Les BacillusLes Bacillus
Aspect microscopique
Bacilles Gram +présentant une spore
Distinction de trois groupes:
Bacillus à spore ovale non déformante,
Bacillus à spore ovale déformante,
Bacillus à spore ronde déformante
À l’EF : mobiles le plus souvent par ciliature péritriche
Observation au MEB
Forme végétative : bacilles à bouts arrondis
Forme de résistance : spore dans un environnement favorable permet le développement d’un nouveau Bacillus.
Bacillus anthracis
Observation microscopique
Grand bacille (5 µm de long, 1 µm de large),
Gram +, Formant une spore ovalaire
centrale non déformante. immobiles capsulé
Il élabore une toxine comprenant trois facteurs agissant en synergie:
facteur I oedématogène facteur II immunogène facteur III létal
Caractères biochimiques:AAF, glucose +, non exigeant, VP + (caractère de la classification des Bacillus), gélatinase +, uréase -, maltose +, saccharose +
Les milieux de culture des Bacillus
Gélose à l’amidon
Gélose nutritive à 1% d’amidon de riz ou de pomme de terre
Ensemencer par une strie centrale à partir d’une suspension bactérienne.Ou en faisant 5 ou 6 dépôts d’öse sur la gélose
Incuber 24 heures à 37°C
Gélose à l’oeuf
Gélose trypticase-soja à 10% de jaune d’œuf stérile
Ensemencer par une strie centrale à partir d’une suspension bactérienne.Ou en faisant 5 ou 6 dépôts d’öse sur la gélose
Incuber 24 heures à 37°C
Milieu TCAComposition
Peptone trypsique de caséine 20 gChlorure de sodium 5 g Sulfite de sodium 0,5 gCystine 0,5 gRouge de phénol 0,017 gGélose 2,5 g ED qsp 1 L
Source N
Source de C et N
Indicateur de pH
pH = 6,8 à 7
Ensemencement
Sources minérales
Régénérer les milieux 20 min au BM à 100°C.Refroidir les tubes à 45°C.Incorporer le sucre désiré pour une concentration
finale de 1% (10g.L-1).Solidifier les milieux sous l’eau froide.Ensemencer par piqûre centrale.Incuber 24 heures à 37°C.
Milieu de Mossel
Composition
Extrait de viande 1 gPeptone 10 gMannitol 10 gChlorure de sodium 10 g Rouge de phénol 0,025 gAgar 12 g ED qsp 1 L
Source N
Indicateur de pH
pH = 7,1
Sources minérales
Sources de carbone
Au moment de l’emploi, ajouter à 90 mL de milieu: 10 mL de jaune d’œuf dilué au ½ dans de l’eau
physiologique 1, 2, 5 ou 10 mL de polymyxine à 1 mg/mL
(Inhibiteur)
Ensemencement
Isolement par la technique des quadrants.
C’est un milieu d’isolement sélectif des Bacillus de l’espèce Bacillus cereus à partir des aliments ou des selles.
Gélose au lait
Gélose blanche à 2,5 à 3% d’agar en solution dans l’eau dans laquelle on ajoute la même quantité de lait stérile.
Ensemencer en faisant 5 ou 6 dépôts d’öse sur la gélose
Incuber 24 heures à 37°C
Recouvrir de lugol la gélose après culture Pas de coloration noire autour
des cultures: absence d’amidon il a été hydrolysé par les bactéries, test positifColoration noire autour des cultures: présence d’amidon test négatif
Gélose à l’amidonLecture des milieux
Gélose à l’œuf Lecture directe:Éclaircissement du milieu de culture les bactéries ont hydrolysé les lécithines du jaune d’œuf , test positif
Pas de changement du milieu test négatif
Gélose Mossel
Colonies rouges entourées d’un halo opaque et blanchâtre suspicion de Bacillus cereus, LECITHINASE +++
Présence d’un halo: hydrolyse des lécithines par une lécithinase, en choline soluble et diglycéride insoluble qui précipite dans le milieu en formant un trouble.
Colonies rouges pas d’utilisation de mannitol par les bactéries MANNITOL -
Lecture directe après cultureHalo clair autour de la culture hydrolyse de la caséine, test positif
Pas de modification du milieu autour de la culture test négatif, la caséine n’est pas hydrolysée.
Gélose au lait
Correction du TP1er jour
N° impair: Bacilles en chaînette Gram +
N° pair: Bacilles en chaînette Gram + présence d’une spore déformante dans le bacille.
2nd jourN° pair: présence d’une spore centrale ovoïde déformanteColoration des spores au vert de
Malachite
Lecture du VF
N° impair: culture en surface AS
N° pair: culture dans tout le tube AAF
1ère orientation: bacilles Gram +, mobiles, catalase +, VP+, non exigeants,(sporogène), AS orientation vers le genre Bacillus.
1ère orientation: Bacilles Gram +, mobiles, VP+, non exigeants, sporogènes, AAF orientation vers le genre Bacillus.
Lecture des milieux CTA
N° impair
glucoseVirage de l’indicateur
de pH glucose +
xyloseVirage de l’indicateur
de pH xylose +
arabinoseVirage de l’indicateur
de pH arabinose +
N° pair
glucoseVirage de l’indicateur
de pH glucose +
xylosePas de virage de
l’indicateur de pH xylose -
arabinosePas de virage de
l’indicateur de pH arabinose -
Lecture de la gélose à l’amidon (n°pair et impair)
Pas de coloration autour de la culture absence d’amidon qui a été hydrolysée par l’-amylase des Bacillus.
Lecture de la gélose au lait (n°pair et impair)
Présence d’un halo d’éclaircissement autour de la culture de la caséine a été hydrolysée par les protéases des Bacillus.
Lecture de la gélose à l’œuf
Présence d’un halo clair autour de la culture les lécithines ont été hydrolysées par la lécithinase des Bacillus.
n° pair
n° impairPas de modification autour de la culture les lécithines n’ont pas été hydrolysées.
Lecture de la gélose de Mossel
n° pair Colonie rose pas d’utilisation du mannitol par les Bacillus MANNITOL -
Présence d’un halo clair autour de la culture les protéines du jaune d’oeuf ont été hydrolysées par les protéases des Bacillus.
Présence d’un halo opaque autour de la culture les lécithines ont été hydrolysées par la lécithinase des Bacillus.
Suspicion de Bacillus cereus
Identification de l’espèce: Bacillus présentant divers enzymes (-amylase, lécithinase, protéases), glc +, xylose-, arabinose -, culture caractéristique sur Mossel Bacillus cereus.
Lecture de la gélose de Mossel
n° impair
Colonie jaune Utilisation du mannitol par les Bacillus MANNITOL +
Absence d’un halo opaque autour de la culture les lécithines n’ont pas été hydrolysées par les Bacillus.
Il s’agit d’un Bacillus autre que Bacillus cereus
Identification de l’espèce: Bacillus présentant divers enzymes (-amylase, protéases), glc +, xylose+, arabinose + Bacillus subtilis (tableau p 132 du livre).