validation de méthodes acides aminés portée b - .non-conformité renseignées si alarmes .

Validation de mthode : acides amins

Marie-Hlne Read, CHU de Caen

Nov 2014

Prambule

Accompagnement qualit

RAQ + AQ 1, 8 ETP /ple biologie

ACC j/mois -1 an

extension porte flexible dont 10 AA

Evaluation COFRAC

1re inspection biochimie +viro en mai 2013,

2 inspection oct 2014

Plan selon chapitres et paragraphe de la norme

Chapitre 5 = exigences techniques

Chapitre 4 = exigences relatives au management

5 Exigences techniques

5.1 Personnel

5.2 Locaux et conditions environnementales

5.3 Matriel de laboratoire

5.4 Procdures pr-analytiques

5.5 Procdures analytiques

5.6 Qualit des procdures analytiques

5.7 Procdures post-analytiques

5.8 Compte-rendu des rsultats

5.1 Personnel

Fiches de poste : secr/tech/biol/interne

Fiches dhabilitation : pr tous + pr rfrents

informatique/qualit/mtrologie

Preuves de la formation

Ex signatures sur fiche manip tuteur+ tech en formation

Questionnaires tech/biol/secr/internes

chromato /cas cliniques pour biologistes

(5 CAAS, 5CAOU, 5ACN)

Suivi habilitations : cadre/plannings validation

Suivi formations : traces formations internes et externes

Test interprtation chromatographie

Cas n Commentaires/conclusion Avis/paraphe

responsable CAAS N1

CAAS N2

CAAS N3

Hyperphnylalaninmie avec tyrosinmie basse chez NN de J7.

voque PCU dficit PAH. Conseiller test au Kuvan et

dosage bioptrines sang + urines.

Hyperglycinmie importante isole voque Hyperglycinmie

sans ctose. Demander nouveau prlvement avec LCR

pour calcul rapport glycine LCR/plasma

Augmentation des acides amins ramifis, prsence

dalloisoleucine voque leucinose. Contacter un mdecin

rfrent .

Ok signature

Ok signature

Nom/Prnom biol X Date :

But du test : conclure sur les tracs Thme : Acides amins

5.2 Locaux et conditions environnementales

Signaltique /scurit

locaux

Respecter conditions

dinstallation matriel ex centrifugeuses, Aminotac

Jol

Enceintes thermiques +

sondes tempratures

Non-conformit

renseignes si alarmes

5.4 Procdures pr-analytiques

Dfinir dlai/tempratures acceptables AA sang/urines/LCR :

Dans glace dlai < 6h, hors glace dlai

5.5 procdures analytiques

Formulaire SH FORM 43

1 ) dtailler la mthode/ractifs/programme HPLC

2) Lister tous les points critiques,

dtailler la matrise des risques

penser aux risques dinversion de tubes

dtailler critres de validation analytique

Logigramme validation analytique

Critres de validation analytique

Critre OK Observation

Standard dbut srie/std prcdent

Hauteur/Forme pics/sparation

Surface EI AEC ( +/- 20% ) < <

Temps de rtention Si pas OK modif table : Oui/Non

Concentrations AA std avant recal (entre 80 et 120

mol/l)

CIQ

Rsultats CIQ sur MVT

en vert ou jaune

Si toujours rouge aprs 2me prparation

( CIQ > 3 SD ) remplir FNC : n

Surface EI AEC sur CIQ (+/- 20%)

Echantillons

Surface EI AEC (+/- 20%)

Vrification position des vials

Envoi sur MVT/fin de jour

Remplir le tableau suivi des RT et surfaces des pics du

std AA

Spcificit analytique

SH FORM 43 par acide amin par matrice Commander AA purs (Sigma) pour vrifier SPECIFICITE ANALYTIQUE :

Ex de

Chromatogrammes

-blanc

-lAA pur en solution

aqueuse

-ltalon Sigma

-6 plasmas

-1 plasma surcharg

Tableau rcapitulant

TR et TRR/aa le plus

proche et/ou EI

avec moy/SD/CV

SH FORM 43 - suite

2) Dfinir normes/ge, seuil dcisionnel, limites acceptables (CV rpt et FI) pour conclure si conformit pour chaque AA

Donnes limites acceptables C.RICOS sur http://www.westgard.com

Biological variation database, and quality specifications for imprecision, bias and total error (desirable and minimum). Carmen Rics

ex desirable specification pour alanine

I% = CV limite FI = 7,4 %

et B% = biais limite EEQ/pairs = 14,4 %

3) tude rptabilit et fidlit intermdiaire (FI) sur pool de plasma ou CIQ (pour tous les AA)

Rpt : n= 8 ou 10

FI : sur 2 niveaux n=30 (ou moins)

Justesse : si CIQ, calculer biais/cible CIQ

Conclure chaque fois / limites (RICOS ou autre )

Etude de rptabilit ralise sur n=10

*CV limite calcul en appliquant la formule CV rptabilit=0,75 du CV reproductibilit daprs A. Vassault (Ann BiolClin, 1999)

- N=30 - Dure suffisamment longue pour tester la colonne des ges diffrents - NB : CV RICOS trs variables dun AA lautre

Echantillons Nombre

(N)

Moyenne

mol/l

Ecart-

type CV (%)

CV (%)

fournisseur

Inter (total)

CV (%) limite

(RICOS) Conclusion

Clinchek

niveau 1 30 167,09 6,99 4,18 - 5,9 conforme

SKML

30 511,67 22,05 4,31 - 5,9 conforme

Echantillons Nombre

(N) Moyenne

Ecart-

type CV (%)

CV (%)

fournisseur CV (%) limite * Conclusion

Clinchek

niveau 1 10 158,12 2,26 1,43 - 4,4 conforme

Clinchek

niveau 2 10 602,40 9,61 1,60 - 4,4 conforme

SKML

10 534,88 8,19 1,53 - 4,4 conforme

Ex prsentation rptabilit

Ex prsentation fidlit intermdiaire =reproductibilit

SH FORM 43- suite

exactitude : contrles externes ERNDIM 16 EEQ/2 ans, calcul biais/cible pairs/limite RICOS

Justifier si biais > limite : acceptable ou anomalie ponctuelle ou non ?

Incertitude U : daprs GTA-14 CIQ/EEQ, calcul 2 niveaux conclure pertinence calcul au niveau du ou des seuils dcisionnels

Linarit teste entre 5 et 2000 mol/l (tous aa)

Contamination vrifie sur 1 blanc aprs mlange 2000 mol/L

Au total

20 chantillons de rptabilit + 8 chantillons linarit +1chantillon contamination

+1 blanc et 25 chantillons spcificit analytique soit 55 runs pour la validation de 25 AA

+ 2 CIQ/ srie pour la fidlit intermdiaire

SH FORM 43- suite

stabilit ractifs : priodes dutilisation des diffrents ractifs sur la carte de contrle des CIQ

Tampons

Ninhydrine

Ac sulfosal.

Colonne

Dates

SH FORM 43- suite

ALA GLY EI=AEC

TR CV% 0,52% 0.56% 0,06%

TRR/ALA CV% - 0.82% 0,56%

Surface pic CV% 6,26% 6.37% 7,19%

Rapport surface

pic/surface EI CV%

3.79% 3.26% -

Robustesse en dveloppement, tude de limpact de diffrents facteurs (conc phase mobile, ge colonne.)

Ou, si mthode en place, tude de la reproductibilit des temps de rtention

(TR et TRR) et des surfaces des pics du calibrant au cours dun temps suffisant

pour prendre en compte les facteurs ge de la colonne et oprateur.

Et conclure !

bonne stabilit des temps de rtention et du signal rapport au signal de

ltalon interne

La robustesse de la mthode est dmontre et est suivie rgulirement.

Procdures analytiques suite

Etudes complmentaires

Stabilit pranalytique

Centrifugation

Hmolyse

Interfrences

Stabilit bord

Ajouter tudes locales si besoin mais prfrer tudes

nationales.

5.6 assurer la qualit des procdures

analytiques

Suivi TR et surface de ltalon pour chaque AA

Suivi CIQ: CV mensuels et annuels

NB justifier choix SD pour acceptation srie cf GTA 06

Suivi EEQ/ biais RICOS : Recalcul annuel de lincertitude

non-conformit et action corrective si anomalie

Divers ++++

Mtrologie

Certificats talonnage pipettes,

Balance (masses talons, incertitude balance, limite peses)

Centrifugeuses

Fiches de pese de produit

Suivi lots de ractifs pour audit de traabilit

Qualification informatique liaison si transfert donnnes

5.7 procdures post-analytiques

5.8 compte-rendu des rsultats

Validation biologique

Fiches techniques validation,

formation la validation,

codes pour commentaires interprtation formaliser

Suivi dlai rendu rsultats : 1 enqute par an

4 Exigences relatives au management

4.1 organisation et management

4.2 systme de management de la qualit

4.3 matrise des documents

4.4 revue de contrats

4.5 analyses transmises des sous traitants

4.6 services externes et approvisionnement

4.7 Prestations de conseil

4.8 traitement des rclamations

4.9 identification et matrise des non-conformits

4.10 Actions correctives

4.11 Actions prventives

4.12 Amlioration continue

4.13 enregistrements qualit et enregistr. techniques

4.14 audits internes

4.15 revue de direction

4.4 revue de contrats

4.5 analyses transmises des sous traitants

4.6 services externes et approvisionnement

Contrats avec centres hospitaliers de la rgion

+ Convention de preuve si envoi rsultats par fax

Contrats avec sous traitants (centres de rfre