cours de cytologie et physiologie cellulaire · techniques de coupes minces + coloration positive...
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Cours de cytologie et physiologie cellulaire
Assuré par Mme . F . BENALKMA - FOUKRACHE
Année universitaire : 2014 -2015
CHAPITRE II Méthodes d’études de la cellule
Plan
Introduction
Le microscope photonique à fond clair /M .optique ou microscope photonique
Description Principe de fonctionnement
Technique histologique
Le microscope photonique à fluorescence
Principe de fonctionnement
Description
Technique de détection et de localisation de composés cellulaires
I / Les microscopes photoniques :
II / Les microscopes électroniques : Le microscope électronique à transmission ( MET )
Description Principe de fonctionnement
Techniques de coupes minces + coloration positive
Technique d’autoradiographie
Le microscope électronique à balayage (MEB )
Description Principe de fonctionnement
Technique de cryofracture / cryodécapage + ombrage métallique
Technique de coloration négative
Le fractionnement cellulaire / Isolement des différents composants de la cellule .
Autres techniques d’études
La chromatographie sur papier
L’ électrophorèse
La spectrophotométrie
Les cultures cellulaires
Notion de pouvoir séparateur= pouvoir de résolution
C’est la capacité de l’œil à distinguer nettement 2 points très rapprochés 0,2mm
Organismes de taille plus petite Invisibles
Nécessité d’utiliser des instruments destinés à observer de petits objets dont un système de lentilles (optiques , électroniques … ) fournit une image agrandie
Ces instruments les microscopes
0,2mmŒil humain
Le microscope est indispensable à l’observation et à l’étude
De la structure et de la composition des tissus
Des cellules
L’histologie
La cytologie
Des molécules
Primordiales pour l ’établissement des diagnostics
Microchirurgie
Connaissance de la cellule
Etude morphologique
Etude biochimique
Etude moléculaire
•Description Structurale et Ultrastructurale
TailleFormeContenu
•Détection •Localisation
•Quantification
•Nature des molécules
• Leur organisation
De composés cellulaires
Les microscopes photoniques :
Plan
Le M P à fond clair / microscope optique
Pouvoir séparateur de 0,2µm
Description
Principe de fonctionnement
Technique histologique
Principe de formation de l’image
Le M O est un système optique à lentilles dans le but d’obtenir une image agrandie de l’échantillon à observer :
L’objectif à image agrandie inversée
L’oculaire à image agrandie virtuelle
réelle
Source d’éclairement
milieu Porte objet
Observation
Faisceau de photons
Lentilles en verre
Lame de verre
Lentilles oculaire
Principe de fonctionnement du M O
1ere image
Lentilles objectif
Résultat : image colorée
La technique histologique p .28
Méthode de préparation de l’échantillon pour une observation au microscope photonique
But : étude structurale des tissus
3 - Borels de déshydratation (bains d’alcool )
90 ° 100° Toluène
4 – Inclusion à la paraffineBlocs de paraffine
5 – Microtomie (réalisation de coupes de 2–10µm d’épaisseur)
Microtome
Ruban de coupes de 2 – 10 µm
Bloc de paraffine
A