 (premiers) jours de test.Facilement biodégradable sans respect de l’intervalle de 10 jours : un produit est considéréfacilement biodégradable sans respect de l’intervalle de 10 jours si le taux de biodégradationa atteint au moins 60 % dans les 28 (premiers) jours de test sans atteindre ce seuil dansl’intervalle de 10 jours.

II.3 Références normatives

- Ligne directrice OCDE n° 301 B « Biodégradabilité facile : essai de dégagement de CO2 (Essai de Sturm modifié) » - Juillet 1992.- Méthode d’essai C.4C : « Détermination de la biodégradabilité facile : dégagement de dioxyde de carbone (Essai de Sturm modifié) » en annexe du Règlement (CE) n°440/2008 de la Commission du 30 mai 2008 établissant des méthodes d'essai conformément au règlement (CE) n° 1907/2006 du Parl ement européen et du Conseil concernant l'enregistrement, l'évaluation et l'autorisation des substances chimiques, ainsi que les restrictions applicables à ces substances (REACH).- Dosage du carbone organique suivant la norme NF EN 1484 de septembre 1997« Lignes directrices pour le dosage du carbone organique total et carbone organiquedissous – Méthode par oxydation au persulfate à chaud ».

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12

44

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II.4 Description de la méthode standard de laboratoire

La biodégradabilité des composés organiques par des micro-organismes en milieuaquatique est déterminée à l’aide d’un système d’essai statique. Le mélange soumis àl’essai contient un milieu inorganique, le composé organique constituant la seule sourcenominale de carbone et d’énergie à une concentration de 10 à 20 mg/L en carbonethéorique, ainsi qu’un ensemencement mixte provenant d’une usine traitant en majorité des eaux résiduaires urbaines (concentration en matières en suspension inférieure ou égale à 30mg/L dans le mélange final).Le mélange, agité dans des récipients d’essai, est exposé à un flux d’air exempt de CO2 àun débit de l’ordre de 50 mL/min pendant généralement 28 jours à une température de22°C +/- 2°C (la durée de l’essai peut être augment ée de deux semaines si la dégradation ade toute évidence commencé, mais qu’elle n’a pas atteint la phase de plateau).Le CO2 formé pendant la dégradation microbienne est piégé dans des récipients externescontenant une solution d’hydroxyde de baryum et est déterminé par dosage titrimétrique.Le CO2 libéré est comparé à la quantité théoriquement (CO2 Th) dégagée et exprimé enpourcentage.

Schéma du dispositif expérimental :

Le CO2 piégé est dosé dans le flacon contenant la solution d’hydroxyde de baryum le plusproche du mélange d’essai. Le flacon absorbeur restant est décalé à sa place et remplacépar un flacon contenant de la solution d’hydroxyde de baryum fraîchement préparée.Le volume de solution d’hydroxyde de baryum contenu dans les flacons absorbeur est de250 à 300 mL suivant l’intervalle de temps effectif entre deux mesures.Au 28ème jour, environ 1 mL d’acide chlorhydrique concentré est ajouté dans chaquerécipient d’essai, afin de décomposer les carbonates et les bicarbonates : les valeursobtenues sont référencées comme jour d’incubation « 28bis ».

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Débitmètre

Flaconlaveur de

NaOH 10N

Mélange

Flaconlaveur deBa(OH)2

4g/l

Flaconlaveur deBa(OH)2

4g/l

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II.5 Configuration des tests standards

Une série analytique comprend :- Témoin négatif (milieu minéral + inoculum) : 2 répliques.- Témoin positif (milieu minéral + substance de référence + inoculum) : 1 réplique.- Produit d’essai (milieu minéral + produit d’essai + inoculum) : 2 répliques.- Contrôle de toxicité*: 1 réplique.* Contrôle de toxicité d’un produit d’essai : milieu minéral + mélange de la substance deréférence et du produit d’essai aux concentrations testées + inoculum.

II.6 Règles de calculs

Correction du CO2 cumulé : Les calculs de biodégradation sont effectués après soustraction de la moyenne de des résultats de CO2 cumulé des témoins négatifs (représentant l’activité endogène de l’inoculum).Résultat de biodégradation pour les produits à tester : Pour un produit donné, le résultat de biodégradation aux différents temps de mesure correspond à la moyenne des valeurs de biodégradation obtenues.

II.7 Inoculum bactérien

Origine : par défaut, boues activées provenant de la station d’épuration de Maxéville (France) traitant principalement des eaux usées domestiques (98 %), ou provenant de la station d’épuration de Toul (France). Les boues activées sont utilisées dans les 24 heures après prélèvement. La concentration en matières sèches dans les flacons d’essai contenant de l’inoculum doit être inférieure ou égale à 30 mg/L.

II.8 Milieu minéral

Chaque solution est préparée dans de l’eau ultra-pure.Solution mère A :Dihydrogénophosphate de potassium, KH2PO4 : 8,50 gHydrogénophosphate de potassium, K2HPO4 : 21,75 gHydrogénophosphate de sodium dihydraté, Na2HPO4, 2H2O : 33,40 gChlorure d’ammonium, NH4Cl : 0,50 gqsp 1 litre ; pH égal à 7,4.Solution mère B :Chlorure de calcium anhydre, CaCl2 : 27,50 gou chlorure de calcium dihydraté, CaCl2, 2H2O : 36,40 gqsp 1 litre.Solution mère C :Sulfate de magnésium heptahydraté, MgSO4, 7H2O : 22,50 gqsp 1 litre.

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Solution mère D (à préparer extemporanément) :Chlorure de fer III hexahydraté, FeCl3, 6H2O : 0,25 gqsp 1 litre.Préparation du milieu minéral :Mélanger 10 mL de la solution A avec 800 mL d’eau ultra-pure, ajouter ensuite 1 mL dessolutions B, C et D et compléter le volume à 1 litre.

II.9 Substance de référence

Acétate de sodium.

II.10 Critères de validité du test

Selon la ligne directrice OCDE 301B :- Le pourcentage médian de dégradation de la substance de référence a atteint au moins60 % en 14 jours.- Le dégagement total de CO2 médian dans l'essai à blanc (témoin négatif) contenantl'inoculum n’excède normalement pas 40 mg/L de milieu à la fin de l'essai et ne doit pasdépasser 70 mg/L. Si on obtient des valeurs supérieures à 70 mg/L de CO2, on doitexaminer les résultats et les méthodes expérimentales avec un esprit critique.- Si, lors d'un essai de toxicité mettant en oeuvre à la fois le produit à tester et lasubstance de référence, la dégradation est inférieure à 25 % après 14 jours, on peutestimer que la substance d'essai a un effet inhibiteur.

II.11 Protocole

II.11.1 Préparation de l’inoculum bactérien Le jour du prélèvement : lavage de la boue par trois centrifugations successives (1100 gpendant 10 minutes) après remise en suspension du culot dans le milieu minéral et filtrationsur tamis inox de porosité égale à 100 μm.Après traitement, réaliser une mesure de matières en suspension.La concentration en matières sèches dans les flacons d’essai contenant de l’inoculum doitêtre inférieure ou égale à 30 mg/L.

II.11.2 Préparation des mélanges d’essai- Dans une fiole en verre d’un litre, dissoudre x mg du produit correspondant à laconcentration en carbone organique testée dans 900 mL de milieu minéral- Ajouter le volume d’inoculum nécessaire pour obtenir une concentration en matièresen suspension inférieure ou égale à 30 mg/L- Ajuster au trait de jauge avec du milieu minéral- Distribuer dans les flacons correspondant en agitant régulièrement la fiole.

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ESSAI CURATIF EN TIR DIRECT SUR LES INSECTES BLATTES

rep 1 rep 2 rep 3 M V %KD M V %KD M V %KD moyenne5 min 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,015 min 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,01 h 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,04 h 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,024 h 25 0 100,0 25 0 100,0 25 0 100,0 100,0KT 100 < 5 minutesMortalité 24H = 100%

EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) A T0 délai d'exposition sur les surfaces traitées 20 min 4 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 2 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 3 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 4 25 0 100 25 0 100 25 0 100 25 0 100 moy 100 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0non traité 2 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 3 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 4 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 moy 0 moy 0 moy 0 moy 0

EFFET RESIDUEL SUR LES SURFACES (EFFET PREVENTIF) A T0 + 2mois délai d'exposition sur les surfaces traitées 4 h 6 h 24 h 48 hfacteur rép. M V %M M V %M M V %M M V %MINSECTI-BIO 1 17 8 68 25 0 100 25 0 100 25 0 100 2 15 10 60 25 0 100 25 0 100 25 0 100 3 19 6 76 25 0 100 25 0 100 25 0 100 4 14 11 56 25 0 100 25 0 100 25 0 100 moy 65 moy 100 moy 100 moy 100témoin 1 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0non traité 2 0 25 0 0 25 0 0 25 0 1 24 4 3 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 4 0 25 0 0 25 0 0 25 0 0 25 0 moy 0 moy 0 moy 0 moy 1

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III. DATES DE REALISATION

Essai de biodégradabilité facile, méthode OCDE 301 B : 30 Novembre 2011.

IV. INOCULUM BACTERIEN

Origine : boues activées provenant de la station d’épuration de Maxéville (France) traitantprincipalement des eaux usées domestiques (98 %).Date de prélèvement : 29 Novembre 2011.

V. RESULTATS V.1 Analyse de l’Echantillon

Teneur en carbone organique dissous (COD) d’une solution à 100 mg/L : 1,51 mg/L.Concentration initiale en carbone organique de produit d’essai dans le milieu : 10,0 mg/L.Concentration initiale de produit d’essai dans le milieu : 662,3 mg/L.

V.2 Valeur des dégagements théoriques en CO2 (CO2Th)

Pour le volume testé (1 litre), les CO2Th sont respectivement égaux à :- 36,7 mg pour les flacons d’essai « produit d’essai » (premier essai de biodégradabilité)et « substance de référence » pour une concentration en carbone organique de 10 mg/L- 73,3 mg pour le flacon d’essai « contrôle de toxicité » pour une concentration en carboneorganique de 20 mg/L.

V.3 Essai de biodégradabilité facile (OCDE 301 B)

V.3.1 Suivie du dégagement du CO2 cumulé : lot d’essai témoins négatifs

Nombre de jours 1 2 5 7 9 12 14 19 22 28 28bisTémoin Neg1 0.7 1.6 2.9 5.8 6.6 9.1 9.7 11.3 11.7 13.5 14.8Témoin Neg2 0.2 0.9 2.4 6.8 8.3 9.2 10.3 10.5 11.0 12.3 14.3Moyenne 0.5 1.2 2.7 6.3 7.5 9.1 10.0 10.9 11.3 12.9 14.5

Critères de validité définis par la ligne directrice OCDE 301 B :Le dégagement total de CO2 médian dans l'essai à blanc contenant l'inoculum (témoinnégatif) n’excède pas 40 mg pour un litre de milieu à la fin de l'essai : 14,5 mg.

L’essai est donc considéré comme valide.

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V.3.2 Suivie du dégagement du CO2 cumulé : témoin positif

Nombre de jours 1 2 5 7 9 12 14 19 22 28 28bisTémoin Positif 13.0 21.3 28.4 33.2 36.3 39.4 42.5 45.6 47.1 48.6 50.8

V.3.3 Suivie du dégagement du CO2 cumulé : lot d’essai INSECTI-BIO PAE

Nombre de jours 1 2 5 7 9 12 14 19 22 28 28bisINSECTI-BIO PAE1 1.9 6.3 12.5 19.3 25.0 33.1 39.7 44.4 45.7 47.7 49.2INSECTI-BIO PAE2 1.5 5.9 10.7 16.9 24.8 31.9 38.0 43.7 45.5 47.5 49.5Moyenne 1.7 6.1 11.6 18.1 24.9 32.5 38.9 44.1 45.6 47.6 49.3

V.3.4 Suivie du dégagement du CO2 cumulé : contrôle de toxicité du

produit INSECTI-BIO PAENombre de jours 1 2 5 7 9 12 14 19 22 28 28bisContrôle toxicité 8.1 16.9 28.2 38.5 45.3 54.1 62.5 70.4 74.1 77.9 82.9

V.3.5 Suivi de la dégradation par rapport aux CO2Th : témoin positif

Nombre de jours 1 2 5 7 9 12 14 19 22 28 28bisTémoin Positif 34% 55% 70% 73% 79% 82% 88% 94% 97% 97% 99%Critères de validité définis par la ligne directrice OCDE 301 B :Le pourcentage de dégradation de la substance de référence a atteint au moins 60 % en 14 jours : 88 %.L’essai est donc considéré comme valide.

V.3.6 Suivi de la dégradation par rapport aux CO2Th : lot d’essai INSECTI-BIO PAE

Nombre de jours 1 2 5 7 9 12 14 19 22 28 28bisINSECTI-BIO PAE1 4% 14% 27% 35% 48% 65% 81% 91% 94% 95% 94%INSECTI-BIO PAE2 3% 13% 22% 29% 47% 62% 76% 89% 93% 94% 95%moyenne 3% 13% 24% 32% 47% 64% 79% 90% 93% 95% 95%

V.3.7 Suivi de la dégradation par rapport aux CO2Th : contrôle de toxicité du produit INSECTIBIO PAE

Nombre de jours 1 2 5 7 9 12 14 19 22 28 28bisContrôle toxicité 10% 21% 35% 44% 52% 61% 72% 81% 86% 89% 93%

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V.3.8 Courbes de dégradation

Pou

rcen

tage

s de

dég

rada

tion

Pourcentagede dégradation

au bout de 28 jours

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28

100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%

99%

Pou

rcen

tage

s de

dég

rada

tion

Pourcentagede dégradation

au bout de 28 jours

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28

100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%

95%

Pou

rcen

tage

s de

dég

rada

tion

Pourcentagede dégradation

au bout de 28 jours

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28

100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%

93%

Témoin positif

INSECTI-BIO PAE

Contrôle toxicité

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V.4 Validité de l’essai

Etant donné que :1. Le pourcentage de biodégradation de la substance de référence (acétate de sodium)est supérieur à 60 % (88 %) au quatorzième jour.2. La quantité de CO2 dégagé par le témoin à blanc est négligeable : 14,5 mg/L à la finde l’essai (valeur à ne pas dépasser : 40).3. Pour l’essai de toxicité mettant en oeuvre à la fois le produit à tester et la substancede référence, la dégradation est supérieure à 25 % (72 %) après 14 jours : le produitINSECTI-BIO PAE n’a pas d’effet inhibiteur vis-à-vis de l’inoculum bactérien.L’essai est considéré comme valide.

VI. CONCLUSION

Dans les conditions expérimentales du test :L’échantillon « INSECTI-BIO PAE » est considéré comme facilement biodégradable :- le niveau de seuil de diminution du CO2 de 60 % étant acquis dans un intervalle de 10 jours après que 10 % de biodégradabilité soit atteint (64 % au 12ème jour de test).

L’échantillon « INSECTI-BIO PAE » est biodégradable à 95 % après 28 jours de test.

Pou

rcen

tage

s de

dég

rada

tion

Biodégradation égale à 95%

après 28 jours

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28

100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%

95%INSECTI-BIO PAE

Valeur seuil de biodégradabilité facile

Intervallede 10 jours

Phase delatence