annls limnol. 12 (3) 1976 : 269-281. donnees …la destruction des mollusques vecteurs de la...

Annls Limnol. 12 (3) 1976 : 269-281.

DONNEES HISTOLOGIQUES ET H I S T O C H I M I Q U E S

SUR LE TRANSFERT DE DEUX M E T A U X (FE+ + + , C U + + )

CHEZ L Y M N A E A (GALBA) TRUNCATULA MULLER

[Mo l lusques Gastéropodes Pulmonés]

par D. RONDELAUD», C. CHAISEMARTIN 2 et D. BARTHE'

Les voies de transfert du fer et du cuivre sont étudiées chez Lymnaea trun-catula par histochimie, histopathologie et dosages quantitatifs sur les masses molles globales de ces animaux. Le fer pénètre par les régions péritentaculaires et le tube digestif ; il est excrété par les « cellules à cytoplasme dense » des acini de la glande digestive et par les ovocytes de la glande génitale. Les régions péritentaculaires sont seules responsables de la pénétration du cuivre ; ce dernier est véhiculé par les amibocytes et excrété au niveau des granules formés par les « cellules digestives » de la glande digestive.

Some histological and histochemical observations on the transfer of two m étals ( F e " \ Cu* + )

in Lymnaea (Galba) truncatula Mi i l ler .

The transfer processes of iron and copper in Lymnaea truncatula by histo-chemical tests, histopathology and quantitative proportions of thèse metals in the total soft tissues of thèse molluscs. Iron pénétrâtes into peritentacular areas and the alimentary canal ; this métal is excreted by « dense cytoplasm cells » of the digestive gland and by ovules of the génital gland. Peritentacular areas are solely responsible for copper pénétration ; this métal is carried by « amibocytes » and excreted in granules elaborated by « digestive cells » of the digestive gland.

INTRODUCTION

L a d e s t r u c t i o n d e s M o l l u s q u e s v e c t e u r s d e l a f a s c i o l o s e e s t e n c o r e

r é a l i s é e s , à l ' h e u r e a c t u e l l e , e n m a j e u r e p a r t i e p a r v o i e c h i m i q u e .

P a r m i l e s m o l l u s c i c i d e s p r é c o n i s é s , le c u i v r e — p r o p o s é p a r CHANDLER e n 1920 — e s t l a r g e m e n t e m p l o y é . L e s s e u i l s d e t o x i c i t é d e c e m é t a l

s o n t b i e n dé f in i s p o u r d e n o m b r e u s e s e s p è c e s a l o r s q u ' i l s e r é v è l e

i n d i s p e n s a b l e a u d é v e l o p p e m e n t n o r m a l d e c e s m ê m e s o r g a n i s m e s .

1. Laboratoire d'Histologie-Embryologie-Cytogénétique, Faculté de Médecine, 87032 Limoges Cedex.

2. Laboratoire de Biologie Animale, Faculté des Sciences, 123, rue Albert-Thomas, 87060 Limoges Cedex.

Article available at http://www.limnology-journal.org or http://dx.doi.org/10.1051/limn/1976013

http://www.limnology-journal.orghttp://dx.doi.org/10.1051/limn/1976013

270 D. RONDELAUD, C. CHAISEMARTIN ET D. BARTHE ( 2 )

S e s m é c a n i s m e s d ' a c t i o n s o n t e n c o r e m a l c o n n u s c h e z l e s M o l l u s q u e s

e n m i l i e u a q u a t i q u e . D ' a p r è s S P R O N K e t co l l . (1973) , l e s r é g i o n s

p é d i e u s e s d e l ' a n i m a l i n t e r v i e n d r a i e n t d a n s l a f i x a t i o n d u m é t a l .

E n L i m o u s i n , l e f e r e n t r e e n p r o p o r t i o n i m p o r t a n t e d a n s l a t e n e u r

m i n é r a l e d e l ' e a u d e c e r t a i n e s r i g o l e s . C e m é t a l a s u r t o u t é t é u t i l i s é

c o m m e a n t i - c a r e n t i e l m a i s H E N E I N E e t co l l . (1969) le c o n s i d è r e n t

c o m m e p o u v a n t a g i r , à l a l i m i t e , e n t a n t q u e m o l l u s c i c i d e . S o n

a c t i o n m é t a b o l i q u e d a n s l a L i m n é e r e s t e p e u p r é c i s é e .

L e p r é s e n t t r a v a i l r é p o n d d o n c à u n d o u b l e b u t :

— d é t e r m i n e r l e s v o i e s d e t r a n s f e r t d e c e s d e u x m é t a u x ( s o u s

f o r m e d e c h l o r u r e s ) d u m i l i e u d e v i e à l a L i m n é e ,

— l o c a l i s e r c e s é l é m e n t s d a n s l ' o r g a n i s m e e t é t a b l i r l e u r c i n é t i q u e .

L e s e s s a i s o n t p o r t é s u r d e s L i m n é e s t r o n q u é e s i n f e s t é e s o u n o n

p a r Fasciola hepatica. C e t t e é t u d e e s t r é a l i s é e à l ' a i d e d e t e s t s h i s t o -

c h i m i q u e s , d e d o n n é e s f o u r n i e s p a r l ' h i s t o p a t h o l o g i e e t d e l a d é t e r -

m i n a t i o n p a r d o s a g e s d e l a t e n e u r e n m é t a l d e s m a s s e s m o l l e s

g l o b a l e s d e s M o l l u s q u e s e x p é r i m e n t é s .

MATERIEL ET METHODES

a ) M A T É R I E L BIOLOGIQUE ET PROTOCOLE EXPÉRIMENTAL.

D e u x p o p u l a t i o n s d e L i m n é e s t r o n q u é e s o n t é t é r e t e n u e s :

— la p r e m i è r e v i t d a n s u n e e a u o l i g o f e r r i q u e ( F e y t i a t , H a u t e -

V i e n n e : 0,12 m g / 1 d e f e r t o t a l ) .

— l ' h a b i t a t d e la 2 è m e p o p u l a t i o n e s t a s s e z r i c h e e n f e r (S t -Yr i e ix -

l a - P e r c h e , H a u t e - V i e n n e : 0,27 m g / 1 d e f e r t o t a l ) .

N o u s n ' a v o n s p a s p u t r o u v e r d e p o p u l a t i o n v i v a n t n a t u r e l l e m e n t

d a n s u n e e a u c o n t e n a n t d u c u i v r e .

L e s M o l l u s q u e s d e t a i l l e c o m p r i s e e n t r e 4 e t 4,5 m m s o n t s o u m i s

à d e s c o n c e n t r a t i o n s e n i o n s a t t e i g n a n t u n n i v e a u d e t o x i c i t é q u i

p e r m e t t e l a d é t e r m i n a t i o n d e l a c o n c e n t r a t i o n l é t h a l e ( C L . 50 ) e n

48 o u 96 h e u r e s s e l o n l ' o r i g i n e d e l a p o p u l a t i o n . L e s c o n c e n t r a t i o n s

t e s t é e s s o n t d e l O p p m (10 m g / 1 ) p o u r le f e r ( F e C b ) e t d e 1 p p m

(1 m g / 1 ) p o u r l e c u i v r e ( C u C h ) .

L e s e x p é r i e n c e s o n t l i e u d a n s d e s c r i s t a l l i s o i r s e n v e r r e c o n t e n a n t

500 m l d e s o l u t i o n e t 20 à 25 M o l l u s q u e s e n c i r c u i t s e m i - o u v e r t a v e c

r e n o u v e l l e m e n t t o u s l e s 2 j o u r s . L a t e m p é r a t u r e d ' e x p é r i e n c e e s t

d e 16°C e t l e s e s s a i s o n t l i e u e n s a l l e s e m i - é c l a i r é e n a t u r e l l e m e n t .

D e s l o t s t é m o i n s o n t é t é c o n s t i t u é s .

(3) TRANSFERT DE DEUX MÉTAUX CHEZ LYMNAEA TRUNCATULA 271

L e s e f f e t s d e s t o x i q u e s s o n t é t u d i é s :

— s u r d e s M o l l u s q u e s s a i n s o u i n f e s t é s s o u m i s à l ' a c t i o n d ' u n

t o x i q u e p e n d a n t u n t e m p s m a x i m u m d e 48 h e u r e s ( p é r i o d e d e c h a r g e )

a v e c p r é l è v e m e n t d e s a n i m a u x e x p é r i m e n t é s e t t é m o i n s t o u t e s l e s

6 h e u r e s p o u r é t u d e h i s t o l o g i q u e o u d o s a g e s .

— s u r d e s M o l l u s q u e s e n c h a r g e r e m i s e n e a u n o r m a l e , c e q u i

p e r m e t u n e é t u d e d e l a d é c h a r g e ( o u d é s o r p t i o n ) d u t o x i q u e . L e s

a n i m a u x n o n - i n f e s t e s o n t é t é m i s e n d é s o r p t i o n a u b o u t d e 18 e t

48 h e u r e s d e c h a r g e p o u r le f e r , d e 12 h e u r e s p o u r l e c u i v r e . L e s

p r é l è v e m e n t s o n t a l o r s l i eu a u b o u t d e 6, 12 e t 24 h e u r e s a p r è s l a

m i s e d e s L i m n é e s e n d é c h a r g e .

— s u r q u e l q u e s a n i m a u x s o u m i s à l ' a c t i o n d u t o x i q u e p e n d a n t

d e p l u s l o n g u e s p é r i o d e s (4 , 7 e t 14 j o u r s ) .

b ) T E C H N I Q U E S HISTOLOGIQUES.

L e s i n d i v i d u s s o n t f ixés a u B o u i n a q u e u x o u a u B a k e r . L a c o l o r a t i o n

h i s t o l o g i q u e g é n é r a l e e s t l ' h é m a t o x y l i n e d e H a r r i s — m é l a n g e d e

H a l m i . L e s t e s t s h i s t o c h i m i q u e s u t i l i s é s s o n t :

— p o u r le f e r : m é t h o d e d e P é r i s e t m é t h o d e d e G a b e ( M a r t o j a

e t M a r t o j a 1967).

— p o u r le c u i v r e : m é t h o d e d e l ' a c i d e r u b é a n h y d r i q u e e t t e c h n i q u e

à la p - d i m é t h y l a m i n o b e n z y l i d è n e - r h o d a n i n e ( G A B E 1968).

c) T E C H N I Q U E DE DOSAGE.

L e s a n i m a u x p r é l e v é s s o n t c o n g e l é s . A p r è s d é s h y d r a t a t i o n (105° C

p e n d a n t 96 h e u r e s ) , l e s m a s s e s m o l l e s s o n t b r o y é e s e t c a l c i n é e s

520° C p e n d a n t 24 h e u r e s ) . L e s c e n d r e s s o n t r e p r i s e s p a r HC1 N e t

d i l u é e s j u s q u ' à l ' o b t e n t i o n d e s o l u t i o n s à 0,5 HC1 N . L a d é t e r m i n a t i o n

d e s t e n e u r s e n c u i v r e o u e n f e r e s t r é a l i s é e p a r s p e c t r o p h o t o m é t r i e

( P E R K I N - E L M E R 303) . L e s r é s u l t a t s s o n t e x p r i m é s e n n a n o g r a m m e s ( p p b ) p a r m i l l i g r a m m e d e m a s s e s m o l l e s g l o b a l e s ( p o i d s h u m i d e ) .

d ) REMARQUE.

D e s l o t s d ' i n d i v i d u s p a r a s i t é s s o n t o b t e n u s p a r i n f e s t a t i o n e x p é -

r i m e n t a l e e t é l e v é s s e l o n l e s c o n d i t i o n s s t a n d a r d d u l a b o r a t o i r e

à 16° C. (RONDELAUD 1974 b e t c ) . L e s M o l l u s q u e s s o n t u t i l i s é s :

— e n p h a s e C : p r é s e n c e d e n o m b r e u s e s r é d i e s à « g a s t r u l a s » à

l ' i n t é r i e u r d u M o l l u s q u e ,

— e n p h a s e E : p r é s e n c e d e c e r c a i r e s l i b r e s d a n s le M o l l u s q u e

(RONDELAUD 1974 a ) .

272 D. RONDELAUD, C. CHAISEMARTIN ET D. BARTHE (4)

PHOTO I. — 1 : Granules de stockage (fer) dans les « cellules à cytoplasme dense » de la glande digestive : Limnée témoin mésoferrique (Péris x 195).

2 : Le réceptacle séminal : Limnée témoin mésoferrique (Péris x 48). 3 : Granules ferriques dans le cytoplasme des cellules bordantes des

sinus d'un tentacule oculaire : Limnée témoin mésoferrique (Péris x 48).

4 : Un diverticule d'acinus de la glande digestive : Limnée témoin mésoferrique (hématoxyline de Harris - Halmi x 195).

5 : Granules ferriques dans le pharynx d'une rédie de Fasciola hepatica (Péris x 72).

6 : Lacunes de dégénérescence au niveau de la sole pédieuse : Limnée exposée à 10 ppm de fer pendant 48 heures (hématoxyline de Harris - Halmi x 195).

PHOTO I I . — 7 : Hyperplasie au niveau de la sole pédieuse : Limnée exposée à 10 ppm de fer pendant 48 heures (hématoxyline de Harris -Halmi x 195).

8 : Hyperplasie au niveau de la glande digestive : Limnée exposée 10 ppm de fer pendant 48 heures (hématoxyline de Harris -Halmi x 150).

9 : Hyperplasie au niveau de la sole pédieuse : Limnée exposée à 1 ppm de cuivre pendant 7 jours (hématoxyline de Harris -Halmi x 195).

10 : Granules de cuivre dans les amibocytes au niveau de la glande digestive : Limnée exposée à 1 ppm de cuivre pendant 24 heures (Acide rubéanhydrique - Halmi x 487).

11 : Hyperplasie au niveau de la glande digestive : Limnée exposée à 1 ppm de cuivre pendant 14 jours (hématoxykine de Harris -Halmi x 195).

12 : Le passage du cuivre dans les granules orangeophiles formés par les cellules digestives : Limnée exposée à 1 ppm de cuivre pendant 48 heures (Acide rubéanhydrique - Halmi x 195).

2 7 4 D. RONDELAUD, C. CHAISEMARTIN ET D. BARTHE ( 6 )

RESULTATS

1 . — Les Limnées soumises au fer.

1 . 1 . E T U D E HISTOCHIMIQUE DES TÉMOINS.

— Non infestés.

E n m i l i e u o l i g o f e r r i q u e , l ' a c c u m u l a t i o n d e f e r d a n s les t i s s u s

a p p a r a î t s o u s f o r m e d e g r a n u l e s d e s t o c k a g e d e 3 m i c r o n s d e d ia -

m è t r e a u n i v e a u d e c e r t a i n e s c e l l u l e s d e s a c i n i d e l a g l a n d e d i g e s t i v e

q u e n o u s n o m m o n s e n r a i s o n d e l e u r a s p e c t : « c e l l u l e s à c y t o p l a s m e

d e n s e » ( « c a l c i u m c e l l s » d e SOUTHGATE 1 9 6 9 o u « b a s i p h i l c e l l s » d e

MOORE e t H A L T O N 1 9 7 3 ) ; la p l u p a r t d e c e s g r a n u l e s s e r e t r o u v e d a n s

l a p a r t i e b a s a l e d e c e s c e l l u l e s ( p h o t o 1 ) . L e f e r fa i t p a r t i e d e la

t r a m e c y t o p l a s m i q u e i n t r a - o v o c y t a i r e a u n i v e a u d e la g l a n d e g é n i t a l e :

l e s o v o g o n i e s m o n t r e n t u n e r é a c t i o n p l u s i n t e n s e ( à l a c o l o r a t i o n d e

P E R L S ) q u e les o v o c y t e s . I l s e r e n c o n t r e a u s s i s o u s f o r m e d e g r a i n s

i n t r a - c e l l u l a i r e s d e t a i l l e v a r i a b l e a u n i v e a u d e s c e l l u l e s é p i t h é l i a l e s

d e l ' i n t e s t i n l o r s q u e c e d e r n i e r c o n t i e n t d e s d é b r i s v é g é t a u x .

C h e z l e s M o l l u s q u e s p r o v e n a n t d e l ' h a b i t a t m é s o f e r r i q u e , n o u s

a v o n s r e t r o u v é l e s c a r a c t é r i s t i q u e s p r é c é d e m m e n t c i t é e s . D e p l u s

le m é t a l s e r e t r o u v e s o u s f o r m e d e g r a n u l a t i o n s d e 0 , 5 0 m i c r o n d e d i a m è t r e d a n s l e s t i s s u s o u o r g a n e s s u i v a n t s : c e l l u l e s é p i d e r m i q u e s

d e s r é g i o n s p é r i t e n t a c u l a i r e s e t c e l l u l e s b o r d a n t e s d e s s i n u s d e c e s

r é g i o n s , p a r o i s d u m y o c a r d e , p l u s r a r e m e n t d a n s l e s v a i s s e a u x a u t o u r

d e s o r g a n e s v i s c é r a u x , c e l l u l e s d u c a n a l h e r m a p h r o d i t e e t e n t r e l e s

s p e r m a t o z o ï d e s , r é c e p t a c l e s é m i n a l ( p h o t o g r a p h i e s 2 e t 3 ) . I l f a u t n o t e r q u e c e s a n i m a u x p r é s e n t e n t u n e a u g m e n t a t i o n n e t t e d u n o m b r e

d e « c e l l u l e s à c y t o p l a s m e d e n s e » q u i f o r m e n t d e s d i v e r t i c u l e s

a p p e n d u s a u x a c i n i d e l a g l a n d e d i g e s t i v e ( p h o t o 4 ) .

— Infestés.

L e s m o d i f i c a t i o n s d e s t r u c t u r e d e l a g l a n d e d i g e s t i v e s o u s l 'e f fe t

d u p a r a s i t i s m e o n t d é j à é t é s i g n a l é s (SOUTHGATE 1 9 6 9 , MOORE e t H A L T O N 1 9 7 3 ) . N o u s a v o n s r e t r o u v é l a m ê m e d i s t r i b u t i o n d u f e r q u e c h e z l e s t é m o i n s n o n - i n f e s t e s . L a t a i l l e d e s g r a n u l e s d e s t o c k a g e

d a n s les « c e l l u l e s à c y t o p l a s m e d e n s e » e s t p l u s f a i b l e ( 1 à 1 ,5 m i c r o n d e d i a m è t r e ) . L e p h a r y n x d e s r é d i e s c o n t i e n t d e p e t i t s g r a n u l e s fer-

r i q u e s , m a i s l e r e s t e d e s t i s s u s d e l a r é d i e e t l e s c e r c a i r e s e n s o n t

t o t a l e m e n t d é p o u r v u s ( p h o t o 5 ) .

1 . 2 . — H I S T O C H I M I E ET HISTOPATHOLOGIE DES M O L L U S Q U E S EXPÉRIMENTÉS.

a ) Animaux non-inf estes.

— C h e z l e s i n d i v i d u s e n c h a r g e .


L ' é p i t h é l i u m d e s r é g i o n s p é r i t e n t a c u l a i r e s e s t t o u c h é d è s q u e l e s

M o l l u s q u e s s o n t e x p o s é s a u t o x i q u e : o n c o n s t a t e d e l a p y c n o s e e t

d e s l a c u n e s d e d é g é n é r e s c e n c e i n t e r c e l l u l a i r e . Au b o u t d e 48 h e u r e s

d ' e x p o s i t i o n , l ' é p i t h é l i u m m o n t r e d e s z o n e s d e d é g é n é r e s c e n c e : il

d i s p a r a î t p a r e n d r o i t s , l a i s s a n t à n u le c h o r i o n s o u s - j a c e n t . L e t é g u -

m e n t d e l a s o l e p é d i e u s e n e m o n t r e q u e p l u s t a r d i v e m e n t d e la

p y c n o s e e t d e s p h é n o m è n e s d e r e m a n i e m e n t ( p s e u d o - s t r a t i f i c a t i o n

é p i t h é l i a l e , m u l t i p l i c a t i o n d e s n o y a u x d u c h o r i o n s o u s - j a c e n t ) ; c e

r e m a n i e m e n t t o u c h e a u s s i l e s r é g i o n s p é r i t e n t a c u l a i r e s m a i s d e

f a ç o n p l u s d i s c r è t e ( p h o t o s 6 e t 7 ) .

N

5 0 - -

10--

0 - -

• Limnées oligoferr. NI

• Limnées mésoferr. NI

• Limnées oligoferr. I

12 18 24 3 6 48 heures

5 0 - -

10- -

48 heures

FIG. 1. — L'évolution des nombres N de granules (fer et cuivre) au niveau de la glande digestive des Limnées expérimentées. A : Les nombres de granules de stockage (fer) observés dans 200 « cellules à

cytoplasme dense» (en moyenne). N I : non-infestées ; I : infestées au stade C.

B : Les nombres d'amibocytes AM présentant des granules noirâtres et des granules orangéophiles GO (cuivre) observés pour une valeur moyenne de 200 « cellules à cytoplasme dense » (Limnées oligoferriques non-infestées) •

276 D. RONDELAUD, C. CHAISEMARTIN ET D. BARTHE ( 8 )

La figure 1 A m o n t r e l a d i m i n u t i o n p r o g r e s s i v e e t la d i s p a r i t i o n ,

à p a r t i r d e 18 h e u r e s d e c h a r g e , d e s g r a n u l e s d e s t o c k a g e d a n s

l e s « c e l l u l e s à c y t o p l a s m e d e n s e ». T o u s l e s t y p e s c e l l u l a i r e s d e s

a c i n i d e la g l a n d e d i g e s t i v e p r é s e n t e n t d e f a ç o n h é t é r o g è n e d e s z o n e s

d e n é c r o s e c e l l u l a i r e . L ' h y p e r p l a s i e y a p p a r a î t d è s 24 h e u r e s d ' e x p o -

s i t i o n a u t o x i q u e ( p h o t o 8) ; e l le s ' i n s t a l l e a p r è s l a n é c r o s e e t t o u c h e

t o u s les t y p e s c e l l u l a i r e s d e s a c i n i d i g e s t i f s e t d e l a p a r o i d e l ' i n t e s t i n .

A p a r t i r d e 48 h e u r e s , n o u s n o t o n s (fig. 1 A ) la r é a p p a r i t i o n d e s

g r a n u l e s d e s t o c k a g e d a n s les « c e l l u l e s à c y t o p l a s m e d e n s e », s i g n e

i n d i q u a n t u n e r e p r i s e d ' a c t i v i t é d e c e s c e l l u l e s . C e s d o n n é e s i n d i q u e n t

d o n c q u e l e s « c e l l u l e s à c y t o p l a s m e d e n s e » i n t e r v i e n n e n t d a n s

l ' e x c r é t i o n d u f e r a u n i v e a u d e la g l a n d e d i g e s t i v e . Ces c e l l u l e s for-

m e n t d e s d i v e r t i c u l e s a p p e n d u s à la p a r o i d e s a c i n i d e c e t t e g l a n d e .

L e s a u t r e s o r g a n e s m o n t r e n t q u e l q u e f o i s d e s g r a n u l e s f e r r i q u e s

( r e i n ) , s o u v e n t d e s p y c n o s e s ( p o u m o n ) .

— C h e z les a n i m a u x e n d é s o r p t i o n .

L e s g r a n u l e s d e s t o c k a g e p e r s i s t e n t e n n o m b r e r é d u i t d a n s l e s

« c e l l u l e s à c y t o p l a s m e d e n s e ». 56 h e u r e s a p r è s le d é b u t d e l ' expo-

s i t i o n a u fe r , le M o l l u s q u e m o n t r e u n e v a c u o l i s a t i o n c e l l u l a i r e a u

n i v e a u d e s c e l l u l e s d e s a c i n i d i g e s t i f s , d u r e i n , d u p o u m o n e t d e

la p a r o i d i g e s t i v e .

Q u e l q u e s L i m n é e s m o n t r e n t la p r é s e n c e d ' a l i m e n t s d a n s l e u r t u b e

d iges t i f c e q u i i n d i q u e q u e c e s M o l l u s q u e s o n t p u s e r é a l i m e n t e r

( a n i m a u x p l a c é s e n d é s o r p t i o n a u b o u t d e 18 h e u r e s d ' e x p é r i e n c e ) .

b ) Animaux infestés.

L e s r é s u l t a t s o b t e n u s s o n t v o i s i n s d e c e u x o b t e n u s a v e c les L i m n é e s

n o n - i n f e s t é e s . N o u s a v o n s r e m a r q u é q u e les g r a n u l e s d e s t o c k a g e

d i s p a r a i s s e n t a u b o u t d e 12 h e u r e s d ' e x p é r i e n c e (fig. 1 A ) . L ' h y p e r -p l a s i e d e s « c e l l u l e s à c y t o p l a s m e d e n s e » n ' e s t p a s n e t t e à l ' i n v e r s e

d e ce l l e d e s a u t r e s t y p e s c e l l u l a i r e s . L a v a c u o l i s a t i o n c e l l u l a i r e o b s e r -

vée a u n i v e a u d e s a c i n i d i g e s t i f s a p p a r a î t d è s 36 h e u r e s d ' e x p o s i t i o n .

A p a r t i r d e 24 h e u r e s d ' e x p o s i t i o n , g a s t r u l a s e t c e r c a i r e s p r é s e n t e n t d e s s i g n e s do p y c n o s e .

1.3. ANALYSE QUANTITATIVE.

L a f i g u r e 2 r e g r o u p e les d o n n é e s f o u r n i e s p a r l ' a n a l y s e s p e c t r o p h o -

t o m é t r i q u e .

L e s M o l l u s q u e s n o n - i n f e s t é s a c c u m u l e n t p r o g r e s s i v e m e n t le fe r ,

c ec i j u s q u ' à l a v a l e u r m a x i m a l e d e c h a r g e ( à p a r t i r d e 24 h e u r e s

d ' e x p o s i t i o n ) . N o u s n e c o n s t a t o n s p a s d e d i f f é r e n c e d e p l a t e a u

e n t r e i n d i v i d u s p a r a s i t é s o u n o n . Ces d o n n é e s s u g g è r e n t q u e l ' a b s o r p -

t i o n d u f e r r é p o n d r a i t e s s e n t i e l l e m e n t à u n m é c a n i s m e p h y s i q u e

P o u r les 2 g r o u p e s d ' a n i m a u x m i s e n d é c h a r g e , la c h u t e d u t a u x

f e r r i q u e e s t i d e n t i q u e .

(9 ) TRANSFERT DE DEUX MÉTAUX CHEZ LYMNAEA TRUNCATULA 277

} 1 1 1 1 1 h— 1 :—I -

0 6 12 18 24 36 48 78 heures

FIG. 2. — L'accumulation des deux métaux à l'intérieur des Limnées expérimen-tées (A : fer ; B : cuivre). Traits continus : Limnées en charge { • : non-infestées ; • : infestées au stade C ) ; Traits pointillés: Limnées non infestées ( • ) mises en décharge à partir de x heures de charge (D x).

1 . 4 . — D O N N É E S ÉTHOLOGIQUES COMPLÉMENTAIRES.

D u r a n t l ' h ive r , l es L i m n é e s v i v e n t e n m i l i e u i m m e r g é . L e s Mol -

l u s q u e s n o n - i n f e s t é s o n t é t é r é c o l t é s d a n s l a n a t u r e d u r a n t c e t t e

s a i s o n e t l ' e x p o s i t i o n à d e s c o n d i t i o n s c o n s t a n t e s a p o u r c o n s é q u e n c e

l ' é m e r s i o n p r o g r e s s i v e d e c e s a n i m a u x , e n g é n é r a l à p a r t i r d u 7 è m e

j o u r .

L e s L i m n é e s t é m o i n s o u s o u m i s e s à d e f a i b l e s c o n c e n t r a t i o n s

( 0 , 1 p p m ) o n t u n c o m p o r t e m e n t i d e n t i q u e à c e l u i d é c r i t p r é c é d e m -m e n t . P o u r d e s c o n c e n t r a t i o n s d e 1 p p m , l e s a n i m a u x p r é s e n t e n t u n e r é a c t i o n d e f u i t e a v e c é m e r s i o n d a n s les 4 à 8 h e u r e s q u i s u i v e n t le d é b u t d e l ' e x p é r i e n c e . P o u r d e s c o n c e n t r a t i o n s d e 1 0 p p m , l e s d é p l a c e m e n t s s o n t l i m i t é s (5 à 1 0 m i n u t e s ) , p u i s i l s e p r o d u i t u n e r é t r a c t i o n d u p i e d a v e c s é c r é t i o n d u m u c u s e t r e j e t d ' u n e p a r t i e

d e s f è c e s ( g é n é r a l e m e n t d e p u i s l ' e s t o m a c ) .

L a m o r t d e l ' a n i m a l e s t s i g n é e p a r le r e l â c h e m e n t d u p i e d e t

l ' i m m o b i l i t é d u M o l l u s q u e l o r s d ' u n e s t i m u l a t i o n ( p i q û r e , e t c . ) .


2 . — Les Limnées soumises au cuivre.

2 .1 . — E T U D E HISTOCHIMIOUE DES TÉMOINS.

— Non-infestés.

L e p i g m e n t h é m o c y a n i q u e e s t u n e c u p r o p r o t é i n e e t l e s t e s t s

h i s t o c h i m i q u e s r é v è l e n t l a p r é s e n c e d e g r a n u l a t i o n s n o i r â t r e s d e

0,25 m i c r o n d e d i a m è t r e d a n s t o u s l e s s i n u s e t v a i s s e a u x .

L ' e x a m e n d e s s u j e t s n ' a p a s m o n t r é l a p r é s e n c e d e g r a n u l e s d a n s

la g l a n d e d i g e s t i v e o u d a n s l e s c e l l u l e s d e l ' i n t e s t i n m ê m e l o r s q u e

c e d e r n i e r c o n t i e n t d e s v é g é t a u x .

— Infestés.

E n p l u s d e s c a r a c t é r i s t i q u e s p r é c é d e n t e s , s e u l s l e s p h a r y n x d e s

r é d i e s c o n t i e n n e n t d e s g r a n u l e s .

2.2. — H I S T O C H I M I E ET HISTOPATHOLOGIE DES MOLLUSQUES EXPÉRIMENTÉS.

— Non-infestés.

C h e z les a n i m a u x s o u m i s a u t o x i q u e , l e s r é g i o n s p é r i t e n t a c u l a i r e s

s o n t a u s s i t o u c h é e s e n p r e m i e r e t p r é s e n t e n t u n e é v o l u t i o n i d e n t i q u e

à ce l l e d é c r i t e p o u r le f e r . N o t o n s d e p l u s la d i l a t a t i o n d e s v a i s -

s e a u x d e c e s r é g i o n s a v e c d e s t r u c t i o n d e s c e l l u l e s b o r d a n t e s ; c e s

d o n n é e s c o n f i r m e n t c e l l e s c i t é e s c h e z Busycon canaliculatum p a r

B E T Z E R e t Y E V I C H (1975) . L ' h y p e r p l a s i e s e c o n d a i r e f r a p p e l ' é p i t h é l i u m p é d i e u x d e m ê m e q u e c e l u i d e s e s g l a n d e s ( p h o t o 9 ) .

L e c u i v r e s ' a c c u m u l e a u t o u r d e s a c i n i d e l a g l a n d e d i g e s t i v e s o u s

f o r m e d e g r a n u l e s d a n s le c y t o p l a s m e d e s a m i b o c y t e s ; c e r t a i n s

g r a n u l e s a t t e i g n e n t 3 m i c r o n s d e d i a m è t r e ( p h o t o 10). L ' é p i t h é l i u m

d e s a c i n i p r é s e n t e a u s s i u n e n é c r o s e d e s e s d i v e r s é l é m e n t s c e l l u l a i r e s ,

a c c o m p a g n é e d ' u n e h y p e r p l a s i e r é a c t i o n n e l l e r e c o n n a i s a b l e à l ' a s p e c t

o v o ï d e e t r é g u l i e r d e s n o y a u x d e s c e l l u l e s d i g e s t i v e s ( p h o t o 11). A

p a r t i r d e l a 1 8 è m e h e u r e , n o u s r e t r o u v o n s le p a s s a g e d e s g r a n u l e s

o r a n g e o p h i l e s f o r m é s p a r l e s c e l l u l e s d i g e s t i v e s e t l e u r é l i m i n a t i o n

d a n s la l u m i è r e d e s a c i n i ( p h o t o 12 e t fig. 1 B ) .

L e s p h é n o m è n e s c i t é s p r é c é d e m m e n t f r a p p e n t a u s s i l e s c e l l u l e s

i n t e s t i n a l e s , l es p a r t i e s l e s p l u s d i s t a l e s d e s c o n d u i t s g é n i t a u x .

C h e z les M o l l u s q u e s m i s e n d é c h a r g e à p a r t i r d e 12 h e u r e s d ' e x p é -

r i e n c e , o n o b s e r v e d e s p y c n o s e s f r a p p a n t d e f a ç o n i r r é g u l i è r e l e s

c e l l u l e s d e l a g l a n d e d i g e s t i v e m a i s il n ' e x i s t e p a s d ' h y p e r p l a s i e

p a r a l l è l e . L a v a c u o l i s a t i o n c e l l u l a i r e a p p a r a î t à p a r t i r d e 54 h e u r e s

d ' e x p é r i e n c e .

— Animaux infestés.

Ces M o l l u s q u e s s o u m i s a u t o x i q u e p r é s e n t e n t l es m ê m e s c a r a c t é -

r i s t i q u e s q u e p r é c é d e m m e n t . L a v a c u o l i s a t i o n c e l l u l a i r e a p p a r a î t


INTERPRETATION ET D ISCUSSION

L e s t o x i q u e s o n t d e s v o i e s d e p é n é t r a t i o n d i f f é r e n t e s s e l o n l e u r s

c a r a c t é r i s t i q u e s p h y s i c o - c h i m i q u e s . L ' u t i l i s a t i o n d e t e s t s h i s t o c h i -

m i q u e s , d ' a p r è s H E N E I N E e t co l l . (1969) , e s t i n s u f f i s a n t e p o u r p e r m e t -

t r e u n e é t u d e d e l a c i n é t i q u e d ' u n m é t a l . N o s r é s u l t a t s p e r m e t t e n t

c e p e n d a n t d e p r é c i s e r c e r t a i n s p o i n t s :

— P o u r le f e r .

• C h e z la L i m n é e p l a c é e d a n s s o n h a b i t a t n a t u r e l , il e x i s t e 2 v o i e s

d e p é n é t r a t i o n d u f e r à l ' i n t é r i e u r d e l ' o r g a n i s m e . L a 1è r e v o i e u t i l i s e

l e s r é g i o n s p é r i t e n t a c u l a i r e s ; l ' e x i s t e n c e d e c e t t e v o i e e s t j u s t i f i é e

p a r l a p r é s e n c e d e g r a n u l a t i o n s f e r r i q u e s d a n s c e s r é g i o n s c h e z

les t é m o i n s m é s o f e r r i q u e s . L a 2 è m e v o i e c o n c e r n e u n p a s s a g e à

t r a v e r s les c e l l u l e s i n t e s t i n a l e s l o r s q u e l ' a n i m a l s e n o u r r i t .

• C h e z l a L i m n é e s o u m i s e a u t o x i q u e , s e u l e i n t e r v i e n t l a 1è r e

v o i e , p u i s q u e l e s a n i m a u x r e j e t t e n t l e u r s f èce s e t n e s e n o u r r i s s e n t

p l u s . D e p l u s les r é g i o n s p é r i t e n t a c u l a i r e s s o n t l e s p r e m i è r e s t o u c h é e s

l o r s d e l ' e x p o s i t i o n d e l ' a n i m a l a u t o x i q u e .

— P o u r le c u i v r e , l a s e u l e v o i e d e t r a n s f e r t d u m i l i e u à l a L i m n é e

e s t r e p r é s e n t é e p a r l e s r é g i o n s p é r i t e n t a c u l a i r e s . N o u s n ' a v o n s p a s

r e t r o u v é d e g r a n u l a t i o n s d a n s l e s c e l l u l e s d i g e s t i v e s d e t o u s l e s té -

m o i n s c o n t e n a n t p o u r t a n t d e s v é g é t a u x d a n s l ' i n t e s t i n .

d è s 24 h e u r e s d ' e x p é r i e n c e ( a u l i e u d e 48 h e u r e s c h e z l e s a n i m a u x

n o n - i n f e s t e s ) .

2.3. — DOSAGES QUANTITATIFS.

L e s d o n n é e s p r o v e n a n t d e l ' a n a l y s e s p e c t r o p h o t o m é t r i q u e s o n t

r a s s e m b l é e s d a n s l a f i g u r e I I B .

C h e z l e s M o l l u s q u e s n o n - i n f e s t é s e n c h a r g e , l e s c o n c e n t r a t i o n s

d e c u i v r e i n t r a - o r g a n i q u e s ' é l è v e n t b r u s q u e m e n t e n t r e 18 e t 24 h e u r e s

d e s é j o u r d a n s l e b a i n . L e s a n i m a u x i n f e s t é s p r é s e n t e n t u n e c h a r g e

n e t t e m e n t p l u s r a p i d e e n c u i v r e .

2.4. — D O N N É E S ÉTHOLOGIQUES COMPLÉMENTAIRES.

L e s r é a c t i o n s d e s a n i m a u x e n p r é s e n c e d e c u i v r e r a p p e l l e n t c e l l e s

d é c r i t e s p r é c é d e m m e n t . A v e c 0,1 p p m d e c u i v r e , 50 % d e s M o l l u s q u e s

s e r e n c o n t r e n t e n z o n e é m e r g é e a u b o u t d e 12 h e u r e s d ' e x p é r i e n c e

e t l a t o t a l i t é a u b o u t d e 24 h e u r e s .

L e s L i m n é e s , e n p r é s e n c e d e 1 p p m d e c u i v r e , p r é s e n t e n t u n e

r é t r a c t i o n i m m é d i a t e d u p i e d a v e c s é c r é t i o n a b o n d a n t e d e m u c u s e t

r e j e t d e f è c e s .


L e s d o n n é e s r e c u e i l l i e s à l ' a i d e d e s t e s t s h i s t o c h i m i q u e s e t d e

l ' h i s t o p a t h o l o g i e p e r m e t t e n t d e d é d u i r e q u e c h e z l a L i m n é e t é m o i n

o u e x p é r i m e n t é e :

— P o u r le fe r , c e m é t a l p r o v e n a n t d e l ' u n e o u l ' a u t r e v o i e d e

p a s s a g e e s t v é h i c u l é d a n s les v a i s s e a u x : cec i s ' a p p u i e s u r l ' e x i s t e n c e

d e g r a n u l a t i o n s f e r r i q u e s d a n s l ' h é m o l y m p h e c h e z l e s t é m o i n s m é -

s o f e r r i q u e s e t l e s M o l l u s q u e s e x p é r i m e n t é s . C e s g r a n u l a t i o n s fer-

r i q u e s — i n d é p e n d a n t e s d e s a m i b o c y t e s — s o n t c o n c e n t r é e s d a n s le

c y t o p l a s m e d e s « c e l l u l e s à c y t o p l a s m e d e n s e » s o u s f o r m e d e g r a n u l e s

d e s t o c k a g e , p u i s e x c r é t é e s v e r s l ' e x t é r i e u r . U n e p a r t i e d e c e f e r

e s t a u s s i e x c r é t é e p a r l e s œ u f s d e l ' a n i m a l , c e q u i c o n f i r m e les d o n -

n é e s d e JOHNSON e t co l l . (1962) e t d e H E N E I N E e t c o l l . (1969) .

— P o u r le c u i v r e , c e t é l é m e n t e s t p r i s e n c h a r g e p a r l es a m i b o c y t e s

e t é l i m i n é d a n s les g r a n u l e s f o r m é s p a r l e s c e l l u l e s d i g e s t i v e s :

c e c i s ' a p p u i e s u r l e s r é s u l t a t s r e g r o u p é s d a n s l a f i g u r e I B . N o u s

n ' a v o n s p a s n o t é la p r é s e n c e d e c e m é t a l a u n i v e a u d e s o v o c y t e s

d u M o l l u s q u e .

L e s d o n n é e s q u a n t i t a t i v e s r e c u e i l l i e s p a r l ' a n a l y s e c h i m i q u e m o n -

t r e n t q u e le f e r p é n é t r e r a i t d a n s l ' o r g a n i s m e p a r u n m é c a n i s m e p h y -

s i q u e d ' a b s o r p t i o n . L e s r é s u l t a t s r e c u e i l l i s a v e c l e s M o l l u s q u e s n o n -

i n f e s t é s s o u m i s a u c u i v r e p e r m e t t e n t d ' é m e t t r e l ' h y p o t h è s e q u e les

i n d i v i d u s p r é s e n t e r a i e n t u n e r é s i s t a n c e a u t o x i q u e d u r a n t 18 h e u r e s ,

p u i s l ' a n i m a l s e c h a r g e r a i t d è s la f in d e c e t t e p é r i o d e ; l es p e r t u r -

b a t i o n s p r o v o q u é e s p a r le p a r a s i t i s m e c h e z l e s M o l l u s q u e s e n t r a î -

n e r a i e n t u n p e r t e d e c e t t e r é s i s t a n c e , d ' o ù u n e c h a r g e n e t t e m e n t

p l u s r a p i d e .

L e s e f f e t s p a t h o l o g i q u e s d e c e s 2 i o n s v a r i e n t s e l o n les a u t e u r s .

M a i s d a n s les 2 c a s , l ' o r g a n i s m e d u M o l l u s q u e r é a g i t :

— P o u r u n e n é c r o s e c e l l u l a i r e f r a p p a n t d e f a ç o n h é t é r o g è n e les

r é g i o n s p é r i t e n t a c u l a i r e s , l a s o l e p é d i e u s e , la g l a n d e d i g e s t i v e .

— P a r u n e h y p e r p l a s i e p a r a l l è l e à c e t t e n é c r o s e : e l le e s t n e t t e

c h e z l e s s u j e t s s o u m i s a u t o x i q u e p e n d a n t 4 à 14 j o u r s e t t o u c h e a u s s i

b i e n le p i e d q u e l a g l a n d e d i g e s t i v e .

C e s r é s u l t a t s i n d i q u e n t q u e l ' h y p e r p l a s i e e s t u n p h é n o m è n e r é a c t i o n -

n e l n o r m a l e t s u g g è r e n t q u e la L i m n é e s o u m i s e a i n s i à u n e l é g è r e

a u g m e n t a t i o n d e l a c o n c e n t r a t i o n d ' u n é l é m e n t p e u t s ' a d a p t e r .

L a v a c u o l i s a t i o n c e l l u l a i r e o b s e r v é e d a n s c e r t a i n s t i s s u s e s t à m e t t r e

e n r e l a t i o n a v e c l a m o r t d e l ' a n i m a l . L e s r é s u l t a t s m o n t r e n t q u e d a n s

le c a s d e s 2 m é t a u x , l e s L i m n é e s i n f e s t é e s p r é s e n t e n t u n e s e n s i b i l i t é

p l u s g r a n d e a u t o x i q u e q u e les n o n - i n f e s t é e s , c e q u i c o n f i r m e les

d o n n é e s d e P A U L I N I e t PELLEGRINO (1957) c h e z Australorbis glabratus.


TRAVAUX CITÉS

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