validation de méthodes acides aminés portée b - .non-conformité renseignées si alarmes .

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  • Validation de mthode : acides amins

    Marie-Hlne Read, CHU de Caen

    Nov 2014

  • Prambule

    Accompagnement qualit

    RAQ + AQ 1, 8 ETP /ple biologie

    ACC j/mois -1 an

    extension porte flexible dont 10 AA

    Evaluation COFRAC

    1re inspection biochimie +viro en mai 2013,

    2 inspection oct 2014

    Plan selon chapitres et paragraphe de la norme

    Chapitre 5 = exigences techniques

    Chapitre 4 = exigences relatives au management

  • 5 Exigences techniques

    5.1 Personnel

    5.2 Locaux et conditions environnementales

    5.3 Matriel de laboratoire

    5.4 Procdures pr-analytiques

    5.5 Procdures analytiques

    5.6 Qualit des procdures analytiques

    5.7 Procdures post-analytiques

    5.8 Compte-rendu des rsultats

  • 5.1 Personnel

    Fiches de poste : secr/tech/biol/interne

    Fiches dhabilitation : pr tous + pr rfrents

    informatique/qualit/mtrologie

    Preuves de la formation

    Ex signatures sur fiche manip tuteur+ tech en formation

    Questionnaires tech/biol/secr/internes

    chromato /cas cliniques pour biologistes

    (5 CAAS, 5CAOU, 5ACN)

    Suivi habilitations : cadre/plannings validation

    Suivi formations : traces formations internes et externes

  • Test interprtation chromatographie

    Cas n Commentaires/conclusion Avis/paraphe

    responsable CAAS N1

    CAAS N2

    CAAS N3

    Hyperphnylalaninmie avec tyrosinmie basse chez NN de J7.

    voque PCU dficit PAH. Conseiller test au Kuvan et

    dosage bioptrines sang + urines.

    Hyperglycinmie importante isole voque Hyperglycinmie

    sans ctose. Demander nouveau prlvement avec LCR

    pour calcul rapport glycine LCR/plasma

    Augmentation des acides amins ramifis, prsence

    dalloisoleucine voque leucinose. Contacter un mdecin

    rfrent .

    Ok signature

    Ok signature

    Nom/Prnom biol X Date :

    But du test : conclure sur les tracs Thme : Acides amins

  • 5.2 Locaux et conditions environnementales

    Signaltique /scurit

    locaux

    Respecter conditions

    dinstallation matriel ex centrifugeuses, Aminotac

    Jol

    Enceintes thermiques +

    sondes tempratures

    Non-conformit

    renseignes si alarmes

  • 5.4 Procdures pr-analytiques

    Dfinir dlai/tempratures acceptables AA sang/urines/LCR :

    Dans glace dlai < 6h, hors glace dlai

  • 5.5 procdures analytiques

    Formulaire SH FORM 43

    1 ) dtailler la mthode/ractifs/programme HPLC

    2) Lister tous les points critiques,

    dtailler la matrise des risques

    penser aux risques dinversion de tubes

    dtailler critres de validation analytique

  • Logigramme validation analytique

  • Critres de validation analytique

    Critre OK Observation

    Standard dbut srie/std prcdent

    Hauteur/Forme pics/sparation

    Surface EI AEC ( +/- 20% ) < <

    Temps de rtention Si pas OK modif table : Oui/Non

    Concentrations AA std avant recal (entre 80 et 120

    mol/l)

    CIQ

    Rsultats CIQ sur MVT

    en vert ou jaune

    Si toujours rouge aprs 2me prparation

    ( CIQ > 3 SD ) remplir FNC : n

    Surface EI AEC sur CIQ (+/- 20%)

    Echantillons

    Surface EI AEC (+/- 20%)

    Vrification position des vials

    Envoi sur MVT/fin de jour

    Remplir le tableau suivi des RT et surfaces des pics du

    std AA

  • Spcificit analytique

    SH FORM 43 par acide amin par matrice Commander AA purs (Sigma) pour vrifier SPECIFICITE ANALYTIQUE :

    Ex de

    Chromatogrammes

    -blanc

    -lAA pur en solution

    aqueuse

    -ltalon Sigma

    -6 plasmas

    -1 plasma surcharg

    Tableau rcapitulant

    TR et TRR/aa le plus

    proche et/ou EI

    avec moy/SD/CV

  • SH FORM 43 - suite

    2) Dfinir normes/ge, seuil dcisionnel, limites acceptables (CV rpt et FI) pour conclure si conformit pour chaque AA

    Donnes limites acceptables C.RICOS sur http://www.westgard.com

    Biological variation database, and quality specifications for imprecision, bias and total error (desirable and minimum). Carmen Rics

    ex desirable specification pour alanine

    I% = CV limite FI = 7,4 %

    et B% = biais limite EEQ/pairs = 14,4 %

    3) tude rptabilit et fidlit intermdiaire (FI) sur pool de plasma ou CIQ (pour tous les AA)

    Rpt : n= 8 ou 10

    FI : sur 2 niveaux n=30 (ou moins)

    Justesse : si CIQ, calculer biais/cible CIQ

    Conclure chaque fois / limites (RICOS ou autre )

  • Etude de rptabilit ralise sur n=10

    *CV limite calcul en appliquant la formule CV rptabilit=0,75 du CV reproductibilit daprs A. Vassault (Ann BiolClin, 1999)

    - N=30 - Dure suffisamment longue pour tester la colonne des ges diffrents - NB : CV RICOS trs variables dun AA lautre

    Echantillons Nombre

    (N)

    Moyenne

    mol/l

    Ecart-

    type CV (%)

    CV (%)

    fournisseur

    Inter (total)

    CV (%) limite

    (RICOS) Conclusion

    Clinchek

    niveau 1 30 167,09 6,99 4,18 - 5,9 conforme

    SKML

    30 511,67 22,05 4,31 - 5,9 conforme

    Echantillons Nombre

    (N) Moyenne

    Ecart-

    type CV (%)

    CV (%)

    fournisseur CV (%) limite * Conclusion

    Clinchek

    niveau 1 10 158,12 2,26 1,43 - 4,4 conforme

    Clinchek

    niveau 2 10 602,40 9,61 1,60 - 4,4 conforme

    SKML

    10 534,88 8,19 1,53 - 4,4 conforme

    Ex prsentation rptabilit

    Ex prsentation fidlit intermdiaire =reproductibilit

  • SH FORM 43- suite

    exactitude : contrles externes ERNDIM 16 EEQ/2 ans, calcul biais/cible pairs/limite RICOS

    Justifier si biais > limite : acceptable ou anomalie ponctuelle ou non ?

    Incertitude U : daprs GTA-14 CIQ/EEQ, calcul 2 niveaux conclure pertinence calcul au niveau du ou des seuils dcisionnels

    Linarit teste entre 5 et 2000 mol/l (tous aa)

    Contamination vrifie sur 1 blanc aprs mlange 2000 mol/L

    Au total

    20 chantillons de rptabilit + 8 chantillons linarit +1chantillon contamination

    +1 blanc et 25 chantillons spcificit analytique soit 55 runs pour la validation de 25 AA

    + 2 CIQ/ srie pour la fidlit intermdiaire

  • SH FORM 43- suite

    stabilit ractifs : priodes dutilisation des diffrents ractifs sur la carte de contrle des CIQ

    Tampons

    Ninhydrine

    Ac sulfosal.

    Colonne

    Dates

  • SH FORM 43- suite

    ALA GLY EI=AEC

    TR CV% 0,52% 0.56% 0,06%

    TRR/ALA CV% - 0.82% 0,56%

    Surface pic CV% 6,26% 6.37% 7,19%

    Rapport surface

    pic/surface EI CV%

    3.79% 3.26% -

    Robustesse en dveloppement, tude de limpact de diffrents facteurs (conc phase mobile, ge colonne.)

    Ou, si mthode en place, tude de la reproductibilit des temps de rtention

    (TR et TRR) et des surfaces des pics du calibrant au cours dun temps suffisant

    pour prendre en compte les facteurs ge de la colonne et oprateur.

    Et conclure !

    bonne stabilit des temps de rtention et du signal rapport au signal de

    ltalon interne

    La robustesse de la mthode est dmontre et est suivie rgulirement.

  • Procdures analytiques suite

    Etudes complmentaires

    Stabilit pranalytique

    Centrifugation

    Hmolyse

    Interfrences

    Stabilit bord

    Ajouter tudes locales si besoin mais prfrer tudes

    nationales.

  • 5.6 assurer la qualit des procdures

    analytiques

    Suivi TR et surface de ltalon pour chaque AA

    Suivi CIQ: CV mensuels et annuels

    NB justifier choix SD pour acceptation srie cf GTA 06

    Suivi EEQ/ biais RICOS : Recalcul annuel de lincertitude

    non-conformit et action corrective si anomalie

  • Divers ++++

    Mtrologie

    Certificats talonnage pipettes,

    Balance (masses talons, incertitude balance, limite peses)

    Centrifugeuses

    Fiches de pese de produit

    Suivi lots de ractifs pour audit de traabilit

    Qualification informatique liaison si transfert donnnes

  • 5.7 procdures post-analytiques

    5.8 compte-rendu des rsultats

    Validation biologique

    Fiches techniques validation,

    formation la validation,

    codes pour commentaires interprtation formaliser

    Suivi dlai rendu rsultats : 1 enqute par an

  • 4 Exigences relatives au management

    4.1 organisation et management

    4.2 systme de management de la qualit

    4.3 matrise des documents

    4.4 revue de contrats

    4.5 analyses transmises des sous traitants

    4.6 services externes et approvisionnement

    4.7 Prestations de conseil

    4.8 traitement des rclamations

    4.9 identification et matrise des non-conformits

    4.10 Actions correctives

    4.11 Actions prventives

    4.12 Amlioration continue

    4.13 enregistrements qualit et enregistr. techniques

    4.14 audits internes

    4.15 revue de direction

  • 4.4 revue de contrats

    4.5 analyses transmises des sous traitants

    4.6 services externes et approvisionnement

    Contrats avec centres hospitaliers de la rgion

    + Convention de preuve si envoi rsultats par fax

    Contrats avec sous traitants (centres de rfre

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