aucun titre de diapositive - medecine.ups-tlse.fr · et du calcul de l’iam 3 anomalies présentes...

Dr F EUSTACHE, Bondy Hôpital Jean Verdier

Spermogramme – Spermocytogramme

Rappels contexte de l’analyse de routine du sperme

14 % des couples “en âge de procréer” consultent pour infécondité

3 % présentent une stérilité

38 %

8 %34 %

20 %+

+

-

-

Origine des facteurs en cause

(sur 1318 couples consultant)

Thonneau et al., 1991

Infécondité

Psycho-Social Environnement

Génétique

Paraclinique

Explorations

Spermogramme-spermocytogramme

Clinique

Explorations partenaire

Rappel des définitions

CONCEPT DE RESULTAT

avoir ou pas

fécond infécond

Mesure :

grossesse, enfant

CONCEPT D’APTITUDE

capacité d’avoir

fertile infertile

Mesure :

fécondabilité

Délai nécessaire pour concevoir , DNC = nombre de cycles

(mois) nécessaires pour parvenir à une grossesse après tout

arrêt de “précautions” anticonceptionnelles

Fécondabilité, f = 1/DNC

Fécondabilité moyenne dans les pays dévelopés

0,20-0,25 (en moyenne, 4-5 cycles pour concevoir)

Rappel des définitions

L’hypofertilité masculine se présente initialement comme une

infécondité du couple

Quelle est la part respective des facteurs féminins et masculins

contribuant à cette infécondité ?

Les 2 partenaires doivent être explorés : l’approche est rationnelle et

progressive

Le spermogramme-spermocytogramme est avec le test post-coïtal

l’un des 2 examens de base s’imposant

QUAND ?

Après X années de rapports sexuels normaux et réguliers sans

aucune protection

Facteur “thérapeutique”

60 % des couples concoivent à 6 mois,

90 % en 18 mois

Rôle du facteur temps

Facteur de “sélection des inféconds”

Après 18 mois d’infécondité,

la fécondabilité est estimée à 0,05

Difficultés/contraintes de

l’analyse de routine du sperme

Prescription

Prélévement

Transport

Conservation

Traitement

Validation

Présentation

Transmission

Interprétation

Pré-

analytique

Analytique

Post-

analytique

Analyse

La vaste majorité des procédures

détaillées décrites dans le manuel

de l’OMS est

accessible

en français

dans le cahier

bioforma

« Exploration

de la fonction

de reproduction/

versant masculin »

Méthodes reconnues

(A)

Méthodes reconnues,

adaptées ou

développées (B)

Méthode automatisée de

type quantitatif

Cytométrie de flux après

marquage

Etude de la qualité du

noyau du

spermatozoïde

Échantillon(s) biologique(s)

d'origine humaine :

sperme (*)

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)

Méthode manuelle de type

qualitatif et quantitatif

Identification par

microscopie optique

après coloration (bleu

d’aniline,

fragmentation sur

lame, …)


noyau du

spermatozoïde


d'origine humaine :

sperme (*)

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)



Examen microscopique à

fort grossissement

Etude morphologique des

spermatozoïdes

mobiles


d'origine humaine :

sperme (*)

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)


type qualitatif et

quantitatif

Coloration et examen

microscopique

Etude morphologique et

identification des

cellules

(spermocytogramme, …)


d'origine humaine :

sperme, urine (*)

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)



Coloration (Papanicolaou,

Eosine-Nigrosine,

Harris-Schorr, …) et

examen microscopique


identification des

cellules (vitalité,

cellules rondes,

spermocytogramme,

…)


d'origine humaine :

sperme, urine, échantillon

épididymaire et

testiculaire (*)

Test de migration-

survie

Préparation en vue

d'AMP

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)


type quantitatif

Cytométrie de flux, avec ou

sans traitement

(centrifugation,

gradient,…)

sur échantillon frais ou après

décongélation

Détermination de la

concentration des

spermatozoïdes


d'origine humaine :

sperme, urine (*)

Spermogramme

Test de migration-

survie

Préparation en vue

d'AMP

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)


type qualitatif et

quantitatif

Examen microscopique,

avec ou sans

traitement

(centrifugation,

gradient,…)


décongélation


concentration des

spermatozoïdes,

mobilité et/ou

mouvement (*)


d'origine humaine :

sperme, urine (*)

Spermogramme

Test de migration-

survie

Préparation en vue

d'AMP

Test de Hühner/Test

post-coïtal

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)



Examen direct macro- et

microscopique, avec

ou sans traitement

(centrifugation,

gradient,…)


décongélation

Recherche et

identification des

spermatozoïdes,

volume, pH,

viscosité,

agglutination,

mobilité,

concentration,

cellules rondes (*)


d'origine humaine :


épididymaire et

testiculaire, glaire

cervicale (*)

Remarques

(Limitations,

paramètres

critiques, …)

Référence de la

méthodePrincipe de la méthode

Nature de

l’examen/analyse

Nature de l’échantillon

biologique

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)


type quantitatif

Cytométrie de flux après

marquage


noyau du

spermatozoïde


d'origine humaine :

sperme (*)

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)



Identification par

microscopie optique

après coloration (bleu

d’aniline,

fragmentation sur

lame, …)


noyau du

spermatozoïde


d'origine humaine :

sperme (*)

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)



Examen microscopique à

fort grossissement

Etude morphologique des

spermatozoïdes

mobiles


d'origine humaine :

sperme (*)

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)


type qualitatif et

quantitatif

Coloration et examen

microscopique


identification des

cellules

(spermocytogramme, …)


d'origine humaine :

sperme, urine (*)

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)



Coloration (Papanicolaou,

Eosine-Nigrosine,

Harris-Schorr, …) et

examen microscopique


identification des

cellules (vitalité,

cellules rondes,

spermocytogramme,

…)


d'origine humaine :


épididymaire et

testiculaire (*)

Test de migration-

survie

Préparation en vue

d'AMP

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)


type quantitatif

Cytométrie de flux, avec ou

sans traitement

(centrifugation,

gradient,…)


décongélation


concentration des

spermatozoïdes


d'origine humaine :

sperme, urine (*)

Spermogramme

Test de migration-

survie

Préparation en vue

d'AMP

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)


type qualitatif et

quantitatif

Examen microscopique,

avec ou sans

traitement

(centrifugation,

gradient,…)


décongélation


concentration des

spermatozoïdes,

mobilité et/ou

mouvement (*)


d'origine humaine :

sperme, urine (*)

Spermogramme

Test de migration-

survie

Préparation en vue

d'AMP

Test de Hühner/Test

post-coïtal

Méthodes reconnues

(A)


adaptées ou

développées (B)



Examen direct macro- et

microscopique, avec

ou sans traitement

(centrifugation,

gradient,…)


décongélation

Recherche et

identification des

spermatozoïdes,

volume, pH,

viscosité,

agglutination,

mobilité,

concentration,

cellules rondes (*)


d'origine humaine :


épididymaire et

testiculaire, glaire

cervicale (*)

Remarques

(Limitations,

paramètres

critiques, …)

Référence de la

méthodePrincipe de la méthode

Nature de

l’examen/analyse

Nature de l’échantillon

biologique

PRE-ANALYTIQUE

Prescription

Fluctuations

du nombre total de

spermatozoïdes par

éjaculat chez un

même individu

(n=5, 1 recueil/1-2mois)

Un spermogramme ?

… des spermogrammes !

Prélèvement

Les instructions

pour le prélèvement

sont affichées dans la pièce

de recueil et reprises

verbalement par le personnel

installant le patient

dans la pièce de recueil

Prélèvement

Transport?

ANALYTIQUE

Caractéristiques du

sperme évaluées dans

l’analyse du sperme ou

spermogramme-

spermocytogramme

1. Caractéristiques

physiques


spermatiques

3. Autres cellules

Etape importante +++

AGGLUTINATS

AGREGATS

Evaluation de la mobilité

Hétérogénéité du mouvement des

spermatozoïdes humains: méthode de l’OMS

OMS OMS

1999 2010

(37°C) (ambiant

ou 37°C)

a=10

PR=24

b=14

c=9 NP=9

d=13 IM=13

Optiques

simples

Optiques de

contraste de phase

… dans un hémocytomètre

L’OMS recommande la

Cellule de Neubauer modifiée

Règle pour compter :

<10 sp. par grand carré compte sur 25 grands carrés

10-40 sp. par grand carré compte sur 10 grands carrés

>40 sp. par grand carré compte sur 5 grands carrés

Mesure de la concentration de spermatozoïdes

Caractéristiques de la chambre de la cellule

de Neubauer « improved » : Carré central

de la chambre comportant 25 grands carrés,

chacun composé de 16 petits carrés

Evaluation de la morphologie

des spermatozoïdes

« En routine la normalité morphologique des

spermatozoïdes doit être évaluée par une méthode de

classification basée sur des critères stricts (dixit WHO)

Le % de spermatozoïdes morphologiquement normaux

est calculé à partir de l ’évaluation de 200 spermatozoïdes

Dans certains cas, il est souhaitable de recenser le détail des

atypies morphologiques pour calculer l’Index d’Anomalies

Multiples » WHO (1999-2010)

Evaluation de la morphologie des

spermatozoïdes en France

La méthode de David modifiée a été adoptée en France par la plupart des

laboratoires publics et privés

En plus de l ’évaluation du % de spermatozoïdes morphologiquement

normaux

elle permet:

le classement de 7 anomalies de la tête

3 anomalies de la pièce intermédiaire

5 anomalies de la pièce principale

le calcul de l’index d'anomalies multiples (IAM)

Principe de la classification de David

et du calcul de l’IAM

3 anomalies

présentes

3 anomalies

recenséesNombre total d'anomalies T = 103

1,56= IAM T / Nb de spz anormaux :

03320

2

03200

81

34

2653

Piè

ce

Piè

ce

pri

nci

pal

e in

term

édia

ire

Têt

e

Multiple

Morphologiquement normal

Anomalie du postacrosome

AllongéeAmincie

MicrocéphaleMacrocéphale

Reste cytoplasmique

AmincieAnguléeAbsenteCourte

EnrouléeMultiple

Acrosome anormal ou absent

Irréguliere

Formation initiale et continue + CQ:Une nécessité en Biologie polyvalente...

Un impératif absolu en BDR !

en Biologie de la Reproduction tests

principalement au microscope

→ nature subjective

L’étape analytique

en Biologie polyvalente Automates

PRÉ-REQUIS AUX CIQ (ET EEQ)

Nécessité impérieuse d’une formation théorique et pratique initiale

(BDR non enseignée en école / spécificité du domaine / nature

subjective des analyses au microscope)

d’après Mortimer

EVALUATION DE 100 SPERMATOZOIDES PAR

62 TECHNICIENS : VARIABILITE ET INFLUENCE

DU SUIVI DES BONNES PRATIQUES

Eustache et

Auger, 2003

Différence (%) par rapport

aux données de référence

p<0,01

Participants suivant

les recommandations

Participants ne suivant

pas les recommandations

p<0,05

p<0,01

p<0,01

- 20 -10 0 10 20 30 40

ROLE DE L'EXPERIENCE CHEZ 12 TECHNICIENS:

EXEMPLE DE LA CONCENTRATION

VARIABILITE INTRAINDIVIDUELLE CV

11 %

31 %

4/12 4/12

2/12 2/12

Exact et Précis

Exact et Imprécisou Précis et Inexact

Inexact etImprécis

Pratique quotidienne et > 3 ans

Pratique récenteet/ou épisodique

VARIABILITE INTERINDIVIDUELLE

Auger et al, 2000

Pratique quotidienne et > 3 ans

Pratique récenteet/ou épisodique

Les résultats de l’analyse de routine du sperme

et leur interprétation

Caractéristiques du

sperme évaluées dans

l’analyse du sperme ou

spermogramme-

spermocytogramme


physiques


spermatiques

3. Autres cellules

Eléments d’orientation

du compte rendu de

l’analyse de sperme


spermatiques

Efficacité de la spermatogénèse

Nombre total

Qualité de la spermiogénèse

Profil morphologique

Maturation épididymaire

Mobilité/vitalité

Nature du micro-environnement

du tractus génital

Mobilité/vitalité

Eléments d’orientation

du compte rendu de

l’analyse de sperme

3. Autres cellules

Processus « toxique » au

niveau de la cohésion des

cellules de l’épithélium

séminifère (=exfoliation des

cellules germinales plus ou

moins profondes)

Cellules de la lignée germinale

(possible) inflammation /

infection du tractus et/ou des

glandes associées

Cellules de la lignée blanche

notamment des polynucléaires

Orientation pronostique*

(plusieurs examens si

nécessaire)

Elle se fonde sur:

La durée d’infécondité

Le reste du bilan dans le

couple

Les valeurs de référence

disponibles

* Elle présente

une certaine

relativité

Délai d’abstinence sexuelle (n’affecte pas la morphologie)

Ensemble des caractéristiques( Nb total de spz. Mobiles / normaux)

Défauts avec «résonnance» fonctionnelle (vitalité, acrosome,…)

Répéter après 3 mois en cas d’«anomalies» *

Accorder une certaine relativité aux seuils proposés et éviter les termes oligo, …

Interprétation

* variabilité intra-individuelle et modulation «environnementale»

Les incertitudes de l’analyse de routine du sperme

PRÉ-REQUIS A L’INTERPRETATION DES RESULTATS DE L’EXAMEN DE SPERME (AUSSI TMS, QUALITE PAILLETTE, etc...)

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95100

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95100

Inte

rva

lle d

e c

on

fia

nce

à 9

5%

0

5

10

15

20

25

30

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40

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50

55

60

65

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85

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95

100

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

90

95

100

Intervalles de confiance à 95%pour un % trouvé à partir d'un échantillonage de 200

Résultats :

Tech 1: 15%

Tech 2: 22%

Les intervalles liés à l’incertitude

de mesure pour les résultats

15% et 22% se recouvrent :

Les résultats ne doivent pas être

considérés comme différent//////

EXEMPLE DE LA RELATIVITE D’UN RESULTAT DE TMS

Estimation du nombre total

de spermatozoïdes mobiles

progressifs (x106)

selectionables dans

l’éjaculat entier

Le nombre de spermatozoïdes mobiles

trouvés est “n’importe quelle valeur” dans

un intervalle large de plusieurs millions de

spermatozoïdes mobiles!

IGNORER LES MARGES D’INCERTITUDE

PEUT NOTABLEMENT NUIRE A

L’INTERPRETATION AUSSI BIEN POUR LE

DIAGNOSTIC QUE POUR LA POSSIBLE

STRATEGIE EN AMP

I sur l’estimation de la mobilité dans l’echantillon

sélectionné

I sur mesure volume fraction/ejaculat

I sur estimation concentration dans le

sperme natif

extrapolation àl’ejaculat entier

+

+

+

Incertitude (I) globale:

L’interprétation de l’analyse de routine du sperme:

quelles valeurs de référence?

Qu’est ce qu’une morphologie normale ?

Selon l’OMS 99 : 15 % de spermatozoïdes normaux

Selon cette étude :

40% (critères de David)

Selon cette étude :

19% (critères stricts)

et 39% (critères de David)

Probabilité d ’obtention d’une grossesse

en 1 an sans aucun traitement

(population générale, volontaires)

Slama et al, 2001

0 20 40 60 80

Critères de David

% grossesses obtenues sans aucun

traitement 1 an et 3 ans après

un 1er examen de sperme

(bilan d’une infertilité du couple)

Jouannet et al, 198880

60

40

20

0<20 30 40 50 60 >60

% spermatozoïdes normaux

3

2

1

00 10 20 30 40 50

Critères stricts

Hum Reprod Update 2010 May-Jun;16:231-45

Les limites des valeurs de référence de l’OMS:

Exemple de la concentration

Probabilté d’obtention d’une grossesse dans le cycle

en fonction de la concentration

Bonde et al., 1998

Infécondité

Psycho-Social Environnement

Génétique

Paraclinique

Explorations

Spermogramme-spermocytogramme

Clinique

Explorations partenaire

Délai d'infécondité

Fertilité antérieure : couple/homme/femme

Sexualité

Mode de vie / profession

Antécédents médicaux généraux

Antécédents génito-urinaires

Fertilité dans la famille

Traitements médicaux suivis

Examens biologiques antérieurs : sperme, autres

Questionnaire partenaire féminin

Examen clinique uro-génital

Bilan pour prise en charge ultérieure

L’EXPLORATION DE L’HOMME DOIT COMPORTER

UN INTERROGATOIRE ET UN EXAMEN CLINIQUE :

aucun titre de diapositive - medecine.ups-tlse.fr · et du calcul de l’iam 3 anomalies présentes...

Documents