Identification des individus par l’ADNIdentification des individus par l’ADN
Les Empreintes GénétiquesLes Empreintes Génétiques
?
Les Empreintes GénétiquesLes Empreintes Génétiques
Quelques datesQuelques dates ...
Les deux ADN: Caractéristiques et techniques d ’analyse
Applications : de l’ADN nucléaire
de l’ADN mitochondrial
1985 : Sir A. JEFFREYS1989 : Premières expertises en France1994 : ADN mitochondrial1994 : Loi sur la bioéthique1997 : Habilitation des experts1998 : Création du fichier national
Quelques dates ...Quelques dates ...
1944 : L ’ADN, support de l ’information génétique
1970 : Essor technologique ….
Les Empreintes GénétiquesLes Empreintes Génétiques
Quelques dates ...
Les deux ADNLes deux ADN: : Caractéristiques et techniques d ’analyseCaractéristiques et techniques d ’analyse
ADNADN Acide DésoxyribonucléiqueAcide Désoxyribonucléique
La Molécule d’ADNLa Molécule d’ADN
Cellule
Mitochondries
Noyau
Chromosome
Les deux ADN :Les deux ADN :CaractéristiquesCaractéristiques
CelluleCellule
Mitochondries
Noyau
ADN nucléaireADN nucléaire
ADN mitochondrialADN mitochondrial
Les deux ADN :Les deux ADN :DifférencesDifférences
Noyau
Mitochondries
Chromosomes(23 paires)
+ XYXY
ADN nucléaireADN nucléaire
ADN mitochondrialADN mitochondrial
ADN mitochondrial
+
ADN nucléaire
+
Les deux ADN :Les deux ADN :DifférencesDifférences
ADN nucléaireADN nucléaireVariations de tailleVariations de taille
NoyauChromosomes
Variation d’un individu à l’autre du nombre de motifs répétés
1 Locus STR1 Locus STR 2 Allèles2 Allèles
ADN mitochondrialADN mitochondrialVariations de séquenceVariations de séquence
Mitochondrie
ADN CAGTACATAG
Variations de séquence d’un individu à l’autre(sauf apparentés par la lignée maternelle)
ADN nucléaire ADN mitochondrial
• 2 copies (2 chromosomes)
• Transmission biparentale
• Variation de taille
• Absent dans tige des
cheveux
• Milliers de copies
• Transmission maternelle
• Variation de séquence
• Présent dans tige des
cheveux
Chaque individu est Chaque individu est uniqueunique
(sauf les “vrais” jumeaux)(sauf les “vrais” jumeaux)
Tous les individus d’une Tous les individus d’une même lignée maternelle même lignée maternelle
sont identiquessont identiques
Les deux ADN :Les deux ADN :DifférencesDifférences
De 1985 à 1995 :
- VNTR et Southern-Blot
Techniques d’analyse de l’ADN nucléaireTechniques d’analyse de l’ADN nucléaire
Depuis 1995
- STR et PCRSTR et PCR
Technique de PCR = AmplificationTechnique de PCR = Amplification
Techniques d’analyse de l’ADN nucléaireTechniques d’analyse de l’ADN nucléaire
ElectrophorèseElectrophorèse
- +
Techniques d’analyse de l’ADN nucléaireTechniques d’analyse de l’ADN nucléaire
- +
LASER
VisualisationVisualisation
Techniques d’analyse de l’ADN nucléaireTechniques d’analyse de l’ADN nucléaire
ComparaisonComparaison
Référence = Marqueur allélique1 2 3 4 5 6 7 8
2 7ADN inconnu
Assignation des Allèles
ComparaisonComparaison
Caractérisation de l ’ADN inconnuCaractérisation de l ’ADN inconnu
Techniques d’analyse de l’ADN nucléaireTechniques d’analyse de l’ADN nucléaire
= Génotype= Génotype
PCR
Electrophorèse
PCR multiplex : 11 à 16 locus STR simultanésPCR multiplex : 11 à 16 locus STR simultanés
LASER
Techniques d’analyse de l’ADN nucléaireTechniques d’analyse de l’ADN nucléaire
Techniques d’analyse de l’ADN nucléaireTechniques d’analyse de l’ADN nucléaire
Comparaison avec le marqueur alléliqueComparaison avec le marqueur allélique
Empreinte génétique masculineEmpreinte génétique masculineobtenue par l’analyse de dix motifs répétés (STR) différentsobtenue par l’analyse de dix motifs répétés (STR) différents
Techniques d’analyse de l’ADN nucléaireTechniques d’analyse de l’ADN nucléaire
Assignation des allèles inconnus
Comparaison d ’empreintes génétiques
Marqueur1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6
1 6 4 5 2 5
Référence n°15 6 1 3 3 4
Inconnu
1 6 4 5 2 5
Référence n°2
Techniques d’analyse de l’ADN nucléaireTechniques d’analyse de l’ADN nucléaire
ExclusionExclusion
IdentitéIdentité
TechniqueTechnique d’analyse d’analyse de l’ADN mitochondrialde l’ADN mitochondrial
HV1 HV2
Locus
Variations de séquenceVariations de séquence
Séquences amplifiées spécifiques à la race humaineSéquences amplifiées spécifiques à la race humaine
HV1 HV2
TechniqueTechnique d’analyse d’analyse de l’ADN mitochondrialde l’ADN mitochondrial
Comparaison à la Séquence de référence d ’«Anderson»
PCR
TTCTTT……..CGTCCC GGGGGT……..AAACACSéquençage
Caractérisation de l ’ADN inconnuCaractérisation de l ’ADN inconnu
Mutations
…CCACTCTTAGC...
…CCACCCTTAAC...
ADN inconnu
Séquence Anderson
Position 16290
Comparaison
TechniqueTechnique d’analyse d’analyse de l’ADN mitochondrialde l’ADN mitochondrial
Mitotype de l’ADN inconnu : 16294 T16299 G
...AACCTGCCTA...
...AGCCTGCCCA...
ADN inconnu
ADN de référence n°1
...AACCTGCCTA...ADN de référence n°2
IdentitéIdentité
ExclusionExclusion
Comparaison de mitotypesComparaison de mitotypes
TechniqueTechnique d’analyse d’analyse de l’ADN mitochondrialde l’ADN mitochondrial
Comparaison de mitotypesComparaison de mitotypes
TechniqueTechnique d’analyse d’analyse de l’ADN mitochondrialde l’ADN mitochondrial
Les Empreintes GénétiquesLes Empreintes Génétiques
Quelques dates ...
Les deux ADN: Caractéristiques et techniques d ’analyse
Applications :Applications : de l’ADN nucléairede l’ADN nucléaire
de l’ADN mitochondrialde l’ADN mitochondrial
Tests de filiation (paternité …)
Agressions homo ou hétérosexuelles
Homicides
Autres délits (vols, violences, …)
Applications de l’ADN nucléaireApplications de l’ADN nucléaire
A chaque fois que l’on dispose de substanceA chaque fois que l’on dispose de substance
biologique : sang, sperme, salive …biologique : sang, sperme, salive …
?
Applications de l’ADN nucléaire Applications de l’ADN nucléaire Tests de FiliationTests de Filiation
Etablir un lien de parentéEtablir un lien de parenté
Tests de FiliationTests de Filiation
Les prélèvementsLes prélèvements
Sang
Salive
Produit d ’IVG
Muscle
3 6
3 4
52
Interprétation Interprétation : Fausse paternitéFausse paternité
Tests de FiliationTests de Filiation
Mère
Enfant
Père
Exemple de fausse paternitéExemple de fausse paternité
Tests de FiliationTests de Filiation
3 6
3 4
62
Interprétation : Vraie paternitéInterprétation : Vraie paternité
Tests de FiliationTests de Filiation
Exemple de vraie paternitéExemple de vraie paternité
Mère
Enfant
Père
Tests de FiliationTests de Filiation
Applications de l’ADN nucléaire Applications de l’ADN nucléaire Agressions sexuellesAgressions sexuelles
=?
Identifier l ’auteur de l ’agressionIdentifier l ’auteur de l ’agression
Préservatifs Préservatifs (2 faces analysées indépendamment)
Agressions sexuellesAgressions sexuelles
Autres prélèvementsAutres prélèvements
Objets de literieObjets de literie
Objets introduitsObjets introduits
Tout objet abandonné sur les lieux par l’agresseurTout objet abandonné sur les lieux par l’agresseur
Prélèvement (mélange)
Fraction M(enrichie en spermatozoïdes)
Fraction F(enrichie en cellules épithéliales)
Agressions sexuellesAgressions sexuelles
Extraction différentielle de l ’ADNExtraction différentielle de l ’ADN
62
Suspect n°2
Suspect n°1
3 5
ExclusionExclusion
Victime
3 4
IdentitéIdentité
62
Fraction M
3 4
Fraction F
ComparaisonsComparaisons
Agressions sexuellesAgressions sexuelles
Marqueur
Victime
Fraction F
Fraction M
Suspect
ComparaisonsComparaisons
Agressions sexuellesAgressions sexuelles
Analyse des STR YAnalyse des STR YViol en réunionViol en réunion
Fraction MSTR
Autosomaux
Suspect n°1STR Y
Fraction MSTR Y
Identifier toute trace biologiqueIdentifier toute trace biologique
Applications de l’ADN nucléaire Applications de l’ADN nucléaire HomicidesHomicides
Laissée par la victime sur l’agresseur
Laissée par l’agresseur sur la victime
Marqueur
Victime
Suspect
Pistolet
Applications de l’ADN nucléaire Applications de l’ADN nucléaire HomicidesHomicides
Applications de l’ADN nucléaire Applications de l’ADN nucléaire HomicidesHomicides
Le sang est-il celui de la victime ?A qui appartient le pantalon ?
Sang Zones de frottement
VêtementsVêtements
MégotsChewing-gums, noyaux de fruitDenrées alimentaires (sandwichs, beignet ...)Bouteilles, verres, cuillèresBrosse à dents, lime à onglesVêtementsPeignes, brosse à cheveuxGantsCagoules ...
Applications de l’ADN nucléaireApplications de l’ADN nucléaireAutres délitsAutres délits
Tout support potentiel de matériel biologiqueTout support potentiel de matériel biologique
SaliveSalive
Applications de l’ADN nucléaireApplications de l’ADN nucléaireAutres délitsAutres délits
Cagoule
Les Empreintes GénétiquesLes Empreintes Génétiques
Quelques dates ...
Les deux ADN: Caractéristiques et techniques d ’analyse
Applications : de l’ADN nucléaire
de l’ADN mitochondrial
ACGT
ADN
Rappels sur l’ADN mitochondrialRappels sur l’ADN mitochondrial
Milliers de copies
Transmission maternelle
Variation de séquence
Présent dans tige des cheveux
Cellulemitochondries
noyau
Quand l’analyse de l’ADN nucléairen’est pas possible ou pas nécessaire
Applications de l’ADN mitochondrialApplications de l’ADN mitochondrial
Identification de cadavresIdentification de cadavres
AgressionAgression
Vols à main arméeVols à main armée
Terrorisme ...Terrorisme ...
Prélevés sur cagoule (Vol à main armée, terrorisme…)
Prélevés dans la main d’une victime (homicide)
Prélevés sur scène de crime (dans voiture, logement…)
Applications de l’ADN mitochondrialApplications de l’ADN mitochondrial
Eléments pileuxEléments pileux
Essai d’analyse de l ’ADN nucléaireEssai d’analyse de l ’ADN nucléaire(Sexe / Typage)(Sexe / Typage)
Mais si ...Mais si ... Présence d ’un bulbe
Grande quantité d ’ADN
Méthodologie complexe
Technique longue
Coût plus important
Pouvoir discriminant plus faible
Applications de l’ADN mitochondrialApplications de l’ADN mitochondrial
Cheveux sans bulbe
Échantillons très dégradés
(cadavres, excréments)
Échantillons en quantité
très faible (micro-traces, …)
InconvénientsInconvénients AvantagesAvantages
Seule technique pour :
Les Empreintes GénétiquesLes Empreintes Génétiques
ConclusionConclusion
(1989)
1600
Activité des empreintes génétiquesActivité des empreintes génétiques
40
(2000)
Les Empreintes GénétiquesLes Empreintes Génétiques
Ce que l’on ne peut pas dire (aujourd’hui)...
RaceAge
Caractères physiques
LaboratoireLaboratoire
Magistrat Enquêteur
Médecin légiste
Les Empreintes GénétiquesLes Empreintes Génétiques