faculté de médecine pathologie et biologie cellulaire … · 2019-04-01 · vimal krishnan...

Mardi 2 avril 2019

Pavillon Roger-Gaudry salle M-415

Faculté de médecine

Pathologie et biologie cellulaire

www.patho.umontreal.ca

33e JOURNÉE SCIENTIFIQUE

Département de pathologie et biologie cellulaire Mardi 2 avril 2019

Le Département de pathologie et biologie cellulaire tient à remercier :

Le Département de pathologie et biologie cellulaire ainsi que l’Institut de recherche en immunologie et

cancérologie (IRIC), de l’Université de Montréal, pour leur aide financière.

Les membres du jury : Sébastien Carréno

Dorothée Dal Soglio

Alexandre Dubrac

Janos Filep

Louis Gaboury

Gilles Hickson

Jean-Claude Labbé

Roger Lippé

Nathalie Patey

Philippe Roux

Les modérateurs : Sébastien Carréno

Dorothée Dal Soglio

Louis Gaboury

Le comité organisateur : Sébastien Carréno

Alexandre Dubrac

Louis Gaboury

Diane Gingras

Benoit Lanthier

Les membres du personnel qui ont travaillé à l’organisation de la Journée scientifique :

Wendy Choung, Katherine David, Diane Roy et Michèle Saturné Modé



Sommaire

8h00- 8h30 Arrivée

8h30- 8h40 Mot de bienvenue - Louis Gaboury, directeur du Département

Sébastien Carréno, responsable de la journée

8h40- 9h40 Présentations orales I - Modérateur : Sébastien Carréno

9h40- 10h00 Pause-santé

Durant la pause, les participants sont invités à consulter les affiches

10h00- 11h00 Présentations orales II - Modératrice : Dorothée Dal Soglio

11h00- 11h30 Conférence nouveau chercheur I

Alexandre Dubrac, PhD

Professeur/chercheur adjoint, de notre département et du centre de recherche du CHU Sainte-Justine

Titre: « Retinal vascular mural cell heterogeneity and functional plasticity »

11h30 Mot de la doyenne de la Faculté de médecine, Dre Hélène Boisjoly

11h35- 13h30 Lunch

Durant le lunch, les participants sont invités à consulter les affiches

12h15- 13h30 Présentations par affiche I *Évaluation par les membres du jury

13h30- 14h00 Conférence nouveau chercheur II

Étienne Caron, PhD

Professeur/chercheur adjoint, de notre département et du centre de recherche du CHU Sainte-Justine Titre : «Spectrométrie de masse clinique de nouvelle génération en immunologie, vaccinologie et

immunothérapie »

14h00- 15h00 Présentations orales III - Modérateur : Louis Gaboury

15h00- 16h00 Présentations par affiche II *Évaluation par les membres du jury

16h10- 16h30 Décompte des évaluations et clôture de la journée

16h30 Cocktail et remise de prix dans le Hall d’honneur



Horaire des présentations orales

Présentations orales I : Membres du jury : Roger Lippé et Philippe Roux

8h40 Sabrya Carim (Résumé #8)

8h55 Jack Bauer (Résumé #3)

9h10 Camille De Jamblinne (Résumé #2)

9h25 Thilai Dhanaraman (Résumé #12)

Présentations orales II : Membres du jury : Janos Filep et Louis Gaboury

10h00 Sharmila Khullar (Résumé #6)

10h15 Élizabeth Arslanian (Résumé #1)

10h30 Eugénie Fradette (Résumé #14)

10h45 Kurosh Rahimi (Résumé #11)

Présentations orales III : Membres du jury : Jean-Claude Labbé et Gilles Hickson

14h00 Amira Othman (Résumé #4)

14h15 Virginie Mondin (Résumé #13)

14h30 Pierre Priam (Résumé #10)

14h45 Bita Khadivjam (Résumé #7)



Présentations orales I

Modérateur : Sébastien Carréno

8h40 RHO-DEPENDENT CONTROL OF CITRON KINASE IS REQUIRED FOR THE CONTRACTILE RING-TO-

MIDBODY RING TRANSITION DURING CYTOKINESIS.

Carim, S.*, Wernike, D.*, El-amine, N.* & Hickson, G.R.X, Centre de Cancérologie Charles Bruneau, Centre Hospitalier Universitaire Sainte-Justine, Centre de Recherche, Département

de Pathologie et Biologie Cellulaire, Université de Montréal, Montréal.

8h55 DEVELOPMENTAL REGULATION OF GERMLINE SYNCYTIUM ORGANIZATION IN C. ELEGANS

Jack Bauer1, Mei Zhen3, Jean-Claude Labbé1,2

1Institut de Recherche en Immunologie et en Cancérologie et 2Département de Pathologie et biologie cellulaire, Université de

Montréal, QC. 3Lunenfeld-Tanenbaum Research Institute, University of Toronto, ON.

9h10 STRIPAK COMPLEX CONTROLS MITOTIC MORPHOGENESIS THROUGH MOESIN ACTIVATION

De Jamblinne Camille1, Decelle B1, Leguay K1, Sriskandarajah N3, Roux PP1,2 , Hipfner D3, Carreno S1,2

1Institut de recherche en immunologie et en cancérologie ; 2Département de pathologie et biologie cellulaire ; 3Institut de recherches cliniques de Montréal, Université de Montréal

9h25 THE TUMOR SUPPRESSOR RASSF1A IS AN EFFECTOR OF THE RGK FAMILY OF SMALL GTPASE

PROTEINS

Dhanaraman T1, Singh S1, Killoran R1, Singh A2, Shifman J2 and Smith M J1

1. Département de pathologie et biologie cellulaire, et Institut de recherche en immunologie et en

cancérologie, Université de Montréal. 2. Department of Biological Chemistry, Hebrew University of Jerusalem.

Présentations orales II

Modératrice : Dorothée Dal Soglio

10h00 CORRELATION HISTOLOGIE-CYTOLOGIE DE BIOPSIES GANGLIONNAIRES/MEDIASTINALES PAR EBUS/EUS

Khullar S, Roméo P, Leduc C, Hadjeres R, Département de pathologie et biologie cellulaire, Centre Hospitalier de l’Université de Montréal

10h15 LOCALISATION DU MARQUAGE IMMUNOHISTOCHIMIQUE DE CD73 DANS LE MICROENVIRONNEMENT DE METASTASES HEPATIQUES DE CANCER COLORECTAL SUR DEUX MICROPUCES TISSULAIRES

Arslanian E1, Messaoudi N2, Soucy G1, Stagg J2, Turcotte S2, Trudel D1,2

1. Discipline pathologie, CHUM. 2. Centre de recherche du CHUM

10h30 CHRONIC ENDOMETRITIS: REVISION OF HISTOLOGICAL CHARACTERISTICS AND FERTILITY

OUTCOME

E. Fradette1, A. Bissonnette1, L. Nicholls-Dempsey1, J. Saumet2, N. Patey3,4, D. Dal Soglio3,4

1Dept. Ob/Gyn, Université de Montréal, 2Dept. Ob/Gyn, Centre hospitalier universitaire Sainte-Justine, Montréal, 3Dept. de

Pathologie, Centre hospitalier universitaire Sainte-Justine, Montréal, 4Superviseures du projet de recherche



10h45 INTÉGRATION DE BIOMARQUEURS MOLÉCULAIRES À LA PRATIQUE CLINIQUE

Dr Kurosh Rahimi, Dre Cécile le Page, Dre Diane Provencher, Dre Anne-Marie Mes-Masson. CR-CHUM, Montréal, Qc, Canada

Présentations orales III

Modérateur : Louis Gaboury 14h00 L'INTERFÉRON BÊTA FACILITE LA RÉSOLUTION DE L'INFLAMMATION PULMONAIRE INDUITE

PAR E. COLI

Othman A1, Sekheri M1, El Kebir D1, Ariel A2, Filep JG1

1 Département de pathologie et biologie cellulaire et Centre de recherche, HMR 2 Université de Haifa

14h15 A PTEN/PLC PATHWAY REDUCES ENDOSOMAL PI (4,5)P2 AND CAN COMPENSATE FOR LOSS OF

THE OCRL PHOSPHATASE

Mondin V1, Ben El Kadhi K1, Chagroui J1, Decelle B1, Carréno S 1,2

1-Institute for Research in Immunology and Cancer (IRIC), Université de Montréal, Montreal, QC H3C 3J7, Canada

2-Département de Pathologie et de Biologie Cellulaire, Université de Montréal, Montreal, QC H3C 3J7, Canada

14h30 SMARCD1 SUBUNIT OF SWI/SNF CHROMATIN REMODELING COMPLEXES IS REQUIRED FOR

LYMPHOID SPECIFICATION

Pierre Priam1, Veneta Krasteva1, Philippe Rousseau1 and Julie A Lessard1

1 Département de pathologie et biologie cellulaire, IRIC, Université de Montréal.

14h45 HERPES SIMPLEX VIRUS TYPE-1 INTERACTION WITH HUMAN ATP-DEPENDENT RNA

HELICASE DDX3X

Khadivjam B1, Bonneil E2, Thibault P2, Lippé R1, 1Département de Pathologie et biologie cellulaire,et 2Institut de Recherche en Immunologie et en Cancérologie, Université de Montréal.



Horaire des présentations par affiche

Les affiches doivent demeurer sur les babillards toute la journée, dans le Hall d’honneur

Présentations par affiche I :

12h15- 13h30 Membres du jury : Alexandre Dubrac et Gilles Hickson

Hugo Boruchowicz (Résumé #1)

Mackenzie Thornbury (Résumé #8)

Kendra Cruz Palomar (Résumé #9)

Kévin Leguay (Résumé #5)

12h15- 13h30 Membres du jury : Dorothée Dal Soglio et Nathalie Patey

Simon Roy (Résumé #2)

Louis Samson (Résumé #6)

Marie-Hélène Ngo (Résumé #7)

Présentations par affiche II :

15h00- 16h00 Membres du jury : Sébastien Carréno et Alexandre Dubrac

Catherine Vandal (Résumé #10)

Clothilde Berger (Résumé #15)

Gabriela Bernal Astrain (Résumé #16)

Swati Singh (Résumé #14)

15h00- 16h00 Membres du jury : Dorothée Dal Soglio et Nathalie Patey

Vimal Krishnan (Résumé #11)

Heidi Youssef (Résumé #13)



Résumés des

communications

scientifiques

orales



1. Localisation du marquage immunohistochimique de CD73 dans le microenvironnement de métastases

hépatiques de cancer colorectal sur deux micropuces tissulaires

Arslanian E1, Messaoudi N2, Soucy G1, Stagg J2, Turcotte S2, Trudel D1,2. 1. Discipline pathologie, CHUM. 2. Centre

de recherche du CHUM

Introduction: L’ecto-nucléotidase CD73 contribue à l’immunodépression et favorise l’envahissement en altérant

l’adhésion cellulaire. Son niveau est augmenté dans le microenvironnement tumoral. L’immunofluorescence a montré un

marquage de CD73 au sein du stroma et de la nécrose tumorale, quantitativement corrélé au pronostic. Le but est d’étudier

les micropuces tissulaires en immuno-H&E pour préciser la localisation du marquage de CD73.

Méthodes et résultats: L’échantillon comprend 31 patients, avec 1 à 3 métastases chacun (total de 50 métastases). Deux

micropuces tissulaires numérisées comprenant pour chaque patient six prélèvements tumoraux et six à l’interface entre

le foie non-tumoral et la tumeur, pour un total de 600 prélèvements, ont été étudiées avec immuno-H&E. Nous avons

exclu 118 des 600 prélèvements en vertu des critères suivants : matériel insuffisant ou mal identifié et artéfact technique

important. En l’absence d’interprétation validée du marquage immunohistochimique de CD73 dans le

microenvironnement de métastases hépatiques de carcinome colorectal, l’identification visuelle de la couleur, à divers

degrés d’intensité, a été répertoriée. Nous avons noté un marquage aux localisations suivantes : apex des cellules

néoplasiques, matériel nécrotique, membrane et cytoplasme de fibroblastes, membrane hépatocytaire, lumière et

membrane apicale des canalicules biliaires.

Conclusion et pertinence : L’immunofluorescence et l’immunohistochimie suggèrent la présence de CD73 dans le

microenvironnement de métastases hépatiques de carcinome colorectal. La signification de ce marquage est à explorer.

2. STRIPAK complex controls mitotic morphogenesis through Moesin activation

De Jamblinne Camille1, Decelle B1, Leguay K1, Sriskandarajah N3, Roux PP1,2 , Hipfner D3, Carreno S1,2

1Institut de recherche en immunologie et en cancérologie ; 2Département de pathologie et biologie cellulaire ; 3Institut

de recherches cliniques de Montréal, Université de Montréal

Introduction: During mitosis, coordination between chromosome segregation and cell morphogenesis preserves genome

stability. Deregulation of this coordination triggers tumorigenesis. In Drosophila melanogaster, the only ERM

orthologue, Moesin, controls cell shaping and spindle orientation during mitosis. We reported that Slik kinase

phosphorylates Moesin at the plasma membrane to promote its activation at mitosis entry. However how Slik itself is

spatiotemporally regulated remains elusive.

Methods and Results: Here we discovered that core members of the STRIPAK complex (Striatin Interacting

Phosphatase and Kinase) regulate Slik localization at the plasma membrane. Previously, we identified in a genome wide

RNAi screen in Drosophila S2 cells, the four members of phosphatase complex of STRIPAK (PP2A) as Moesin

activators. We further revealed an interaction between Slik kinase and Cka (Striatin, the regulatory subunit of PP2A) by

co-immunoprecipitation assays. In addition, the depletion of Cka or Strip (Striatin Interaction Protein) reduced Slik

localization at the plasma membrane. Finally, we evidenced that Slik localization is regulated by phosphorylation, and

that Slik is a substrate of PP2A-STRIPAK. Thus, we discovered that STRIPAK regulates Slik localization potentially by

dephosphorylation. Moreover, S2 cells depleted for Cka or Strip, present a mis-coordination between cell shaping and

spindle orientation during mitosis (phenocopy Moesin downregulation).

Conclusion and Impact: We discovered a novel regulation upstream of Slik, an important but poorly characterized

kinase that controls apoptosis, growth, motility and development in vivo. Subsequently, this study will shed light on

STRIPAK complex as spatiotemporal regulator of Moesin, which controls mitotic morphogenesis.



3. Developmental regulation of germline syncytium organization in C. elegans

Jack Bauer1, Mei Zhen3, Jean-Claude Labbé1,2

1Institut de Recherche en Immunologie et en Cancérologie et 2Département de Pathologie et biologie cellulaire,

Université de Montréal, QC. 3Lunenfeld-Tanenbaum Research Institute, University of Toronto, ON.

Introduction: While a syncytial architecture is common among animal germlines and is required for fertility, the

mechanisms leading to syncytium formation during development are largely unknown. The nematode C. elegans

constitutes a powerful in vivo model to study syncytium formation and organization throughout development. In the

embryo, incomplete division of the germline precursor blastomere P4 gives rise to the two primordial germ cells (PGCs)

that remain stably interconnected by a cytoplasmic bridge enriched in conserved contractility regulators. In the larval and

adult germline, these contractility regulators are found at the stable actomyosin rings that connect germ cells to the central

rachis. We are characterizing the structure of the two PGCs at the L1 larval stage to understand the relationship between

the stable cytoplasmic bridge that forms between the PGCs during embryogenesis and the syncytial germline architecture

of adult animals. Méthodes et résultats: With confocal and electron microscopy we observed the presence of a syncytial

structure in newly-hatched animals. Contractility regulators form actomyosin rings that connect the two PGCs to a

common central cavity (a proto-rachis), to which several membrane lobes are also connected. We monitored the first

division of the PGCs to understand how they remain connected to the proto-rachis after cytokinesis. Our preliminary

results suggest that the pool of contractile regulators in the cytokinetic ring persists and directly contributes to proto-

rachis expansion. Conclusion et pertinence: Investigating the developmental regulation of C. elegans PGCs will provide

a better understanding of the mechanisms required for germline syncytium formation and organization.

4. L'interféron bêta facilite la résolution de l'inflammation pulmonaire induite par E. coli.

Othman A1, Sekheri M1, El Kebir D1, Ariel A2, Filep JG1 1 Département de pathologie et biologie cellulaire et Centre de recherche, HMR 2 Université de Haifa

Introduction: le rôle des interférons de type I dans la défense antibactérienne est peu connu. Récemment, un sous-

ensemble de macrophages a été identifié lors de la résolution de l'inflammation. Ces macrophages présentent un

transcriptome distinct caractérisé par une signature génique associée à l'IFNβ. Ainsi, nous avons voulu savoir si l'IFNβ

pourrait affecter la résolution de l'inflammation induite par la bactérie E-coli.

Méthodes et résultats: l'instillation intratrachéale de E. coli à des souris B57BL/6, provoque une lésion pulmonaire

médiée par les neutrophiles. Cette lésion atteint son pic après 6 h mais elle est complètement résolue dans les 48 h post

injection. Les souris éliminent rapidement les bactéries, suive d`une augmentation des neutrophiles apoptotiques et

d'efferocytose, ceci est associé à des élévations significatives des niveaux d'IFNβ, 24 h après l'injection de E. coli. Le

prétraitement des souris avec un anticorps neutralisant, anti-IFNβ, retarde l`élimination de E. coli, attenue l'apoptose des

neutrophiles et prolonge les lésions pulmonaires. En revanche, le traitement des souris avec un IFNβ exogène au pic de

l'inflammation améliore la clairance bactérienne, redirige les neutrophiles à l'apoptose, améliore l`efferocytose et accélère

la résolution de l'inflammation.

Conclusion et pertinence : nos données impliquent une diaphonie médiée par l'IFNβ entre les macrophages et les

neutrophiles afin de permettre une résolution rapide de l'inflammation bactérienne. Ces résultats identifient un rôle

précédemment peu connu de l'IFNβ dans la défense antibactérienne et suggèrent le potentiel thérapeutique de l'IFNβ dans

l'inflammation chronique et la réparation des blessures. (Supporté par les IRSC MOP-97742 et MOP 102619).



5. Spectrométrie de masse clinique de nouvelle génération en immunologie, vaccinologie et immunothérapie

Caron E, Département de pathologie et biologie cellulaire, et Centre de recherche CHU Sainte-Justine, Université de

Montréal.

L'efficacité de l'immunothérapie personnalisée chez les patients atteints de cancer est régie par la qualité et la quantité de

peptides associés aux molécules HLA présentés sur les cellules tumorales, collectivement nommé immunopeptidome, et

la capacité des cellules T à les engager. Par conséquent, une immunothérapie à base de cellules T hautement précise et

efficace n'est pas possible sans 1) une caractérisation moléculaire détaillée de l’immunopeptidome dans les tumeurs de

chacun des patients et 2) une compréhension mécanistique précise de l'engagement des cellules T chez chacun des patients

cancéreux. Pour mieux comprendre de manière globale la relation entre les cellules T et le cancer, leur analyse doit se

faire de manière systématique sur de très grandes cohortes de patients. Au cours des dernières années, j'ai contribué au

développement d'une technologie de spectrométrie de masse de nouvelle génération, appelée SWATH/DIA-MS,

permettant de mesurer quantitativement le protéome et l’immunopeptidome de cellules à partir de grandes cohortes de

patients. Au cours de cette présentation, je montrerai comment cette technologie peut être déployé pour mieux

comprendre la relation entre les cellules T et le cancer, incluant l’identification de nouvelles cibles thérapeutiques pouvant

être utilisées en immunothérapie du cancer. En tant que fondateur du « Human Immuno-Peptidome Project », un projet

d’envergure internationale, je présenterai mon programme de recherche et ma vision à long terme dans le cadre de ce

projet afin d’amener la spectrométrie de masse de nouvelle génération en clinique vers une immunothérapie extrêmement

précise et efficace chez tous les patients atteints du cancer.

6. Corrélation histologie-cytologie de biopsies ganglionnaires/médiastinales par EBUS/EUS

Khullar S, Roméo P, Leduc C, Hadjeres R, Département de pathologie et biologie cellulaire, Centre Hospitalier de

l’Université de Montréal

Introduction: Les biopsies médiastinales visent à déterminer la nature d’une adénopathie suspecte, à stadifier une

néoplasie pulmonaire, et/ou à obtenir du matériel pour analyses immunologiques et génétiques en vue d’un traitement

oncologique personnalisé. L’échographie par voie endobronchique (EBUS) et transoesophagienne (EUS) est une

technique d’acquisition de matériel biopsique qui a l’avantage d’être minimalement invasive, mais qui procure moins de

tissu pour analyse par le pathologiste. Le but principal de cette étude est d’établir le niveau de corrélation diagnostique

entre la cytologie et l’histologie provenant d’une même biopsie par EBUS ou EUS, afin de déterminer la nécessité

d’effectuer ces deux modalités.

Méthodes et résultats: Les biopsies médiastinales obtenues par EBUS ou EUS au CHUM entre mars et mai 2017 pour

lesquelles des lames de cytologie et d’histologie ont été effectuées (n=122) ont été incluses dans l’étude. Pour chaque

modalité, le diagnostic posé, l’adéquation du spécimen (qualité de quantité de matériel), les études moléculaires

demandées, ainsi que la présence d’un bloc cellulaire (cytologie) ont été répertoriés et comparés. L’adéquation des

spécimens est comparable entre l’histologie et la cytologie. La corrélation diagnostique entre ces deux modalités est de

90%. Lorsqu’il y a discordance, l’histologie s’avère plus sensible que la cytologie.

Conclusion et pertinence : Dans notre institution, il semble avantageux de privilégier l’histologie pour les biopsies

médiastinales, notamment afin d’augmenter la précision diagnostique et de préserver du matériel pour des études

supplémentaires à visée thérapeutique.



7. Herpes Simplex Virus type-1 Interaction with Human ATP-dependent RNA Helicase DDX3X

Khadivjam B1, Bonneil E2, Thibault P2, Lippé R1, 1Département de Pathologie et biologie cellulaire,et 2Institut de

Recherche en Immunologie et en Cancérologie, Université de Montréal. Herpetic infections are amongst the oldest and

most prevalent infections worldwide. Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) latently persists in sensory neurons,

occasionally recurring as a lytic infection which damages the epithelium. Even though HSV-1 causes a mild disease

known as the cold sore in majority of cases, the infection can have catastrophic consequences such as encephalitis and

keratitis in immunocompromised individuals, newborns and rarely in immune competent adults.

Characterization of HSV-1 mature particles by our lab revealed the viral incorporation of approximately 49 cellular

proteins alongside the viral proteins. Next, a high throughput siRNA screen of these host proteins proved that a third of

them are active modulators of viral replication. Among these hits we found the human DDX3X protein, a DEAD-box

ATP-dependent RNA helicase. DDX3X is a nucleocytoplasmic shuttling protein that is implicated in several aspects of

RNA metabolism, translation, IFN induction and apoptosis. Moreover, DDX3X has been already shown to be involved

in the replication of various viruses. Previously, we discovered that HSV-1 yield is sensitive to DDX3X levels, as either

depleting or overexpressing the protein would negatively affect viral gene expression and genome copy numbers.

Interestingly, although DDX3X is involved in the interferon pathway, our findings show that DDX3X acts on this DNA

virus by a novel mechanism. Now, we need to elucidate a detailed mechanism for the effects we observe. Therefore, we

sought to find the interacting partners of DDX3X in the context of infection and distinguish the possible differences

between the viral (incorporated) and cellular pools of this protein.

Although the discovered MS/MS hits require further validation through some functional assays such as IF and co-IP, this

preliminary result might explain the dose-dependent behavior of DDX3X towards the virus. Perhaps, earlier during

infection, virus needs to modulate the IFN stimulatory effects of DDX3X, however, later this protein helps the virus

transport its capsids.

Despite more than 100 years of extensive research on HSV-1, many molecular and cellular aspects of the viral life cycle

remain elusive. Therefore, shedding light on the mechanistic details of HSV-1 infection can help us control this

widespread infection.

8. Rho-dependent control of Citron kinase is required for the contractile ring-to-midbody ring transition during

cytokinesis.

Carim, S.*, Wernike, D.*, El-amine, N.* & Hickson, G.R.X, Centre de Cancérologie Charles Bruneau, Centre

Hospitalier Universitaire Sainte-Justine, Centre de Recherche, Département de Pathologie et Biologie Cellulaire,

Université de Montréal, Montréal.

Introduction:Cytokinesis is the physical separation of two daughter cells following mitosis. Activation of the small

GTPase, Rho mediates the assembly of an actomyosin contractile ring (CR) at the cell equator that drives cell division.

Constriction of the CR gives rise to the midbody ring (MR) that coordinates abscission. Citron kinase or Sticky in

Drosophila, is a putative Rho-GTP binding protein required for the formation of a stable MR, however its regulation and

modes of action, are unclear. This study aims to elucidate how Sticky localizes during cytokinesis and how Sticky

contributes to the formation of a stable MR in Drosophila S2 cells.

Méthodes et résultats:Using live-cell microscopy, we identify two distinct Rho-dependent mechanisms of Sticky

localization to the MR. The first mechanism depends on scaffold protein Anillin, and mapped to the central coiled-

coil(CC) domain of Sticky (miniCC2a). Biochemical assays identified a physical interaction between Sticky-miniCC2a

and the N-terminal domain of Anillin. Furthermore, the localization of Sticky-miniCC2a and Anillin-NTD overlapped

during cytokinesis. The second mechanism of Sticky cortical recruitment occurs through the Rho-GTP binding domain

(RBD), since it was sensitive to a mutation that abolishes interaction with Rho-GTP (L1246N). Both Rho-dependent

inputs were required for robust cortical localization of Sticky. Deletion of Sticky-miniCC2a or perturbation of its RBD,

lead to unstable MR and cytokinesis failure.

Conclusion et pertinence :Sticky is recruited to the CR by two Rho-dependent mechanisms: one via its RBD and one

via Anillin. Multiple Rho-dependent interactions of Sticky are essential for the transition from CR to stable MR, a

prerequisite for successful cytokinesis.



9. Retinal vascular mural cell heterogeneity and functional plasticity.

Künzel SE1, Cagnone G2, Eichmann A1, Joyal JS2, Dubrac A2.

1 Department of Internal Medicine, Yale Cardiovascular Research Center, Yale University School of Medicine, New

Haven, CT, 06511, USA.

2 Department of Pathology and Cellular Biology, CHU Sainte-Justine Research Center, Université de Montréal,

Montréal, QC, Canada

Introduction:

The development and maturation of a functional vascular network is critical for tissue growth and depend on the

interaction between the endothelial cells and the pericytes. Pericytes are mural cells that surround capillaries and control

angiogenesis and capillary barrier function. Pericyte dysfunction promotes the onset and progression of several vascular

diseases including neurodegenerative diseases, intracerebral hemorrhage (ICH) and retinopathy. However, due to a

paucity of defining markers, pericyte identification and functional characterization remain ambiguous and data

interpretation problematic.

Méthodes et résultats:

We have recently shown that abnormal, α-SMA-expressing pericytes cover angiogenic sprouts and pathological

neovascular tufts (NVTs) in a mouse model of oxygen-induced retinopathy (OIR), a model that mimics retinopathy of

prematurity (ROP). Genetic lineage tracing demonstrates that pericytes acquire α-SMA expression during NVT

formation. Pericyte depletion decreases NVT formation and impairs revascularization, whereas inactivation of the NCK1

and NCK2 adaptor proteins inhibits pericyte migration, NVT formation, vascular leakage and increases revascularization,

suggesting that pericyte activation promotes the vascular defects observed in the OIR model.

Conclusion et pertinence :

Whereas insight has recently been obtained on the identity of pericytes in different organs, much less is known about the

mechanisms regulating pericyte activation and how activated pericytes contribute to vascular diseases. Then, the main

goal of our research program is to precisely define the identity of pericytes in normal and OIR retinas, investigate new

signaling pathways involved in pericyte activation and study the function of activated pericyte in blood brain barrier

defects and ICH.

10. Smarcd1 subunit of SWI/SNF chromatin remodeling complexes is required for lymphoid specification.

Pierre Priam1, Veneta Krasteva1, Philippe Rousseau1 and Julie A Lessard1

1 Département de pathologie et biologie cellulaire, IRIC, Université de Montréal.

Introduction: Lymphocyte development from hematopoietic stem cells (HSCs) is accompanied by a loss of self-renewal

capacity and a progressive restriction of developmental potential. Although the molecular mechanisms for generation of

mature lymphocytes are beginning to be revealed, a major unanswered question is how the progeny of HSCs initiate

commitment toward lymphoid fate. Increasing evidence indicates that specialized assemblies of ATP-dependent

SWI/SNF chromatin remodeling complexes perform lineage-specific roles in hemopoiesis.

Methods and Results: Our studies show that the Smarcd1 SWI/SNF subunit is specifically required for establishing

lymphoid cell identity and function in the hematopoietic system. Acute deletion of Smarcd1 in adult hematopoiesis causes

lymphopenia with near complete absence of mature B- and T-lymphocytes, whereas the myeloid and erythroid lineages

remain largely unaffected. Lymphoid primed multipotent progenitors are severely reduced, indicating a role in early

lymphoid priming. Genome-wide expression studies revealed that Smarcd1 functionally collaborates with the bHLH E2A

transcription factor to establish a lymphoid-restricted signature. Mechanistically, we show that Smarcd1 directly interacts

with E2A and is required for its recruitment to the promoter of essential regulators of lymphoid specification.

Conclusion: Altogether, these studies identified Smarcd1 as a lineage-specific chromatin remodeler that collaborates

with E2A to specify cell fate and enforce developmental checkpoints in the lymphoid lineage.



11. Intégration de biomarqueurs moléculaires à la pratique Clinique

Dr Kurosh Rahimi, Dre Cécile le Page, Dre Diane Provencher, Dre Anne-Marie Mes-Masson.

CR-CHUM, Montréal, Qc, Canada

Introduction :

Le cancer de l’ovaire est le cancer gynécologique le plus meurtrier, et compte environ 2500 nouveaux cas par an au

Canada. L’espérance de vie des patientes varient beaucoup en fonction du sous-type de cancer (histotype, grade, stade de

la maladie). L’identification précise de chaque sous-type est donc primordiale pour le bon diagnostic et la prise en charge

du patient. Au laboratoire, nous développons des modèles biologiques pour identifier, et test, des biomarqueurs afin de

mieux diagnostiquer et prédire la réponse aux thérapies des patientes.

Méthodes et résultats :

Grâce à la banque de tissus gynécologiques du CRCHUM, et à la ressource du consortium Canadien CŒUR, nous avons

construit plusieurs micro-étalage tissulaires (TMA) représentant les différents sous-types de cancer de l’ovaire. Ainsi

nous avons évalué, par immunohistochimie, les marqueurs p53, p16, PR, WT1, PAX8 et Napsin, pour discriminer les

différents sous-types du cancer de l’ovaire. D’autres marqueurs, tel que p16 (CDKN2A) ou la mutation du gène BRCA,

semblent eux aider à prédire le pronostic des patientes.


Les banques de tissus sont des ressources précieuses pour la recherche de biomarqueurs et permettent de construire des

cohortes d’étude pour étudier, et valider, des biomarqueurs biologiques utiles aux cliniciens.

12. The tumor suppressor RASSF1A is an effector of the RGK family of small GTPase proteins

Dhanaraman T1, Singh S1, Killoran R1, Singh A2, Shifman J2 and Smith M J1

1. Département de pathologie et biologie cellulaire, et Institut de recherche en immunologie et en

cancérologie, Université de Montréal. 2. Department of Biological Chemistry, Hebrew University of Jerusalem.

Introduction: RASSF proteins are tumor suppressors that are downregulated by promoter hypermethylation in numerous

cancer cells. There are 10 RASSF homologs (RASSF1-10) in the human proteome, each comprising RAS Association

domain proposed to bind specifically with activated RAS GTPases. RA domains are present in all effector proteins that

interact with RAS, enabling signal transduction to number of downstream processes from proliferation to apoptosis.

Direct binding between RAS and RASSFs has only been reported for RASSF5, and only limited information is available

describing the interactions and functions of other RASSF proteins. In this study, we aim to identify and characterize

RASSF1 interactors. Methods and results: We have begun to characterize RASSF protein interactions with RAS small

GTPases. We find that only RASSF5 interacts with KRAS, with a Kd of 1.7 µM. In contradiction to other studies, we

report that only Classical-RASSFs (1-6) bind the MST1 kinase. We propose that RASSF7-10 are actually members of

the ASPP family of GTPase effectors, and show that N-terminal RASSFs interact with p53 regulatory ASPP proteins

(ASPP1/2). Further, we have generated homology models for all RASSFs RA domains based on the crystal structure of

the HRAS-RASSF5 complex. Using our model of the RASSF1 RA domain, we identified key residues that diverge from

those at the RASSF5-RAS interface. These data helped us identify alternative GTPase partners for RASSF1, and we

demonstrate it interacts specifically with the RGK family and RASL small GTPases. We confirmed these interactions

thorough biochemical and co-localization studies. Conclusion:Overall, our study provides a thorough characterization

of the specific interactions mediating RASSF tumour suppressor activity, and suggests that the significant expansion of

this family in vertebrates has evolved to relay signals from diverse RAS superfamily GTPases to the proapoptotic

pathways.



13. A PTEN/PLC pathway reduces endosomal PI(4,5)P2 and can compensate for loss of the OCRL phosphatase

Mondin V1, Ben El Kadhi K1, Chagroui J1, Decelle B1, Carréno S 1,2

1-Institute for Research in Immunology and Cancer (IRIC), Université de Montréal, Montreal, QC H3C 3J7, Canada

2-Département de Pathologie et de Biologie Cellulaire, Université de Montréal, Montreal, QC H3C 3J7, Canada

The Oculo-Cerebro-Renal Lowe (OCRL) syndrome is a rare multisystemic disease characterized by anomalies affecting

the eyes, the nervous system and the kidneys. This incurable disease is caused by mutations in the OCRL gene, which

encodes for the phosphatidylinositol (4,5) bisphosphate (PIP2) phosphatase OCRL1. We previously reported that

depletion of dOCRL, the orthologue of this phosphatase in Drosophila melanogaster promote accumulation of

PtdIns(4,5)P2 on endosomes and cytokinesis defects, leading to multinucleation. By investigating how PtdIns(4,5)P2 is

produced on endosomes of dOCRL-depleted cells, we investigated an important enzyme for direct production of

PtdIns(4,5)P2 in Drosophila S2 cells : the well-known tumor suppressor Phosphatase and tensin homolog deleted on

chromosome 10 (PTEN) that dephosphorylates PtdIns(3,4,5)P3 into PtdIns(4,5)P2.

Here, we make the unexpected discovery that in Drosophila, PTEN reduces PtdIns(4,5)P2 levels on endosomes,

independently of its phosphatase activity. This new PTEN function requires the enzymatic action of dPLCXD, an atypical

Phospholipase C. Importantly, we discovered that this novel PTEN/dPLCXD pathway can compensate for dOCRL

depletion. Here, we show that PTEN or dPLCXD overexpression prevents the accumulation of PtdIns(4,5)P2 on

endosomes and cytokinesis defects. In addition, we found that chemical activation of this pathway restores normal

cytokinesis in human Lowe syndrome cells and rescues OCRL phenotypes in a zebrafish Lowe syndrome model

(manuscript in revision, JCB).

Our findings identify, a novel PTEN/dPLCXD pathway that controls PtdIns(4,5)P2 levels on endosomes. They also point

to a potential new strategy for the treatment of Lowe syndrome.

14. Chronic endometritis: revision of histological characteristics and fertility outcome

E. Fradette1, A. Bissonnette1, L. Nicholls-Dempsey1, J. Saumet2, N. Patey3,4, D. Dal Soglio3,4

1Dept. Ob/Gyn, Université de Montréal, 2Dept. Ob/Gyn, Centre hospitalier universitaire Sainte-Justine, Montréal, 3Dept.

de Pathologie, Centre hospitalier universitaire Sainte-Justine, Montréal, 4Superviseures du projet de recherche

Introduction: Chronic endometritis (CE) is defined as a chronic inflammation of the endometrial lining characterized

by unusual infiltration of plasma cells in the endometrial stroma. Studies have suggested the potential negative impact of

CE on uterine receptivity. However, there are no establish standardized guidelines for its diagnosis. Therefore, this pilot

research aimed to investigate the histopathology of CE in women with reproductive issues.Methods and results: This

retrospective study reviewed the charts of 312 patients with a history of recurrent pregnancy loss (RPL), recurrent

implantation failure (RIF) or unexplained infertility between 2013 and 2018. Sixty-eight women diagnosed and treated

with antibiotics for CE and 11 fertile women without CE were included in the study. The endometrial biopsies sampled

before and after treatment were analysed using hematoxylin-eosin-saffron staining and immunohistochemistry staining

for Syndecan-1 (CD138). The following histological features were quantified: nodular lymphocyte infiltrates, plasma

cells by field (x100), plasma cells on the complete section, small and big gatherings of plasma cells (x200), spindle

stromal cells, oedema and fibrosis. Endometrial biopsies of women with RPL, RIF or unexplained infertility were similar

for all the evaluated features. Thus, women were separated according their reproductive outcome after antibiotic

treatment, either having successfully carried a pregnancy (group 1; n =26) or still having fertility issues (group 2; n = 42),

and were compared to the fertile subjects (group 3; n=11). Before treatment, group 1 had significantly more spindle

stromal cells than group 2. Otherwise, both group 1 and 2 showed higher degree of inflammation and more nodular

lymphocyte infiltrates than group 3. After treatment, group 1 demonstrated a significant reduction of nodular lymphocyte

infiltrates only, while group 2 presented a significant diminution of the total number of plasma cells, plasma cells per

field, small and big gatherings of plasma cells, nodular lymphocyte infiltrates and spindle stromal cells.

Conclusion: The impact of CE on fertility as the primary factor of reproductive failure remains ambiguous. Antibiotic

treatments for CE can normalize the endometrial lining, but do not ensure a positive reproductive outcome. This study

suggests that plasma cell density and nodular lymphocyte infiltrates are appropriate elements to consider for the diagnosis

of CE. Moreover, we hypothesize that a moderate degree of inflammation for women diagnosed with CE would be

favorable for the gestational process.number of plasma cells, plasma cells per field, small and big gatherings of plasma

cells, nodular lymphocyte infiltrates and spindle stromal cells.



Résumés des

communications

scientifiques

affiches



1. Identification des partenaires de gM d’HSV-1 par BioID.

Hugo Boruchowicz, Roger Lippé

Département de pathologie et biologie cellulaire, Département de microbiologie, infectiologie et immunologie,

Université de Montréal

Introduction:

Le virus herpès simplex de type 1 (HSV-1) est un virus à ADN muni d’une enveloppe d’origine cellulaire qui

réplique son génome et assemble de nouvelles particules virales dans le noyau. Parmi les glycoprotéines virales que

le virus contient, la glycoprotéine M (gM), est la première détectée dans les membranes nucléaires. On ne sait

toutefois pas comment gM est ciblé à la membrane nucléaire interne. L’hypothèse est que les protéines destinées à

la membrane nucléaire interne y sont acheminées en interagissant avec d’autres molécules, notamment des protéines

régulant le transport au travers des pores nucléaire et la matrice intranucléaire. Pour clarifier ce processus de ciblage,

mon projet consiste à identifier les partenaires de gM par spectrométrie de masse en utilisant une approche de BioID.

Méthodes et résultats :

Des lignées cellulaires ont été générées dans les HEK293 Flp-In (BirA*Ha, NLSBirA*Ha, UL10BirA*HA). Suite

à l’ajout de biotine et d’une infection au HSV-1 ∆2gM, une purification sur colonne de streptavidin (BioID) est

effectuée. L’identification des éventuels partenaires de gM se fait par spectrométrie de masse (plateforme l’IRIC).

Après analyses des résultats, une validation de la présence et importance des partenaires sera effectuée.


Cette approche permettra d’identifier les molécules interagissant avec gM dont certaines devraient être impliqués

dans le ciblage de cette glycoprotéine virale à la membrane interne. Cette étude bonifiera notre compréhension du

mécanisme qui permet au virus de transiter au travers les membranes nucléaires mais aussi de clarifier comment les

protéines de l’hôte y sont aussi ciblées.

2. Epidermolytic acanthoma: a study of 131 cases

Simon F. Roy MD (1), Feras M. Ghazawi MD (2), PhD, Keith A. Choate MD, PhD (3,4), Jennifer M. McNiff

MD (3,4)

(1)Department of Pathology, University of Montreal, Canada, (2) Department of Dermatology, University of Ottawa, Canada,

(3) Department of Dermatology, Yale School of Medicine, Connecticut, (4)Department of Pathology, Yale School of Medicine,

Connecticut.

BACKGROUND

Epidermolytic acanthoma (EA) is a rare, benign acquired cutaneous keratosis displaying epidermolytic

hyperkeratosis in more than 50% of its surface. Due to the sparsity of comprehensive studies, little is known on the

patient demographics and clinical characteristics of this uncommon entity. We wish to comprehensively characterize

the clinical and demographic features of EA and to differentiate it from its mimickers.

METHODS

We carried out a retrospectively review of 131 cases of EA, recorded clinical and histopathologic features and

performed linear regression of yearly incidence rates to assess for possible under-reporting of this entity.

RESULTS

EA affected both genders equally. We found 9.08 cases per 100,000 biopsy specimens per year and linear regression

analysis demonstrated significant decreasing incidence rates. Analysis of the anatomical site distribution of EA

lesions demonstrated a more frequent genital location in men (39.1% of cases, as compared to 11.3% for women).

Contrary to previous studies, lesions were most frequently single (91.7%) and the mean age of presentation was 57.8

years.

CONCLUSION

The presented largest case series to-date indicates that EA is likely an underdiagnosed entity and establishes the

demographic and clinical features of EA



3. Instabilité des microsatellites et protéines MMR : un contrôle de qualité en gynécopathologie

Simon F. Roy, François Gougeon Introduction: Une des avancées récentes en gynéco-pathologie a été l’identification de défaut des protéines

réparatrices de l’ADN (en anglais le DNA mismatch repair, ou MMR) et le MSI (soit l’instabilité microsatellite)

pour dépister certains syndromes génétiques comme le syndrome de Lynch. Les microsatellites sont des courtes

séquences répétées de nucléotides, parsemées à travers le génome, et susceptibles à des erreurs de réplication du à

des glissements de la polymerase DNA.

Méthodes et résultats: Nous avons recherché par le logiciel Diamic les 250 derniers cas de cancers de l’endomètre

grâce au mot clé « endométrioïde ». Nous voulions établir le pourcentage de cas sans examens

immunohistochimiques demandés, et le pourcentage de cas avec omission du test d’hyperméthylation par PCR. Le

taux d’IHC demandé était élevé (98.4%), mais les omissions se produisaient au niveau du test de méthylation (seuls

86.3% de taux demandé).

Conclusion et pertinence : Nous avons pu détecter 27 patientes qui devront être vues en génétique, afin d’évaluer

pour un syndrome de Lynch. Il demeurerait à investiguer les raisons charnières expliquant notre faible taux de

demande de test de méthylation, qui pourtant devrait être un test réflexe.

4. Multinucleate cell angiohistiocytoma: a clinicopathologic review of 62 cases

Simon F. Roy, Danni Dong, Peggy Myung, Jennifer M. McNiff

BACKGROUND

Multinucleate cell angiohistiocytoma (MCAH) is an uncommon and likely underdiagnosed entity that is thought to

be of vascular and fibrohistiocytic origin.

OBJECTIVE AND METHODS

We retrospectively reviewed all cases diagnosed as MCAH at the Yale Medicine Dermatopathology laboratory

between January 1st 1990 to September 1st 2018. Sixty-two cases were retained. We performed

immunohistochemistry on the ten most inflamed lesions found and assessed for a possible alteration within the ß-

Catenin/LEF-1 signaling pathway, involved in follicular induction in dermatofibroma. We subsequently established

histologic diagnostic criteria to differentiate MCAH from its mimickers.

RESULTS

MCAH affected both genders equally. The hands or fingers were affected in 51.6% of cases. We found the most

specific histologic criteria to be: 1) presence of odd multinucleated fibroblasts. b) presence of superficial parallel

fibrosis c) presence and thickening of superficial papillary dermal vessels d) absence of perifollicular fibrosis. As

for immunoreactivity, we found positivity to CD138, CD163 and CD117 in the mononuclear inflammatory infiltrate,

yet absence of Beta-Catenin and LEF1 expression indicating that MCAH and dermatofibroma are likely separate

entities.

CONCLUSION

This large case series of MCAH reviews the clinical features of this entity, characterizes immunohistochemically

the mononuclear inflammatory infiltrate and establishes histologic criteria for its diagnosis.



5. ERM proteins act downstream of the GPCR TBXA2R to regulate cell motility in breast cancer cells

Leguay K1, Decelle B1, He YY1, Hogue M1, Kobayashi H1, Le Gouill C1, Bouvier M1,2, Carréno S1,3

1Institut de Recherche en Immunologie et en Cancérologie (IRIC), 2Département de biochimie et médecine

moléculaire, 3Département de pathologie et biologie cellulaire

Introduction: Metastasis is correlated with poor prognosis. For instance, metastasis is responsible for 90% of death

in breast cancer patients. Development of secondary tumors involves invasive cell migration from the primary to the

second site and requires modification of the actin and microtubule cytoskeletons. Proteins of the ERM family (Ezrin,

Radixin and Moesin) bridge these two cytoskeletons with the plasma membrane to control cell morphogenesis. ERM

overexpression and over-activation were shown to promote metastasis development. Here, we show for the first time

that a GPCR activates ERM, and that this activation could be involved in cell migration.

Methods and Results: We developed conformational BRET sensors to follow activation of individual ERM. Using

this tool, we discovered that TBXA2R activates all three ERM in HEK293T cells. We also showed that this

activation is dependent of G12/13 and Gq/11 subunits, RhoA, PKC but not ROCK using CRISPR knockout cell

lines and/or inhibitors. We also found that activation of TBXA2R increases the migration velocity and the

directionality in Hs578T triple negative breast cancer cells.

Conclusion and relevance: In this study, we discovered a new signaling pathway involving GPCR and ERM

proteins. We also showed that activation of another GPCR PAR2 also induces ERM activation suggesting that this

new pathway is conserved between different GPCR. Finally, we propose that TBXA2R could be a new potential

target for anti-metastatic treatment in breast cancer.

6. Corrélation histopathologique entre les biopsies et les traitements à l’anse diathermique (LEEP) du col de

l’utérus, un an d’expérience au CHUM.

Samson, L et Rahimi K, Département de pathologie et biologie cellulaire de l’Université de Montréal et Centre

hospitalier de l’Université de Montréal (CHUM).

Introduction:

La prise en charge des lésions intraépithéliales du col de l’utérus est directement reliée au diagnostic sur biopsie. Or,

il n’existe pas d’étude de rendement interne récent sur la concordance entre la biopsie et le spécimen de LEEP

thérapeutique.


Révision de 235 rapports de biopsie cervicale ayant mené à une LEEP et relecture de 24 cas discordants. Parmi ces

derniers, 47% sont attribuables à un biais d’échantillonnage ou à une régression spontanée, 26% à une erreur

d’interprétation histologique et 26% à une erreur d’interprétation liée à l’immunohistochimie p16 pour un taux de

discordance global de 12%.


Le CHUM affiche un taux de discordance total de 12% ce qui est inférieur à ce qui est rapporté dans la littérature

(14 – 26%). Les discordances reliées à l’utilisation de l’immunohistochimie p16 sont attribuables à son utilisation

en dehors des lignes directrices. Ce projet renforce donc l’importance d’utiliser cet outil exclusivement dans des

lésions cervicales ambiguës et non pour confirmer un diagnostic morphologique clair.



7. Concordance cytologique-microbiologique des lavages broncho-alvéolaires chez les patients greffés.

Ngo MH et Stephenson P, Département de pathologie et biologie cellulaire, Université de Montréal, et Centre

hospitalier de l’Université de Montréal (CHUM).

Introduction:

Les infiltrats pulmonaires chez les patients greffés pulmonaires représentent souvent des infections. Au CHUM, les

échantillons de lavages broncho-alvéolaires (LBA) chez ces patients sont systématiquement envoyés pour études

cytologique et microbiologique. Le but de cette étude est de vérifier le taux de concordance entre les résultats de ces

deux modalités d’analyse.


Étude des résultats de 213 échantillons de LBA chez 99 patients greffés pulmonaires avec stratification pour la

présence de bloc cellulaire, le type d’organisme et les organismes cliniquement significatif. Concordance de 61.6%

lorsque qu’un bloc cellulaire a été effectué par rapport à 47,2% sans bloc. Concordance de 10,4% pour les mycoses,

de 0% pour les mycobactéries. 37% des mycoses ont nécessité des colorations spéciales pour être détectées en

cytologie.


La présence de cas seulement détectables par la microbiologie et d’autres seulement détectables par la cytologie

renforce le fait que ces analyses sont complémentaires dans les LBA. Cette étude a aussi démontré la pertinence de

faire des colorations spéciales en plus du Papanicolaou lorsque possible.

8. Role of host proteins in HSV-1 C-capsid maturation

Mackenzie Thornbury1, Bita Khadivjam1, Nabil El Bilali1, Roger Lippé1

1 Département de Pathologie et Biologie Cellulaire, Faculté de Médicine, Université de Montréal, Montréal,

Québec, H3C 3JT, Canada

Introduction: Herpes simplex type 1 (HSV-1) is a ubiquitous human pathogen that generally causes mild disease

such as cold sores. This enveloped, dsDNA virus has a complex life cycle, one aspect of which is capsid maturation.

Capsid proteins are imported into the nucleus for assembly and DNA packaging. Capsid maturation results in 3

different types of capsids: A-capsids, B-capsids and C-capsids. A- and B- capsids result from defects in DNA

packaging and C-capsids are mature capsids that are preferentially exported from the nucleus to form infectious

virions. The mechanism of preferential export is not well understood.


All three capsids types were collected and analyzed by Mass Spectrometry to determine host proteins associated

with each fraction. PCBP-1 was specifically associated with C-capsids. Using RNAi we knocked down PCBP-1 in

HeLa cells and infected them with HSV-1. Extracellular and intracellular virus fractions were collected and tittered.

Extracellular titers decreased by half in PCBP-1 KD cells while intracellular titers did not change.


Our data shows that PCBP-1 may be pro-viral, as PCBP-1 KD decreased extracellular viral titers. As we observed

no difference in intracellular virus, this suggest PCBP-1 has effects on viral egress and release. As PCBP-1 is

involved in pre-mRNA processing I hypothesis it plays a role in translation of host proteins involved in the

trafficking of mature virions from TGN to the plasma membrane. If true, this could help elucidate the intricacies of

HSV-1 egress and release.



9. Rôle du complexe SUN-KASH dans la propagation du virus herpès simplex de type 1

Cruz Palomar K, Lippé R Département de pathologie et biologie cellulaire, Département de microbiologie,

infectiologie et immunologie, Université de Montréal

Introduction: les virus sont des parasites qui utilisent plusieurs mécanismes de leurs hôtes, incluant ceux impliquant

le transport des protéines. Ils constituent donc une excellente façon de comprendre la cellule ainsi que les interactions

hôte-pathogène.

Mon projet concerne la glycoprotéine M (gM) du virus herpès simplex de type I (VHS-1), l’une des premières

protéines virales qui atteint la membrane nucléaire interne lors d’une infection. Ceci est critique, car plusieurs autres

protéines du virus iront éventuellement à cet endroit, où gM régule très vraisemblablement leurs fonctions incluant

notamment la fusion membranaire induite par le virus.

Notre hypothèse est que ce transport repose sur la machinerie cellulaire. Le projet se porte donc sur le complexe

SUN-KASH qui se trouve entre les deux enveloppes nucléaires et qui peuvent retenir certaines protéines dans la

membrane nucléaire interne. Sun2 est également important pour la propagation du virus pseudorabies, un proche

parent du VHS-1. Nous présumons donc qu'il régule également le VHS-1.

Méthodes et résultats: étude par microscopie à fluorescence, essai de plaque et microscopie électronique l’impact

de la délétion et de la surexpression des divers isoformes de Sun et Kash sur le ciblage de gM au noyau par ARNi

et des plasmides codant pour ces protéines.

Ces plasmides existent déjà au labo pour Sun. Si nécessaire, des mutants de Kash seront aussi évalués.

Conclusion et pertinence: ce projet permettra non seulement de déchiffrer ce processus cellulaire essentiel, mais

aussi de découvrir de nouvelles interactions hôtes-pathogènes.

10. Rôles des importines et du pore nucléaire dans le ciblage au noyau de la glycoprotéine M du virus herpès

simplex de type 1

Vandal C et Lippé R, Département de microbiologie, infectiologie et immunologie et Département de pathologie

et biologie cellulaire, Université de Montréal

Introduction : Chez les cellules eucaryotes, le transport de molécules solubles du cytoplasme au noyau est permis

par un système de transport actif impliquant les pores nucléaires, les importines et la protéine RanGTP1. Dans le cas

des protéines transmembranaires ciblées à la membrane nucléaire interne (INM), ces mécanismes de transport sont

encore pourtant peu étudiés. La glycoprotéine M (gM), une protéine transmembranaire, de l’herpès simplex de type

I (VHS-1) est la première glycoprotéine virale détectée à l’INM lors de l’infection. Il a été démontré que ce ciblage

était permis par un processus spécifique et viral-dépendant, mais le mécanisme reste toujours inconnu. Sur la base

d’un processus semblable observé chez le baculovirus et de résultats préliminaires obtenus au laboratoire, nous

posons comme hypothèse que le ciblage de gM au noyau est un processus actif. Ce dernier impliquerait le mécanisme

de transport nucléocytoplasmique de la cellule et permettrait à gM d’être ciblée à l’INM par l’intermédiaire des

importines et du pore nucléaire.

Méthodes et résultats : Des ARN interférents seront utilisés afin de dépléter les différentes importines humaines

dans des cellules 143B. Ces dernières seront ensuite infectées avec un VHS-1 sauvage et la localisation de gM sera

déterminée par microscopie à fluorescence. La déplétion de chaque importine sera confirmée par RT-qPCR.

Conclusion et pertinence : Ce projet contribuera à la compréhension du ciblage des protéines membranaires, autant

cellulaires que virales, à la membrane nucléaire interne. De plus, ceci permettra d’identifier de nouvelles interactions

hôte-pathogène et de mieux comprendre le rôle de gM à l’INM dans les premières heures suivant l’infection par

VHS-1.



11. Valeur pronostique et corrélation de l’expression du PD-L1 dans le cancer du poumon non-à-petites-

cellules oligométastastique

Krishnan V1, Kassi I1, Gaboury L1, Tran-Thanh D1, Albadine R1, Gauvin C2, Blais N2, Tehfé M2, Florescu

M2, Département de pathologie et biologie cellulaire et Département de médecine, Université de Montréal.

Introduction: L’immunothérapie dans le cancer du poumon non-à-petites-cellules (NSCLC) est souvent choisie en

fonction de l’expression du PD-L1 sur les cellules tumorales. Toutefois, l’incidence et la valeur pronostique du PD-

L1 chez les patients NSCLC avec atteinte cérébrale oligométastatique ont été peu étudiées.

Méthodes et résultats: Parmi les patients traités au CHUM entre 2007 et 2014, 40 patients ont été inclus dans

l’étude. Une étude immunohistochimique à l’aide de l’anticorps SP263 (Ventana) dirigé contre le PD-L1 a été

effectuée. Les analyses statistiques (Kaplan-Meier, régression de Cox) ont été effectuées sur SPSS 25.

PD-L1 était exprimé dans 40% des cas (20/50), avec une positivité de 54,5% (12/22) dans les tumeurs primaires et

28,6% (8/28) dans les métastases cérébrales. Dans un sous-groupe de 10 patients, une analyse de l’expression entre

la tumeur primaire et la métastase a révélé un taux de concordance de 80% (8/10). La survie médiane (mOS) était

significativement plus courte pour les patients PD-L1 positifs comparés aux patients PD-L1 négatifs (8mois vs

20mois, p=0.04).

Conclusion et pertinence : Le statut PD-L1 était concordant entre la tumeur primaire et la métastase cérébrale.

L’expression du PD-L1 chez les patients NSCLC avec maladie cérébrale oligométastatique était associée à une

moins bonne survie dans notre étude.

12. Crystal structure of a RHOG-ELMO2 complex reveal a novel RBD domain interface with a RHO family

GTPase

Chang Hwa Jo, Ryan C. Killoran, Jean-François Côté and Matthew J. Smith,

1.Département de pathologie et biologie cellulaire, et Institut de recherche en immunologie et en cancérologie,


2.Institut de Recherches Cliniques de Montreal

Introduction: The small GTPase RHOG mediates numerous intracellular signalling pathways and is an important

upstream regulator of RAC1. RHOG binds to Engulfment and cell motility (ELMO) proteins and Dedicator of

cytokinesis (DOCK) proteins for regulating RAC1. RAC1 has a central role in regulating the actin cytoskeleton

during cell migration and axon guidance. These activities underlie numerous aspects of malignant transformation,

including: tumorigenesis, angiogenesis, invasion and metastasis. How RHOG-ELMO-DOCK regulates signaling

through RAC1 is poorly understood. Here, we have determined a structure of the complex between RHOG and the

ELMO RAS-binding domain (RBD).

Méthodes et résultats: The X-ray diffraction data of RHOG and ELMO2-RBD complex crystals were belonged to

the monoclinic space group C2, and collected to the resolution of 2.4 Å.

Conclusion et pertinence : Despite low sequence identity, the ELMO2-RBD structure revealed a ubiquitin fold

similar to other RBD domains. Usually, these RAS-binding RBD domains bind GTPase through an intermolecular

β-sheet formed between two anti-parallel β-strands : β2 at switch I region of RAS and β2 from the RBD domains.

Interestingly, RHOG interacts with the ELMO2-RBD domain via α2-helix at switch II region. These data will

advance the understanding of molecular mechanisms required upstream of RAC1 signaling.



13. Comparaison entre les méthodes de comptage visuelles et virtuelles pour l’évaluation de l’indice de

prolifération Ki-67 des tumeurs neuroendocrines du pancréas.

o Chercheur principal : Trudel, Dominique MD PhD FRCPC,

o Co-chercheurs : - Nguyen, Bich N. MD FRCPC FABP, Pathologiste,

- Soucy, Geneviève MD, FRCPC, FCAP, FASCP,

o Collaborateurs : - Youssef, Heidi MD, Dion, Natalie PhD,

Introduction:

En mars 2017, en partenariat avec TRIBVN Healthcare, le CHUM s’est doté d’une plateforme de pathologie

numérique dans le but d’améliorer la productivité, et la fiabilité diagnostique pour engendrer des économies tant

financières qu’en temps-médecin. L’intégration de cette technologie novatrice nécessite le développement d’outils

informatiques qui assisteront le pathologiste dans son travail diagnostique et d’enseignement. Ceci implique le

transfert d’analyses effectuées au microscope vers des applications automatisées traitant des images virtuelles du

tissu histopathologique.


Intervention (Annexe-Phases 2-3) : Détermination de l’IP par comptage des cellules tumorales immuno-

marquées (positives), ou non (négatives) au Ki-67 sur les lames virtuelles.

Comparateurs (Annexe-Phases 2-3) : Le dénombrement de cellules tumorales (positives et négatives) sera

effectué sur lame virtuelle en utilisant les outils du logiciel CaloPix (TRIBVN Healthcare):

• Méthode de référence : comptage cellulaire manuel; méthode « visuelle ».

• Méthode à évaluer : comptage par analyses d’images; méthodes « virtuelles » :

Résultats (Annexe-Phase 4) : À l’issue de ce projet, la plateforme de pathologie numérique sera en mesure de

déterminer l’IP Ki-67 par comptage automatisé via le logiciel CaloPix.


L’utilisation d’un outil informatique automatisé permettant la reconnaissance tissulaire/cellulaire ainsi que sa

quantification serait une aide indéniable pour le pathologiste.

14. Evolved plasticity of RAS family GTPase interactions with effector binding domains

Singh Swati, Smith M. Institut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: The human RAS GTPase superfamily consists of 160 proteins divided into the RAS, RHO, ARF,

RAB and RAN subfamilies. Among these, three RAS genes (K-, H- and N-RAS) are frequently mutated in many of

the most refractory human cancers. When activated, switch-like RAS GTPase proteins recruit numerous downstream

‘effectors’ that propagate signals regulating diverse cellular events, including growth and transformation.

Interestingly, activated RAS proteins can recruit effectors that paradoxically promote senescence and apoptosis,

known as the RAS association domain family (RASSF1-10). All putative RAS effectors are proposed to recognize

activated RAS using specialized, targeted RAS-binding domains (RBDs), but only a small subset have been

demonstrated to directly bind H/K/N-RAS biochemically. In fact, among RASSF family members, only RASSF5

binds RAS isoforms. Methods and Results: Established ‘fishing’ approaches are generally incompatible for

discovery of GTPase-effector partners, so we have adapted co-precipitation assays to identify RASSF RBD domain

partners amongst 85 RAS, RHO and ARF subfamily GTPases. We have found that RASSF5 interacts with a number

of RAS GTPases in addition to H/K/N-RAS, including MRAS, RIT1, RIT2, RAP2B, RAP2C, RRAS1 and RRAS2.

Interestingly, RASSF3, RASSF4 and RASSF8 present distinct specificity profiles, indicating that input from

multiple GTPase switches might influence RASSF-Hippo signalling. Conclusion and Relevance: By exploiting a

multidisciplinary approach combining cell biology and biochemistry, we are able to investigate RBD binding

specificity by deciphering interactions between RASSF tumour suppressor proteins and cellular GTPases. These

systematic examinations of GTPase-effector partners are necessary to identify new partners downstream of key cell

signaling hubs, and we propose that GTPase-effector signaling is much more plastic that currently believed.



15. Déchiffrage du mécanisme d’assemblage des filaments du cytosquelette

Berger Clothilde, Dragieva Zlatina, Hickson Gilles. Hôpital Sainte-Justine (CRHSJ)

Introduction: Les septines constituent un élément du cytosquelette important pour l'homéostasie cellulaire,

notamment la cytokinèse. Elles forment des hexamères qui s'assemblent en filaments non polaires qui peuvent

également former des structures hautement ordonnées de manière mal-comprise. Dans les cellules S2 de

Drosophiles, les septines Sep1, Sep2 et Peanut peuvent interagir avec l'actine et l'anilline et, par microscopie

confocale, se localisent à des anneaux cytoplasmiques, des tubes cytoplasmiques et l'anneau contractile lors de la

cytokinèse. Notre but est de définir les mécanismes de recrutement des septines à ces différentes structures

cellulaires en identifiant des protéines collaboratrices et en testant les rôles potentiels des extrémités N-C terminales

des septines qui sont variables et dont les fonctions demeurent inconnues.


Des déplétions par ARNi des septines, de l’actine et de leurs régulateurs connus démontrent que les tubes

dépendent de l'actine, tandis que le recrutement à l'anneau contractile dépend spécifiquement de Rho et d'anilline,

mais que les anneaux semblent dépendre uniquement des septines. Des troncations des extrémités N- et C-

terminales de Sep1, Sep2 et Peanut furent réalisées par clonage moléculaire, pour transfection dans les cellules S2

et visualisation par microscopie. Des résultats préliminaires suggèrent que l'extrémité C-terminale de Sep2 est

dispensable pour sa localisation aux tubes et aux anneaux, d'autres études sont en cours.


Il semble que différentes structures hautement organisées contenant les septines peuvent se former et avec des

mécanismes d'assemblage distincts. Cette étude permettra une meilleure compréhension de la régulation du

cytosquelette dont les septines sont partie intégrante.

16. Elucidating RAF isoform specificity by mapping A-RAF and B-RAF interactions with RAS superfamily

small GTPases.

Gabriela Bernal Astrain and Matthew J. Smith Institute de Recherche en Immunologie et Cancerologie,


Introduction: A-RAF, B-RAF and C-RAF are isoforms of RAF serine threonine kinases. They regulate essential

cellular processes through the MEK/ERK signaling pathway downstream of RAS. They have highly conserved

structures, yet differ in their activation and kinase activity, which is moderate for A-RAF but high for B-RAF. This

is attributed to differences in the kinase domain N-region. They also differ in their binding affinity with the RAS

homologs. ARAF has a decreased affinity with HRAS (wt), with a KD value of 0.86µM, whereas BRAF has a KD

value of 0.04µM. Little is known of how this impacts their selectivity of binding partners and downstream signaling.

Current therapy approaches for RAS-driven cancer target downstream effectors kinases, including RAF. A major

setback is the development of drug resistance via compensatory mechanisms. Understanding the role of the different

isoforms in cellular signaling and identifying alternative binding partners can provide information on how resistance

mechanisms evolve.

Méthodes et résultats: Pull-down assays using purified RBDs of A- and B- RAF with 84 RAS superfamily small

GTPases expressed in HEK293T cells uncovered several potential new GTPase interaction partners. We found

ARAF interacts with RASD2, RRAS1, RHOBTB1, and RND2, whereas BRAF interacts with MRAS and weakly

with RRAS1. Coimmunoprecipitation assays using full length protein showed that RASD2, RND2, and RHOBTB1

bound to both, whereas MRAS and RRAS1bound only BRAF.

Conclusion et pertinence : These results suggest a relationship between specificity and plasticity of binding.

Understanding this mechanism can allow us to better explain the structure of cellular networks that control cellular

function in normal and cancer cells, and how drug resistance can arise.

faculté de médecine pathologie et biologie cellulaire … · 2019-04-01 · vimal krishnan...

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