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L’Harpagophytum est une plante largement utilisée pour ses propriétés anti-inflammatoires et antalgiques. Les composés responsables de cette activité sont les iridoïdes dont le représentant majoritaire est l’harpagoside (ci-contre). Pour ses actions, cette plante est une des plus répandue sur le marché et, il est possible de la retrouver dans de nombreux types de produits. A ce titre, la méconnaissance du produit peut amener à une activité nulle ou bien dans certains cas, à une toxicité chronique. C’est pourquoi les contrôles doivent être pertinents afin de protéger le consommateur. Le problème est que pour l’Harpagophytum, comme pour de nombreuses autres espèces végétales, il existe un grand nombre de techniques proposées par les textes règlementaires (Pharmacopées) ou les différents laboratoires. L’objet de ce document est de mettre en évidence les différences existantes entre les méthodes les plus courantes et de présenter une méthode permettant d’obtenir les informations souhaitées
NEWSLETTERS – DISPARITÉ DES MÉTHODES ANALYTIQUES, CAS DE L’HARPAGOPHYTUM
INTRODUCTION
Méthode par spectrophotométrie UV 1 Parmi les techniques utilisées de nos jours, la méthode la plus ancienne est celle qui permet de suivre la teneur en harpagoside (ou en iridoïdes) au sein de tous types d’échantillon par spectrophotométrie UV sans chromatographie au préalable. Cette technique est basée sur l’extraction de l’harpagoside à l’aide d’un solvant adapté et, en se plaçant à 280 nm (longueur d’onde d’absorption maximale de l’harpagoside) de doser l’harpagoside et par extension ,(et par abus de langage) les iridoïdes. Les extraits commerciaux peuvent être titrés jusqu’à plus de 20% en iridoïdes.
BOTANICERT, LABORATOIRE D’ANALYSE DU VÉGÉTAL – [email protected] – 04.89.85.60.27
CONCLUSION Comment s’assurer de la qualité de vos échantillons d’Harpagophytum?
Contrôler l’identité de la matière première (identification HPTLC ou HPLC ainsi que sa qualité (dosage d’iridoïdes par UHPLC-MS/ELSD).
AVRIL 2016
Actuellement, l’HPLC couplée à un détecteur UV semble être la technique de choix pour doser les iridoïdes. Lorsqu’une analyse plus précise est demandée, les acteurs se tournent principalement vers cette solution. Le problème est qu’il est possible de trouver de nombreuses méthodes différentes et il est complexe pour les acteurs d’appréhender, d’une part la pertinence de la méthode et d’autre part, de savoir comment les comparer entre elles. C’est pourquoi les deux méthodes les plus répandues ont été comparées.
Méthodes non exhaustives par HPLC-UV 2
Méthode 1 : doser les iridoïdes totaux en ne dosant que l’harpagoside Méthode 2 : doser les iridoïdes totaux en ne dosant que l’harpagoside et le 8-O-p-CH Méthode 3 : doser uniquement l’harpagoside Méthode 4 : doser uniquement l’harpagoside et le 8-O-p-coumaroylharpagide
Sans chromatographie au préalable, il y aura des interférences. A 280 nm, de nombreux composés autre que les iridoïdes vont absorber (comme les acides phénols avec le verbascoside) et certains iridoïdes ne seront tout simplement pas détectés
8-O-p-coumaroylharpagide (8-O-p-CH)
Harpagoside
Harpagide
8-O-p-coumaroylharpagide Harpagoside
- Les méthodes 1 et 2 présentent des intitulés de dosage identiques et les résultats seront très différents
- Pour les méthodes 1 et 2, les iridoïdes sont dosés aux longueurs d’onde d’absorption respectives de l’harpagoside et du 8-O-p-CH
- Les méthodes 3 et 4, bien que pertinentes, ne permettent pas d’obtenir la teneur réelle en iridoïdes totaux
HPLC-UV à 280 nm
Méthode exhaustive par UHPLC-MS/ELSD développée par BotaniCert 3
Harpagide
Iridoïde
Harpagoside 8-O-p-coumaroyl harpagide
8-O-p-feruoyl
harpagide
Pagoside
Methoxy-pagoside
Profil MS à CV=10V
Acides phénols
Il est possible d’obtenir une idée proche de la réalité en utilisant une méthode de routine par UHPLC-MS/ELSD. Les iridoïdes sont identifiés à l’aide du spectromètre de masse et dosés à l’aide d’un détecteur universel, l’ELSD. Tous les inconvénients des méthodes précédentes sont ainsi écartés permettant aux acteurs de pouvoir réellement juger de la qualité d’un échantillon.