Inserm Instituts thématiques

Institut national de la santé et de la recherche médicale

Frederic FIORE, PhD frederic.fiore@inserm.fr

INSERM US012 CNRS UMS 3367

Aix Marseille Université

Archivage Distribution

Phénotypage Zootechnie

Validation de cibles Évaluation des risques

Mutagénèse

Éthique Bien être animal

R&D

Éducation Formation

Services à la recherche et l’industrie

KO-KI Booster Plate-forme IBISA d’exploration

des fonctions du système immunitaire de la souris

1 Module

de KO/KI Trangénèse

Cryopréservation Archivage

Décontamination par transfert d’embryons

Module de stabulation

EOPS (10 000 cages)

Exploration fonctionnelle du

système immunitaire de la

souris en conditions

A3/L3

2 3 4 5

Exploration fonctionnelle du

système immunitaire de la

souris Cytométrie et tri multi-

paramétrique

CIML Implémentation en continue

des panels d’anticorps

CIMTECH Anticorps

monoclonaux

Zone Laboratoire banalisé

Zone Animalerie EOPS

Zone Animalerie A3/L3

Zone Laverie

Zone Bureaux - Stockage

Zone Laboratoire banalisé

Zone Animalerie A3/L3

Zone Animalerie EOPS

Zone Laverie

Zone Bureaux - Stockage

Micro-injection

Biologie cellulaire

Chimères matures

Transmission + Géno-typage

F1

Contrôles sanitaires

3-5 mois 3 mois ~ 6-9 mois

2 w 7 w 5+2 w 4 w 4w ~ 6-9 mois

F1 matures Bio-mol Etude Projet

+ Stratégie

1 mois 1w

Livraison

Certification Iso 2001 de ce périmètre décembre 2012

Knock-out Knock-out conditionnel Knock-in

d’une mutation ponctuelle d’une étiquette Tag à des fins d’analyses biochimiques Tag de protéines fluorescentes Du récepteur humain à la toxine diphtérique

Knock-in entraînant la constitution d’un allèle complexe et multi-analytique Combinatoire entre : protéines fluorescentes + récepteur humain à la toxine

diphtérique Tag à des fins d’analyses biochimiques + protéines fluorescentes

+ récepteur humain à la toxine diphtérique (à venir)

R415

1 2 3

Start Stop

R415A

1 2 3

Start Stop

N

R415X

1 2 3

Start Stop

N

Stop

1 2 3

Start Stop

1 2 3

Start Stop

TdT IRES2

Stop

1 2 3

Start Stop Stop

+ N N

N

N

N

TEAL YPET

Neptune

TdT EGFP

(à venir)

TEAL YPET

Neptune

EGFP

(à venir)

N

N

eYFP eYFP

3’UTR

3’UTR 3’UTR

1 2 3

Sart Stop

1 2 3

Start Stop

hDTR IRES2

Stop

+ N N

+ DT-A

Mort cellulaire

3’UTR

3’UTR

1 2 3

Stop

1 2 3

Start Stop

FP IRES2

+ N

C

+ N

+ DT-A

Mort cellulaire Suivi cellulaire

Stop

hDTR 2A Linker

3’UTR

3’UTR

1 2 3

Stop

1 2 3

Start Stop

3’UTR

3’UTR Stop

Tag

N Tag de très haute affinité qui permet l’analyse de l’intéractome protéique en condition stœchiométrique via la spectrométrie de masse

Purification des complexes

Start

P1 P2

P3

1 2 3

Stop

1 2 3

Start

FP IRES2

Stop

3’UTR

3’UTR Stop

Tag

Suivi de l’expression par émission de fluorescence + signalosome en condition stœchiométrique via spectrométrie de masse

Purification des complexes

Start

N

P1 P2

P3

1 2 3

Stop

1 2 3

Start

FP IRES2

Stop

hDTR 2A Linker

3’UTR

3’UTR Stop

Tag

+ DT-A

Mort cellulaire

N

P1 P2

P3

Plus de 103 projets pris en charge depuis 2008

Module confiné BSL3

gorvel@ciml.univ-mrs.fr

Module Immunophenotypage

malissen@ciml.univ-mrs.fr

Module « Cryo-préservation, Cohortes, Intégration

PHENOMIN» malissen@ciml.univ-mrs.fr

Micro-injection

Biologie cellulaire

Chimères matures

Transmission + Géno-typage

F1

Contrôles sanitaires

3-5 mois 3 mois ~ 6-9 mois

2 w 7 w 5+2 w 4 w 4w ~ 6-9 mois

F1 matures Bio-mol Etude Projet

+ Stratégie

1 mois 1w

Livraison

Module KOKI : frederic.fiore@inserm.fr

Spécialisation en Cytométrie multi-paramétrique et

Développement de la Cytométrie de masse

Bilan hématologique complet Immunophenotypage exhaustif- analyse multiparamétrique Réponse immunitaire – standard et inflammatoire L'activité génique par l'expression d'un gène rapporteur Tri des différents populations des cellules immunitaires Cytometrie de masse R&D Réponse immunitaire –conditions infectieuse (BSL3) Virus, bactérie Tri des cellules infectées Bio-imaging –ex vivo, in vivo Imagerie 3D à haute résolution de tissus vivants Imagerie dynamique en temps réel de cellules vivantes normales ou infectées Microdissection- sélection d’une population ou d’une région cellulaire d’intérêt R&D

CYTO

BSL3

CELPHEDIA French national technological network for

integrative and syntetic biology

INFRAFRONTIER European infrastructure

for phenotyping, archiving and

distribution of mouse models

INTERNATIONAL MOUSE PHENOTYPING

CONSORTIUM 6 countries, 15 research

institutes

PHENOMIN French nationale infrastructure for

phenogenomics

Boissonnas, A., Scholer-Dahirel, A., Simon-Blancal, V., Pace, L., Valet, F. Kissenpfennig, A., Sparwasser, T., Malissen, B., Fetler, L. and Amigorena, S., Foxp3+ T cells induce perforin-dependent dendritic cell death in tumor-draining lymph nodes. Immunity. 32: 266-278.

Guilliams, M., Crozat, K., Henri, S., Tamoutounour, S., Grenot, P., Devilard, E., de Bovis, B., Alexopoulou, L., Dalod, M. and Malissen, B., Skin-draining lymph nodes contain dermis-derived CD103(-) dendritic cells that constitutively produce retinoic acid and induce Foxp3(+) regulatory T cells. Blood. 115: 1958-1968.

Henri, S., Poulin, L. F., Tamoutounour, S., Ardouin, L., Guilliams, M., de Bovis, B., Devilard, E., Viret, C., Azukizawa, H., Kissenpfennig, A. and Malissen, B., CD207+ CD103+ dermal dendritic cells cross-present keratinocyte-derived antigens irrespective of the presence of Langerhans cells. J Exp Med. 207: 189-206.

Komatsu, N., Mariotti-Ferrandiz, M.E., Wang, Y., Malissen, B., Waldmann, H., and Hori, S. (2009). Heterogeneity of natural Foxp3+ T cells: a committed regulatory T-cell lineage and an uncommitted minor population retaining plasticity. Proc Natl Acad Sci U S A 106, 1903-1908.

Kissenpfennig, A., and Malissen, B. (2006). Langerhans cells--revisiting the paradigm using genetically engineered mice. Trends Immunol 27, 132-139.

Prinz, I., Sansoni, A., Kissenpfennig, A., Ardouin, L., Malissen, M., and Malissen, B. (2006). Visualization of the earliest steps of gammadelta T cell development in the adult thymus. Nat Immunol 7, 995-1003.

Près de 50 publications réalisées par les utilisateurs de la plate-fome IBISA « KI/KO booster » (l'embryon de CIPHE)

Inserm Instituts thématiques

Institut national de la santé et de la recherche médicale

Partenariats, collaborations et soutiens

Dr Bernard Malissen –Directeur du CIPHE bernardm@ciml.univ-mrs.fr Dr Ana Zarubica – Directrice des opérations du CIPHE, COO ana.zarubica@inserm.fr Dr Frederic Fiore - Responsable du module KO/KI « Création de

lignées de souris génétiquement modifiées » frederic.fiore@inserm.fr Dr Marie Malissen – Responsable des modules

« Immunophenotypage » « Cryo-préservation, Cohortes, Intégration PHENOMIN » malissen@ciml.univ-mrs.fr Dr Jean-Pierre Gorvel – Responsable du module « Infectiologie BSL3 » gorvel@ciml.univ-mrs.fr