thierry orsière, ph d
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Mise en place d’un test de mutation génique pour évaluer la participation de l’environnement à la
survenue de leucémies aigües
Thierry Orsière, Ph D
Institut de Biodiversité et d’Ecologie (IMBE UMR CNRS 7263)Equipe Biogénotoxicologie, Santé Humaine et Environnement
Identification des dangers ↓
Définition des risques ↓
Politique de Prévention de la pollution
des environnements
Exposition de l’Homme aux cancérogènes d’origine naturelle
et anthropiques
Les cancérogènes génotoxiques agissent au niveau des noyaux
de nos cellules….
… et peuvent créerdes mutations de gènes : certaines de ces mutations sont susceptibles d’initier
un processus carcinogénique
Biogénotoxicologie, Santé Humaine et Environnement
BiogénotoxicologieEnvi
ronn
emen
tSa
nté
Hum
aine
Expositionsprofessionnelles
Particules Fines(urbaines, industrielles, trafic routier)
Quantification de lésions de l’ADN ou de mutations
géniques / chromosomiques sur les cellules de ses patientsHAP / Tabagisme
Risque de cancer ou de troubles de la fertilité
Bisphenol A
Leucémies aigües (projet)
Patients consultant pour troubles de la fertilité
Programme Européen
ANR
INERIS – Post-GRENELLE
ANSES
ADEME
DRTE-FP
DIRECCTE
ECCOREV
ARS-PACA / PRSE
NanoparticulesP
Antimutagènes
Equipe Biogénotoxicologie, Santé Humaine et Environnement (IMBE) : de nombreux outils validés
Ovocytes de sourisExposition in vitro au BPDE
Fibroblastes humains Exposition in vitro au
particules fines (PM 2.5)
Test de Mutation génique : Pig-A
Test du Micronoyau
Lymphocytes humains Expositions
professionnelles
Test des Comètes
Immuno-marquage 8-OHdG Immuno-marquage adduits BPDE
Non fumeurs FumeursSpermatozoïdes humains
Cellules épithéliales pulmonaires humaines (A549
Exposition in vitro aux nanoparticules d’argile
Non fumeurs FumeursSpermatozoïdes humains
Mise en place d’un test de mutation génique pour évaluer la participation de l’environnement à la survenue de leucémies aigües
Ce projet est le fruit d’échanges sur les préoccupations scientifiques et médicales entre :
Pr François EisingerPr Patrice Viens
Pr Alain BottaDr Thierry Orsière
Dr Aurélie Bonnefoy
Implication de la participation :- des expositions professionnelles- de l’environnement - de l’hérédité
sur la genèse de cancers
Développement d’outils de toxicologie génétique
applicables à la surveillance des expositions afin
de prévenir les cancers et/ou troubles de la reproduction
Proposition de tester la mutagénicité globale au moyen du test de mutation génique au locus Pig-A
(phosphatidylinositol glycan class A : Pig-A )
Mutations au locus Pig-A : synthèse bibliographique (~50 publications)
Principe Type Cellulaire
Méthodologie
Le gène Pig-A en Toxicologie génétique
D’après Daishiro Miura et al, Mutatio Research 2009
Accumulation et persistance d’érythrocytes Pig-A-
sur une période de 26 semaines (6 mois)
Rats administrés (IP) avec une dose unique de N-ethyl-N-nitrosourée (ENU)
8.9 mg/kg
35.6 mg/kg
142.4 mg/kg
Le gène Pig-A en Clinique
Hémoglobinurie Paroxystique Nocturne- Trouble hématopoïétique au niveau des cellules souches hématopoïétiques-Expansion de cellules Pig-A-
- Sensibilité anormale des GR Pig-A- à l’action lytique du complément : lyse des GR-Cellules HPN fréquemment retrouvées chez les patients atteints d’anémie aplasique, de syndromes myélodysplasiques, d’autres formes de dysfonctionnement de la moelle osseuse-Fréquence de cellules Pig-A- de l’ordre 0.001 – 0.3
http://www.pnhsource.com
Biosurveillance mutations Pig-A chez l’homme-Une seule étude-Suivi des effets de diverses chimiothérapies sur patients atteints de cancers différents-Nécessité de développer ce test sur des cohortes de sujets plus importantes et plus homogènes-Nécessité d’améliorer les critères méthodologiques (choix du type cellulaire, des protéines liées au GPI, du marquage du GPI, etc…)
V.N. Dobrovolsky et al, Environ. Mol. Mutagen. 2011
Définition de notre stratégie de mise au point du test
Choix des sujets et des types cellulaires analysés
Sujets sains Patients cancéreux
Vessie Lymphome Poumon Leucémie Aigu
Types Cellulaires
GR GR GR GR GR
GB GB GB GB -
Sujets sains Patients cancéreux
Vessie Lymphome Poumon Leucémie Aigue
Types Cellulaires
GR GR GR GR GR
GB GB GB GB -
Choix des protéines marquées et des anticorps:Marqueur cellulaire : GR : CD235a-Alexa 647
GB : CD15-Alexa 647 Protéines liées au GPI : CD55 et CD59 – Alexa 488Marqueur GPI : FLAER-Alexa 488
Partenariat avec plateforme de cytométrie en flux:Plateau FACS/Tri cellulaire – Charles Prevot (IR CNRS) - INSERM UMR_S 911
Premiers Résultats
ErythrocytesMarquage CD 235 (rouge) :
18%Marquage CD 59 (vert) :
20%Co-marquage CD 235 – CD 59 :
94%
Protocole en cours d’optimisation
Je vous remercie de votre intérêt…
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