Journal CJ~’ Chromatography, 292 (1984) 468472 Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam ~ Printed in The Netherlands

CHROM. 16,661

Note

Dosage de I’heptaminol dans des preparations pharmaceutiques par chromatographie liquide apr&s derivation par le 4-N,N-dim&hylami- noazobenz&ne-4-isothiocyanate

MICHEL BAUER*, LILIANE MAILHE et LAN NGUYEN

Service de Chimie Analytique, Dtipartement de Recherches et DCveloppement Pharmaceutique, Centre de Recherches Pierre Fubre, 17, Avenue Jean Moulin. 81106 Castres Ckdex (Fruncej

(Requ le 7 fkvrier 1984)

Le chlorhydrate d’heptaminol (6amino-2-methyl-2 heptanol) a it& reconnu d&s 1951 par A. Loubatierel comme presentant une action cardiotonique intiressante sur le plan therapeutique et de ce fait figure dans la composition de certaines specia- lit& pharmaceutiques. Sur le plan analytique cette molecule a fait l’objet d’etudes par chromatographie sur couche mincez, par chromatographie gazeuse et par chro- matographie liquide haute performance (CLHP). Dans ce dernier cas, la molecule ne possedant pas de spectre d’absorption dans l’ultra-violet, une derivation reposant sur la reaction de l’orthophtalaldehyde avec une amine primaire en presence de 2-mer- captoethanol a ttt mise g profit et appliquee a des preparations pharmaceutiques aussi bien qu’a des etudes de pharmacocinetique 5. Cette mtthode ntcessitant l’utili- sation d’un mercaptan, surtout dans le cas d’un usage en routine, est trb disagrtable sur le plan organoleptique. Afin de remtdier a cet inconvenient nous avons dtveloppe une mtthode de derivation du groupement amine primaire de I’heptaminol par le reactif colort 4-N,N dimtthylaminoazobenzene-4’-isothiocyanate (DABITC) et uti- lise db 1976’j par Chang et al. pour la determination de sequence des protlines et peptides7. Cette note decrit le mode de derivation ainsi que la methode CLHP sur phase greffee Cl8 mise au point pour le dosage de l’heptaminol dans deux sptcialitis pharmaceutiques, une forme liquide (ampoule) et une forme solide (cornprime).

PARTIE EXPERIMENTALE

Appareillage La methode a CtC etudiee sur un appareil Waters 6000 A (Waters Assoc., Paris,

France) couple avec un ditecteur g longueur d’onde variable modele 450 (fixee dans ce cas g 420 nm), un injecteur automatique Wisp 710 B (Waters Assoc., Paris, France) et un enregistreur Omniscribe (Houston Instrument, Austin, TX, U.S.A.). La colonne en acier inoxydable, longueur 30 cm, diametre interne 3.9 mm, est remplie par du LiChrosorb RP-18 10 pm (Merck no 9334, Merck, Darmstadt, R.F.A.) suivant la methode par voie humides.

0021-9673/84/$03,00 a 1984 Elsevier Science Publishers B.V.

NOTES 469

AcCtonitrile pour chromatographie (Merck no 30); DABITC qualit6 Pm-urn (Fluka n” 39065); chlorohydrate d’heptaminol (Finorga, Courbevoie, France) de pu- rett supCrieure g 99% mesurCe par anhydrotitrimbtrie & I’acide perchlorique; chlo- roforme (qualit& Purex, SDS, France); lessive de soude (Prolabo n” 28226.293). Deux prtparations pharmaceutiques ont CtC testCes, une forme ampoule, renfermant une solution B 3.6 g de chlorhydrate d’heptaminol pour 100 ml et une forme comprimC de 0.180 g de chlorhydrate d’heptaminol par unit&

Conditions chromatographiques L’Cluant a la composition suivante: eau-acttonitrile (60:40); il est utilisC apres

filtration sur membrane Schleicher et Schiill n” 6. Pour l’ensemble des manipulations un d&bit de 2 ml/min, une longueur d’onde de dCtection de 420 nm et une sensibilittr de 0.04 unit& d’absorbance pleine kchelle ont && utilises.

R&action de dkivation -mode opPratoire Prkparer les solutions suivantes: Solution de chlorhydrate d’heptaminol tCmoin g 0.1 g pour 100 ml d’eau, notte

HEP-T. Solution de DABITC g 0.35 g pour 100 ml de chloroforme, notke DABITC. Solution forme solide (comprimC): effectuer une prise d’essai exactement pesCe

(voisine de 0.150 g) de poudre obtenue par broyage de cinq comprimb. Ajouter 20 ml d’eau. Extraire au bain-marie bouillant en agitant pkriodiquement pendant 10 min. Transvaser quantitativement dans une fiole jaugte et compltter avec de l’eau en quantitC suffisante pour 100 ml. Filtrer sur filtre sans cendre. On obtient la solution essai comprimts not&e SEC.

Solution forme liquide (ampoule): diluer la solution au 3:lOO dans l’eau. On obtient la solution h analyser notie SEA.

Dans cinq b&hers de 50 ml not&s Tl, T2, T3, EC et EA introduire suivant le schtma ci-dessous les volumes (exprimts en ml) des diffkrentes solutions d&rites:

Tl T2 T3 EA EC HEP-T 1 2 3 0 0 SEA 0 0 0 2 0 SEC 0 0 0 0 2 Eau c-------- 10 l

Lessive de soude A 1 _ DABITC c--- 3 I

Placer les b&hers dans un bain thermostat6 & 45°C pendant une heure (le milieu est le sidge de mouvements de convection assurant le dCveloppment homog;ne de la r&action). Refroidir & tempirature ambiante et extraire par 3 fois 20 ml de chloro- forme. RCunir les extractions et s&her l’ensemble sur sulfate de sodium anhydre. Evaporer B set et reprendre par du chloroforme en quantitt suffisante pour 10 ml. Effectuer une dilution au I:10 de chaque solution dans I’acCtonitrile. Les solutions sont stables 24 h d tempirature ambiante mais $ l’abri de la lumikre.

Dans tous les cas le volume inject& a &t& de 10 ~1. La dttermination quantitative a tt& effect&e par la mesure des hauteurs de

NOTES

0.1 UA

I I

250 400 550

(Longueur d’ondc (rim) 1

Fig. 1. Spectre d’absorption UV%isible de I’heptaminol d&vi (c = 0.0004 g pour 100 ml d’alcool Bthy- lique).

8 c

::

k 2 Q

-

Heptominol de’rive’

DABITC

1 I 1 1 I t 0 2 4 eJ/ 20

c 22 24 26

Temps en min

Fig. 2. Chromatogramme de la solution tkmoin heptaminol d&iv&

NOTES 471

TABLEAU I

BTUDE Du RECOUVREMENT DE ~HEPTAMINOL PAR MESURE DE LA QUANTITY RE- TROUVEE APRES SURCHARGE

Qr x 100 Recouvrement (%) = p-+s’

QuantitP initiale Quantitk retrouvke, Qr (ng). aprk inject&e, Qi (ng) surcharge S en ng

S = 29.9 S=60 s = 90.3

Forme ampoule 108 139.6 165.5 203 Recouvrement (X) 101.2 98.5 102.4

s = 31.7 S = 48.3 S = 80

Forme comprimks 103.3 137 151.6 181.7

Recouvrement (%) 101.5 100 99.1

pits. Le calcul des droites d’ktalonnage a &tC rkalid A l’aide d’une calculatrice HP 41 C (Hewlett Packard, Corbeil Essones, France) suivant la mCthode des moindres car- rc?sg.

RESULTATS ET DISCUSSION

La Fig. 1 reprtsente le spectre UV du composC d&vii obtenu par chromato- graphie sur plaque prkparative (support silice F 254 2 mm d’kpaisseur, Merck no 5717, kluant: chloroform-acide acttique glacial (1005). Le E:&,, obtenu A 420 nm est de 725. La Fig. 2 reprksente le chromatogramme obtenu pour la solution tkmoin, les chromatogrammes obtenus pour les deux solutions essais 6tant en tout point identiques. Pour l’heptaminol d&iv6 nous avons obtenu une rCponse 1inCaire en hau- teur de pit (h en cm) relativement aux quantitts injectCes (q en ng) comprises entre 100 et 300 ng, h = 5.101 q - 0.169, coefficient de corrtlation = 0.9997.

La reproductibiliti? de la m6thode chromatographique proprement dite (injectionGlution~dttection_mesure des hauteurs) a ttC CtudiCe en injectant 6 fois une solution tbmoin. Le coefficient de variation trouvk a &t& de 0.25%. Le rCsultat obtenu montre la trls bonne reproductibilitt du systeme confirmant qu’avec les systkmes d’injection actuels il n’est pas obligatoire comme l’a montrk P. Haefelfinger’O d’uti- liser un &talon interne. Pour Ctudier la reproductibilitt globale de la mCthode ana- lytique nous avons, B partir de prises d’essais homogttntistes, effectuC cinq essais indtpendants pour la forme liquide ampoule et la forme solide comprimts. Les coef- ficients de variation trouvCs ont CtC respectivement de 1.6% et 1.7%. Nous avons par ailleurs pro&de pour chaque type de prkparation A des surcharges connues en chlor- hydrate d’heptaminol et mesurt le taux de recouvrement (Tableau I) qui dans tous les cas est compris entre 98.5 et 102.5%.

CONCLUSION

La methode d&c&e dans cette note peut done Stre utilisCe pour des contr6les

472 NOTES

de speciali& pharmaceutiques pour lesquelles les contraintes administratives ac- tuelles peuvent exiger des limites de variation de la teneur en principe actif de k 5% par rapport a la valeur d&la&e.

REMERCIEMENTS

Nous remercions Monsieur J. P. Roy (INSERM, hbpital St Louis), le Docteur Basquin, Directeur du departement Recherches et developpement Pharmaceutique, Monsieur Leverd et l’ensemble des personnes du departement qui nous ont aides dans la rtalisation de ce travail.

BIBLIOGRAPHIE

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Paris, 1982, 2eme ed., p. 101. 9 H. G. Mendelbaum, F. Madaule et M. Desgranges, Bull. Sot. Chim., 5 (1973) 1619.

10 P. Haefelfinger, J. Chromatogr., 218 (1981) 73.