chercheur de métaphases au chu de reims. organisation du laboratoire de cytogénétique et...

Chercheur de Métaphases au CHU de REIMS

Organisation du laboratoire de cytogénétique et génétique du CHU REIMS

Secteur constitutionnel , hématologique et fish (4,5 techniciennes)

En 2009: 600 caryo constit métaphasiques

/prométaphasiques 800 caryo hémato 1100 FISH hémato et constit

Secteur prénatal et tumeur (1,8 techniciennes)

En 2009 : 900 caryo

Secteur BM (1,5 techniciennes + 1 ingénieur « puce CGH array »)

Évolution des caryotypes en 5 ans

hématologie FISH constitutionnel

2004 500 720 690

2009 800 1100 600

évolution 60% 53% 15%

Equipement et imagerie

Un chercheur de métaphase + chargeur 80 lames

4 microscopes « captures manuelles » + logiciels d’analyse d’images Ikaros® et Isis®

2 microscopes lecture de FISH « captures manuelles »équipé d’une platine de relocalisation de mitose

Utilisation du Métafer®

Tous les caryo hémato bandes G et R

80% des lames de FISH (métaphasique et interphasique), sondes commerciales, bac.

Peu de caryo constitutionnels…

Station metafer® + chargeur 80 lames ( 2m10 en longueur x 80 cm en profondeur)

Temps de capture

Plateau de 8 lames en lumière blanche1) Recherche des mitoses obj x10 2) Choix des mitoses + autocapture à l’obj x603) Transfert des images

± 1h30 FISH métaphasique

De 10 min à 30 min / lame en fonction du nombre de mitoses voulu

FISH interphasique± 30 min / lame (pour une recherche min de 200 à 300 noyaux)

Entrées des dossiers

Paramètres de calibration et d’entraînements des lames

Création de programmes de recherches

Recherche obj x10 , détection des mitoses– Lames bandes G et R (classifiers hémato,

constit, LA ,etc…)

– Lames de FISH (dapi)

Autocapture obj x63 : relocalisation des mitoses– ≠ classifiers pour les mitoses très étalées (HRC)– Classifiers pour les différents types de

fluorochromes en FISH

Création de programmes de recherches

FISH interphasique (objx40)

– Types de cellules à détecter (lymphocytes , LCR ,cellules buccales )

– Sondes monolocus monocolore ou bicolore (break- appart)

– Sonde de fusion– Type de fluorochrome

Paramètres variant en FISH interphasique

Sensibilité (seuil de détection)Largeur des spots Limite d’espacement entre 2 spots d’une sonde bicolore (impliquant ou non une translocation ou une inversion)Nombre de champs à screenerPrise en compte ou non des noyaux avec 0 spot (double délétion)

MLL IGH

Clone 1

Clone 2

Clone 3

AVANTAGES

Moins de lecture au microscope et dégagement de temps souplesse d’organisation au microscope

Sensibilité et détection ++

Souplesse d’utilisation pour les confirmations de petits clones hématologiques ++

Possibilité de relocaliser facilement des mitoses Rendu plus rapide des caryo hémato « screenés » le jour même de la coloration

AVANTAGES

Utilisation du chargeur de lames la nuit notamment en FISH interphasique (30 min /lame)Choix de la zone de lecture notamment en FISH (plusieurs sondes sur une lame)Lecture « rapide » des M-FISHProgrammes adaptés aux ≠ sondes (sonde de fusion ,M-FISH , type de fluorochrome)Compte rendu d’analyse précis en FISH interphasique avec les ≠ clones hématoToutes les recherches sont stockées dans le disque dur

INCONVENIENTS

Plusieurs mois d’adaptation et de paramétrageNécessité de mettre à jour les logiciels de traitement d’image sur chaque poste d’analyseProximité de l’automate indispensable Qualité des étalements importante (étaleur)Huile +++Mitoses incomplètes en constitutionnel et prénatal ++

INCONVENIENTS

Difficulté d’interprétation pour certaines sondes Diagramme interphasique parfois assez fastidieux à corrigerFISH ou lumière blanche prévoir une organisation au sein du labo

conclusion

Après 2 ans d’expérience:

Devenu indispensable en cytogénétique hématologique et en FISH

A optimiser pour nos caryotypes constitutionnels et prénatals