guide ccm révélateurs
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La rvlation en chromatographieLarvlationenchromatographiesurcouchemince
Est elle un art?Estelleunart?
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Paul KleePaulKlee
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tudiant pharmacognosietudiantpharmacognosie
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UNIVERSITEFRANCOISRABELAISTOURS
JolleDorat*.MichellePinault**. Jacques Pothier*JacquesPothier laboratoireNutrition,CroissanceetCancerdel i I U921 d l f l dlquipeInsermU921delafacultdemdecinedeTOURS
LaboratoiredepharmacognosieA M 37200 t AvenueMonge37200tours
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R l ti D i ti tiRvlation,Drivatization
Laphasedelachromatographiecouchemincemalmatrise.
EvaluationqualitativeR l ti l i ti Rvlationparpulvrisation
Rvlationparimmersion Rvlationbiologique Evaluation sous lampe UV et vidoEvaluationsouslampeUVetvido
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Les plaques sans rvlationLesplaquessansrvlation
l l i i di fl laplaquecontientunindicateurfluorescent :onsoumetlaplaqueunrayonnementUVetles
t l f d t hcomposssontrvlssousformedetachessombres.
lesUV(254nm) :enexposantlaplaqueunesourcederadiationUV,certainscomposs(systmesconjugusouaromatiques)apparaissentsousformedetachesbrillantes.
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L iode un grand classiqueLiodeungrandclassique
liode :onplongelaplaquedansunbocalcontenantunfonddiodebroy.Lescompossy papparaissentsousformedetachesbruntres.
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Les piges de la rvlationLespigesdelarvlation
Mauvaisschageavantlarvlation Mauvais chauffage aprs application duMauvaischauffageaprsapplicationdurvlateur
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IMPORTANCEDUSECHAGEPREALABLEPREALABLE
il dpend des composs isoler et des luants
i ll t t id b i il f t hsi lluant est acide ou basique il faut un schagepralable avec chauffage pour viter une ractionl ant r late r luant rvlateur
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Exemples alcalodes de l opiumExemplesalcalodesdelopiumOpium par AMD au DragendorffLaboratoire de pharmacognosie Tours
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Dragendorff 1 sansschage,2 schage,3 schageplusacideformique
opiumavecluantalcalin
2 3
1
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Opiumiodoplatinate ractifpeuacidenondestructifdelamolcule
1mauvaisschage2bonschage
1 2
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IMPORTANCE DU SECHAGE PREALABLEIMPORTANCEDUSECHAGEPREALABLE
sionchromatographiedesproduitsvolatilescommeleshuilesessentiellesviterbienvidemmentunschagetropchaud
Laisser par exemple svaporer lluant de la Laisserparexemples vaporerl luantdelaplaquesouslahotteaspirante
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Rvlation puis chauffageRvlationpuischauffage
La plaque chauffanteLaplaquechauffanteestprfrableltuvepour: Unemeilleurehomognitdelatempraturetemprature.
Unemeilleursuividelarvlation.
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A viter ( proscrire)Aviter(proscrire)
h ff b Lechauffagecow boyboy
L h ff bLe chauffage bonne maman
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PulvrisationPulvrisation
Imprgnationdelacoucheparpulvrisationdunesubstanceractive.
Reproductibilitdifficiletrslieloprateur puissance de pulvrisationpuissancedepulvrisation distanced re dure
balayage,homognitdufonddeplaque
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PulvrisateursPulvrisateurs
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Rvlation par vaporisationRvlationparvaporisation Lavaporisationdunractifsurlaplaquencessiteunminimum
d i t i t t d ti t tdquipement,maissurtoutdesprcautionspourseprotgeretprotgerlenvironnementdesvapeurstoxiques,etunemthodebienmatrisepourlimiterlemanquedereproductibilitetlebruitdefond.
Schmadevaporisation
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Rvlation par immersionRvlationparimmersion Larvlationpar
immersion de la plaqueimmersion delaplaquedanslasolutionderactifsestdeloinlameilleuresolution(nonpolluante,
d tibl tit ti )reproductible,quantitative)maisattentionauxexcsd chantillonsurlaplaque,et aux rvlations Plaquedestrodesetauxrvlationsmultiples. rvlsauractif
phosphomolybdique
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Chromatogrammestablissantunecomparaisonentrepulvrisationettrempage
d H h D i t daprsHahnDeinstrop
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Mthodes de DrivationMthodesdeDrivation
UV254et366nm Pulvrisation Trempage Exposition aux vapeurs Expositionauxvapeurs Ractifsdanslesolvant Ractifdansladsorbant
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Ractifs non spcifiquesRactifsnonspcifiques
Acidesulfuriquepluschauffage Vanillinesulfuriquepluschauffage Acidephosphomolybdiquepluschauffage Anisaldhyde sulfurique plus chauffage Anisaldhydesulfuriquepluschauffage SeldeBleusolideB
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Ractifs Gnraux des AlcalodesRactifsGnrauxdesAlcalodes
Dragendorff Actique (selon Munier et Macheboeuf)Actique(selonMunieretMacheboeuf) Chlorhydrique(basespuriques)(C l ti d f d d l(Colorationduorangeaurougesurfonddeplaquejaune)
Iodoplatinate depotassium(Couleursallantduroseaubleuintenseen(passantparleviolet)
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R tif d Ht id fl iRactifsdesHtrosidesflavoniques
Potassealcoolique Ractif au chlorure ferrique Ractifauchlorureferrique Ractifautrichloruredaluminium RactifdeNEU(NP/PEG)
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McanismeractionnelavecleRactifdeNEU
O+
O
OH
BNH2O
OH2 NO
BCH2CH2HO
+
-
- +
-
OHB2
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ChromatogrammesdeGinkgobilobaDaprsWagner
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Ractifs les plus couramment utilissRactifslespluscourammentutiliss
V Vapeurs Iode AmmoniaqueAmmoniaque
Dragendorffactiqueouchlorhydrique(alcalodes) Iodoplatinate (alcalodes) Aniline(carbohydrates) AcideDiphnylborique (Flavones) Acide Phosphomolybdique + chauffage (strodes phnols ) AcidePhosphomolybdique +chauffage(strodes,phnols) Acidesulfurique+chauffage(substancesorganiques) Anisaldhyde sulfurique ou actique + chauffageAnisaldhyde sulfuriqueouactique chauffage
(sapognines,huilesessentielles)
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Ractifs les plus couramment utilissRactifslespluscourammentutiliss
Di hl i 4 hl i id (Ph l i d l ) Dichloroquinone4chlorimide(Phnols,indoles) SeldeBleuSolideB(cannabinodes,phnols,tannins) Rctif de Neu (NP/PEG) (Flavones)RctifdeNeu(NP/PEG) (Flavones) Vanillinesulfurique(Strodes,saponineshuilesessentielles) TrichloruredAntimoine(terpnes,strodes,sapognines) Acidetrichloractique+chloramineT(H.cardiotoniques) Dinitrophnylhydrazine(Aldhydesetctones) PDAB Para dimthylaminobenzaldhyde (Indoles) PDAB=Paradimthylaminobenzaldhyde(Indoles) Acidechlorhydrique acideactique
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Des rvlateurs trs utilissDesrvlateurstrsutiliss Anisaldhyde sulfurique1cannabis2 opium3ginkgo4ginseng
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acidephosphomolybdique
1cannabis2ginkgo3ginseng
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Diffrencesentredeuxrvlationslavanilline chlorhydrique et sulfuriquevanillinechlorhydriqueetsulfurique
Huileessentielleextraitdecranberry
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Choix de la plaqueChoixdelaplaque
Expriencercente Ne pas changer de fournisseur de plaqueNepaschangerdefournisseurdeplaque
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Ne pas changer de fournisseurNepaschangerdefournisseur
Plaquemerck
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Plaque xPlaquex
Mmeluantmmervlation
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glycolipidesglycolipides
Exempledemiseaupointdunemthodedervlation
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Diffrentsrvlateursutilissettestssurdesglycolipidesglycolipides.
CesmanipulationsonttralisesdanslelaboratoireNutrition,CroissanceetCancerdelquipeInsermU921delafacultdemdecine de TOURS avec laide de lquipe demdecinedeTOURS,avecl aidedel quipedeMonsieurBernardSavarydulaboratoireCamag et les conseils de Monsieur JacquesCamagetlesconseilsdeMonsieurJacquesPothier
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DeuxmolculesAetB, drivsglycolipidiquesdiffrentparunesubstitutionensn3.p
(Ractifs :Primuline,Berbrinesulfatedecuivre avec acide ortho phosphorique Acidecuivre avecacideorthophosphorique,Acidesulfuriquediffrentsdosages.
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Acidesulfurique10%danslthanol :20mLdacidesulfuriqueavec180mLdthanol.Lesplaquessontchauffes130Cpendant5min.
ImageavecplaquedriveenWRT
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R tif l lf t d i 20 d lf t d i di d 200 L dRactifaveclesulfatedecuivre :20gdesulfatedecuivredissousdans200mLdemthanolauquelonajoute8mLdacidesulfuriqueet8mLdacideorthophosphorique(85%).Lesplaquessontchauffes140Cpendant30min.
UV 366
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BerbrineBerbrine
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Test la primuline sur molcule cTestlaprimuline surmolculec
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Les ractifs retenusLesractifsretenus
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RemerciementsLes tudiants en pharmacognosieLestudiantsenpharmacognosie
MichellePinault
Joelle Dorat
Paul KleePaulKlee
Nicolasdestael
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Nicolas de StalNicolasdeStal
Nous vous remercions pourremercions pour votre coute
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Acidesulfurique10%danslthanol :20mLdacidesulfuriqueavec180mLdthanol.Lesplaquessontchauffes130Cpendant5min.
ImageavecplaquedriveenWRT
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R tif l lf t d i 20 d lf t d i di d 200 L dRactifaveclesulfatedecuivre :20gdesulfatedecuivredissousdans200mLdemthanolauquelonajoute8mLdacidesulfuriqueet8mLdacideorthophosphorique(85%).Lesplaquessontchauffes140Cpendant30min.
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.Les2ractifsensemblesontappropris.Les2molculesAetBsontsparesmaisilfaudraitunemeilleureposition,ellesrestentbassessurlaplaque.
Lervlateurpeuttreutilis.
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Test primuline sur molcule cTestprimuline surmolculec