cycle de krebs
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Le cycle de KrebsLe cycle de l’acide citrique
Le cycle tricarboxylique
dans les mitochondries conditions AÉROBIES
Acétyl-CoA
CO2
énergie
Voie finale, COMMUNE de l’oxydation des moléculesénergétiques : acides aminés, acides gras, glucides
Figures tirées de
Copyright © 2004 by W. H. Freeman & Company
Lehninger Principles of BiochemistryFourth Edition
Chap V.
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C6
C6
C5
C4
C4
C4
C4
C4
Vue générale du cycle de l’acide citrique
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2 carbones entrent dans le cycle, 2 autres carbones en sortentsous forme de CO2
4 réactions d’oxydo réduction ont lieu
- 6 électrons sont transférés sur 3 NAD+
- 1 paire d’atomes d’hydrogène (2 électrons) sont transféréssur FAD
1 liaison phosphate, riche en énergie est formée à chaque tour (1 GTP)
Régénération de NAD+ et de FAD conduit à la formation de 3
ATP et de 2 ATP respectivement, dans la chaîne respiratoire
3×3 + 1×2 + 1×1 = 12 ATP
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Vue détaillée du cycle de l’acide citrique
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C COO
-
CH2
COO-
CH3
O
S-CoA
C COO-
HO
CH2
COO-
COO-
CH2
C COO-
HO
CH2 COO
-
CH2
S-CoA
O
1. Condensation de l’oxaloacétate et de l’acétyl coenzyme A
Oxaloacétate
+
Acétyl-CoA
+ H2O
Citrate synthétase
Acide citrique
+ HS-CoA + H+
Intermédiaire =Citryl-CoA
I. Les 9 étapes en détail
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2. + 3. Isomérisation du citrate
COO -
C
OH
CH 2
-OOC
H H
C
COO-
COO -
C OH
CH 2
-OOC
H
H
COO-
COO -
C
CH2
-
OOC
H
C
COO-
Citrate Cis-Aconitate Isocitrate
aconitase aconitase
H2O H2O
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4. Oxydo-réduction I
isocitrate + NAD+α-cétoglutarate + CO2 + NADH + H+
COO-
CH2
H C COO-
COO-
C OH
COO-
CH2
H C COO-
COO-
C O
COO-
CH2
COO-
C O
CH2
Isocitrate Oxalosuccinate α-cétoglutarate
Isocitrate déshydrogénase
H+ CO2NAD+
NADH + H+
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5. Décarboxylation oxydative
α-cétoglutarate + NAD+ + CoA succinyl-CoA + CO2 + NADH
COO-
CH2
COO-
C O
CH2
COO-
CH2
C O
CH2
S-CoA
+ NAD+ + HS-CoA + CO2 +NADH + H+
Enz = complexe α -cétoglutarate déshydrogénase
Cofacteurs = NAD+, CoA, TPP, lipoamide, FAD
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6. Formation d’une liaison riche en énergie
succinyl~CoA + Pi + GDP succinate + GTP + CoA
Succinyl CoA synthétaseTransfert sur ADP
GTP + ADP GDP + ATP
Nucléoside diphosphate kinase
7. Régénération de l’oxaloacétate
COO-
CH2
CH2
COO-
COO-
CH
HC
COO-
+ FAD + FADH2
fumaratesuccinate
succinate
déshydrogénase
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8. COO-
CH
HC
COO-
COO-
C
CH2
COO-
HO H
COO-
C
CH2
COO-
HO H
COO-
CH 2
COO-
C O
fumarate L-malate
fumarase
(trans addition
stéréospécifique)
9.
+ NAD+ + NADH + H+
L-malate oxaloacétate
malate
déshydrogénase
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Acétyl-CoA + 2 H2O + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi
2 CO2 + 3 NADH + FADH2 + GTP + 2 H+ + CoA
acétyl-CoA + oxaloacétate + H2O citrate + CoA + H+
citrate cis-aconitate + H2O
cis-aconitate + H2O isocitrate
isocitrate + NAD+ α-cétoglutarate + CO2 + NADH
α-cétoglutarate + NAD+ + CoA succinyl-CoA + CO2 + NADH
succinyl-CoA + Pi + GDP succinate + GTP + CoA
succinate + FAD (lié) fumarate + FADH2 (lié)
malate + NAD+ oxaloacétate + NADH + H+
fumarate +H2O malate
II. Bilan du cycle de l’acide citrique
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Bilan énergétique du cycle de Krebs
isocitrate déshydrogénase
α-cétoglutarate déshydrogénase
succinyl CoA synthétase
succinate déshydrogénase
malate déshydrogénase
1 NADH formé
1 NADH formé
1 GTP formé
1 FADH2 formé
1 NADH formé
3 liaisons ~
3 liaisons ~
3 liaisons ~
1 liaison ~
2 liaisons ~
12 liaisons ~
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entrée du pyruvate dans la mitochondrie (cf. avant)
devenir des atomes de C :S-CoA
+CO2
CO2 α-cétoglutarate
isocitrate
citrate
succinyl-CoA
succinate
oxaloacétate
III. Particularités et mécanismes
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complexe de l’α-cétoglutarate déshydrogénase
Très semblable au complexe pyruvate déshydrogénase
Mêmes cofacteurs : TPP, lipoamide, CoA, FAD, NAD+
3 enzymes :
A’ : α-cétoglutarate déshydrogénase
B’ : transsuccinylaseC’ : dihydrolipoyl déshydrogénase
C’BA
CBA
CB’A’
C’B’A’
Complexes fonctionnels
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La citrate synthétase
oxaloacétate + acétyl-CoA citrate + CoA
- enzyme = 2 monomères en interaction
- (a) = enzyme sans substrat
- (b) = enzyme avec substrats changement conformationnel,le site actif « se referme »- présence d’histidines dans le site actif qui stabilisent lesdifférents intermédiaires
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L’aconitase
• Aspect structural :
COO-
C
HO
CH2
COO-
H2
C
COO-
COO-
C
CH2
COO-
H
C
COO-
COO-
C
CH2
COO-
H
C
COO-
COO-
CO
CH2
COO-
H
H C
COO-
COO-
C OH
CH2
COO-
H
HC
COO-
ou
cis aconitate
isocitrate
ou
1
2
3
5
4
1
2
3
5
4
1
2
3
5
4
1
2
3
5
4
citrate
A B
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Comment l’enzyme peut elle être spécifique sur unemolécule symétrique
•
••
Molécule symétrique reconnue de manière asymétrique
Site OH
CH2COO-Site
Site COO-
CH2COO-
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• Aspect fonctionnel : Dichapetelum cymosum
Aconitase inhibée par fluoroacétate
Site OH
Site
Site COO-
CH2COO-
COO-
C
HO
C
COO-
H2
C
COO-
H
COO-
CH2F
F CH2
O
C
S-CoA
CoA-SH
fluoroacétate fuoroacétyl CoA
oxaloacétate
fluorocitrate Aconitase
Fe2+
Fluor Blocage
Attention…
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IV. Régulation du cycle de Krebs
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Régulation du cycle :
Complexe pyruvate déshydrogénase :
• Acétyl-CoA inhibe la transacétylase
• NADH inh. Dihydrolipoyl déshydrogénase
P si élevés
• déphosphorylation si pyruvate élevé
ATP, NADH, Acétyl-CoA
ADP NAD+ CoA
• modification covalente : P de Ser
Citrate synthétase :
• inhibée allostériquement par ATP
(ATP baisse l’affinité de l’enzyme par l’Acétyl-CoA)
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Isocitrate déshydrogénase :
• stimulation allostérique par ADP
(ADP augmente l’affinité pour les substrats)
• NADH inhibe l’enzyme car déplace le NAD+
α -cétoglutarate déshydrogénase :
• inhibition par succinyl-CoA et par NADH
Résumé : si taux énergétique cellulaire élevé, vitesse ducycle et vitesse d’incorporation de C2 réduites
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V. Le cycle de l’acide citrique : source de précurseurs
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Remarques :
• Dans situation alimentaire désespérée :
voie néoglucogenèse : oxaloacétate
glucides (glucose pour le cerveau)
• Compensation par réactions anaplérotiques :
Ex : pyruvate + CO2 + ATP + H2O
oxaloacétate + ADP + Pi + 2 H+
pyruvate carboxylase
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paralysie / tremblement mains + pieds, parfois tout le corps
provoqué par carence en vitamine B1 = thiamine
TPP = groupe prosthétique de 3 enzymes importants
• pyruvate déshydrogénase
• α-cétoglutarate déshydrogénaseCycle de Krebs
• transcétolasesVoie despentoses
Activités enzymatiques faibles
Extrême Orient / riz, faible teneur en vit. B1
VI. Cycle de Krebs et Béribéri
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VII. Le cycle glyoxylique
Bilan : 2 Acétyl-CoA + NAD+ + 2 H2O succinate + 2 CoA + NADH + H+
Remarque : Acétate + CoA + ATP Acétyl-CoA + AMP + PPi
Oxaloacétate
Citrate
Acétyl-CoA
CoASH
Isocitrate
CO2
α-cétoglutarate
Succinyl CoA
Succinate
Fumarate
Isocitrate lyase
Glyoxylate
Malate
synthase
Acétyl-CoA
CoASH
MalateGlucose
NAD+
NADH + H+
Malate
déshydrogénase
CO2