This article was downloaded by: [California Poly Pomona University]On: 11 November 2014, At: 13:41Publisher: Taylor & FrancisInforma Ltd Registered in England and Wales Registered Number: 1072954Registered office: Mortimer House, 37-41 Mortimer Street, London W1T 3JH,UK

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Caractères et réactivité desgrains protéiques et de leursgloboïdes dans différentstissus des cotylédons degraines d'Helianthus annuus L.(Asteraceae)Aimas Shoar-Ghafari a & Colette Vintéjoux aa Laboratoire de Cryobiologie végétale , UniversitéPierre et Marie Curie (Paris VI) , 12 rue Cuvier,F-75005 , ParisPublished online: 26 Apr 2013.

To cite this article: Aimas Shoar-Ghafari & Colette Vintéjoux (1997) Caractèreset réactivité des grains protéiques et de leurs globoïdes dans différents tissus descotylédons de graines d'Helianthus annuus L. (Asteraceae), Acta Botanica Gallica:Botany Letters, 144:1, 95-106, DOI: 10.1080/12538078.1997.10515757

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Acta hot. Gallica, 1997, 144 (/), 95-106.

Caracteres et reactivite des grains proteiques et de leurs globoldes dans differents tissus des cotyledons de graines d'Helianthus annuus L. (Asteraceae)

par Almas Shoar-Ghafari et Colette Vintejoux

Laboratoire de Cryohiologie w!getale, Universite Pierre et Marie Curie (Paris VI), 12 rue Cuvie1; F-75005 Paris

Resume.- Plusieurs categories de grains d'aleurone ont ete caracterisees dans les cotyledons de toumesol. lis different entre eux par leurs dimensions et les proprietes metachromatiques de leurs globo'ides. La repartition a ete etudiee dans les parenchymes palissadique, lacuneux et profond et dans les epidermes. Ces organites sent egalement decrits en microscopie electronique, apres Ia simple fixation aldehydique, permettant une meilleure stabilisation des structures cristallines. Les diverses localisations des reserves minerales et proteiques a l'interieur des cotyledons sent mises en rapport avec leurs fonctions.

Summary.- Several types of protein bodies are described inside the sunflower cotyledons. They differ from one another by their sizes and by the metachroma­tic characters. The repartition is not the same inside the palisade, intermediate or lacuna parenchyma, as in epidermis. These organelles are also described by the M.E.T. method, with aldehydique fixation to allow stabilization of crystalline structures. The different localizations of mineral and protein reserves are corre­lated with their fonctions, inside cotyledons.

Kev words : cotyledons - protein bodies - tissue repartition globo'ids -Sunflower.

I. INTRODUCTION

Les corps proteiques localises dans les graines des Angiospermes renferment une grande partie des reserves organiques et minerales qui seront necessaires au developpement de l'embryon, pendant Ia germination. Leur structure est variable, ces organites differant entre eux selon Ia famille ou l'espece consideree (Lott, 1981 ). Elle est en rapport etroit avec le groupement taxonomique (Buttrose et Lott, 1978). Cependant, leur structure fine peut aussi differer dans les graines, selon Ies tissus, ou parfois a l'interieur d'une meme cellule. Les variations observees concement les globoi'des, leurs structures cristallines ou encore Ia substance fondamentale (Geneves, 1984; Geneves et Rutin, 1985 ; Shoar-Ghafari, 1986;

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Geneves et Cachon, 1987). Dans le cas des cotyledons d'Helianthus annuus, )'utilisation de techniques adaptees (mises au point effectuees par ces derniers auteurs, pour )'etude des tissus anhydres) a egalement permis de montrer l'heterogeneite structurale des corps pro­teiques, ainsi que Ia diversite de Ia composition elementaire des cristaux qu'ils renferment (Shoar-Ghafari, 1986 ; Vintejoux, 1992). Afin de completer ce travail, nous envisageons, dans cet article, une etude plus globale de Ia repartition de ces organites, essayant de carac­teriser leur structure fine dans les differents tissus des cotyledons d'Helianthus annuus. Ces donnees, en permettant de mieux connaitre Ia localisation des reserves proteiques et mine­rates, leurs proportions relatives a l'interieur des organes etudies, pourraient contribuer a preciser Ia physiologie de ces graines pendant Ia periode de vie latente, avant que ne s'ef­fectue le processus de germination.

II. MATERIEL ET METHODES

Des cotyledons ont ete preleves sur des graines seches (Helianthus annuus L.). Certaines observations ont ete effec­tuees directement. a partir de coupes de materiel in vivo (traitees par divers reactifs : noir soudan, reactif iodo-iodu­re. etc.). D'autre part, des fragments de cotyledons ont ete fixes par une solution de glutaraldehyde (6 %, 1 h), tamponnee par une solution de cacodylate (0,2M). Certains d'entre eux ont aussi subi une post-fixation par le tetroxy­de d'osmium, en solution dans le tampon veronal (1 h). Des coupes histologiques ont ete effectuees apres inclusion dans Ia paraffine (epaisseur : 5~) et colorees soil par le bleu de toluidine, soil par le bleu de bromophenol ou bien successivement par les deux series de reactifs. Nous avons egalement observe des coupes histologiques, apres Ia technique a I'APS pour Ia localisation eventuelle de reserves glucidiques. Pour Ia microscopie electronique, apres inclusion des pieces dans le melange araldite-epon, nous avons realise des sections ultrafines qui ont ete observees soil directement (sans traitement de coloration), soil apres renforcement du contraste par une solution de KMn04.

Ill. RESULTATS

A. Histologie des cotyledons Dans les sections transversales des cotyledons, le parenchyme palissadique comporte

quatre a cinq assises de cellules, regulierement disposees, tongues et etroites, sous-jacentes a l'epiderme (Pl. I, fig. I et 2). Celui-ci est constitue par une assise de petites cellules, de section quadrangulaire. Ducote inferieur du cotyledon, les assises parenchymateuses (au nombre de sept a huit), peuvent etre aussi regulierement disposees : Ia presence de lacunes, assez developpees, permet de les differencier de celles situees sur Ia face superieure. D'autre part, les cellules sont un peu plus larges et moins tongues que dans le parenchyme palissadique. Dans )'ensemble du cotyledon, les dimensions des cellules augmentent depuis Ies regions superficielles vers les regions profondes. Ce phenomene peut etre obser­ve plus nettement au niveau du parenchyme lacuneux.

B. Localisation des grains proteiques et des autres inclusions de reserves La repartition des inclusions lipidiques (visualisee en microscopie photonique par Ia

coloration au noir soudan) est irreguliere dans les divers territoires des cotyledons (Pl. I, fig. I). Celles-ci sont plus abondantes dans certaines cellules que dans d'autres, phenome­ne egalement observe dans les coupes histologiques et ultrafines. Les reserves glucidiques (amidon) sont peu frequentes. Seuls quelques rares grains d'amidon ont ete observes apres coloration par Ie reactif iodo-iodure. Les resultats obtenus avec Ia technique a I'APS (coupes histologiques) n'ont pas apporte d'autres indications pour Ia determination de ces inclusions.

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Dans les sections histologiques colorees successivement par le bleu de toluidine et le bleu de bromophenol, les corps proteiques apparaissent plus distinctement (Pl. I, figs. 3 a 5). En effet, les deux principaux constituants structuraux, substance fondamentale et glo­boi'des, sont colores. La substance fondamentale (proteique) est bleutee ; les globoi'des prennent des teintes diverses (rouge clair ou rouge fonce) selon leurs proprietes de meta­chromasie. Au moyen de cette technique, nous avons effectue des comptages dans les divers tissus des cotyledons, a partir de cliches obtenus en microscopie photonique, a fort grandissement (G x 2000).

Les resultats sont presentes sur les tableaux I a 5, correspondant aux tissus suivants : epidermes (superieur, Tableau I, et inferieur, Tableau 2) ; parenchymes : palissadique (Tableau 3), profond (Tableau 4) et lacuneux (Tableau 5). Differentes classes de corps pro­teiques ont pu ainsi etre caracterisees :

- ceux qui sont gros et fortement metachromatiques (F), les globo"ides qu'ils renferment pouvant etre distincts les uns des autres ou jointifs ; - ceux qui sont aussi fortement metachromatiques, mais qui ont des dimensions plus reduites (P) ; - ceux qui sont colores par le bleu de bromophenol et qui paraissent peu pourvus en glo­boi'des (ou qui en sont totalement depourvus); ils ont des dimensions varices et sont sou­vent de taille reduite (In).

D'autre part, ont ete repartees dans les tableaux precedents les aires des sections de chaque cellule observee. Dans chaque categorie de tissu, le rapport entre le nombre de corps proteiques releve et l'aire de Ia section de Ia cellule peut varier sensiblement. Toutefois, il n'a pas ete tenu compte dans ces comptages des cellules plus riches en lipides et peu pourvues en inclusions proteiques.

La repartition des trois sortes de grains proteiques est variable selon le tissu considere. Dans le parenchyme palissadique, existent un grand nombre d'organites assez fortement metachromatiques et de surface "moyenne" ( 170 sur sur un total de 200). Dans le paren­chyme lacuneux, on observe a ]'inverse une quantite relativement elevee de corps pro­teiques "incolores" (peu metachromatiques) (94 sur sur un total de 135) et un faible pourcentage d'organites typiquement metachromatiques (20 sur 135). C'est dans le paren­chyme intermediaire que l'on trouve Ia proportion Ia plus elevee d'organites volumineux et fortement metachromatiques (67 sur 258) (comparer aussi les cliches des figs. 3, 4, 5, pl. 1). En fait, les corps proteiques de diametre plus eleve sont souvent groupes dans l'epais­seur des cotyledons, paraissant localises dans plusieurs plans paralleJes a l'epiderme.

Les differents rapports (etablis d'apres l'examen des cliches) peuvent etre evalues en fonction d'une meme surface I 000f.1m2. Les diverses proportions obtenues sont indiquees dans le tableau 6. Ces resultats sont egalement presentes sous forme d'histogrammes (Fig. I). L'evaluation des trois classes de grains a egalement ete effectuee par rapport a ]'en­semble de ceux qui ont ete examines (Fig. I, T).

Les proportions d'organites renfermant des globoi'des sont indiquees ci-dessous pour chaque classe :

Par. palissadique

87%

Par. projond

68%

Par. lacuneux

30%

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Cc s N N/S X JQQ

A 90 2 2 B 135 18 13 c 100 14 14 D 49 5 10 E 90 10 II F 120 16 13 G 150 17 II H 144 15 10 I 130 12 9 J 120 12 10

Totaux 1128 121

2 Cc s N N/S

X JQQ K 35 6 17 L 150 II 8 M 49 6 26 N 36 4 16 0 30 5 23 p 25 4 20 Q 49 5 18 R 30 6 25 s 84 12 14

Totaux 488 59 0

3 Ce s N N/S F p

X JQQ A 320 30 9 I 24 B 280 34 12 I 27 c 350 34 9 2 21 D 370 25 6 () 21 E 280 33 15 0 33 F 420 44 10 0 44

Totaux 2020 200 4 170

G

0 0 0 0 I I 3 0 0 0

5

G

0 0 ()

0 0 0 0 0 0

In

5 6 II 4 0 0 26

4

Ce s N N/S F p In X JQQ

A 740 48 7 13 19 16 B 429 33 7 II 12 10 c 580 42 7 10 18 14 D 900 45 6 II 24 10 E 750 40 5 10 16 14 F 1000 50 5 12 20 18

Totaux 4399 258 67 109 82

5 Cc s N N/S F p In

X JQQ

A 221 23 10 4 2 17 B 300 30 10 4 2 24 c 270 19 7 I 5 13 D 280 30 10 5 4 21 E 230 15 6 5 4 6 F 300 18 6 2 3 13

Totaux 1601 135 21 20 94

Tableaux 1 a 5.- Distribution des grains proteiques dans les sections de differentes cellules Ce (A a F) des epidermes superieur (1) et inferieur (2), des paren­chymes palissadique (3), profond (4) et lacuneux (5) S, aire de Ia section circulaire (1Jm2) ; N, nombre d'or­ganites releves, selon qu'ils son! fortement (F) ou moyennement (P) metachromatiques ; In, organites peu pourvus ou depourvus de globo'ldes

Tables 1 to 5.- Distribution of protein bodies in the ultra­thin sections of different cells (A to F), in the case of upper (1) and lower (2) epidermis; in the palisade (3), intermediate (4) and lacuna parenchyma (5). S. sur­face of the section (1Jm2); N. number of metachro­matic organelles (high reactivity : F; middle reactivity: P; ln. little reaactivity).

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I. PARENCHYME PALISSADIQUE

(surface : 2020 ).un2)

85% (P) 2% (F)

13%(1n)

(Nbre org./surface : 1000 ~m2 ). 84 (P) 2 (F)

13 (In)

2. PARENCHYME PROFOND

(surface : 4399 ~un2 ) 42 %(P) 26% (F)

32% (In)

(Nbre org./surface :1000 ~m2) 25 (P) 15 (F)

19 (In)

3. PARENCHYME LACUNEUX

(surface: 1610 ~m2 ) 15 %(P) 15 %(F)

70% (In)

(Nbre org./surface : 1000 ~m2 ) 12 (P) 13 (F)

59 (In)

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Tableau 6.- Proportions des differents types de corps proteiques dans les trois parenchymes etudies (valeurs obser­vees et valeurs rapportees a Ia meme surtace cellulaire de 1000 ~m2).

Table 6.- Proportions of differents kinds of protein bodies in the three parenchyma. The values were also refered to the same surtace (1000 ~m2).

La quantite d'inclusions metachromatiques est plus elevee dans Ia region du parenchyme superieur que dans le parenchyme lacuneux. Elle a une valeur egalement importante dans le parenchyme intermediaire.

Compte tenu de l'epaisseur des coupes (5 ~m) et des dimensions des organites (5 a 6 ~m de diametre pour les plus volumineux), on peut estimer que seulement peu de globo"ides passent en dehors du plan de coupe et ont etc elimines dans les comptages.

D'apres des observations anterieures (Shoar-Ghafari. 1986; Yintejoux, 1992), il semble que les inclusions internes des corps proteiques etudiees renferment des composes mine­raux (a base de P. Mg, Ca, K, etc.). La proportion de matiere minerale, par rapport a celle occupee par les substances organiques de nature proteique, semble done plus Clevee dans le parenchyme palissadique que dans le parenchyme lacuneux. Cependant, dans les divers tissus, il existe toujours un certain pourcentage d'organites volumineux et fortement meta­chromatiques, celui-ci etant sensiblement moins eleve du cote palissadique.

Les resultats sont ditferents dans le cas des epidermes. II est en etfet ditficile de carac­teriser les globo"ides dans ces tissus, mis a part dans quelques cellules. lis presentent alors une tres faible colorabilite. Les corps proteiques apparaissent uniformement colores par le bleu de bromophenol ; si leur nature proteique est confirmee, il n'apparait guere de struc­tures internes permettant de juger de leur heterogeneite a cette echelle.

Dans les coupes histologiques de cotyledons ayant subi Ia double fixation, il est ditfici­le de distinguer les constituants des corps proteiques, quelle que soit Ia coloration utilisee. En etfet, une reaction intense se produit avec le tetroxyde d'osmium, en particulier dans les regions superficielles des organes. Cette colorabilite pourrait etre due a Ia presence de polyphenols meles aux proteines ou bien a une reactivite particuliere de ces dernieres sub-

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Fig. 1.- Evaluation du nombre de grains proteiques. selon leur structure et reactivite (categories F, P, In), dans les dif­ferents parenchymes (histogrammes Ill a V) (d'apres les tableaux 3 a 5). Memes abreviations. Les histogrammes T ont ete obtenus il partir de Ia totalite des corps proteiques observes.

Fig. 1.- Evaluation of number of protein bodies, as their structure and reactivity (kinds F, P, In), in the different paren­chyma (Ill, IV, V) (according to 3, 4 and 5 tables). Same abbreviations. The histogram T were issued with the total of observed organelles.

stances avec le tetroxyde d'osmium, en particulier dans les assises peripheriques. C'est a Ia suite de ces ditficultcs que nous avons etfectue successivement les deux types de colora­tion, bleu de toluidine et bleu de bromophenol, a partir d'echantillons uniquement fixes par le glutaraldehyde.

C. Observations ultrastructurales La planche II montre !'aspect des corps proteiques dans Ia premiere assise palissadique,

situee au contact de l'epiderme. On peut en observer trois categories (a I, a2, a3) ditTerant par leurs dimensions et !'aspect des globo'ides qu'ils renferment. lis correspondent proba­blement aux trois types d'organites decrits en microscopic photonique. La conservation des structures cristallines (celles-ci apparaissant opaques aux electrons) a etc facilitee par ]'ob­servation de coupes depourvues d'elements lourds (fixation uniquement par une solution de glutaraldehyde, non utilisation de solutions contrastantes a base de manganese, de plomb ou d'uranium). Les grains volumineux peuvent renfermer un grand nombre de glo­boi'des de dimensions reduites, sensiblement equivalentes entre elles. Cependant, certains d'entre eux montrent des globo'ides de diametres varies, avec plusieurs faisceaux cristallins (Pl. Ill, fig. 7).

La planche Ill montre !'aspect des grains proteiques dans Ia premiere assise palissadique (Figs. 3 et 4) et dans une assise plus profonde (Figs. 5 a 7) d'une meme coupe ultrafine. II semble que les globoi'des acquierent un espacc plus important au fur et a mesure que l'on

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s'cloigne des regions superficielles, au detriment de Ia substance fondamentale. Ce pheno­mcne peut s'expliquer, en partie, par les resultats obtenus en microscopic photonique, le nombre de grains volumineux et fortement mctachromatiques devenant plus eleve en pro­fondeur, dans le cotyledon. II pourrait aussi etre du a une augmentation de volume des glo­bo"ides dans les corps proteiques de type "P", du tissu palissadique lui-meme, entre les regions superficielles et les plus profondes des cotyledons. Des etudes quantitatives effec­tuees a partir de coupes ultrafines permettront d'apporter des donnees complementaires a ces dernieres evaluations.

Dans les deux epidermes, il a etc difficile d'identifier des globoi"des typiques (Pl. Ill. figs. I et 2). Apres Ia simple fixation aldehydique, nous avons observe une ou plusieurs enclaves claires a leur emplacement.

IV DISCUSSION ET CONCLUSIONS

Les observations precedentes conduisent a montrer !'existence d'une specificite tissulaire. Les epidermes se distinguent de fa~on typique des assises parenchymateuses. Les glo­boi"des y sont beaucoup plus rares. De plus, Ia distribution des trois types de grains pro­teiques (F, Pet In) differe selon le parenchyme observe.

A. Signification physiologique de l'heterogeneite Les particularites des corps protciques observes dans les divers tissus peuvent etre mises

en rapport avec des fonctions speciales caracterisant chaque type cellulaire : controle des echanges avec le milieu exterieur. circulation de l'eau et autres substances, des le debut de l'hydratation germinative.

Les reserves minerales, essentiellement localisees dans les globo"ides, sont plus abon­dantes dans le parenchyme palissadique que dans le parenchyme lacuneux. A !'inverse. dans cette dernicre categoric cellulaire, ce sont les reserves proteiques qui y sont plus fre­quentes. Ce phenomene traduit !'existence d'une profonde asymetrie structurale et biochi­mique dans les cotyledons : outre les differences morphologiques (formes. dimensions des tissus). on voit que le contenu cellulaire lui-mcme. essentiellc:mc:llf occupc par lc:s rC.\"C:ITc:s.

differe nettement entre les deux faces de l'organe. Au moment de Ia germination (de type epigee ). les cotyledons sont soul eves au-dessus de Ia surface du sol et verdissent trcs rapi­dement. lis acquierent alors une fonction chlorophyllienne. comparable a celle d'une veri­table feuille. Les corps proteiques seraient susceptibles de liberer de nombreuses molecules fonctionnelles, entrant dans Ia composition des complexes enzymatiques ncces­sites par ce processus, en particulier du cote palissadique. Au moment de Ia germination, Ia penetration de l'eau doit s'effectuer plus rapidement sur Ia face externe des cotyledons (parenchyme lacuneux). directement en rapport avec le substrat. On con~oit alors Ia ncces­site pour ce tissu d'etre muni de precurseurs favorisant en priorite le processus d'imbibi­tion, alors que dans le parenchyme palissadique. predomineraient les precurseurs de Ia photosynthese. Dans Ia region moyenne, les grains proteiques. a Ia fois pourvus en mate­riaux organiques et mineraux, pourraient liberer de f<won rapide. au moment de Ia germi­nation, diverses substances intervenant sans doute a Ia fa~on des futurs tissus conducteurs. La presence d'un stock de reserves proteiques et minerales. dispersees dans !'ensemble de l'embryon. disponibles et d'emblee utilisables, est indispensable avant que ne s'effectue l'enracinement et que Ia seve ne devienne fonctionnelle. La diversite des systemes enzy­matiques de graines seches de tournesol est bien connue au point de vue biochimique.

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Certains d'entre eux (teneurs elevees en glucose 6-phosphate deshydrogenase et en per­oxydases totales) ont ete mis en correlation avec le pouvoir germinatif des semences, le taux de germination etant dans ce cas plus important ( Reuzeau et Cavalie, 1995 ).

B. Perspectives La diversite des corps proteiques peut aussi etre mise en rapport avec le processus de

differenciation cellulaire, ces organites constituant probablement des marqueurs precoces du phenomene. II serait necessaire d'observer leur structure dans d'autres territoires embryonnaires (apex, radicule), ce qui permettrait de developper cette hypothese. L'evolution des cotyledons au cours de l'hydratation germinative (avec le developpement des chloroplastes et de divers organites) devrait egalement apporter des elements de repon­se aces questions. Un des problemes importants consisterait a localiser dans les cotyledons les structures qui evolueront en chloroplastes et de suivre leur differenciation. En effet, d'apres des travaux recents, dans certaines especes ( concombre ), le processus de verdisse­ment des cotyledons est bien connu d'un point de vue physiologique (Yoshida eta/., 1995 ). Celui-ci est regule par le taux de NPR (protochlorophylle oxydoreductase, substance sen­sible a Ia lumiere), sans qu'il y ait activation ou repression de l'activite enzymatique. II est done probable que les proteines Iiees aux structures pigmentaires soient deja presentes dans les cotyledons et il serait important de les caracteriser.

Des travaux ulterieurs permettront aussi de progresser dans )'analyse cytologique et cytochimique des reserves, d'une part par Ia determination de Ia nature chimique exacte des differents globoi'des, en tenant compte de leur repartition, d'autre part par une etude struc­turale fine comparative des corps proteiques dans les cellules tres riches en lipides.

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EXPLICATION DES PLANCHES EXPLANATION OF PLATES

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Abreviations.- a, grain proteique ; co, cotyledon ; cr. inclusions cristallines ; en, enclaves claires ; ep, epiderme ; F, grains volumineux et Ires metachromatiques ; I, faisceaux de cristaux ; g, globo"ides ; In, grain proteique peu meta­chromatique; li, inclusion lipidique; N, noyau; P, grain proteique de taille moyenne et metachromatique; pi, paren­chyme lacuneux ; pp, parenchyme palissadique ; sa, substance amorphe ; sf, substance fondamentale.

Planche I.- Coupes histologiques transversales de cotyledons d' Helianthus annuus L. Plate 1.- Transverse histological sections of cotyledons (Helianthus annuus L.).

1.- Coupe effectuee a main levee, coloree par Ia technique au nair soudan, montrant Ia repartition des inclusions lipi­diques.

1.- Section (fresh materiel) coloured with black Sudan ; observe the repartition of lipid inclusions.

2 a 5.- Fixation par le glutaraldehyde et inclusion dans Ia paraffine. Epaisseur des coupes : 51J. 2 to 5.- Fixation with glutaraldehyde ; inclusion : paraffin. Thickness of sections : 51J.

2.- Coloration par le bleu de toluidine; seuls les globo"ides sont colores avec ce precede; ils son! abondants dans le parenchyme palissadique, sous-epidermique.

2.- Coloration with toluidine blue ; only the globo"ids are coloured with this technique ; they are abundant in the palisade parenchyma.

3 a 5.- Coupes colorees successivement par le bleu de bromophenol et le bleu de toluidine ; observer les diffe­rences dans Ia repartition des grains proteiques (en fonction de leur reactivite et de leurs dimensions), dans trois regions des cotyledons (par. palissadique, fig. 3 ; par. profond, fig. 4 ; par. lacuneux, face inferieure, fig. 5).

3 to 5.- These sections undergo two colorations : bromophenol blue and, after, toluidine blue. Differences exist in the distribution of protein bodies (affecting their reactivity and their dimensions), according to three regions of the cotyledon (palisade parenchyma : fig. 3 ; intermediate parenchyma : fig. 4 ; lacuna par. : fig. 5).

Planches II et Ill.- Coupes ultrafines non contrastees (fixation glutaraldehyde). Plates II and Ill.- Ultrathin sections (without contrast). Fixation : glutaraldehyde.

Planche II.- Vues generales de territoires cellulaires au niveau de Ia premiere assise palissadique ; les grains pro­teiques contiennent un ou plusieurs globo"ides ; leurs dimensions son! heterogenes (cas des organites al, a2 ou a3) ; les globo"ides peuvent contenir des structures cristallines opaques aux electrons (fleches).

Plate II.- General view of palisade cells near epidermis ; the protein bodies contain one or several globo"ids ; their dimensions are various (al, a2, a3) ; the globo"ids are able to show dense crystalline structures (arroses).

Planche Ill 1 et 2.- Epidermes (superieur, 1, et inferieur, 2). Les inclusions lipidiques, claires aux electrons, sont abondantes.

Quelques grains proteiques son! distincts dans l'epiderme inferieur, mais les structures cristallines des glo­bo"ides ne sont pas apparentes.

3 a 7.- Comparaison des grains proteiques dans plusieurs assises palissadiques d'une meme coupe (3 et 4: pre­miere assise; 5 a 7: assise plus profonde). Les dimensions des grains proteiques et de leurs globo"ides son! plus elevees vers l'interieur des cotyledons.

Plate Ill 1 and 2.- Epidermis (upper ep., 1, and lower ep., 2). The lipid-inclusions (clear aspect) are abundant. Some pro­

tein bodies can be observed inside the lower epidermis, but the crystalline structures of globo"ids are not apparent.

3 to 7.- Comparison of the protein bodies in several palisade layers of the same section (3 and 4: first layer, near the epidermis ; 5 to 7 : profound layer). The dimensions of the protein bodies (and globo"ids) are most impor­tant in the internal part of the cotyledons.

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