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ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIRE

Tél. : 33 (0)4 70 03 88 55 I Hotline : 33 (0)4 70 03 73 06 I E-mail : [email protected] I Fax : 33 (0)4 70 03 82 60 G.46

Coloration des cellules I Traceurs cellulaires

Coloration des cellules fixées

Cell Explorer™ pour cellules mortesLes Cell Explorer™ sont un ensemble d'outils pour le marquage de cellules pour les analyses en microscopie à fluorescence des fonctions cellulaires. Le marquage efficace de cellules fournit un procédé puissant pour étudier les événements cellulaires dans un contexte spatial et temporel. Les fluorochromes ont été sélectionnés pour leur photostabilité élevée.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Blue 353 / 442 22600 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Blue Ex.405 410 / 450 22500 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Green Ex.405 408 / 512 22501 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Green 498 / 521 22601 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Orange Ex.405 398 / 550 22502 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Orange 547 / 573 22602 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Red 583 / 603 22603 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Red-FCM 523 / 617 22599 200 testsCell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit, Deep Red 649 / 660 22604 200 tests

Coloration des cellules vivantes

CalceinLes calcéines sont des sondes fluorescentes pour le marquage du cytoplasme des cellules vivantes. Les formes AM sont perméables à la cellulaire. Une étape de lavage peut être nécessaire pour réduire au minimum le bruit de fond.

Cell Explorer™ pour cellules vivantesLes kits Cell Explorer™ pour cellules vivantes sont un ensemble d'outils pour le marquage de cellules pour l'étude des fonctions cellulaires en microscopie à fluorescence. Le marquage est réalisé de manière uniforme dans les cellules vivantes.

Dextrans fluorescents, fixablesLes dextrans conjugués CF™ sont utilisés comme sonde fluorescente pour étudier des pro-cessus cellulaires tels que la perméabilité cellulaire, la phagocytose, l'endocytose ou pour étudier les mécanismes d'administration biomoléculaire. Les colorants CF™ sont des colo-rants fluorescents supérieures avec une luminosité exceptionnelle et photostabilité remar-quable.

CFDA-SELe CFDA-SE (aussi noté CFSE) est une sonde perméable au membrane cellulaire. Elle s'accumule facilement à l'intérieur des cellules viables où elle se fixe de façon covalente aux protéines intracellulaires. Les cellules marquées peuvent être suivies sur plusieurs semaines in vivo.

Par ailleurs, des colorants de noyaux peuvent marquer les cellules vivantes. Ils sont décrits dans la section Sondes nucléaires | Colorants des ADN & ARN | Colorants des cellules vivantes

Cellules vivantes marquées par le Cell Explorer Red.

Cellules CPA marquées au CytoCalcein™ Violet 500.

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ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREAutres structures cellulaires I Traceurs cellulaires

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCalcein AM, Blue 360 / 445 FP-95397A 1 mgCalcein Blue 360 / 445 FP-11141B 25 mgCalcein AM 494 / 517 FP-895514 1 mg

FP-895515 20 x 50 µgCalcein AM, UltraPure Grade 494 / 517 FP-HG6250 1 mgCalcein AM, 1 mg/ml in dry DMSO 494 / 517 FP-855422 1 mlCalcein AM, 4mM in DMSO 494 / 517 FP-FI9820 100 µlCalcein 494 / 517 FP-466251 100 mgCalcein Orange AM 525 / 550 FP-ZE7840 1 mgCalcein Orange 525 / 550 FP-UVC280 1 mgCalcein Red AM 560 / 574 FP-UVC460 1 mgCalcein Red 560 / 574 FP-UVC470 1 mgCalcein Deep Red 646 / 659 FP-ZE7850 1 mgCytoCalcein Violet 450 408 / 450 22012 1 mgCytoCalcein Violet 500 410 / 500 22013 1 mgCell Explorer™ Fixable Live Cell Tracking Kit, Green 495 / 515 22621 200 testsCell Explorer™ Fixable Live Cell Tracking Kit, Red 575 / 600 22625 200 testsCell Explorer™ Live Cell Labeling Kit, Blue 360 / 445 22606 200 testsCell Explorer™ Live Cell Tracking Kit, Blue 403 / 445 22620 200 testsCell Explorer™ Live Cell Labeling Kit, Blue Ex.405 410 / 450 22614 200 testsCell Explorer™ Live Cell Labeling Kit, Green Ex.405 410 / 500 22615 200 testsCell Explorer™ Live Cell Labeling Kit, Green 495 / 515 22607 200 testsCell Explorer™ Live Cell Labeling Kit, Orange Ex.405 398 / 545 22616 200 testsCell Explorer™ Live Cell Tracking Kit, Orange 528 / 541 22622 200 testsCell Explorer™ Live Cell Tracking Kit, Red 575 / 600 22623 200 testsCell Explorer™ Live Cell Tracking Kit, Deep Red 637 / 650 22624 200 testsCell Explorer™ Live Cell Labeling Kit, Red 646 / 659 22609 200 testsCF™488A-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 490 / 515 80110 1 mgCF™543-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 541 / 560 80111 1 mgCF™555-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 555 / 565 80112 1 mgCF™568-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 562 / 583 80113 1 mgCF™594-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 583 / 614 80114 1 mgCF™640R-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 642 / 662 80115 1 mgCF™680R-Dextran 10,000 MW, Anionic and Fixable 680 / 701 80116 1 mgCMAC, Blue Cell Tracking Reagent 353 / 466 FP-63323A 5 mgCMHC, Blue Cell Tracking Reagent 373 / 470 FP-46539A 5 mgCMFDA, Green Cell Tracking Reagent 492 / 517 FP-38855A 1 mgCMTMR, Orange Cell Tracking Reagent 541 / 565 FP-12662A 1 mgCFDA-SE 494 / 521 FP-52493A 25 mg

FP-LQU970 5 x 500 µg5-CFDA-SE 495 / 519 FP-AM4969 10 mg

FP-AM496A 25 mgFP-AM496B 50 mgFP-AM496C 250 mg

6-CFDA-SE 495 / 519 FP-AM497A 10 mg

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Comptage de cellules, viabilité et prolifération I Viabilité

Mesure de viabilité par colorimétrie

Cell Counting Kit (CCK-8)Le kit de comptage des cellules CCK-8 permet un dosage colorimétrique sensible pour la détermination de la viabilité cellulaire et leur prolifération.

● Stable à +4°C ● Rapide à utiliser : prêt-à-l'emploi, sans attendre de décongélation et sans lavage● Procédure simple : ajouter le réactif et mesurer la DO

Principe : colorant moins toxique, car situé à l'extérieur de la cellule

Le sel de tétrazolium soluble dans l'eau (WST-8) est réduit par l'activité déshydrogénase dans les cellules pour donner du formazan de couleur orange, qui est soluble dans le mi-lieu de culture tissulaire. La quantité de colorant formazan, générée par les activités des déshydrogénases dans les cellules, est directement proportionnelle au nombre de cellules vivantes. La sensibilité de détection du CCK-8 est supérieure à celle des autres sels de tétrazolium tels que le MTT, XTT, MTS ou WST-1.

Analyse en microplaque

UptiBlue™, réactif de comptage des cellules vivantesL'UptiBlue™ est un indicateur d'oxydo-réduction, qui produit un changement colorimétrique et un signal fluorescent en réponse à l'activité métabolique. Le descriptif du produit est plus détaillé dans la section suivante pour la mesure de la viabilité par fluorescence.

La réduction liée à la croissance cellulaire provoque le changement de l'indicateur redox de la forme oxydée (bleue, non fluorescent) en forme réduite (rouge fluorescent).

Mode de détection au choix :● Spectrophotométrie : mesures d'absorbance à 570 nm et 600 nm● Fluorimétrie : excitation à 530-560 nm et émission à 590 nm

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCell Counting Kit (CCK8) 450 / - CK04-11 1 000 tests

CK04-13 3 000 testsCK04-20 10 000 tests

UptiBlue™, Viable Cell Counting Reagent 570, 600 / - UP669412 25 mlUP669413 100 mlUP669415 500 ml

Stable 1 an à +4°C.

UptiBlue™ de la forme oxydée (bleue) à la forme réduite (rouge)

G.49

ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREComptage de cellules, viabilité et prolifération I Viabilité

ResazurinCet indicateur redox est utilisé pour déterminer les niveaux d'énergie des cellules, et comme donneur d'électrons dans les dosages utilisant la Horseradish peroxydase (HRP). La HRP transforme la Resazurine en Résorufine, qui est détectée en colorimétrie ou fluorimétrie. L'application de la Résazurine est courante pour étudier la cytotoxicité à médiation cellulaire, la prolifération cellulaire et l'activité métabolique des mitochondries.

WST-1Le WST-1 en sel de tétrazolium est clivé en formazan par un mécanisme cellulaire complexe qui se produit principalement à la surface. Cette bioréduction est surtout dépendante de la production par glycolyse du NAD(P)H dans les cellules viables. Par conséquent, la quantité de colorant formazan formé est directement corrélée au nombre de cellules métabolique-ment actives dans la culture. Il convient pour la prolifération cellulaire et les dosages de cytotoxicité.

MTTLe MTT est un sel de tétrazolium qui est couramment utilisé pour détecter le métabolisme réducteur dans des cellules dans les études de viabilité, prolifération et cytotoxicité. Après réduction, les sels de tétrazolium sont transformés en produits très colorés qui peuvent être facilement quantifiés par mesure colorimétrique. Le MTT forme un produit formazan pourpre qui doit être solubilisé avant quantification. Le MTT est particulièrement utile pour le criblage de composés antiviraux et anticancéreux, et pour les études de l'effet de la cytokine sur la prolifération cellulaire.

XTTLe XTT fournit une méthode simple pour déterminer le nombre de cellules vivantes en uti-lisant les lecteurs de microplaques. La détermination du nombre de cellules vivantes est souvent utilisée pour évaluer la vitesse de prolifération cellulaire et pour cribler des agents cytotoxiques. Le XTT est un dérivé de tétrazolium. Similaire au MTT, le XTT mesure la via-bilité des cellules sur la base de l'activité des enzymes mitochondriales dans les cellules vivantes, qui réduisent le XTT, et qui sont inactivés peu de temps après la mort cellulaire. Contrairement au MTT, le XTT est réduit à un produit de couleur orange très soluble dans l'eau alors que le MTT formazan est insoluble. Il élimine ainsi l'étape de solubilisation requise pour le test au MTT. La quantité de produit soluble dans l'eau générée à partir de la réduc-tion du XTT est proportionnel au nombre de cellules vivantes dans l'échantillon et peut être quantifiée par photométrie à 475 nm. Le développement de la couleur en continu permet des mesures au cours du temps pour une gamme de détection étendue.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéResazurin Sodium Salt, >85 % 570, 600 / - FP-06224C 50 gResazurin Sodium Salt, >96 % 570, 600 / - FP-06224B 100 mg

FP-06224A 1 gResofurin, Sodium Salt 570, 600 / - FP-95432B 100 mg

FP-95432A 5 x 20 mgWST-1 438 / - F98880 100 mg

F98881 500 mgF98882 1 g

WST-1 Cell Proliferation Kit 438 / - 10008883 96 tests(WST-1 powder + Electron mediator solution) 10008883 480 tests

Spectres d'absorption des colorants WST au formazan.

1.5

1.0

0.5

0400 500 600 700

Abso

rban

ce

Longueur d’onde (nm)

WST-1WST-3WST-4WST-5

1.5

1.0

0.5

0400 500 600 700

Abso

rban

ce

Longueur d’onde (nm)

WST-8WST-9





Réactifs avantageux à votre mesure Mesure de viabilité par colorimétrie (suite)

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéWST-3 433 / - T33230 100 mgWST-4 550 / - T33240 100 mgWST-5 550 / - T33250 100 mgWST-8 450 / - QZ8430 100 mgWST-9 BB4490 100 mg1-Methoxy-PMS, Electron mediator T31990 100 mgMTT 550 / - 659393 100 mg

FP-65939A 1 gFP-65939B 5 g

MTT Cell Viability Assay Kit 550 / - 30006 1 kitXTT 475 / - FP-40936A 100 mgXTT Cell Proliferation Assay Kit 475 / - 30007 1 000 tests

4891-025-K 2 500 tests

Mesure de viabilité par fluorimétrie UptiBlue™, réactif de comptage des cellules vivantesL'UptiBlue™ est un indicateur d'oxydo-réduction, qui produit un changement colorimétrique et un signal fluorescent en réponse à l'activité métabolique. Ce colorant sans danger et non toxique a prouvé son utilité pour l'analyse quantitative de la viabilité cellulaire et de la proli-fération cellulaire, pour des analyses de cytokine et dans des études de cytotoxicité in vitro. Compatible avec de nombreuses espèces, l'UptiBlue™ est validé sur les lignées cellulaires animales et humaines, les bactéries et les champignons. Il ne nécessite pas de centrifuga-tion, et il fonctionne sur les cellules attachées ou en suspension. Sa sensibilité produit un signal reproductible à partir de 80 cellules.

Applications :● Déterminations de la prolifération cellulaire : soluble dans l'eau, stable en culture, et non toxique● Analyses de la viabilité cellulaire : activité métabolique et cytotoxicité influencent l'inten-sité du signal● Dosages des cytokines : mesure de la prolifération induite par les cytokines - les cellules peuvent être réutilisées ensuite pour d'autres expériences

La croissance cellulaire en continue maintient un environnement réduit tandis que l'inhibition de la croissance maintient un environnement oxydé. La réduction liée à la croissance pro-voque le changement de l'indicateur redox de la forme oxydée (bleue, non fluorescent) en forme réduite (rouge fluorescent).

Mode de détection au choix :● Spectrophotométrie : mesures d'absorbance à 570 nm et 600 nm● Fluorimétrie : excitation à 530-560 nm et émission à 590 nm

Calcein AM Cell Viability Assay KitLa Calcéine AM est un marqueur de cellules fluorescent vert largement utilisé. La Calcéine AM est perméable à la membrane, et peut donc être introduit dans les cellules par incubation. Une fois à l'intérieur des cellules, la calcéine AM est hydrolysée par les estérases endogènes en calcéine fortement chargée négativement. La calcéine fluorescente est retenue dans le cytoplasme des cellules vivantes. Le Calcein AM Cell Viability Assay Kit est conçu pour quantifier le nombre de cellules vivantes en fonction de l'intégrité de leur membrane cytoplas-mique. Il est un véritable test en point final pour la viabilité cellulaire. Le signal fluorescent est proportionnel au nombre de cellules vivantes dans l'échantillon.

UptiBlue™ de la forme oxydée (bleue) à la forme réduite (rouge).

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Réactifs avantageux à votre mesureViability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Live & Dead CellsLe Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Live & Dead Cells colore en vert et en rouge les cellules vivantes et mortes, respectivement. Le dosage utilise deux sondes qui détectent une activité d'estérase intracellulaire dans les cellules vivantes et l'intégrité de la membrane plasmique dans les cellules mortes. Les cellules vivantes sont marquées avec la Calcéine AM en solution. Les cellules mortes sont marquées en rouge grâce à une solution d'éthidium homodimère III (EthD-III), colorant de l'ADN imperméable à la membrane. Le kit est adapté à la microscopie en fluorescence, au lecteur de microplaques et à la cytométrie en flux. Les principes de dosage est applicable à la plupart des types de cellules eucaryotes, y com-pris les cellules adhérentes et certains tissus, mais pas aux bactéries ou aux levures. Cette méthode d'évaluation de la viabilité des cellules à base de fluorescence peut être utilisée à la place de l'exclusion du bleu de trypan, à la libération de 51Cr, et des méthodes similaires pour déterminer la viabilité cellulaire et la cytotoxicité. L'EthD-III a une plus grande affinité de liai-son à l'ADN et une fluorescence plus intense que l'EthD-I (70% plus lumineux que l'EthD-I).

Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Bacteria Live & Dead Cells

● Double détection : détecter les cellules vivantes et mortes dans une même population de cellules● Simple et rapide : 15 min d'incubation et mesure sans lavage● Économique : Effectuer la viabilité et la cytotoxicité en même temps● Polyvalent : Analyse compatible en cytomètrie de flux et microscopie à fluorescence en utilisant les paramètres de la fluorescéine et de l'iodure de propidium.

Ce kit fournit une coloration fluorescente distincte sur les bactéries vivantes (en vert) et les bactéries mortes (rouge) à l'aide des sondes DMAO et EthD-III. Le kit fonctionne également sur les cellules mammifères. Le DMAO est un colorant d'acide nucléique-vert fluorescent qui colore toutes les cellules vivantes et mortes avec des membranes de cellules intactes ou endommagées. L'EthD-III est un colorant d'acide nucléique fluorescent rouge qui colore uniquement les cellules mortes avec les membranes cellulaires endommagées. Avec un mé-lange approprié de DMAO et d'EthD-III, les cellules avec des membranes cellulaires intactes ont une fluorescence verte, alors que les cellules avec des membranes cellulaires endomma-gées ont fluorescence rouge. Le kit est approprié pour une utilisation en microscope à fluo-rescence et en cytomètie de flux. Le principe d'analyse basé sur l'intégrité membranaire est général, et peut s'appliquer à la plupart des types de bactéries et des cellules mammifères.

Bacterial Viability and Gram Stain KitLe Bacterial Viability and Gram Stain Kit contient trois composants : CF™ 488A-WGA, DAPI et EthD-III en solutions pour distinguer les bactéries vivantes et mortes, ainsi que les gram-négatives et gram-positives. L'agglutinine de germe de blé marquée en vert se lie spécifiquement à la N-acétylglucosamine de la couche de peptidoglycanes de bactéries gram-positives. Le composant d'analyse de la viabilité bactérienne est basé sur l'intégrité de la membrane cellulaire. L'EthD-III est un colorant de liaison d'acide nucléique qui est imperméable à la membrane. Il colore sélectivement les cellules avec des membranes plas-miques dégradées. Toutes les cellules sont colorées en bleu avec le DAPI, colorant d'ADN perméable à la membrane.

Le Bacterial Viability and Gram Stain Kit a été testé sur les espèces bactériennes suivantes: Bacillus subtilis subsp. subtilis, Escherichia coli, Micrococcus luteus, Pseudomonas fluores-cens, et Staphylococcus epidermidis.

Principe du dosage de la Viabilité avec la calcéine AM.





Réactifs avantageux à votre mesure Live-or-Dye™ Fixable Viability Staining KitsLes Live-or-Dye™ Fixable Viability Staining Kits sont conçus pour la discrimination entre les cellules vivantes et mortes en cytométrie de flux et en microscopie. Les colorants sont imper-méables à la membrane cellulaire et réagissent avec les amines. Les colorants pénètrent dans les cellules mortes qui ont une membrane dégradée, et se lient de manière covalente aux amines libres des protéines intracellulaires.Les Live-or-Dye™ sont extrêmement stables, permettant aux cellules d'être fixées et per-méabilisées sans perte de fluorescence ou de transfert de colorant entre les cellules. Le pro-tocole de coloration a été optimisé pour maximiser la discrimination entre cellules vivantes / mortes avec un minimum de coloration des cellules vivantes, afin d'éviter les interférences avec des immunomarquages. La gamme de huit colorants couvre un large spectre de fluo-rescence, pour une flexibilité maximale dans les analyses en multi-marquage.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéUptiBlue™, Viable Cell Counting Reagent 530-560 / 590 UP669412 25 ml

UP669413 100 mlUP669415 500 ml

Calcein AM Cell Viability Assay Kit 494 / 517 30026 1 000 testsViability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Live & Dead Cells 494, 530 BF4710 300 tests

/ 517, 620 BF471E 150 testsViability/Cytotoxicity Assay Kit for Bacteria Live & Dead Cells 503, 530 / 530,

620BU1040 1 000 tests

Bacterial Viability and Gram Stain Kit 358, 490, 530 / 461, 515, 620

32001 200 tests

Calcein AM, 1mg/ml in DMSO 494 / 517 FP-855422 1 mlEthidium Homodimer (EthD-1), 2 mM in DMSO 528 / 617 FP-AT758A 0,5 mlEthidium Homodimer (EthD-2), 1 mM in DMSO 535 / 624 FP-67125A 200 µlEthidium Homodimer (EthD-3), 2 mM in DMSO 530 / 620 FP-BP9340 200 µlLive-or-Dye™ 350/448 350 / 448 32002-T 50 tests

32002 200 testsLive-or-Dye™ 405/452 405 / 452 32003-T 50 tests







32008 200 tests

Cellules Jurkat tuées ou non à la châleur, puis marquées avec les colorants Live-or-Dye™.

Cellules HeLa marquées avec le Live-or-Dye™ 488/515, traitée à l'éthanol 15 % pendant 10 minutes pour tuer une fraction des cellules.

G.53


Réactifs avantageux à votre mesureMesure de viabilité par Luminescence

ATP-Glo™ Bioluminometric Cell Viability Assay KitL'ATP-Glo™ Bioluminometric Cell Viability Assay Kit utilise l'oxydation dépendante de l'ATP de la D-luciférine par la luciférase. La lumière produite dépend de la quantité d'ATP dans une culture cellulaire, qui est proportionnelle au nombre de cellules viables. Le kit ATP-Glo™ peut être utilisé pour détecter l'ATP à partir d'une seule cellule ou de 0,01 picomole d'ATP. La linéarité du signal pour la détection de l'ATP est obtenue sur six ordres de magnitude. Le dosage est de type flash, conçu pour la détection en utilisant un luminomètre. Le signal luminescent est stable pendant au moins une minute.

ATP Determination Kit, 0,1 to 100 pmolCe kit de dosage sensible est optimisé pour la détermination rapide de faibles niveaux d'ATP pré-existant ou d'ATP formé en systèmes cinétiques. Après 10 minutes d'incubation du réactif de dosage, les concentrations d'ATP à partir de 0,1 pmol peuvent être déterminées avec pré-cision en utilisant le signal luminescent linéaire de la réaction de la luciférase. La diminution du signal luminescent et de la sensibilité est observée après des temps d'incubation de plus de 30 minutes.

ATP Determination Kit, 0,01 to 10 µM, up to 4h readingLe kit de détermination de l'ATP à signal stable est basé sur le système de luciférase-lucifé-rine. Ce dosage est optimisé pour les applications pour des concentrations d'ATP allant de 10 nM à 10 µM en place. Le signal de luminescence est stable pendant au moins 4 heures.

PhosphoWorks™ Luminometric ATP Assay Kit, Bright GlowLe PhosphoWorks™ Luminometric ATP Assay Kit, Bright Glow fournit un test par lumines-cence rapide, simple et homogène pour la détermination de la prolifération cellulaire et la cytotoxicité dans des cellules de mammifères. Le dosage peut être effectué dans un format de plaque de 96 puits et de 384 puits. La grande sensibilité de ce test permet la détection de l'ATP dans de nombreux systèmes biologiques, les échantillons de l'environnement et les denrées alimentaires. Le kit Bright Glow peut détecter un signal à partir de 10 cellules/puits. Le signal est stable pendant plus d'une heure.

PhosphoWorks™ Luminometric ATP Assay Kit, DTT-FreeLe PhosphoWorks™ Luminometric ATP Assay Kit, DTT-Free n'utilise pas de DTT, et possède un signal de luminescence stable pendant 4 heures. Le dosage peut être effectué dans un format de plaque de 96 puits et de 384 puits. Le kit DTT-Free peut détecter un signal à partir de 100 cellules/puits.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéATP-Glo™ Bioluminometric Cell Viability Assay Kit - / 560 30020-T 50 tests

30020-1 200 tests30020-2 1 000 tests

ATP Determination Kit, 0,1 to 100 pmol , (20-100 tests/ml) - / 560 FP-S2841A 10 mlFP-S2841B 30 mlFP-S2841C 100 ml

ATP Determination Kit, 0,01 to 10 µM, up to 4h reading - / 560 FP-BU1200 10 ml(20-100 tests/ml) FP-BU1201 30 ml

FP-BU1202 100 mlPhosphoWorks™ Luminometric ATP Assay Kit, Bright Glow - / 560 21610 1 plaquePhosphoWorks™ Luminometric ATP Assay Kit, DTT-Free - / 560 21612 1 plaque

21613 10 plaques

Quantification de dilutions en série de facteur 10 de cellules Jurkat en suspension avec l'ATP-Glo™ Bioluminetric Cell Viability Assay.

10000

1000

100

10

1

1 10 100 1000 10000

Nombre de cellules

Lum

ines

cenc

e




Comptage de cellules, viabilité et prolifération I Prolifération

Cycle cellulaire

CytoTell™ GreenPour analyser les populations cellulaires hétérogènes, le CFDA-SE est l'indicateur de la prolifération cellulaire préférée. Il est largement utilisé pour l'analyse en temps réel de la cellule. Cependant, il existe quelques problèmes graves associés à l'utilisation de CFDA-SE pour la prolifération des cellules : 1). Le CFDA-SE est toxique pour les cellules, car il affecte de nombreuses fonctions des protéines en se fixant dessus ; 2). Le CFDA-SE a une réponse lente et s'avère peu pratique à utiliser. L'intensité de fluorescence des cellules marquées CFDA-SE en deuxième génération est diminuée de plus de 10 fois par rapport à la première génération. Il faut à attendre une autre génération pour commencer l'analyse de la proliféra-tion cellulaire; 3). L'élimination du milieu est nécessaire. Les milieux pour l'analyse cellulaire contiennent des composants sur les quels le CFDA-SE va réagir.

Le CytoTell™ Green a été développé pour éliminer les limitations du CFDA-SE. Il peut être utilisé pour le suivi à long terme des cellules marquées. L'analyse peut débuter dès les cel-lules non divisées et la première génération. Les cellules marquées avec CytoTell™ peuvent être fixées et perméabilisées pour l'analyse de cibles intracellulaires à l'aide de fixateurs contenant du formaldéhyde et des tampons standards de perméabilisation à base de sapo-nine.

ViaFluor™Cell Proliferation KitLes colorants ViaFluor™ diffusent passivement dans les cellules et marquent de manière co-valente les protéines intracellulaires. Les cellules sont ainsi marquées sur le long terme. Les fluorochromes ne sont excitables qu'après leur hydrolyse par les estérases intracellulaires. Les colorants réagissent ensuite avec les amines intracellulaires formant des conjugués fluorescents qui sont conservés dans la cellule. Immédiatement après coloration, une seule population fluorescente sera détectée par cytométrie de flux. A chaque division cellulaire, les cellules filles héritent environ de la moitié du marqueur fluorescent, ce qui permet de déter-miner le nombre de divisions cellulaires qui se produisent après marquage. La coloration peut être fixée par le formaldéhyde. Les kits de dosage de prolifération cellulaire contiennent dix flacons à usage unique de colorants, du DMSO anhydre pour préparer les solutions de colorant, et un protocole de marquage détaillé.

Cell Clock™ AssayLe Cell Clock™ Assay est un système de mesure en temps réel des quatre phases prin-cipales du cycle cellulaire des cellules en culture in vitro. Le test utilise un colorant redox perméable à la membrane.Après incubation, un changement de couleur se produit dans les cellules, avec une couleur distincte dans les cellules en phases G0-G1, S, G2 et M.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCytoTell™ Blue 22251 500 testsCytoTell™ Green 22253 500 testsCytoTell™ Orange 22257 500 testsCytoTell™ Red 22255 500 testsViaFluor™405-SE Cell Proliferation Kit 408 / 452 30068 1 kitViaFluor™ CFSE Cell Proliferation Kit 495 / 519 30050 1 kitViaFluor™ 568 Cell Proliferation Kit 570 / 606 30080 1 kitCFDA-SE (CFSE) 495 / 519 FP-52493A 25 mgBacStain, CFDA solution 495 / 519 BS03-10 100 testsCell Clock™ Assay C1000 100 tests

C2000 400 tests

Suivi de la prolifération cellulaire de cellules Jurkat avec le CytoTell Green et le CFDA-SE pendant 9 jours.

Le ViaFluor 568™ a été utilisé pour suivre la division cellulaire au cours du temps. Les pics apparaissent de droite à gauche avec un rouge atténué à chaque génération.

Analyse d'images de cellules CHO marquées avec le Cell Clock™ Assay (phases : GO/G1 en jaune, S en vert, et G2 et M en noir).

G.55

ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREComptage de cellules, viabilité et prolifération I Prolifération

Prolifération cellulaire par dosage de la synthèse d'ADNFluoProbes® EdU, dosage de la prolifération cellulaire par "click chemistry"

● Quantification de l'ADN nouvellement synthétisé● Protocole simple : Evite la dénaturation de l'ADN ● Détection par petite molécule : excellente diffusion in vivo

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéEdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine) FP-MM982A 10 mg

FP-MM9829 25 mgFP-MM982B 100 mg

FluoProbes® 488 azide 493 / 517 FP-YE4970 1 mgFluoProbes® 532A azide 532 / 553 FP-YE4980 1 mgFluoProbes® 547H azide 550 / 575 FP-1H0970 1 mgFluoProbes® 550A azide 554 / 576 FP-FI2090 1 mgFluoProbes® 565A azide 563 / 592 FP-YE4990 1 mgFluoProbes® 590A azide 594 / 624 FP-YE5000 1 mgFluoProbes® 633A azide 629 / 657 FP-YE5010 1 mgFluoProbes® 647N azide 644 / 669 FP-YE5020 1 mgFluoProbes® 647H azide 653 / 675 FP-1H0960 1 mgFluoProbes® 655A azide 663 / 684 FP-YE5030 1 mgFluoProbes® 680A azide 680 / 700 FP-GV3640 1 mgFluoProbes® 700A azide 700 / 719 FP-GV3650 1 mgFluoProbes® 725A azide 725 / 752 FP-LO5630 1 mgFluoProbes® 740A azide 740 / 764 FP-LO5620 1 mgFluoProbes® 749H azide 759 / 780 FP-1K2840 1 mgFluoProbes® 800 azide 777 / 791 FP-JV1870 1 mgFluoProbes® 782 azide 783 / 800 FP-1K3340 1 mgFluoProbes® 831 azide 844 / IR FP-JV1940 1 mgCYanine3 azide 555 / 570 FP-HO7250 1 mgCYanine3 azide, 10 mM in DMSO 555 / 570 FP-EV0900 100 µlDi-Sulfo-CYanine3 azide 548 / 567 FP-1C4660 1 mgCYanine3.5 azide 591 / 604 FP-CY3AZ0 1 mgCYanine3.5 azide, 10 mM in DMSO 591 / 604 FP-FZ8760 100 µlCYanine5 azide 646 / 662 FP-CY5AZ0 1 mgCYanine5 azide, 10 mM in DMSO 646 / 662 FP-EV0910 100 µlDi-Sulfo-CYanine5 azide 646 / 664 FP-1C4670 1 mgCYanine5.5 azide 674 / 707 FP-GO7260 1 mgCYanine5.5 azide, 10 mM in DMSO 674 / 707 FP-FZ8770 100 µlTetra-Sulfo-CYanine5.5 azide 678 / 701 FP-LQV310 1 mgCYanine7 azide 750 / 773 FP-1A6270 1 mgCYanine7 azide, 10 mM in DMSO 750 / 773 FP-1A6260 100 µlDi-Sulfo-CYanine7 azide 749 / 776 FP-1H8710 1 mgCYanine7.5 azide 750 / 773 FP-1A6310 1 mgCYanine7.5 azide, 10 mM in DMSO 750 / 773 FP-1A6300 100 µlAMCA azide 353 / 455 FP-GDA480 1 mg7-hydroxycoumarin azide 404 / 447 FP-IOK790 1 mgCoumarin 343 azide 455 / 463 FP-BLUAZ0 1 mgFAM azide, 5(6)-isomers 496 / 516 FP-DQP151 1 mgFAM azide, 5-isomer 496 / 516 FP-EV0920 1 mgFAM azide, 6-isomer 495 / 520 FP-IOI490 5 mgFAM-PEG3-azide (protected), 6-isomer 495 / 520 FP-DQO511 1 mgFAM-PEG3-azide (unprotected), 6-isomer 495 / 520 FP-DQO471 1 mg6-Carboxy-fluorescein PEG azide 495 / 520 FP-FJ0011 25 mgTET azide, 5-isomer 521 / 536 FP-IOJ060 5 mgTET azide, 6-isomer 522 / 532 FP-IOJ620 5 mg




Comptage de cellules, viabilité et prolifération I Prolifération

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéTET-PEG3 azide 521 / 536 FP-DQO481 1 mgJOE azide, 6-isomer 520 / 548 FP-SNX440 5 mgHEX azide, 5-isomer 535 / 556 FP-IOJ050 5 mgHEX azide, 6-isomer 536 / 557 FP-IOJ610 5 mgHEX-PEG3 azide 535 / 556 FP-DQO491 1 mgSIMA azide, 5-isomer 535 / 557 FP-IOI180 5 mgSIMA azide, 6-isomer 534 / 558 FP-IOI500 5 mgTAMRA azide, 5-isomer 544 / 576 FP-DQP12A 1 mgTAMRA azide, 5-isomer, 10 mM in DMSO 544 / 576 FP-EV0880 100 µlSulfoRhodamine B azide, 5-isomer 568 / 584 FP-IOK950 1 mgROX azide, 5(6)-isomers 576 / 601 FP-1B2390 1 mgROX azide, 5-isomer 576 / 601 FP-SJI030 25 mgROX azide, 5-isomer, 10 mM in DMSO 576 / 601 FP-EV0950 100 µlFluoProbes FL azide, Neutral probe 503 / 510 FP-SJH850 1 mg

EdU-Click™Cell Proliferation Assay KitsLa détection de la prolifération cellulaire est d'une importance capitale pour suivre la vitalité de la cellule, la détermination ou l'évaluation de la génotoxicité des médicaments anticancéreux. Les essais de prolifération cellulaire, avec l'EdU (5-éthynyl-2'-désoxy-uridine),fournissent une alternative supérieure aux dosages au BrdU (5-bromo-2'-désoxy-uridine). Les analyses Edu-Click™ évite les anticorps, et donc ne nécessitent pas la dénaturation de l'ADN pour la détection du nucléoside incorporé. De plus l' Edu-Click™ utilise la chimie click pour la détec-tion avec un large choix de colorants fluorescents. Le protocole de détection simplifié réduit le nombre total d'étapes et diminue significativement le temps nécessaire à l'expérience.

● Très fiable et facile à réaliser grâce à la chimie click● Procédé de détection rapide (seulement 30 min.)● Compatible avec le multiplexage● Des conditions douces, sans dénaturation de l'ADN

BrdU Cell Proliferation Assay KitCe kit est basé sur l'incorporation de BrdU dans les cellules cultivées en plaques de culture. Au cours des dernières 2 à 24 heures de culture, le BrdU est ajouté. Le BrdU est incorporé dans l'ADN des cellules en division. Il est ensuite détecté par un anticorps, qui implique de fixer, perméabiliser et dénaturer l'ADN. Tout cela se fait en une seule étape par un traitement avec la solution de fixation. La HRP catalyse la conversion du substrat chromogénique tétra-methylbenzidine (TMB) d'une solution incolore en solution bleu (ou jaune après l'ajout du réactif d'arrêt), dont l'intensité est proportionnelle à la quantité de BrdU incorporée dans les cellules. Le produit de réaction coloré est quantifié en utilisant un spectrophotomètre.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéEdU-Click™ 488 496 / 516 BCK-EdU488-1 100 testsEdU-Click™ 555 546 / 579 BCK-EdU555-1 100 testsEdU-Click™ 594 584 / 603 BCK-EdU594-1 100 testsEdU-Click™ 647 646 / 662 BCK-EdU647-1 100 testsBrdU FP-18538A 100 mgBrdUTP, 10 mM in TE buffer FP-T8199A 25 µl

FP-T8199B 100 µlanti-BrdU, monoclonal Mouse IgG1, clone MoBu-1 AZD840 100 µgBrdU Cell Proliferation Assay Kit 450, 550 / - ORB109970 200 testsChemiluminescent BrdU Cell Proliferation Assay Kit ORB109974 200 tests

FluoProbes EdU, dosage de la prolifération cellulaire par "click che-mistry" (suite)

Méristème d'Orge marqué avec l'EdU-Click™ 555.

G.57

ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREComptage de cellules, viabilité et prolifération I Cytotoxicité

Cytotoxicité cellulaireaCella™-TOX : Bioluminescence Non Radioactive Cytotoxicity Assay (GAPDH)

● Polyvalent - utile pour mesurer l'activité des cellules T, des cellules primaires, NK,complé-ment et autres agents lytiques. Le test peut être réalisé dans un milieu complété en sérum.● Homogène - en une seule étape, aucun lavage. ● Rapide – résultats en 3-5 minutes● Non destructif – permet d'analyser d'autres paramètres

Le kit aCella™-TOX mesure la libération de glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) dans les cellules mammifères et bactériennes. La méthode Acella™-TOX a été validée avec de nombreux modes de cytolyse, dont la cytotoxicité cellulaire (cellules T) dé-pendante du complément, des agents porogènes, la lyse par antibiotique des bactéries, et lyse mécanique ou par un détergent. La méthode est très générale, étant donné que toutes les cellules connues expriment de grandes quantités de GAPDH, et, contrairement à d'autres enzymes, le GAPDH est très facilement libéré du cytoplasme lors de la lyse cellulaire. Grâce aux formulations spécialement adaptées, la sensibilité de la méthode peut être amenée au niveau d'une cellule eucaryote, ce qui est impossible avec une autre méthode en phase liquide.

Cell Meter™ Colorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit

● Facilement adaptable à l'automatisation sans mélanger ou de séparation.● Mesure par absorbance en plaques 96 ou 384 puits ● Sensible et précis: à partir de 300 cellules.

Ce kit ne nécessite pas de pré-mélange des composants et a une sensibilité plus élevée par rapport aux dosages à base de tétrazolium (tels que MTT et XTT). Les composants du kit sont très stables et à la faible cytotoxicité, donc l'incubation de 1h peut être prolongée de 24 à 48h. La cytotoxicité est proportionnelle au ratio DO570/DO605.

Cell Meter™ Fluorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit Ce kit fournit un test rapide, simple, précis et homogène pour la détection par fluorescence des cellules viables. Ce dosage est basé sur la résazurine oxydée bleu non fluorescente, qui est réduite à un colorant fluorescent rouge (résorufine) en acceptant un électron de la chaîne respiratoire mitochondriale dans les cellules vivantes. La quantité de résorufine produite est directement proportionnelle au nombre de cellules vivantes.

Cytotoxicity LDH Assay Kit

● Système de dosage colorimétrique basé sur le WST● Solution de travail stable 2 mois après reconstitution

Le Cytotoxicity LDH Assay Kit détermine la cytotoxicité en mesurant l'activité lactate dés-hydrogénase (LDH) libérée des cellules endommagées. La LDH libérée selon le schéma suivant. La LDH catalyse la déshydrogénation du lactate en pyruvate qui réduit le NAD en NADH. Le NADH réduit le sel de tétrazolium soluble dans l'eau (WST) en présence d'un médiateur d'électrons pour produire un colorant formazan orange. La quantité du colorant formazan ainsi formée est proportionnelle à celle du LDH libérée dans le milieu.La cytotoxicité peut être mesurée avec les cellules vivantes (dosage homogène). En outre, un dosage non homogène, qui est effectué en utilisant le surnageant de culture de cellules, est également possible. Contrairement aux produits concurrents, la solution de travail re-constituée est stable plusieurs mois.

Les valeurs de Log(EC50) sont -2,612 pour l'aCella™-TOX et -2,77 pour 51Cr.

Comparaison directe du 51Cr et de l'aCella™-TOX sur un même donneur avec des cellules Daudi.

0.0001 0.001 0.01 0.1 1 10log Rituxan µg/mL

%AD

CC +

/-SD

-50

0

50

100aCella-TOX51Cr

La solution de travail est stable 2 mois.

Kit Dojindo

Concurrent P

Concurrent R

Condition de stockage (+4°C)

1 semaine

Non stockable

2 mois

Mesure des doses de D-LDH avec l'Amplite Fluori-metric D-LDH Assay Kit.

10000

1000

100

1 10 100

RFU

(Ex/E

m =

540/5

90 nm

)

Dose de D-Lactate Deshydrogénase (mU/ml)




Comptage de cellules, viabilité et prolifération I Cytotoxicité

Amplite™ Lactate Dehydrogenase Assay Kit (LDH assay)Les LDH Assay Kits offrent deux méthodes, par fluorescence ou par absorbance, pour détec-ter soit la L-lactate déshydrogénase (L-LDH) ou la D-lactate déshydrogénase (D-LDH). Les dosages sont robustes, et peuvent être facilement adaptés pour une grande variété d'appli-cations qui nécessitent la mesure de la L-LDH / D-LDH.Les Amplite™ Lactate Dehydrogenase Assay Kits 13809 et 13813 Kits fournissent une méthode basée sur l'absorption pour la détection de lactate déshydrogénases dans des échantillons biologiques tels que le sérum, le plasma, l'urine, ainsi que dans des échantillons de culture cellulaire. Dans le dosage enzymatique couplé, la LDH est proportionnellement liée à la concentration de NADH qui est spécifiquement suivie par une sonde du NADH chromogène. Les dosages sont spécifiques pour la LDH. Le signal d'absorption peut être lu en utilisant un lecteur de microplaque à ~ 575 nm. La sensibilité est de 3 mU/ml de lactate déshydrogénase dans un volume réactionnel de 100 µl.Les Amplite™ Lactate Dehydrogenase Assay Kits 13808 et 13812 sont basés sur la détection de la lactate déshydrogénase par fluorescence. Dans ces dosages enzymatiques couplées, la LDH est proportionnellement liée à la concentration de NADH, qui est spécifiquement suivie par une sonde fluorescente du NADH. Les dosages sont spécifiques pour la LDH. Le signal de fluorescence peut être lu en utilisant un lecteur de microplaques à fluorescence avec λex/em = 540 / 590 nm. La sensibilité est de 1 mU/ml de lactate déshydrogénase dans un volume réactionnel de 100 µl.

RubyGlow™ Luminescent Cytotoxicity Assay KitContrairement à d'autres dosages par luminescence émettant une lumière verte, ce kit de dosage luminescent produit une lumière rouge (619 nm) pour la mesure de la cytotoxicité en fonction de la production d'ATP dans les cellules métaboliquement actives. Cette longueur d'onde rend le kit compatible avec d'autres mesures simultanées sur les mêmes échantillons.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéaCella™-TOX, Bioluminescence Cytotoxicity Assay - / 562 CLATOX100-3 500 tests(GAPDH) CLATOX100-4 1000 testsCell Meter™ Colorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit 570, 605 / - 22780 5-10 plaques

22780-B 25-50 plaquesCell Meter™ Fluorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit 571 / 585 22781 1 000 testsCytotoxicity LDH Assay Kit 490 / - CK12-01 100 testsAmplite™ Colorimetric D-Lactate Dehydrogenase Assay Kit 575 / - 13809 200 testsAmplite™ Colorimetric L-Lactate Dehydrogenase Assay Kit 575 / - 13813 200 testsAmplite™ Fluorimetric D-Lactate Dehydrogenase Assay Kit 540 / 590 13808 200 testsAmplite™ Fluorimetric L-Lactate Dehydrogenase Assay Kit 540 / 590 13812 200 testsRubyGlow™ Luminescent Cytotoxicity Assay Kit - / 619 M1576 100 tests

Mesure de la cytotoxicité : Des tests de cytotoxicité sont largement utilisés pour cribler la cytotoxicité dans des banques de composés. L'évaluation de l'intégrité de la membrane cellulaire est l'une des façons les plus courantes pour mesurer la viabilité cellulaire et les effets cytotoxiques. Le colorants peuvent être soit libérés des cellules (LDH), soit disponibles pour un marquage cellulaire en passant à travers une membrane celluaire dégradée (bleu trypan, colorants de noyaux). La cytotoxicité peut également être contrôlée en utilisant un indicateur redox. Les cellules viables réduisent les réactifs (MTS, résazurine) en un produit coloré. En plus d'utiliser des colorants pour indiquer le potentiel redox des cellules afin de surveiller leur viabilité, les chercheurs ont mis au point des dosages qui utilisent la teneur en ATP en tant que marqueur de viabilité. Plusieurs approches sont décrites dans d'autres sections du catalogue : viabilité cellulaire, étude de l'intégrité membranaire, colorants de noyaux, mesure d'activité enzyma-tique.

G.59

ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREComptage de cellules, viabilité et prolifération I Viabilité bactérienne

Mesure de la viabilité bactérienneLes kits de dosage de la viabilité bactérienne sont décrits dans la section Biologie Cellulaire | Comptage de cellules, viabilité et prolifération | Mesure de viabilité par fluorimétrie. Les kits de dosage par qPCR avec possibilité de cibler le type de bactérie sont décrits dans la section Génomique | Amplification PCR | PMA Real Time PCR kits.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéViability/Cytotoxicity Assay Kit for Bacteria Live & Dead Cells 503, 530 / 530, 620 BU1040 1 000 testsBacterial Viability and Gram Stain Kit 358, 490, 530 32001 200 tests

/ 461, 515, 620CF™594 WGA 593 / 614 29023-1 1 mgPMA™ dye, 20 mM in H2O 40019 100 uLPMAxx™ dye, 20 mM in H2O 40069 100 uLPMA-Lite™ LED Photolysis Device E90002 1 unitéPMA™ Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Salmonella enterica (invA) 31033 200 testsPMA™ Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Mycobacterium tuberculosis (groEL2)

31034 200 tests

PMA™ Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Staphylococcus aureus (nuc) 31035 200 testsPMA™ Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Staphylococcus aureus (mecA) 31036 200 testsPMA™ Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - E. coli O157:H7 (ORF Z3276) 31037 200 testsPMA™ Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - E. coli (uidA) 31050 200 testsPMA™ Real-Time PCR Bacterial Viability Kit - Listeria monocytogenes (hly) 31051 200 testsPMA™ Enhancer for Gram Negative Bacteria, 5X Solution 31038 16 ml

WWW.INTERCHIM.COM > LIFE SIENCES > Cell Biology > Cells Assays > Toxicology, Toxicity Assays



Apoptose I Changements cytoplasmiques

Glowing Products for ScienceTM

Activités des Caspases

NucView™ Caspase Subtrates

● Double fonctions : détection de l'activité caspase-3/7 et visualisation de la morphologie nucléaire apoptotique● N'interfère pas avec l'activité de la caspase, permettant un suivi de la caspase en temps réel● Coloration rapide en milieu de culture cellulaire sans lavage● Tolérant à la fixation au formaldéhyde et à la perméabilisation● Détectable par microscopie à fluorescence, cytométrie en flux, ou lecteur de micro-plaques● Pour une utilisation avec des cellules adhérentes ou en suspension

Le subtrat de caspase NucView™ fournit un outil pratique pour la détection de l'apoptose dans des cellules intactes en microscopie confocale ou en cytométrie de flux.Contrairement à d'autres substrats fluorescents de la caspase ou inhibiteur de caspase (fluo-rescent), les substrats NucView™ peuvent être utilisés pour détecter l'activité caspase au sein des cellules intactes sans inhiber la progression de l'apoptose. Les substrats NucView™ sont constitués d'un colorant fluorescent de l'ADN couplé à la séquence de reconnaissance d'une caspase. Le substrat, qui est initialement non-fluorescent, pénètre dans la membrane plasmique, puis dans le cytoplasme. Dans les cellules apoptotiques, la caspase clive le subs-trat, libérant le colorant de l'ADN, qui migre vers le noyau de la cellule et marque l'ADN. Ainsi, les substrats NucView™ sont bifonctionnels, ce qui permet la détection de l'activité de la caspase et la visualisation des changements morphologiques dans le noyau au cours de l'apoptose. La coloration est également fixable au formaldéhyde.

Les colorants NucView™ 405 et NucView™ 488 sont excités par un laser à 405 nm et 488 nm, respectivement. Le NucView™ 530 est détecté avec les filtres de la CYanine3. Ils peuvent être associés à d'autres fluorochromes, comme le marqueur de mitochondries, Mito-View, le marqueur de noyau, RedDot ou l'indicateur d'apoptose, Annexin V marquée. Des combinaisons d'un colorant NucView avec une deuxième sonde fluorescente sont proposées sous forme de kits.

La technologie NucView™ est protégée par les brevet US N° 8.092.784 et 8.586.325

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéNucView™ 405 Caspase-3/7 Substrate, 1 mM in DMSO 429 / 469 10405-T 10 µl

10405 100 µlNucView™ 488 Caspase-3 Enzyme Substrate, 1 mM in DMSO 500 / 530 10402 100 µlNucView™ 488 Caspase-3 Enzyme Substrate, 1 mM in PBS 500 / 530 10403 100 µlNucView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells 500 / 530 30029-T 25 tests

30029 100 testsNucView™ 530 Caspase-3 Enzyme Substrate, 1 mM in DMSO 528 / 563 10406-T 10 µl

10406 100 µlNucView™ 488 and 500 / 530 30062 100 testsMitoView™ 633 Apoptosis Assay Kit 622 / 648NucView™ 488 and 500 / 530 30072 100 testsRedDot™ 2 Apoptosis/Necrosis Assay Kit 488-647 / 695Dual Apoptosis Assay with NucView™ 488 Caspase-3 Substrate and Sulforhodamine 101-Annexin V

500 / 530 594 /615

30030 50 tests

Dual Apoptosis Assay with NucView™ 488 Caspase-3 Substrate and CF™ 594 Annexin V

500 / 530 593 / 614

30067 50 tests

Dual Apoptosis Assay with NucView™ 488 Caspase-3 Substrate and CF640R Annexin V

500 / 530 642 / 662

30073 50 tests

Cellules HeLa colorées avec le NucView™ 405.

G.61

ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREApoptose I Changements cytoplasmiques

Substrats des Caspases et HTS Assay kitsLes HTS Assay Kits sont spécialement conçus pour des analyses à haut débit. Le kit fournit un système de détection rapide et hautement sensible de l'activité caspase par fluorescence. Le kit de dosage comprend un inhibiteur de caspase, qui peut être utilisé comme témoin négatif. De plus, un colorant est fourni dans le kit pour générer une courbe étalon.Dans les Fluorometric and Colorimetric Assay Kit, les tampon de lyse cellulaire et tampon de dosage sont séparés. Ils contiennent également le substrat enzymatique, l'inhibiteur d'en-zyme et un colorant pour courbe standard Sinon les substrats sont aussi disponibles seuls en dehors des kits.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCaspase 3 Assay Kit DEVD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit 488 / 520 FP-BR4930 1 ml

FP-BR4931 10 mlFP-BR4932 100 ml

Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric and Colorimetric Assay Kit 488 / 520 FP-857852 25 testsFP-857853 100 tests

Caspase 8 Assay Kit Fluorometric HTS Assay Kit (IETD-R110) 488 / 520 FP-BX1510 1 mlFP-BX1511 10 mlFP-BX1512 100 ml

Caspase 8 IETD-R110 Fluorescent and Colorimetric Assay Kit 488 / 520 FP-BR4940 25 testsFP-BR4941 100 tests

Caspase 1 Substrate (Ac-YVAD)2 R110 (ICE) 488 / 520 FP-BI2450 1 mgCaspase 1 (ICE) Substrate, Ac-WEHD-AFC 400 / 405 FP-BI2460 5 mg

FP-BI2461 25 mgCaspase 1 (ICE) Substrate, Ac-WEHD-AMC 380 / 460 FP-BI2470 5 mg

FP-BI2471 25 mgCaspase 1 (ICE) Substrate, Ac-YEVD-AMC, Fluorogenic 380 / 460 FP-BI2390 5 mg

FP-BI2391 25 mgCaspase 1 (ICE) Substrate, Ac-YVAD-AFC 400 / 405 FP-BI2420 5 mg

FP-BI2421 25 mgCaspase 1 (ICE) Substrate, Ac-YVAD-AMC 380 / 460 FP-BI2440 5 mg

FP-BI2441 25 mgCaspase 2 (ICH-1) Substrate, Ac-VDVAD-AFC 400 / 405 FP-BI2490 5 mg

FP-BI2491 25 mgCaspase-2 Substrate (Fluorogenic) Ac-VDVAD-AMC 380 / 460 FP-WT2121 1 mg

FP-WT2120 5 mgCaspase-2 Substrate VDVAD-AFC 400 / 405 FP-1A0340 200 testsCaspase-3 Substrate Z-DEVD-AMC 351 / 430 FP-AM355A 5 mgCaspase-3 Substrate Ac-DEVD-AFC 400 / 500 FP-R1147A 5 mgCaspase-3 Substrate Z-DEVD-AFC 400 / 500 FP-BXQ932 5 mgCaspase-3 Substrate FITC-C6-DEVD-FMK 492 / 514 FP-JQ6931 100 µg

FP-JQ6930 1 mgCaspase-3 Substrate Z-DEVD-R110 488 / 520 FP-99481A 0,5 mgCaspase-3 Inhibitor Z-DEVD-FMK 10mM (5000X) FP-CF8480 20 µlCaspase 3 (APOPAIN) Substrate 1Z, Chromogenic Z-DEVD-pNA 408 / - FP-HG269A 5 mgCaspase 3 Substrate, Ac-DEVD-pNA, Chromogenic 408 / - FP-BI0930 5 mg

FP-BI0931 25 mgCaspase 8 / Granzyme B Substrate 1F, Fluorogenic Ac-IETD-AFC 400 / 405 FP-HG804A 5 mgCaspase 8 / Granzyme B Substrate 1F-Z, Fluorogenic Z-IETD-AFC 400 / 405 FP-HG830A 5 mgCaspase 8 Substrate 1R-Z, Fluorogenic (Z-IETD)2-R110 488 / 520 FP-HG9281 1 mgCaspase 9 Substrate, FITC-C6-LEHD-FMK 492 / 514 FP-JQ6941 100 µg

FP-JQ6940 1 mgCaspase 9 Substrate (Ac-LEHD)2-R110, Fluorogenic 488 / 520 FP-IS9260 1 mgCaspase 9 Substrate, Ac-LEHD-AFC 400 / 405 FP-R14712 5 mg

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Apoptose I Changements cytoplasmiques

Cell Meter™ Multiplexing Caspase 3/7, 8 and 9 Activity Assay KitCe kit particulier est conçu pour suivre simultanément quatre caspases clés (caspase 3/7, 8 et 9) impliquées dans l'activation de l'apoptose des cellules en utilisant trois couleurs fluo-rescentes distinctes. Ce kit utilise les DEVD-ProRed™, IETD-R110 et LEHD-AMC comme indicateurs fluorogènes pour l'activité des caspase 3/7, 8 et 9 respectivement. Après clivage par les caspases, les substrats DEVD-ProRed™, IETD-R110 et LEHD-AMC génèrent trois fluorophores distincts : ProRed™ (fluorescence rouge), R110 (fluorescence verte) et AMC (fluorescence bleue).

Cell Meter™ Live Cell Caspase 3/7 and Phosphatidylserine Detection KitCe kit permet la détection simultané de l'activité caspase 3/7 et des phosphatidylserines, qui apparaissent à la surface des cellules apoptotiques. Un colorant Hoechst sert à la contre-coloration du noyau en bleu.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCell Meter™ Multiplexing Caspase 3/7, 8 and 9 Activity Assay Kit 351 / 430 22820 100 tests

498 / 520534 / 619

Cell Meter™ Live Cell Caspase 3/7 350 / 461 22850 100 testsand Phosphatidylserine Detection Kit 490 / 525

550 / 595Cell Meter™ Live Cell Caspase 1 kit (FAM-YVAD-FMK) 492 / 514 20108 25 testsCell Meter™ Live Cell Caspase 2 kit (FAM-VDVAD-FMK) 492 / 514 20111 25 testsCell Meter™ Live Cell Caspase 3/7 kit (FAM-DEVD-FMK) 492 / 514 20100 25 testsCell Meter™ Live Cell Caspase 6 kit (FAM-VEID-FMK) 492 / 514 20113 25 testsCell Meter™ Live Cell Caspase 8 kit (FAM-LETD-FMK) 492 / 514 20115 25 testsCell Meter™ Live Cell Caspase 9 kit (FAM-LEHD-FMK) 492 / 514 20117 25 testsCell Meter™ Live Cell Caspase 10 kit (FAM-VAD-FMK) 492 / 514 20119 25 testsCell Meter™ Live Cell Caspase 13 kit (FAM-LEED-FMK) 492 / 514 20125 25 testsCaspase 10 Blue Substrate (mFluor™ 450-VAD-FMK) 403 / 454 13475 25 testsCaspase 10 Blue II Substrate (mFluor™ 510-VAD-FMK) 414 / 508 13476 25 testsCaspase 10 Orange Substrate (SulfoRhodamine B-VAD-FMK) 556 / 575 13474 25 testsCaspase 10 Red Substrate (TF4-VAD-FMK) 588 / 610 13471 25 testsZ-DEVD-ProRed™ 620 534 / 619 13433 1 mgZ-IEHD-ProRed™ 620 534 / 619 13435 1 mgZ-IETD-ProRed™ 620 534 / 619 13434 1 mg

Triple marquage avec le Cell Meter™ Live Cell Caspase 3/7 and Phosphatidylserine Detection Kit.

G.63

ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREApoptose I Changements cytoplasmiques

Mesure du glutathion réduit (GSH)Le Cell Meter™ Intracellular GSH Assay Kit utilise le colorant non fluorescent Thiolite™ Green, qui devient fortement fluorescent après réaction avec un thiol (dont le GSH dans les cellules). Dans les cellules normales, le Thiolite™ Green est accumulé principalement dans le cytosol. Mais il est partiellement transporté vers les mitochondries dans des cellules apoptotiques faisant diminuer l'intensité de coloration. Les cellules colorées au Thiolite™ Green peuvent être visualisées en cytomètrie de flux (canal FL1). Le kit peut être utilisé en combinaison avec d'autres réactifs, tels que le 7-AAD pour une étude multi-paramétrique de la viabilité cellulaire et de l'apoptose. Le kit est optimisé pour le criblage des activateurs et des inhibiteurs de l'apoptose en cytomètrie de flux.

MCB Glutathione Detection KitLe MCB Glutathione Detection Kit mesure la diminution du niveau glutathion cellulaire (GSH), qui se produit pendant l'apoptose. Le Monochlorobimane (MCB), qui réagit avec des thiols pour former un produit fluorescent bleu, permet la quantification fluorométrique du GSH dans les lysats cellulaires.Le kit contient le tampon de lyse, le MCB et du GST pour le contrôle positif.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCell Meter™ Intracellular GSH Assay Kit for flow cytometry 490 / 515 22810 1 kitAmplite Fluorimetrix Thiol Quantification Assay Kit, Green 490 / 515 5524 200 testsThiolite™ Blue 335 / 460 21507 5 mgThiolite™ Blue, AM 335 / 460 21506 1 mgMCB Glutathione Detection Kit 394 / 490 30019 100 testsMonochlorobimane, UltraPure Grade 394 / 490 FP-CJF730 10 mgMonochlorobimane 394 / 490 FP-38980A 25 mg

Détection du GSH dans les cellules Jurkat avec le Thiolite™ Green.

Cellules Jurkat traitées avec du DMSO (contrôle) ou de la stau-rosporine 1µM pendant 5h. Les niveaux de Glutathione sont déterminés avec le MCB Glutathione Detection Kit avec un lecteur de microplaque.

Traitées DMSO Traitées Staurosporine

Contrôle négatif

Contrôle positif (GSH 10mM)

RFU

0

2000

4000

6000

8000




Apoptose I Changements de la membrane plasmique

Annexin V marquées

FluoProbes® 488 – Annexin VLe kit Annexin-V-FluoProbes® 488 contient l'annexine V, qui détecte les cellules apoptotiques. En effet peu de temps après que la cellule démarre l'apoptose, elle expose des phoshatidyl-serines (PS) à la surface de la membrane plasmique. L'Annexine V reconnaît les PS expo-sées à la surface cellulaire et se lie avec une grande affinité à elle. Les cellules apoptotiques sont colorées avec l'annexine-V marquée avec un protocole simple et rapide en une seule étape. Les cellules colorées peuvent être mesurées par microscopie à fluorescence ou en cytométrie de flux. Le kit Annexin-V-FluoProbes® 488 contient l'Annexin-V - FluoProbes® 488 et le tampon de liaison, assez pour effectuer au moins 100 tests.

Comme pour le marquage au FITC, le couplage est réalisé en dehors du site de reconnais-sance entre l'annexine V et les PS. Les conjugués FluoProbes permettent ainsi une meilleure efficacité de marquage et une plus grande reproductibilité.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéAnnexin V - FluoProbes® 488 (25µg/ml) + binding buffer 493 / 518 FP- BH4140 500 µlAnnexin V - FITC (50ug/ml) + binding buffer 494 / 518 FP-M1965C 500 testsAnnexin V - FITC (50ug/ml) 494 / 518 FP-M19651 500 µlAnnexin V – R-phycoerythrin (RPE) 565 / 578 FP-AH191B 100 tests

FP-AH191A 500 µlAnnexin V – Allophycocyanin (APC) 565 / 578 FP-AK1949 20 tests

FP-AK194A 100 testsAnnexin V, human recombinant FP-JQ7610 100 µg

FP-JQ7611 1 mg

CF™ dyes – Annexin V

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéAnnexin V, CF350 Conjugate, 50 ug/ml 408 / 452 29012 0,5 mlAnnexin V, CF405M Conjugate, 50 ug/ml 408 / 452 29009 0,5 mlAnnexin V, CF488A Conjugate, 50 ug/ml 490 / 515 29005 0,5 mlAnnexin V, CF555 Conjugate, 50 ug/ml 555 / 565 29004 0,5 mlAnnexin V, CF568 Conjugate, 50 ug/ml 562 / 583 29010 0,5 mlAnnexin V, CF594 Conjugate, 50 ug/ml 593 / 614 29011 0,5 mlAnnexin V, CF633 Conjugate, 50 ug/ml 630 / 650 29008 0,5 mlAnnexin V, CF640R Conjugate, 50 ug/ml 642 / 662 29014 0,5 mlAnnexin V, CF647 Conjugate, 50 ug/ml 650 / 665 29003 0,5 mlAnnexin V, CF680 Conjugate, lyophilized solid 663 / 682 29007 25 µgAnnexin V, CF750 Conjugate, lyophilized solid 755 / 777 29006 25 µgAnnexin V, CF770 Conjugate, lyophilized solid 770 / 797 29046 25 µgAnnexin V, CF790 Conjugate, lyophilized solid 784 / 806 29047 25 µgAnnexin V, Biotin Conjugate, 50 ug/ml 29013 0,5 mlAnnexin V, FITC Conjugate, 50 ug/ml 495 / 519 29001 0,5 mlAnnexin V, Sulforhodamine 101 Conjugate, 50 ug/ml 583 / 603 29002 0,5 ml5X Annexin V Binding Buffer 99902 15 mlDual Apoptosis Assay with NucView™ 488 & CF™594 Annexin V 30067 50 testsDual Apoptosis Assay with NucView™ 488 & CF™640R Annexin V 30073 50 testsApoptosis & Necrosis Quantitation Kit Plus 30065 50 testsApoptotic, Necrotic & Healthy Cells Quantitation Kit Plus 30066 50 testsCF™488A Annexin V and 7-AAD Apoptosis Kit 30060 100 testsCF™488A Annexin V and PI Apoptosis Kit 30061 100 testsAnnexin V, FITC Labeled 492 / 515 20030 100 tests

Stabilité du signal du FluoProbes 488 en comparai-son avec la fluorescéine.

Cellules Jurkat marquées avec le Apoptotic, Necrotic & Healthy Cells Quantitation Kit Plus Les cellules apoptotiques sont colorées avec CF™ 488A Annexin V (vert), les cellules apoptotiques nécrotiques avec EthDIII (rouge). Toutes les cellules sont colorées avec Hoechst 33342 (bleu).

G.65

ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREApoptose I Changements de la membrane plasmique

Annexin V, TRITC Labeled 541 / 568 20031 100 testsAnnexin V-iFluor™ 350 Conjugate 346 / 449 20070 100 testsAnnexin V-iFluor™ 488 Conjugate 491 / 514 20071 100 testsAnnexin V-iFluor™ 555 Conjugate 555 / 565 20072 100 testsAnnexin V-iFluor™ 594 Conjugate 594 / 614 20073 100 testsAnnexin V-iFluor™ 647 Conjugate 649 / 664 20074 100 testsAnnexin V-iFluor™ 680 Conjugate 676 / 695 20075 100 testsAnnexin V-iFluor™ 700 Conjugate 685 / 710 20077 100 testsAnnexin V-iFluor™ 750 Conjugate 749 / 775 20076 100 testsAnnexin V-mFluor™ Violet 450 Conjugate 403 / 454 20080 100 testsAnnexin V-mFluor™ Violet 510 Conjugate 414 / 510 20081 100 testsAnnexin V-mFluor™ Violet 540 Conjugate 424 / 560 20082 100 testsCell Meter™ Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit, Blue Fluorescence Excited at 405 nm

405 / 450 22828 100 tests

Cell Meter™ Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit, Deep Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry

650 / 668 22827 100 tests

Cell Meter™ Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit, Green Fluorescence Excited at 405 nm

414 / 508 22829 100 tests

Cell Meter™ Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit, Green Fluorescence Optimized for Flow Cytometry

490 / 520 22824 100 tests

Cell Meter™ Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit, Orange Fluorescence Excited at 405 nm

424 / 560 22830 100 tests

Cell Meter™ Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit, Orange Fluorescence Optimized for Flow Cytometry

554 / 578 22825 100 tests

Cell Meter™ Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit, Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry

590 / 610 22826 100 tests

Cell Meter™ Live Cell Caspase 3/7 and Phosphatidylserine 350 / 461 22850 100 testsDetection Kit, Triple Fluorescence Colors 490 / 525Cell Meter™ Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit, Blue Fluorescence Excited at 405 nm

405 / 450 22835 100 tests

Cell Meter™ Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit, Blue Fluorescence Optimized for Microplate Readers

405 / 450 22790 100 tests

Cell Meter™ Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit, Deep Red Fluorescence Optimized for Flow Cytometry

649 / 660 22832 100 tests

Cell Meter™ Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit, Deep Red Fluorescence Optimized for Microplate Readers

649 / 660 22793 100 tests

Cell Meter™ Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit, Green Fluorescence Excited at 405 nm

414 / 508 22836 100 tests

Cell Meter™ Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit, Green Fluorescence Optimized for Flow Cytometry

498 / 520 22831 100 tests

Cell Meter™ Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit, GreenFluorescence Optimized for Microplate Readers

498 / 520 22791 100 tests

Cell Meter™ Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit, Orange Fluorescence Optimized for Microplate Readers

554 / 578 22794 100 tests

Cell Meter™ Phosphatidylserine Apoptosis Assay Kit, Red Fluorescence Optimized for Microplate Readers

575 / 600 22792 100 tests

Détection de l'activité de liaison de l'Annexin V-iFluor™488 (# 20071) à la phosphatidylsérine dans des cellules Jurkat. Les cellules Jurkat ont été traitée avec la camptothécine 20 µM (rouge) ou non (bleu) dans un incubateur à 37°C, 5% de CO2 pendant 4-5 heures, puis colorées avec de l'Annexin V-iFluor™ 488 pendant 30 minutes. L'intensité de fluorescence de l'Annexin V-iFluor ™ 488 a été mesurée avec un cytomètre en flux FACSCalibur en utilisant le canal FL1.




Apoptose I Changements de la membrane plasmique

Intégrité de la membrane cellulaire

Cell Meter™ Cell Viability Assay KitsL'intégrité de la membrane cellulaire est la méthode la plus fiable et pratique pour contrôler la cytotoxicité cellulaire. Basés sur le suivie de l'intégrité de la membrane cellulaire, les Cell Meter™ Cell Viability Assay Kits constituent un outil approprié pour étudier les fonctions des cellules proliférantes et non proliférantes. Les kits 22784, 22785, 22786 et 22787 utilisent des composés hydrophobes qui entrent facilement dans les cellules vivantes intactes.

Le kit 22789 utilise deux indicateurs, la CytoCalcein™ Green pour les cellules viables et un colorant d'ADN pour les cellules avec des membranes dégradées. La CytoCalcein™, forte-ment hydrophile, est bien conservée dans le cytoplasme de la cellule. L'activité estérase qui libère la fluorescence de la CytoCalcein™, est proportionnelle au nombre de cellules viables. Le colorant de liaison à l'ADN est très polaire et imperméable pour les cellules viables qui ont des membranes intactes. Il devient fluorescent seulement lors de la liaison à l'ADN des cellules mortes.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCell Meter™ Cell Viability Assay Kit, Blue Fluorescence 360 / 445 22785 500 testsCell Meter™ Cell Viability Assay Kit, Blue with 405 nm Excitation 405 / 450 22784 500 testsCell Meter™ Cell Viability Assay Kit,Green 495 / 515 22786 500 testsCell Meter™ Cell Viability Assay Kit, Green/Red Dual 492 / 540 22789 200 tests

515 / 620Cell Meter™ Cell Viability Assay Kit, NIR Fluorescence 646 / 659 22787 200 testsOptimized for Fluorescence Microplate Reader

D'autres colorants pour déterminer l'intégrité membranaire sont décrits dans les sections :● Biologie Cellulaire (Analyse) | Sondes nucléaires | Colorants des ADN & ARN | Colorants des cellules fixées ou mortes● Biologie Cellulaire (Analyse) | Coloration des cellules | Traceurs cellulaires | Coloration des cellules vivantes | Calcein● Biologie Cellulaire (Analyse) | Comptage de cellules, viabilité et prolifération | Viabilité | Mesure de viabilité par fluorimétrie | Live-or-Dye™ Fixable Viability Staining Kits

Changement dans la mitochondrieVoir les descriptifs dans les sections :● Biologie Cellulaire (Analyse) | Mitochondries | Sondes fluorescentes pour mitochondries | Mesure du potentiel membranaire mitochondriale● Biologie Cellulaire (Analyse) | Sondes membranaires | Mesure du potentiel membranaire | Marqueurs de potentiel membranaire mitochondriale● Biologie Cellulaire (Analyse) | Apoptose | Changements cytoplasmiques | Mesure du glutathion réduit

L'effet de la saponine sur la viabilité cellulaire dans des cellules Jurkat avec Cell Meter™ Cell Viability Assay Kit (# 22789). Des cellules Jurkat ont été trai-tées avec ou sans saponine 0,5% à 2x106 cellules/ml pendant 5 minutes. 100 ul de cellules non traitées (A), 50 ul de non traitée et 50 ul de cellules traitées (B), 25 ul de non traitée et 75 ul cellules traitées (C), et 100 ul de cellules traitées à la saponine 0,5% (D) ont été analysées en microplaque. Les cellules ont été incubées avec 100 µl/puits de CytoCalcein ™ Green / Iodure de propidium pendant 1 heure à 37°C. Le rapport d'intensité de fluorescence à 520 nm (exci-tation à 490 nm) sur 650 nm (excitation à 540 nm) est représenté dans le graphique ci-dessus (n = 6).

D (0.001)

C (0.5)

B (1.1)

A (1.6)

2.0

1.5

1.0

0.5

0.0

RFU

Ratio

(490

/520 n

m :

540/6

50 n

m)

G.67

ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREApoptose I Fragmentation de l'ADN

Mesure d'apoptose par TUNEL

TACS® XL Kits

● Détection de l'apoptose in situ (par TUNEL) dans des sections de tissus congelés ou fixés en paraffine.● Aide à l'identification des morphologies apoptotiques

Le TACS® XL Kit incarne une approche robuste pour la détection in situ de l'apoptose. Il est basé sur l'incorporation de bromodésoxyuridine (BrdU) à l'extrémité 3'-OH des fragments d'ADN qui se forment au cours de l'apoptose. L'incorporation de BrdU par la TdT est plus efficace que les nucléotides Biotinylés ou marqués à la digoxigénine utilisés dans les autres analyses en TUNEL. Le système de détection utilise un anticorps anti-BrdU conjugué à la Biotine et une streptavidine-HRP. La combinaison de la spécificité de l'anticorps avec l'ampli-fication du signal avec les streptavidines / Biotines permet d'obtenir le meilleur rapport signal / bruit.

Le Kit TACS XL® DAB est fourni avec le subtstrat DAB et le contre-colorant Methyl Green. Le Kit TACS XL® Blue Label contient le subtsrat TACS® Blue Label et le contre-colorant Nuclear Fast Red. Ces kits fournissent également le réactif exclusif de perméabilisation Cytonin™ et les réactifs de contrôle TACS-nucléase™.

Produit Réf. QtéTACS® XL DAB Kit 4828-30-DK 30 testsTACS® XL Blue Label Kit 4828-30-BK 30 testsTACS® XL Basic Kit 4828-30-K 30 testsTerminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT) 9510-01K-EB 1 000 uTdT Enzyme 4821-96-05 25 µlCytonin™ permeabilization reagent 4876-05-01 5 mlBrdU FP-18538A 100 mgBrdUTP, 10 mM in TE buffer FP-T8199A 25 µl

FP-T8199B 100 µl




Kits TUNEL avec colorants CF™ dyes et dUTP marquésLa technique TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick-end labeling) est très sélective pour la détection de cellules apoptotiques, et non de la nécrose des cellules ou des cassures de brins d'ADN résultant d'irradiation ou de médicaments. Dans ce test, l'enzyme TdT catalyse l'ajout de dUTP marqué aux extrémités 3 des fragments d'ADN clivés. Le conjugué fluorescent du dUTP peut être utilisé pour la détection directe de l'ADN fragmenté par microscopie à fluorescence ou cytométrie de flux.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCF™488A TUNEL Assay Kit 490 / 515 30063 50 testsCF™594 TUNEL Assay Kit 593 / 614 30064 50 testsCF™640R TUNEL Assay Kit 642 / 662 30074 50 testsCF™405S-dUTP 404 / 431 40004 25 nmolCF™488A-dUTP 490 / 515 40008 25 nmolCF™543-dUTP 541 / 560 40002 25 nmolCF™568-dUTP 562 / 583 40005 25 nmolCF™594-dUTP 593 / 614 40006 25 nmolCF™640R-dUTP 642 / 662 40007 25 nmolCF™680R-dUTP 680 / 701 40003 25 nmolCyanine 555-dUTP 550 / 570 40064 25 nmolCyanine 647-dUTP 650 / 670 40065 25 nmolDEAC-dUTP 426 / 480 40059 25 nmol5-TAMRA-dUTP, 1 mM solution 553 / 577 40001 25 µlFluorescein-12-dUTP 494 / 521 40063 25 nmol5-Bromo-dUTP, 10 mM solution 40025 25 µlBiotin-11-dUTP, 1 mM solution 40029 50 µlBiotin-11-dUTP, lyophilized 40029-1 50 µgBiotin-16-dUTP, 1 mM solution 40022 50 µlBiotin-16-dUTP, lyophilized 40022-1 50 µgBiotin-20-dUTP, 1 mM solution 40030 50 µlBiotin-20-dUTP, lyophilized 40030-1 50 ug5,6-TAMRA Aminoally-dUTP (1 mM) FP-IM0550 30 µl5-Aminoally-dUTP, sodium salt, 10 mM in TE buffer FP-AK218A 100 µlAminoally-dUTP, sodium salt 4 mM TE buffer FP-AK218B 1 µmolAminoally-dUTP, trisodium salt FP-AY490A 1 mgAmino-11-dUTP FP-EV0970 1 µmol

FP-EV0971 5 µmolFP-EV0972 25 µmol

Aminoally-dUTP - CYanine3 (1 mM) 555 / 570 FP-FI0390 10 µlFP-FI0391 5 x 10 µl

Aminoally-dUTP - CYanine5 (1 mM) 646 / 662 FP-FI0410 10 µlFP-FI0411 5 x 10 µl

Aminoally-dUTP - DNP (1 mM) FP-MRU140 25 µlBiotin-11-dUTP Lyophilized powder FP-AY489A 50 µgBiotin-11-dUTP, 1 mM in pH 7.5 Tris-HCl buffer FP-AM539A 50 µl

FP-AM539B 100 µlBiotin-16-dUTP Lyophilized powder FP-AM542A 50 µgBiotin-16-dUTP, 1 mM IN Tris buffer (pH 7.5) FP-GCZ950 25 nmolBiotin-18-dUTP, 5 mM FP-DO4210 1 mlDIG-11-dUTP 1 mM FP-DY1160 25 µl

FP-DY1161 5 x 25 µl5-ethynyl-dUTP (5-edUTP) 100 mM, aqueous solution, pH 7.5 FP-DQI620 5 µmol

FP-DQI621 2,5 µmolFP-DQI622 0,5 µmol

FluoProbes 350 – dUTP 353 / 432 FP-1J8680 100 nmolFluoProbes 390A Aminoally-dUTP (1 mM) 390 / 479 FP-IM1030 80 µl


Apoptose I Fragmentation de l'ADN

Coloration TUNEL de coupes en paraffine de glande mammaire de rat, 5 jours après sevrage en utilisant le CF™ 594-dUTP (rouge). Les noyaux sont colorés au DAPI (bleu).

G.69


Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéFluoProbes 405 dUTP 400 / 423 FP-1G6280 100 nmolFluoProbes 415 - dUTP 418 / 465 FP-1J6350 100 nmolFluoProbes 425A Aminoally-dUTP (1 mM) 444 / 487 FP-FQ5520 10 µlFluoProbes 430 - dUTP 444 / 487 FP-1J6420 100 nmolFluoProbes 465A Aminoally-dUTP (1 mM) 453 / 508 FP-IM1000 80 µlFluoProbes 480XXL Aminoally-dUTP (1 mM) 500 /630 FP-IL2870 40 µlFluoProbes 485XXL Aminoally-dUTP (1 mM) 485 / 560 FP-IL2840 40 µlFluoProbes 488-Aminoally-dUTP (1 mM) 493 / 519 FP-IM1110 20 µlFluoProbes 490 - dUTP 491 / 515 FP-JO2800 100 nmolFluoProbes 495 - dUTP 494 / 520 FP-1J6300 100 nmolFluorescein-12-dUTP 1 mM in water 495 / 520 FP-BC5470 40 µlFluoProbes 495A Aminoally-dUTP (1 mM) 495 / 527 FP-FQ5530 80 µlFluoProbes 505-X5 dUTP 505 / 520 FP-1J6310 100 nmolFluoProbes 547 - dUTP 551 / 565 FP-1J6320 100 nmolFluoProbes 547H - dUTP 550 / 575 FP-1H0910 100 nmolTAMRA - dUTP 545 / 575 FP-GCZ980 25 nmolTAMRA - dUTP 1 mg/ml water solution 545 / 575 FP-BF4390 40 µlFluoProbes 555 - dUTP 554 / 576 FP-1J6330 100 nmolFluoProbes 556 - dUTP 548 / 573 FP-1J7390 100 nmolFluoProbes 565A Aminoally-dUTP (1 mM) 563 / 592 FP-FQ5570 80 µlSR101-dUTP (1 mM) 583 / 603 FP-CE8100 10 µlSR101-dUTP (1 mM) 583 / 603 FP-CE8101 5 x 10 µlFluoProbes 594 - dUTP 586 / 616 FP-1H0840 100 nmolFluoProbes 594A Aminoally-dUTP (1 mM) 601 / 627 FP-IL2760 40 µlFluoProbes 620A Aminoally-dUTP (1 mM) 619 / 643 FP-FQ7160 40 µlFluoProbes 633A Aminoally-dUTP (1 mM) 629 / 657 FP-IL7140 40 µlFluoProbes 647 - dUTP 653 / 672 FP-1H0860 100 nmolFluoProbes 654 - dUTP 653 / 677 FP-1K3170 100 nmolFluoProbes 677 - dUTP 673 / 694 FP-1J6360 100 nmolFluoProbes 681 - dUTP 691 / 708 FP-1J7410 100 nmolFluoProbes 700A Aminoally-dUTP (1 mM) 700 / 719 FP-IL2640 40 µlFluoProbes 725A Aminoally-dUTP (1 mM) 725 / 752 FP-IL2620 40 µlFluoProbes 740A Aminoally-dUTP (0,5 mM) 740 / 764 FP-IL6240 80 µlFluoProbes 751 Aminoally-dUTP (1 mM) 751 / 779 FP-IL2720 40 µlFluoProbes 776 Aminoally-dUTP (0,4 mM) 771 / 793 FP-SN0240 100 µlFluoQuench 540 Aminoally-dUTP (1 mM) FP-IL5540 40 µlFluoQuench 580 Aminoally-dUTP (1 mM) FP-IL4060 40 µlFluoQuench 612 Aminoally-dUTP (1 mM) FP-IL5990 40 µlFluoQuench 660 Aminoally-dUTP (1 mM) FP-IL2630 40 µlFluoQuench 661 Aminoally-dUTP (1 mM) FP-IL2610 40 µl

Apoptose I Fragmentation de l'ADN






Apoptose I Nécrose

Identification des cellules nécrotiques

Cell Meter™ Apoptotic and Necrotic Detection KitsLe Cell Meter™ Apoptotic and Necrotic Detection Kit # 22840 contient l'Annexin V fluores-cente pour l'identification des cellules apoptotiques, qui expose les phosphatidyl serine à leur surface, le CytoCalcein Violet 450 pour marquer le cytoplasme des cellules vivantes et le colorant d'ADN, 7-AAD, pour marquer les cellules dont la membrane est dégradée.

Le Cell Meter™ Apoptotic and Necrotic Detection Kit # 22843 contient l'Annexin V fluores-cente rouge, le CytoCalcein Violet 450 et le colorant d'ADN vert, DNA Nuclear Green™ DCS1.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCell Meter™ Apoptotic and Necrotic Detection Kit 405 / 450 22840 100 tests

490 / 525546 / 647

Cell Meter™ Apoptotic and Necrotic Detection Kit 405 / 450 22843 100 tests490 / 525630 / 650

PathoGreen™ Histofluorescent StainLe PathoGreen™ Histofluorescent Stain est un fluorochrome vert anionique fonctionnelle-ment similaire aux colorants Fluoro-Jade®. Ces produits colorent les neurones en dégénères-cence dans des coupes de cerveau fixées et des neurones en culture. Les produits colorent les neurones apoptotiques et nécrotiques après une exposition à des neurotoxiques. Le mé-canisme de coloration neuronale par des colorants fluorescents anioniques n'a pas été déter-minée. Il a été proposé que les colorants chargées négativement se lient à la charge positive des polyamines ou d'autres molécules spécifiquement générées à la mort des neurones.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéPathoGreen™ Histofluorescent Stain, 1000X in water 497 / 520 80027-5ml 5 ml

80027-50ml 50 mlFluoro-Jade B 480 / 525 FP-DX2521 30 mgFluoro-Jade C, highest resolution 485 / 525 FP-CD0860 30 mgFluoro-Jade C staining kit with DAPI counter stain 485 / 525 FP-ITF96A 1 kit

Neurones en dégénérescence dans une section d'hippocampe de souris marqués avec le Patho-Green™ Histofluorescent Stain.

G.71

ANALYSE DE BIOLOGIE CELLULAIREApoptose I Autophagie


Autophagie

Cell Meter™ Autophagy Assay Kit Le Cell Meter™ Autophagy Assay Kit utilise le colorant Autophagy Blue pour analyser l'acti-vité de l'autophagie. Le dosage est optimisé pour la détection directe de l'autophagie dans les cellules détachées et attachées. Le kit fournit tous les composants essentiels pour le protocole de dosage.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéCell Meter™ Autophagy Assay Kit 333 / 518 23000 200 testsMonodansyl cadaverine, Lysosomotropic Fluorescent Probe 333 / 518 FP-75581A 100 mg

FP-75581B 250 mgFP-75581C 1 g

Autophagy/Cytotoxicity Dual Staining KitLe Autophagy/Cytotoxicity Dual Staining Kit fournit un outil pratique pour étudier la régulation de l'autophagie et la cytotoxicité au niveau cellulaire. Le kit utilise le monodansylcadavérine (MDC), une substance incorporée dans les corps multilamellaires à la fois par un mécanisme de piégeage d'ions et par l'interaction avec les lipides membranaires, en tant que sonde pour la détection de vacuoles d'autophagiques. L'iodure de propidium est utilisé comme un marqueur de mort cellulaire. Le tamoxifène, un inducteur connu de l'autophagie, est inclus comme un contrôle positif.

Produit Ex / Em (nm) Réf. QtéAutophagy/Cytotoxicity Dual Staining Kit 335 / 512 600140 100 tests


analyse de biologie cellulaire coloration des … · g.49 analyse de biologie cellulaire comptage...

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