application des techniques « in situ » (immuno-histo- chimie et his) dans la prise en charge dune...
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APPLICATION DES TECHNIQUES « IN SITU » (IMMUNO-HISTO-CHIMIE ET HIS) DANS LA PRISE EN CHARGE D’UNE TUMEUR DU SEIN
Dr Olivier RENAUDService d’anatomie-pathologiqueCHU POITIERS
Approche « théragnostique »
● Intérêt pronostique● Décision thérapeutique● Immuno-histo-chimie
Méthodes de détection :
● Immunohistochimie● Hybridation in situ
– FISH– CISH
● RT PCR et Elisa
Récepteurs hormonaux :
semi-quantitative– % de cellules– intensité du marquage
● récepteurs oestro et progestéroniques● marquage nucléaire
réc. œstrogène x 400
HER2 : définition
● Récepteur d'un facteur de croissance● Human Epidermal growth factor Receptor-2● Glyco-protéine transmembranaire HER2● Famille des erbB tyrosine kinase ● Proto-oncogène c-erbB2 ou HER2-neu code
pour le gène 185Her2● Chromosome 17q21
● Intervient dans la régulation de la croissance, de la division et de la différenciation cellulaire
● Surexpression induit le maintien de son activation et la persistance des signaux vers le noyau pouvant entraîner dans certains cas une transformation maligne
● Surexpression dans 20 à 30 % des cancers du sein
● Facteur de risque● Traitement par trastuzumab
(Herceptin)
•chaque récepteur HER existe sous forme de monomère en équilibre avec des dimères qui sont stabilisés par un ligand.
•HER2 peut former des complexes soit avec lui-même (homodimères HER2/HER2), soit avec d'autres membres de la famille HER (hétérodimères en général HER2/HER3).
3) une partie intracellulaire à activité tyrosine kinase qui active le signal de transduction du cytoplasme vers le noyau.
La protéine HER2 possède 3 domaines :
1) un site extracellulaire de fixation du ligand qui reçoit les signaux de l'extérieur
2) un petit segment lipophile transmembranaire qui transmet les informations à travers la membrane
Application aux cancers du sein
Application aux cancers du sein
Application aux cancers du sein
Les cellules normales possèdent 2 copies du gène HER2 et expriment un taux normalement bas de récepteur HER2 à leur surface.
La surexpression de HER2 peut se faire par plusieurs mécanismes
Application aux cancers du sein
Étude in vitro :
Transfection de gène sur culture cellulaire
Application aux cancers du sein
Application aux cancers du sein
0 : Absence de marquage ou marquage membranaire < 10%
1+ : Marquage faible et partiel > 10% des cellules
2+ : Marquage membranaire faible ou modéré mais complet > 10% des cellules
3+ : Marquage membranaire fort et complet > 10% des cellules
Problème des scores 2+ :
● Nécessité de savoir s'il y a amplification génique ou pas
● Traitement uniquement des cas amplifiés● 2 gènes par cellule, amplification à partir de 6● Méthode FISH ou CISH● Possibilité de faire une recherche sur blocs paraffinés
même anciens (sauf fixation par le Bouin)● Détection du centromère 17 dans le même temps par
FISH
2+
HER2 : Méthodes actuelles
IHC
visualisation des cellules portant le signal
Approches morphologiques
FISH CISH
Approches sans contrôle morphologique
Taux circulant d’ECDPCR
FISH
• Coupe fixée (pas Bouin !)• Différents kits
– Pathvysion (2 sondes)– Dako (2 sondes)– Inform® (1 sonde)
• Microscope à fluorescence
• Signal avec le temps
Pré-traitement
Hybridation
Interprétation
Les amplifications
Augmentation du nombre de copies d’un gène sur le chromosome
ANEUPLOÏDIE
≠
Cas N°1 : Amplification HER2
Cas N°2 : Polysomie
Technique CISH
HER2 gene • Peut remplacer la FISH (concordante)
• Plateau technique plus simple
• Microscope optique• Conservation des lames• Kits commerciaux
• Zytovision-Clinisciences• Zymed (Invitrogen)
• Accord européen en octobre 2005
Exemples de CISH
Absence d’amplification
Amplification
Utiliser un contrôle positif à
chaque manip+++
>50% cellules tumorales (Zymed)
Repérage au x20 Lecture au x40
Corrélation/biologie moléculaire
● Sous-type luminal● Sous-type HER2+● Sous-type basal-like● Sous-type normal breast like
Perou CM, Sorlie T, Eisen MB et al. Molecular portraits of human breast tumours. Nature 2000 ; 406 (6797) : 747-52
Sous-type luminal
● A et B● Réceptivité hormonale forte● CK8/18/19 et GATA● RE alpha – exprimé dans le sous-type B● A = monothérapie antihormonale● B = + chimio
Sous-type HER2+
● Associé à Ki 67 élevé● Traitement par Herceptin
Sous-type basal-like
● RE/RP/HER2 négatifs● Positivité de CK5/6 et EGFR● Souvent mutation de BRCA1● Englobe carcinomes médullaires et carcinomes
métaplasiques● Traitement = taxanes ?
Limites de cette classification
● Reste des tumeurs inclassables (basal-like CK5/6 et EGFR -)
● Médullaire : bon pronostic alors que basal-like● Sous-type luminal ne distingue pas les RP● (RP- : anti-aromatase)
Nouvelles recherches
● Cellules cancéreuses circulantes– sang– moëlle osseuse
● Urokinase type activateur du plasminogène (uPA) et son inhibiteur (PAI1)
Nouvelles méthodes
● Outils « omics »– génomique– protéomique
● Nanotechnologies
Conclusion :
● Méthodes d’intérêt pronostique et thérapeutique.● En pratique courante : Rec Horm et HER2 ● HER2
– surexpression facteur de mauvais pronostic– permet traitement par Herceptin– toxicité d'Herceptin et coût très élevé du traitement imposent
une méthode fiable de détection– devant un score 2+, nécessité de rechercher une
amplification génique (FISH ou CISH)– sont traités les scores 3+ et 2+ amplifiés