ufr sciences medicales these s

REPUBLIQUE DE COTE D'IVOIREUNION- DISCIPLINE -TRA YAIL

M1N1STERE DEL'ENSEIGNEMENT SUPERIEURET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

UFR SCIENCES MEDICALES

THESE Année : 2006-2007

Pour l'obtention duN° .. ,(A .u .Ô. S

DOCTORAT EN MEDECINE (DIPLOME D'ETAT)

MISE AU POINT D'UNE TECHNIQUE DE PRODUCTIO.N D'ANTICORPS POLYCLONAUX

ANTI-ERYTHROCYTAIRES DANS LE SYSTEME ABO

Présentée et soutenue publiquement le 08 Février 2007

Par

YAPI YAPI AURELIEN Né le 03 Janvier 1974 à Fiassé s/p de Yakassé-Attobrou (RCI)

COMPOSITION DU JURY:

Président Monsieur le Professeur KODO MICHEL

Directeur de Thèse Monsieur le Professeur Agrégé SEKA SEKA JOSEPH

Co-Directeur Monsieur le Professeur SANOGO IBRAHIMA

Assesseur , Monsieur le Professeur Agrégé DJANHAN Y AO

UNIVERSITE DE COCODYU.F.R. DES SCIENCES MEDICALES

LISTE DU PERSONNEL ENSEIGNANT PAR DEPARTEMENT 2006-2007

DOYENS HONORAIRES

"Pierre HUARD - Pierre PENE - Edmond BERTRAND - ALLANGBA Koffi Théodore - Antoine YANGNI-ANGATE - *MANLAN Kassi Léopold Eloi -

DJEDJE André-Théodore - KADIO Auguste Dieudonné - N'DRI-YOMAN Aya Thérèse

PROFESSEURS HONORAIRES

*ASSALE N'Dri -ASSI Adou Jérôme - *ATTIA Yao Roger - *AYE Hypolite - BADOUAL Jean - BAMBA Méma - BEDA Yao Bernard - BOHOUSSOU Kouadio Marcellin - BONDURAND Alain - BONHOMME Jean - BONNET DE-PAILLERETS François - *Jacques BOUCHER - Auguste BOURGEADE - BOURY Georges - BOUTROS-TONY Ferdinand - Michel BOUVRY - BRETTES Jean- Philippe - BUREAU Jean-Paul -*CABANNES Raymond - CLERC Michel - *COFFI Dick Sylvain - CORNET Lucien -COULIBALY Ouezzin André -COULIBALY Nagbélé - COWPPLI-BONY Kwassy Kwadjo Philippe Alphonse - *DAGO Akribi Augustin - *DANON Gisèle - DJIBO William - DJARRA Samba - Pierre DELORMAS - DOUCET Jean - Marcel DUCHASSIN - EHOUMAN Armand Léon Guillaume - EKRA Frédéric François Alain - Paul ESSOR Nome/ - ETTE Ambrois: - ETTE Marcel - "Dougoutiki F AD/GA - GA LAIS Hervé - *GARANGO - GIORDANO Christian - GUESSENND Kouadio Georges - HAFFNER Georges - Max HAZERA - HEROIN Pierre - KANGAH Diékouadio - *KEBE Memel Jean-Baptiste - *KEITA Cheikh Amadou Tidiane - Pierre KERFELLEQUE - "Ferdinand Sié KETEKOU - *KOFFI N'Guessan Marcel - KONE Nouhou - *KOUASSI Manassé - LANCHO - LEBRAS Michel - *LEGUYADER Armand - LONSDORFER Jean - LOUBIERE Robert - METRAS Dominique - MICHOU Michel - MORLIER Georgette - N'DRI Koffi Dominique - ODI Assamoi Marc - *OUATTARA Kouamé - POTOK.J Bernard - RAIN Jean-Didier - RENAUD Robert - RITT ER Jean - ROUX Constant Antoine - SANGARE Souleymane SANGARET Malick Auguste - SANTIN! Jean-Jacques - SERRE Jean-Jacques SOUBEYRAND Jacques - VEDRENNE Claude - VILASCO Jacob - WAOTA Coulibaly Alexandre - WELFFENS-EKRA Jeanne Marie Christiane - *YAO-DJE Christophe.

*Décédé

DOYEN

ASSESSEURS :

! -ANATOMIE-ANATOMIE PATHOLOGIQUE - HISTO-EMBRYO-CYTOGENETIQUE

PROFESSEURS TITULAIRES

2.., .)

4 5

DIOMANDE Mohénou Isidore Jean-MarieHONDE MichelGNANAZAN BI N'Guessan GabrielKassanyou SALAMI KOKOUA Alexandre

Anatomie PathologiquAnatomie PathologiqueAnatomie-UrologieAnatomie-ChirurgieAnatomie-Chirurgie

CHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de Cocody et TvlleCHU de CocodyCHU de Treichville

MAITRES DE CONFEREJ\CES AGREGES

.., .)

..j.

)

D'HORPOCK Ahoua François de SaleGNAGNE Yadou MauriceKAKOU Konan MédardTRE-YAVO Mireille

Anatomie PathologiqueAnatomieAnatomie NeurochirurgieHisto-Embryo-Cyto-Génétique

MAITRES-ASSISTANTS

BOKA Boni Michel2 KOFFI Kouakou Emmanuel

Anatomie PathologiqueAnatomie Pathologique

ASSISTANTS-CHEFS DE BIOCLINIQUE

2.., .)

4 56789

BROALET Maman You EspéranceDOUKOURE BrahimaETTE-DIENG ElisabethKOUAKOU Koffi FulbertOUATTARA Djibril Charles GuillaumeSAKHO Sidi SambaTROH EmileY AO Gnangoran VictorZUNON-KIPRE Yvan Jacques-Olivier Toualy

Anatomie-NeurochirurgieAnatomie PathologiqueAnatomie PathologiqueAnatomie-NeurochirurgieAnatomieHisto-Embryo-Cyto-Génétiq ueAnatomie PathologiqueHisto-Em bryo-Cyto-GénétiqueAnatom i e-Neurochirurgi e

Il - ANESTHESIE-REANIMATION - OXYOLOGIE PROFESSEURS TITULAIRES

MIGNONSIN David2 YAPOBI Yves René

Anesthésie-RéanimationAnesthésie-Réanimation

AMONKOU Akpo Antoine

MAITRES DE CONFERENCES AGREGES

Anesthési e-Réani mati on

A VE Yikpé Denis2 SORO Lacina3 TETCHI Yavo Deni4 VILASCO Brigitte Emma5 YEO Ténéna Niona Louis-Philippe

MAITRES-ASSISTANTS

Anesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-Réanimation

IRF d. Adzopé

CHU de TreichvilleCHU de YopougonCHU de Cocody

CHU de CocodyCHU de Treichville

CHU de Y opougonCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de YopougonCHU de TreihvilleCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de Yopougon

CHU de TreichvilleInstitut

Cardio.Treichville

CHU de Y opougon

Cl-l U de YopougonCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de Yopougon

Il - ANESTHESIE-REANIMATION - OXYOLOGIE (suite)

ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE

BINLIN-DADIE Renée Hélia Ayakan diteGnanminlin Wôhadjinan

:? DREESEN Alice Julienne3 EHOUNOUD Hyacinthe Jean Clotaire-l- ELOIFLIN Banga5 KOFFI Kouakou6 KONAN Konan Denis7 KONAN Kouassi Jean8 KOUAME Kouadio Joseph9 NIOBLE Ghislain

10 SlSSOKO Jacques Auguste Souleymane11 Y APO Yapo Paul

Ill - APPAREIL DIGESTIF ET CHIRURGIE GENERALE


Î

345

CAMARA Benoît MathieuEHUA Somian FrancisKANGA MiessanN'GUESSAN Henri Alexandre AntoineTURQUIN-TRAORE Henri

Anesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationOxyologie-Médecine dUrgenceOxyologie-Médecine dUrgenceAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-Réanimation

Hépato-Gastro-EntérologieChirurgie Générale et DigestiveChirurgie Générale et DigestiveChirurgie Générale et DigestiveChir. Gén .. Digest. et Proctologie


A TTJA Koffi Alain2 KELI Elie3 KOFFI Eric Martin Alain Sénou4 KOUADIO Koffi Germain5 KOUASSI Jean-Claude6 LOHOUES-KOUACOU Marie Jeanne d'Arc7 N'DRI-YOMAN Aya Thérèse

Hépato-Gastro-EntérologieChirurgie Générale et DigestiveChirurgie Générale et DigestiveChirurgie Générale et DigestiveChirurgie Générale et DigestiveHépato-Gastro-EntérologieHépato-Gastro-Entérologie

CHU de CocodyCHU de TreichvilleInstitut Cardia. TvlleCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de Y opougonInstitut Cardio.TvlleCHU de CocodyCHU de CocodyInstitut Cardia. Tvlle

CHU de CocodyUrgences CHU Yop.CHU de YopougonCHU de TeichvilleCHU de Treichville

CHU de YopougonCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de Yopougon

MAITRES-ASSISTANTS

ALLAH Kouadio Emile Hépato-Gastro-Entérologie CHU de Cocody2 ASSI Constant Hépato-Gastro-Entérologie CHU de Cocody" CASANELLI dIstria Ange Jean-Marie Chirurgie Générale et Digestive CHU de Treichville.)

4 COULIBALY Adarna Chirurgie Générale et Digestive CHU de Yopougon5 KOUADIO N·Dri Laurent Chirurgie Générale et Digestive CHU de Treichville6 KOUAME Yao Julien Chirurgie Générale et Digestive CHU de Treichville7 MAHASSADJ Kouamé Alassan Hépato-Gastro-Entérologie CHU de Yopougon8 Y AO Bathaix Mamert Fulgence Hépato-Gastro-Entérologie CHU de Yopougon9 Y APO Patrice Chirurgie Générale et Digestive CHU de Treichville10 YENON Kacou Sébastien Chirurgie Générale et Digestive CHU de Cocody

Ill - APPAREIL DIGESTIF ET CHIRURGIE GENERALE (suite)

1 ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE

l BLEGOLE Oblé Clément Chirurgie Générale et Digestive CHU de Treichville., KASSI Assamoi Brou Fulgence Chirurgie Générale et Digestive CHU de Cocody -, KISSI-ANZOllAN-1..:ACOtT Henriette Ya Hépato-Gast ro-E ntérologie CHU de Yopougon .)

4 MOUSSA Bakary Chirurgie Gé11er:1Je et Digestive CHl1 de Y opougon 5 N·oru Konan Jean Chirurgie Generale et Digestive (Hl1 de Treichville() SORO Kountélé Gona Bab1Y Chirurgie Générale et Digestive CHU de "{opougon 7 TR.\ORE Lassina Chirurgie Generale et Digestive CHU de Treichville

IV - BIOCHIMIE - PHARMACOLOGIE - PHYSIOLOGIE

PROFESSEURS TJTl1L.\IRES

BOGUI Pascal2 DAH Cyrille Serge3 SESS Essiagne DanieJ

CISSE-CAMARI\ Massara2 DIE-KACOU Henri Maxime3 D.JESSOU Sossé Prosper4 OUATTAR.\ Souhaliho5 YA VO Jean-Claude

Physio. et Explora" FonctionnellePhysio. et Explora" FonctionnelleBiochimie Médicale

l\l.\ITRES DE CONFERENCES AGREGES Biochimie MédicalePharmacologie CliniqueBiochimie MédicalePhysio. et Explora" FonctionnellePharmacologie Clinique

J\IA ITRES-ASSISTANTS

ADEOTI Mansour Franck2 BALA YSSAC Eric Wenceslas Joseph3 KAKOU Augustine4 MONDE Aké Absalorne

Biochimie MédicalePharmacologie CliniquePharmacologie CliniqueBiochimie Médicale

CHU de C ocody et Yop.CHU de Cocody(Hl' de Cocody

CHU de CocodyCHU de C ocodyCHl1 de Cocodv et TvlleCHU de C ocody CHU de Cocody

CHU de YopougonCHU de C ocodyCHU de C ccodvCHU de Cocody

:MAITRE-ASSISTANT :MONO-APPARTENANT

N'KOMarcel Biochimie CHU de C ocody

ASSISTANTS-CHEFS DE BIOCLINJOlfE

DAUBREY-POTEY Thérèse Cotran Pharmacologie Clinique CHU de C ocody, DJOH.AN Youzan Ferdinand Biochimie Médicale (Hl! de C ocody-3 Ki\.l\.fAGATE Mamadou Pharmacologie Clinique CHl1 de C ocody4 KEITA Mustapha dit Moussa Physio et Explora" Fonction. CHU de Cocody

5 SIRANSY A.hou Edwige Physio. et Explora" Fonction. CHU de Cocodv6 TUO Nalourgo Physio. et Explora" Fonction. CH1] de Yopougon7 VAMY Gboignon l\fichel Pharmacologie Clinique ('H1__f de Cocody

V - BIOPHYSIQUE ET MEDECINE NUCLEAIRE - IMAGERIE MEDICALE


1 KEITA Abdoul Kader2 N'GBESSO Roger-Daniel3 OUATTARA Dilaï Noël

Radiologie et Imagerie MédicaleRadiologie et Imagerie MédicaleRadiologie et Imagerie Médicale

CHU de YopougonCHU de YopougonCHU de Treichville


1 ABBY Blaguet Clément2 ACHY Ossey Bertin3 GBAZI Gogoua Casimir4 KONAN Alexis Victorien5 SEKA Assi Rémi6 YAPI-YAPO Chia Paulette

Imagerie MédicaleBiophysique et Médecine NucléaireImagerie MédicaleImagerie MédicaleImagerie MédicaleImagerie Médicale

1 DIABATE Aboubakar Sidiki2 KOUTOUAN Annick Flora Youa3 N'GOAN-DOMOUA Anne-Marie4 N' ZI Kouassi Paul

MAITRES-ASSISTANTS

Imagerie MédicaleBiophysiqueImagerie MédicaleImagerie Médicale


1 ALLOGBAH Aké Cyrille Narcisse2 COULIBAL Y Ali

- 3 DEDE N'Dri Simon4 KONE Tahirou5 KOUAME N'Goran6 SALAMI Fatima Adenike7 TOURE Abdoulaye

Imagerie MédicaleRadiologie (Imagerie Médicale)Imagerie MédicaleRadiologie (Imagerie Médicale)Imagerie MédicaleImagerie MédicaleImagerie Médicale

CHU de CocodyCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de CocodyCardiologie TreichvilleCHU de Treichville

CHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de Treichville

CHU de CocodyCHU de YopougonCHU de TreichvilleCHU de YopougonCHU de YopougonCardiologie TreichvilleCHU de Yopougon


1 KOUASSI N'Go Nathalie Biophysique2 ZUNON-KIPRE Eric Emile Gnogbo Biophysique

CHU de CocodyCHU de Cocody

ATTACHE DE RECHERCHE

1 KOFFI Kouadio Dominique Biophysique CHU de Cocody

VI - DERMATOLOGIE ET INFECTIOLOGIE


1 BISSAGNENE Emmanuel2 KADIO Auguste3 KANGA Jean-Marie4 ODEHOURI Koudou Paul

Maladies Infectieuses et TropicalesMaladies Infectieuses et TropicalesDermato-Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et Tropicales


1 AOUSSI Eba François Blaise Patrice2 DJEHA Djokouéhi3 EHOLIE Serge Paul4 GBERY Ildevert Patrice5 KAKOU Aka Rigobert6 YOBOUE-Y AO Pauline

Maladies Infectieuses et TropicalesDermato- Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et TropicalesDermato-Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et TropicalesDermato-Vénérologie-Allergologie

MAITRES-ASSISTANTS

1 ECRA-ELIDJE Joseph2 SANGARE Abdoulaye3 TANON Koffi Aristophane


1 ABA Yapo Thomas2 AHOGO Kouadio Célestin3 EHUI Eboï4 KALOGA Amadou5 KASSI Komenan6 KASSI N'Douba Alain Charles7 KOUAME Kanga8 OUATTARA Songda Ismaël

Dermato-Vénérologie-AllergologieDerrnato-Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et Tropicales

Maladies Infectieuses et TropicalesDermato-Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et TropicalesDermato-Vénérologie-AllergologieDermato-Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et TropicalesDermato-Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et Tropicales

VII - IMMUNOLOGIE - HEMATOLOGIE - CANCEROLOGIE


1 ECHIMANE Kouassi Antoine2 SANGARE Amadou3 SANOGO Ibrahima4 SOMBO Mambo François5 TEA Daignékpo Norbert

1 ABISSE Agba2 ADOUBI Innocent3 KOFFI Kouassi Gustave4 MEITE Mori

CancérologieHématologie CliniqueHématologie CliniqueImmunologie Générale et MédicaleHématologie Clinique

MAITRES DE CONFERENCES AGREGES Immuno-Transfusion SanguineCancérologieHématologie CliniqueImmunologie Générale et Médicale

CHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de Treichville

CHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de Treichville

CHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de Treichville

CHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de Treichville

CHU de TreichvilleCHU de YopougonCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de Treichville

CNTS TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de YopougonCHU de Yopougon

VII - IMMUNOLOGIE-HEMATOLOGIE- CANCEROLOGIE (suite)

MAITRES-ASSISTANTS

1 DASSE Séry Romuald2 TOLO-DIEBKILE Aïssata3 Y AO Toutoukpo

Immuno. Générale et Médicale CHU de CocodyHématologie Clinique CHU de YopougonHématologie Clinique CHU de Treichville


1 COULIBALY-DIDI-KOUKO Oumou Judith Cancérologie CHU de Treichville

2 M'BRA Kouassi Cancérologie CHU de Treichville3 TOURE Moctar Cancérologie CHU de Treichville

ASSISTANTS-CHEFS DE BIOCLINIOUE

1 KOUAKOU Boidy Hématologie Clinique CHU de Yopougon2 N'DHATZ-COMOE Emeraude Eba Chantal Hématologie Clinique CHU de Yopougon3 NANHO Danho Clotaire Hématologie Clinique CHU de Yopougon4 SIRANSY-BOGUI Kouabla Liliane Immuno. Générale et Médicale CHU de Yopougon5 YAO Attirnéré Nicaise Hématologie Clinique CHU de Treichville

ATTACHES DE RECHERCHE

1 HIEN Sansan Immuno. Générale et Médicale CHU de Cocody2 TOURE Attiényo Honoré Hématologie Clinique CHU de Yopougon

VIII - MEDECINE INTERNE- ENDOCRINOLOGIE- MALADIES METABOLIQUES


1 LOKROU Lohourignon Adrien2 NIAMKEY Ezani Kodjo Emmanuel3 TOUTOU Toussaint

EndocrinologieMédecine InterneMédecine Interne

CHU de YopougonCHU de TreichvilleCHU de Treichville

1 ADOM Ahoussi Hilaire2 OUATTARA Doignan


Médecine InterneMédecine Interne

MAITRES-ASSISTANTS

1 ADINGRA ACHO-GROGA BADA Raymonde Marie Nicole Happie

2 OUEDRAOGO-YANGNI YolandeMédecine InterneMédecine Interne


1 ABODO Jacko Rhedoor Fêtê2 BINAN Allah Omer Yves3 SANOGO Sindou

EndocrinologieMédecine InterneMédecine Interne

CHU de TreichvilleCHU de Treichville

CHU de TreichvilleCHU de Treichville

CHU de YopougonCHU de TreichvilleCHU de Treichville

IX- MERE ET ENFANT PROFESSEURS TITULAIRES

l AGUEHOUNDE Cosme2 ANDOH Joseph3 ANONGBA Danho Simplice Florentin Rodgers4 DA SILVA-ANOMA Sylvia Helena Luisa5 DICK Kobinan Rufin6 HOUENOU-AGBO Yveline Marie-Thérèse7 KONE Mamourou8 KOUAME Konan Joseph9 MOBIOT Mandou Léonardl O TIMITE-KONAN Adjoua Marguerite11 TOURE-COULIBAL Y Karidiata

Chirurgie Pédiatrique CHU de CocodyPédiatrie Médicale CHU de TreichvilleGynécologie-Obstétrique CHU de TreichvilleChirurgie Pédiatrique CHU de YopougonChirurgie Pédiatrique CHU de YopougonPédiatrie-Néo-Natalogie CHU de CocodyGynécologie-Obstétrique CHU de YopougonPédiatrie Médicale CHU de CocodyChirurgie Pédiatrique CHU de TreichvillePédiatrie Médicale CHU de YopougonGynécologie-Obstétrique CHU de Treichville


l ABAULETH Yao Raphaël2 ADONIS-KOFFY Laurence Ya3 AMON-TANOH-DICK Flore4 BONI Ehouman Serge Auguste5 BANKOLE-SANNI Roumanatou6 KOUAKOU Firmin7 KOUAME Dibi Bertin8 OUATTARA Ossénou9 OULAI Soumahoro

Gynécologie-ObstétriquePédiatrie MédicalePédiatrie MédicaleGynécologie-ObstétriqueChirurgie PédiatriqueGynécologie-ObstétriqueChirurgie PédiatriqueChirurgie PédiatriquePédiatrie Médicale

CHU de CocodyCHU de YopougonCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de Treichville .CHU de CocodyCHU de YopougonCHU de YopougonCHU de Treichville

MAITRES-ASSISTANTS

l ADJOBI Ello Jean René Gynécologie-Obstétrique CHU de Treichville

2 AKAFFOU-ADJA Evelyne Pédiatrie-Néo-Natalogie CHU de Yopougon

3 AMORISSANI-FOLQUET Amah Madeleine Pédiatrie Néo-Natalogie CHU de Cocody

4 BOKOSSA-MAMBO Ernestine Sabine Gynécologie-Obstétrique CHU de Cocody

5 CISSE Lassina Pédiatrie Médicale CHU de Treichville

6 COUITCHERE GUEI Line Sylvie Pédiatrie Médicale CHU de Treichville

7 DIETH Atafy Gaudens Chirurgie Pédiatrique CHU de Yopougon

8 GONDO Diomandé Gynécologie-Obstétrique CHU de Cocody

9 GUIE Yéret Privat Gynécologie-Obstétrique CHU de Treichville

10 HORO Gninlgninrin Apollinaire Gynécologie-Obstétrique CHU de Yopougon

11 KOFFI Kouadio Achille Gynécologie-Obstétrique CHU de Cocody

12 KONAN Blé Rémy Gynécologie-Obstétrique CHU de Yopougon

13 MOH Elloh Nicolas Félix Chirurgie Pédiatrique CHU de Yopougon

14 N'GUESSAN Koffi Gynécologie-Obstétrique CHU de Cocody

15 NANDIOLO KONE-ANELONE AMOUY A Rose Chirurgie Pédiatrique CHU de Treichville

16 NIANGUE-BEUGRE N'Drin Martine Pédiatrie Médicale CHU de Treichville

17 PRINCE Agbodjan Adjété Pédiatrie Médicale CHU de Cocody

18 QUENUM Guillaume David Cyprien Gynéco 1 ogie-Obstétri que CHU de Yopougon

19 TANO-AIE Amenan Laure Gynécologie-Obstétrique CHU de Cocody

20 TOURE-ECRA Ana Fatoumata Gynécologie-Obstétrique CHU de Yopougon

IX - MERE ET ENFANT (suite)

ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQllE

AKE-ASSI-KONAN Marie Hélène Pédiatrie Médicale CHU de Yopougon2 BOHOUSSOll Kouacou Paul Eric Gynécologie-Obstétrique CHU de Treichville" DAINGUY Marie-Evelyne Marguerite Api Pédiatrie Médicale CI-IU de Cocody.)

4 DIA Jean-Marc Hervé) .aminc Gynécologjc-Obstctriquc Cl IU de Treichvillc5 EBOUA Tano Kassi François Pédiatrie Médicale CHU de Yopougon

6 EFFOH N'Drin Denis Gynécologie-Obstétrique CHU de Yopougon7 ENOH Slanziahuélie Jacob Euloge Pédiatrie Médicale CHU de Treichvillc 8 FANNY Mohamed Adam Karim Ben Gynécologie-Obstétrique CHU de Yopougon9 GOULI Jean Christian Chirurgie Pédiatrique CHU de Yopougon

10 KOUYATE Salifou Gynécologie-Obstétrique CHU de Treichville11 LASME-GUI LLAO Berthe 1::vel\'nc Pcdiatric Mcdicnlc ( î 11' de Yc1p,1,1"l'i'12 N'GUESSAN Konan Edouard Gynécologie-Obstétrique CHU de Treichvilk13 ODEHOURI-KOUDOU Thierry Hervé Chirurgie Pédiatrique CHU de Yopougon14 SENI Konan Gynécologie-Obstétrique CHU de Yopougon15 TEGNAN Ebba Jacques Arsène Gynécologie-Obstétrique CHU de Trcichvillc 16 Y AO Attéby Jean-Jacques Pédiatrie Médicale Cl lU de Trcichville

X - MICROBIOLOGIE (BACTERIOLOGIE-VIROLOGIE - PARASITOLOGIE-MYCOLOGIE)


DOSSO-BRETIN Mireille Carmen Bactériologie.-Virologie PASTEUR Cocody CI IU Yop.


ASSOUMOU Aka2 EDOH Vincent3 FAYE-KETTE ACHI Yaobla Hortense4 KACOU-N'DOUBA Adèle5 OUHON Jean

Parasitologie-MycologieBactériologie-VirologieBactériologie-VirologieBactériologie-VirologieParasitologie-Mycologie

Cl I lJ de Cocodx CHU de TreichvilleCl IU de YopougonCHU de YopougonCHU de Cocody

MAITRES-ASSISTANTS

1 KOUASSI-M'BENGUE Aya Alphonsine Bactériologie-Virologie Institut PASTEUR Cocody


1 BAKAYOKO Souleyrnane2 BONI-CISSE Cho N'Din Caihérine3 Y APO-KOUADIO Cha Gisèle

Bactériologie-VirologieBactériologie-VirologieParasitologie-Mycologie

ATTACHES DF: RECHERCHF:

ACHO Yapo Blaise2 GUESSENND-KOUADIO Aya Nathalie

KOUAME-KOUABENA Adja Henriette" .)

Bactério-Vi rologieBactériologie-VirologieBactériologie-Virologie

Institut PASTEUR Coccdy CHU de YopougonCHU de Cocody

Institut P/\STEUR-Cocuù)·CHU de YopougonCl lU de Yopougon

XI - NEPHROLOGIE - UROLOGIE


1 DIALLO Amadou Demba2 DJEDJE Mady Alphonse3 MANZAN Konan4 SANG ARE Ibrahima Séga


1 GNIONSAHE Dazé Appolinaire2 OUEGNIN Georges Armand Alexis

MAITRES-ASSISTANTS

1 ACKOUNDOU-N'GUESSAN Kan Clément2 KONAN Kouamé Paul Gérard3 YAO Blaise

1 COULIBALY Noël2 DEKOU Angoran Hyjin3 KOUAME Benjamin4 LAGOU Delphine Amélie5 TIA Weu Mélanie6 Y AO Kouamé Hubert

Néphro-Médecine InterneUrologieUrologieUrologie

NéphrologieUrologie

NéphrologieUrologieUrologie


UrologieUrologieUrologieNéphrologieNéphrologieNéphro-Médecine Interne

XII - OS ET ARTICULATIONS

CHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de Treichville

CHU de YopougonCHU de Cocody

CHU de YopougonCHU de CocodyCHU de Treichville

CHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de YopougonCHU de YopougonCHU de Treichville

1 KOUAKOU N'Zué Marcel2 LAMBIN Yves3 V ARAN GO Guy Gaston


RhumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et Traumatologie

CHU de CocodyCHU de YopougonCHU de Treichville


1 AGOH Serge Antoine Biansoit Yoboukoi2 BAMBA Insa3 BANA Abdoulaye4 ETI Edmond5 TOURE Stanislas André6 RICHARD Kadio Michel7 SIE Essoh Jean-Baptiste

1 ANOUMOU N'Guessan Michel2 COULIBAL Y Abou3 FAL Arame4 GOGOUA Dallo Raphaël5 GUEDEGBE Félix Séraphin6 KONE Brahima7 KOSSOKO Issa Hyppolyte

Orthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieRhumatologieOrthopédie et TraumatologieChir. Plast., Reconst. et Esthét.Orthopédie et Traumatologie

MAITRES-ASSISTANTS

Orthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieChir. Plast., Reconst. et Esthét.

CHU de CocodyCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de Yopougon

CHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de Treichville

XII - OS ET ARTICULATIONS (suite)


1 ALLAH Konan Christophe2 BE Jeancis3 DJE BI DJE-ASSI Valérie Lou-Nahié4 KABA Lanciné5 KACOU A.ka Désiré6 KONE Samba7 KONE Seydou Gnombena N'Golo8 KOUAME Kouakou Maurice9 OUALI Boubacar10 OUATTARA Baly11 SICA Asso12 TRAORE Alidou13 YEO Sitiènèhin

XIII - PEDAGOGIE

1 EHUA Somian Francis

Chir. Plast., Reconst. et EsthétiqueOrthopédie et TraumatologieChir. Piast., Reconst, et EsthétiqueChirurgie Plastique ~t ReconstOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieRhumatologieRhumatologieChirurgie PlastiqueOrthopédie et TraumatologieChir. Plast., Reconst. et Esthétique

Philomène2 AKA Mossouma Georgette3 KAHAN Koffi Pierre


Chirurgie Générale et Digest.

CHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de TreichvilleIRF AdzopéCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de CocodyIRF ADZOPECHU de YopougonCHU de Treichville

Urgences CHU Yop.

ENSEIGNEMENT SECONDAIRE

1 ABBY-BAILL Y Hortense Marie-ThérèseAnglaisAnglaisAnglais

UFR Sciences Méd. CocodyUFR Sciences Méd. CocodyUFR Sciences Méd. Cocody

XIV- SANTE AU TRAVAIL

1 BONNY Jean Sylvain


Médecine du Travail CHU de Yopougon


1 Y APO-ETTE Hélène Abouheu2 YEBOUE-KOUAME Brou Yves

1 KOUASSI Yao Mathias2 WOGNIN Sangah Barthélémy

1 BOTTI Koffi2 TCHICAYA Aimé François

Médecine LégaleMédecine du Travail

MAITRES-ASSISTANTS. Médecine du TravailMédecine du Travail

ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE Médecine LégaleMédecine du Travail

CHU de TreichvilleCHU de Yopougon

CHU de YopougonCHU de Yopougon

CHU de TreichvilleCHU de Yopougon

XV - SANTE PUBLIQUE ET INFORMATIQUE

PROFESSELRS TlTLLAll{E~

KOFFI Kouamé Santé Pub. et Méd. Commun.2 TAGLIANTE-SARACINO CHAPMAN

Janine Adèle Félicienne Claire Santé Pub. et Méd. Commun.


AKA Joseph2 DAGNAN N'Cho Simplice

1 AKE-TANO Sassor Odile Purifine2 BENIE BI V roh Joseph3 EKRA Kouadio Daniel4 TIEMBRE Issaka

Biosiat. et Informatique Méd.Santé Pub. et Méd. Commun.

MAITRES-ASSISTANTS Santé Pub. et Méd. Commun.Santé Pub. et Méd. Commun.Santé Pub. et Méd. Commun.Santé Pub. et Méd. Commun.

ASSISTANTS-CHEFS DE CLJNLOLJE

ATTOH -TOURE Harvey Nick SjencersYelame Fy

2 F ALL Aïssatou 3 TOURE Brahirna4 ZENGBE-ACRA Y Pétronille

BROU Ama N'Guetta Isabelle2 NIGUE Luc

Santé Pub. et Méd. Commun.anté Pub. et Méd. Commun.

Santé Pub. et Méd. Commun.Santé Pub. et Méd. Commun.

INSP d' Adjarné

INSP dAdjamé

CHU de CocodylNHP de Treichville

INSP dAdjarnéTNHP deTreichvilleINHP de TreichvilleINHP de Treichville

INHP de TreichvilleINHP de TreichvilleINHP de TreichvilleINHP de Treichvillc

ASSISTANTS-CHEFS DE BIOCLINIQLIE

Biostat. et Informatique Méd.Biostat. et Informatique Méd.

CHU de CocodyCHU de Cocody

XVI - SYSTEME NERVEUX ET READAPTATION


1 AMANI N 'Goran2 BA Zézé Vincent

DELAFOSSE Roger Charles Joseph3 KOUASSI Beugré4 SONAN AFFOUNDAH-

DOlJA YOUA Thérèse Adélaïde Armait

PsychiatrieNeurochirurgiePsychiatrieNeurologie

Hôp. Psychiat. BingervilleCHU de YopougonTNSP dAdjarnéCHU de Cocody

eurologie CHU de Yopougon


ASSI Amonchyépo Ablan Berthe2 BOA Yapo Félix3 KONE Drissa4 NANDJUI Mansé Béatrice5 VARLET Guy Gervais Aka

eurologieNeurologiePsychiatrieRééduca° Fonction. (Physiatrie)Neurochirurgie

CHU de CocodyCHU de YopougonHôp. Psychiat. BingervilleCHU de YopougonCHU de Yopougon

MAITRES-ASSISTANTS

N'DRl Oka Dominique curochirurgic Cl IU de Yopougon

XVI -SYSTEME NERVEUX ET READAPTATION (suite)


1 Aderehime_HAÏDARA 2 AKA ANGHUI-DIARRA Evelyne Marie-

Françoise Adjoua3 ALLOH Amonso Daniel Beugré4 COWPPLI-BONY Ahou Pascale5 DOUMBIA Mariam6 IPOU Yves Stéphane7 KOUAME-ASSOUAN Ange Eric8 MANOU Koffi Benjamin9 VE Diomandé10 YEO-TENENA Yessonguilana Jean-Marie

1 TE-BONLE-DIA WAR Marguerite2 COULIBAL Y Djénéba

XVII- TETE ET COU

Neurochirurgie

NeurologieRééduca° Fonction. (Physiatrie)NeurologieNeurologiePsychiatrieNeurologieRééduca° Fonction. (Physiatrie)PsychiatriePsychiatrie

ATTACHES DE RECHERCHE PédopsychiatriePsychiatrie

CHU de Yopougon

CHU de CocodyCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de YopougonINSP d'AdjaméCHU de CocodyCHU de YopougonHôp. Psychiat. BingervilleINSP d'Adjamé

INSP d'AdjaméINSP d'Adjamé

1 ADJOUA Rith Pascal2 ASSA Allou3 FANNY Adama4 GADEGBEKU Anani Samuel5 KOUASSI Konan Bertin

PROFESSEURS TITULAIRES ORL et Chirurgie Cervico-FacialeStomato. et Chir. Maxille-FacialeOphtalmologieStomato. et Chir. Maxillo-FacialeORL et Chirurgie Cervico-Faciale


1 AKA Gblanh Kassy François-Philippe2 AKA-KOFFI Viviane Emilie Colette (Ama)3 Bakary OUA TT ARA 4 EHOUO Florent Stanislas Adolphe5 ETTE-AKRE Evelyne Elie6 KONAN Kouadio Emmanuel7 KONE Safédé8 TANON-ANOH Blah Marie José

1 BURAIMA Fataho2 GBE Kassieu3 HARDING-KABA Mouan Béatrice4 KOUASSI François Xavier5 KOUASSI Yao Mathurin6 N'GUESSAN-KOFFI Isabelle Léa Rosine7 YOTIO Ayékpa

Stomato. et Chir. Maxillo-FacialeORL et Chir. Cervico-FacialeStomato. et Chir. Maxille-FacialeORL et Chir. Cervico-FacialeORL et Chirurgie Cervico-FacialeStomato. et Chir. Maxillo-FacialeOphtalmologieORL et Chirurgie Cervico-Faciale

MAITRES-ASSISTANTS ORL et Chirurgie Cervico-FacialeOphtalmologieStomato. et Chir. Maxille-FacialeOphtalmologieORL et Chirurgie Cervico-FacialeORL et Chirurgie Cervico-FacialeORL et Chirurgie Cervico-Faciale

CHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de 'i opougon

CHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de YopougonCHU de Yopougon

CHU de YopougonCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de Treichville

XVII- TETE ET COU (suite)


1 ADJORLOLO-SANOGO Adjoua Christiane Ophtalmologie CHU de Treichville

2 ANZOUAN-KACOU Evelyne ReineMarguerite Anoumon Stomato. et Chir. Maxillo-Faciale CHU de Treichville

3 BERETERokia Ophtalmologie CHU de Treichville

4 BONI Séverin Ophtalmologie CHU de Treichville

5 COULIBAL Y Fahan Ophtalmologie CHU de Treichville

6 DIOMANDE Abdoulaye Stomato. et Chir. Maxillo-Faciale CHU de Treichville

7 KONAN-TOURE Akissi Marie-Louise Ophtalmologie CHU de Treichville

8 KOUASSI Aya Colette Ophtalmologie CHU de Treichville

9 MOBIO N'Kan Max Ange ORL et Chirurgie Cervico-Faciale CHU de Treichville10 N'GOUAN Jean-Michel ORL et Chir. Cervico-Faciale CHU de Cocody

11 N'GUESSAN N'Dia Dominique Stomato. et Chir. Maxillo-Faciale CHU de Treichville

12 OUATTARA Ouettéré Abdallah Sylvain Ophtalmologie CHU de Treichville

13 TEA Zékou Basilide ORL et Chirurgie Cervico-Faciale CHU de Cocody14 YODA Moussa ORL et Chirurgie Cervico-Faciale CHU de Yopougon15 YOFFOU Liliane Ophtalmologie CHU de Cocody

XVIII - THORAX ET VAISSEAUX PROFESSEURS TITULAIRES

1 DANGUY-AKA KOUASSI Wangah Elisabeth Pneumophtisiologie2 KO FFI N'Goran Bernard Pneumophtisiologie3 N'DOPI Abouo Raymond François Cardiologie


1 AKE-TRABOULSI Evelyne Léonore2 ANZOUAN-KACOU Jean-Baptiste3 EBOULE-ABOA Alloua Corinne4 KOUASSI Boko Alexandre5 KRAMOH Kouadio Euloge

MAITRES-ASSISTANTS Cardiologie PédiatriqueCardiologieCardiologiePneumophtisiologieCardiologie

CHU de CocodyCHU de CocodyCHU de Treichville

1 ADOHAdoh Cardiologie CHU de Treichville

2 COULIBAL Y Gaoussou Pneumophtisiologie CHU de Treichville

3 DOMOUA Kouao Médard Serge Pneumophtisiologie CHU de Treichville

4 KAKOU Guikahué Maurice Cardiologie CHU de Treichville

5 KENDJA Kouassi Flavien Hyppolyte Chirurgie Thoracique CHU de Treichville

6 KOUASSI Kanga Chirurgie Cardio-Vasculaire CHU de Treichville

7 N'GOM Abdoukarim Séverin Pneumophtisiologie CHU de Cocody8 T ANAUH Yves Raymond Chirurgie Thoracique CHU de Treichville

9 YAPI Achy Pneumophtisiologie CHU de Treichville

CHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de Treichville

XVIII -THORAX ET VAISSEAUX (suite)


1 AMANI Kwadjau Hyppolyte Chirurgie Thoracique CHU de Treichville2 BAKASSA Traoré Lamine Serge Alexis Chirurgie Cardiaque CHU de Treichville3 BAKA YOKO Alimata Sandia Pneumophtisiologie CHU de Treichville4 BASSA Kouadio Modeste Cardiologie CHU de Treichville5 Blaise Alexandre DEMINE Chirurgie Cardiaque CHU de Treichville

6 COULIBAL Y Iklo Cardiologie CHU de Treichville7 DAIX Ahou Thomas Joseph Pneumophtisiologie CHU de Treichville8 HARDING-TANON Ekoué Diana Cardiologie CHU de Treichville9 HORO Kigninlman ~t Dl C. Pneumophtisiologie CHU de Cocody10 KONIN Kouaho Christophe.~ Cardiologie CHU de Treichville11 N'GUETTA Aka Roland ~ IJ.P.I. 0\ Cardiologie CHU de Treichville12 SOUAGA Kouassi Antoni~:) dee 5der,œe ~ Chirurgie Cardio-Vasculaire CHU de Treichville

Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO

J.E. 1 Ell'E' C. 11. -1 tH· ES'E ~i· _; 1 • • i r ; , J - - - ~ : ;: j · - : ~ . . _JI __ -~ eJ • ~ • • r I J . , . ., · •••

IYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A L'ETERNEL DIEU TOUT' Pms:SANT Toi qui es source de vie,

Toi qui as fait de moi ce que je suis aujourd'hui, Toi qui as été ma lanterne jusqu'à cette étape de ma vie. Je te demande de recevoir cette thèse et de la bénir. Donne-moi la force nécessaire pour exercer cette profession. Remplis mon cœur d'amour pour mes patients afin que leurs souffrances, leurs peines et aussi leurs joies soient les miennes.

Amen

II Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)

Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclouaux anti-érythrocytaires dans le système ABO

ATOUS LES SUJETS .. CIBLES1 IDE NCOJlrRœ' ETUDE Vous avez été mon premier soutien et les véritables artisans

de ce travail. Trouvez en ces mots, toute la reconnaissance d'un frère. Que le Seigneur dans sa miséricorde et son amour daigne exaucer vos souhaits les plus utiles.

III Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


IN MEM.OJ~IJUM. A mon père : fe,w1 'tfAl!ll!AIB;OU~:JACQUES Très tôt tu as compris la nécessité de la chose scolaire et très tôt tu nous as indiqué le chemin de l'école. Mais hélas tu nous as quitté trop prématurément. Aujourd'hui l'arbre que tu as planté a donné son fruit. Saches que tu demeures présent dans mon cœur à jamais. A ta mémoire je dédie cette thèse.

IVYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


IN MEM101Rl!lJJM A MES CHERS DIS, \ 1 )IDS

-DOCTEUR YAPI SEKA DESIRE -ACHANGO YAPI LAZARO -SEKA JEAN MAXIME ALEX -YAPO JULIETTE -YAPI AKOUN SIMON -AKAYE PHILBERT ET MADAME -KAKOU MASSA -YAPI JEAN PRINCE -SOBA AYE JEAN BAPTISTE -N'CHO ABE -AFFO N'CHO MICHEL -ATSE ATSE AUGUSTIN -SOTCHI KOUASSI BRUNO (8KB) -YAPI GUISSEU ETIENNE ...

J'aurais tant voulu que vous soyez à mes côtés pour voir le couronnement de tant d'effort. Mais le seigneur en a décidé autrement. De la haut où vous êtes, vous pouvez être fiers car, ce travail est aussi le vôtre. Que Dieu vous garde à ses côtés.

Reposez en paix.

VYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A MES PARENTS ET AMIS

VIYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A MA MERE V~P() CJH:0) TH:~~E-S;E Ah! Que c'est agréable de t'avoir comme mère.

Toi qui très tôt as compris que la graine mise en terre a besoin d'eau et de soins. Que le SIEGNEUR Dieu te permette de vivre longtemps afin que tu puisses goûter au fruit de cet arbre et trouver un peu de consolation auprès de ton fils.

A MES FRERES, El SŒlJJRS -ABOUA YAPI ANDRIEN -YAPI ATSE FAUSTIN -ABOUA KOTTIA REMI -ABOUA API HELENE -YAPI CHO LAURENCE -YAPO ABOUA JACQUELINE -YAPI APO CHARLOTTE,

Vous qui avez les premiers cru en ma valeur, votre soutien, votre réconfort et votre affection ont été pour moi les armes mêmes de la victoire. Trouvez en ces mots l'attachement sincère et affectueux que ce frère vous témoigne ainsi que l'expression de mon amour et de mon infinie reconnaissance.

A MES NEUVEW* ET· ~IECES· en ~alitieulier à toi ASSI JEAN NOEL -

Que ce travail vous serve de stimulant et vous pousse à aller au delà de vos rêves pour les réaliser. Vous êtes bien jeunes mais vos cœurs aussi grands pour porter toute l'affection que j'ai pour chacun de vous.

VIIYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A îOUS MES COUS~NS lEî COUS~NlES -ADOUBY N'CHO MARUS -AKOMOU BENOIT -AKOMOU FRANCOIS SALES -APPIA GNANDOH MICHEL dit Jagger -APPIA VINCENT -BROU ATSE THOMAS -DIAHOU KOUASSI ATHANASE -KOKOBO YAPI EMMANUEL -KOUASSIYAPIALEXANDRE -MAMBO ATSE L'ABBE -MAMBO FIRMIN dit Wambé -MAMBO BASILE -N'CHO ATSE DANIEL -N'CHO BENIE -N'CHO ASSI dit Johnny Walker -NIANGORAN JOACHIN -YAPI KOUASSI EMMANUEL -YAPO GERMAIN -APPIA APO -APPIA CHO -APPIA LUICIE -APPIA SOPIE -AKOMOU CHIA ANGELLE -DIAHOU APO CECILE -DIAHOU APO YVETTE -DIAHOU CHO YVONNE -KOUASSI ACHTÔH -KOUASSI GEORGETTE -KOUASSI GERMAINE dit Chakô -MAMBO KOUSSO -NIANGORAN CHENIN -NIANGORAN N'GUESSAN -N'CHO AMAN VALANTINE -N'CHO N'DIN JEANNETTE -N'CHO KOUSSO BEATRICE -N'CHO CLOTILDE -N'CHO M'BHO -YAPO GERMAIN dit Ayépiwo -YAPO APIE RONIE

J'ai trouvé auprès de vous tendresse et réconfort, affection et amour. Que cette même chaleur familiale qui nous entoure demeure toujours ; n'oublions donc pas que la vraie richesse d'une famille réside non dans la fortune qu'elle a amassée mais dans l'union entre ses membres.

VIIIYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A MES ONCLES ET TANTES -ASSI SEKA SIMPLICE -ABBE AFFO JEAN -AKOMOU N'CHO RAYMOND -YAPI YAPI FRANCOIS -YAPI N'CHO LUICIEN dit Baba Kotchio -YAPI AGNIN AGNES - YAPI YABA HELENE -YAPI BOKOZE Ce travail est aussi le vôtre recevez le comme le témoignage de mon tendre affection.

Que Dieu vous bénisse.

A MA CHER~E MON NEY YOLANDE (Etudiante en Sciences Economique et de Gestion)

Ta constante présence auprès de moi. Tes conseils et tes encouragements m'ont été d'un soutien précieux au cours de la confection de ce travail. Je t'en suis infiniment reconnaissant.

A MONS~EUR. PAlEU DJ~[BR.~l Je vous dédie ce travail pour votre soutien et votre affection.


IXYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A MONS~EUR AHU~ ATSE THOMAS d~i D0UG8Al L'homme qui m'a vu naître L'homme qui a supporté mes caprices L'homme qui m'a vu grandir Le moment que tu as tant attendu est arrivé Cette thèse je te la dédie en témoignage de mon affection et de ma profonde gratitude.

A M[ES HOMONYM[ES -SEKA GREGOIRE PACIFIQUE ADA -YAPI ROLAND EUNICE ADA

Je vous dédie cette thèse.

A lA FAM!llE YAP! YAP! MARCElVous m'avez toujours considéré comme votre fils et vous

m'avez apporté votre soutien sur tous les plans lorsque cela s'avérait nécessaire. Recevez cette dédicace comme manifestation de tout mon amour et de toute ma considération pour vous.


A lA fAM~llE D~AHOU AîSE JUlES è Ab~dj©J~ Sincères remerciements pour vos conseil, encouragements et soutien financier. Que Dieu accorde à vous et à votre famille toutes ses grâces de santé de bonheur et de paix.

XYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A LA FAM~llE ADOU~Y AKE MATH~AS à Ab~dj~~ Je vous dédie ce travail pour votre soutien et votre affection. Que Dieu vous accorde ses grâces.

A lA FAM!llE YAP~ EDY AlA~N à Ab!djamVous m'avez beaucoup appris, beaucoup donné ; vous m'avez

forgé. Cette thèse est la vôtre, le fruit de votre labeur. Que le Seigneur vous rende au centuple ce que vous avez fait pour moi.

A lA FAM!llE SEKA BATîHE PlACmE à D~~ou Merci pour votre soutien et conseils.

A lA FAM!llE YAPO AMAN PIERRE Sincères remerciements pour vos conseils et encouragements. Que le seigneur achève en vous ce qu'il a commencé et vous accorde sa grâce en abondance.

AUX SIECRIETAIRIES DU SERVICE D'IMMUNOLOGIE ET HIEMATOLOG~E -MADAME N'GUESSAN BLAH ELISABETH -MADAME KOUAKOU EPOUSE KOFFI MADELEINE


A lA FAM~llE KONANDR~ @J A~kdj©1nSincères remerciements pour vos conseils et encouragements.

A MADEMO~SEllE MONSEKElANY ANNE Je te dédie cette thèse.

Que Dieu te bénisse.

XI---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A lA FAM~ll[E ASSO ~ Agb(Q)V~~~~ Je vous dédie ce travail pour votre soutien et votre affection. Que Dieu vous accorde ses grâces.

A lA [FAM~llE ASS~ lBOKOZE A~ME Sincères remerciements pour vos conseils et encouragements. Que Dieu accorde à vous et à votre famille toutes ses grâces de santé de bonheur et de paix.

A lA FAM~llE AMOUGOUAASS~ PH~lHPE Je n'oublierai jamais votre simplicité, votre courtoisie, votre générosité et tout ce que vous faites pour moi.

Merci pour tout.

A lA FAM~llE KAKAYE ~GNACEToute ma gratitude et ma reconnaissance pour vos sages conseils et votre aide. Que Dieu accorde à vous et à votre famille toutes ses grâces de santé de bonheur et de paix.

A lA FAM~llE AHU~ N~CHO MAUR~CEMerci pour votre soutien.


A lA f AM~ll[E N~ANGORAN YA~O ~OMON ClAUD[E Merci pour m'avoir appris que fraternité, union, solidarité et entraide sont les seules valeurs qui conduisent à une vie paisible. Que le Seigneur vous accorde toutes ses grâces de santé, de paix, de prospérité et de bonheur à vous et à votre famille.

A FAM~llE N~ANGORAN N~ANGORAN f)~ERRE Merci pour votre soutien et conseils Que le tout puissant fortifie notre amitié.

XII Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A lA [FAM~llE AGBO YAOJe vous dédie cette thèse.

A lA FAM~ll[E AMON [ED~H G[EORG[ES Merci pour votre soutien ; ce travail est aussi le vôtre.


A TOUT LES RESORTISSANTS DU VILlAGE FIASSE A ABIDJAN Toute ma reconnaissance à vous.

A TOUS lES MEMlBRES DE : -La MUDEFIA (mutuelle pour le développement de Fiassé) -La MUTEF (mutuelle des étudiants de Fiassé)

Merci pour votre soutien et que Dieu tout puissant vous bénisse.

AîOUTE lA COMMUNAUTE V~llAGEO!SE DE F~ASSE (Commune de Yakassé Attobrou)

Je n'oublierai jamais votre générosité. Je vous remercie pour votre soutien moral, matériel, financier.

Merci pour votre mobilisation.

XIII----------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)

Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0

-ESCALIER A LA MODE -BOGNAN BOGNAN -REMUER LA TETE -LES SIX -LES ABEILLES ...

Merci pour votre soutien sans faille.

A îOUî[E lA COMMUNAUî[E D'ABONGOUA, D'AHU~IKO~, DE YAKASS[E.,ATîOlBROUi DiAlBRAD~N[E DE D~ANG,OlBO ...

Merci pour votre soutien et présence massive.

AMESA~NES -ASSI MATHIAS -ASSI N'CHO LEON -BLE KOHOU ERNESTE -DIAHOU ROGER -DIAHOU JEAN PAUL -N'DA FIRMIN -N'CHO YAPI (NDIA N'CHO ROGER) -SEKA ASSI GERMAIN

Je vous dédie ce travail.

A îOUS lES POl~C~ERS GENDARMES Eî M~l~îA~RES

RESORî~SSANîS DE F~ASSE Toute ma reconnaissance à vous.

XIV----------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


l[ES DOCî[EURS: -N'CHOH HUGUES EDY GUILLAUME -SEKA WILLIAMS ROCH -AGUIE AYE MARIUS ...

A vous je dédie ce travail.

A MES AM~S DE PROMOî~ON lES DOCîEURS : -ASSEMIAN LUDOVICK AKA -ASSI YAPO PAULIN -ASSI LOUIS ROBERT -ASSI BERNARD -YAPI N'CHO ALAIN -VANGA KOFFI MARIUS -TOKPA SOMPOHI JACQUES -TUO MAMADOU MELAIHE -TRA BI IRIE MICHEL ...

Recevez cette dédicace en signe de mon attachement fraternel et comme manifestation de mon amitié sincère.

Merci pour cette bonne collaboration.

XV ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A îOUS M[ES AM~S D~[ENFANC[E : -N'CHO EHOUEU JULES -YAPO YAPO ALFRED -ATSE YAPI COM -ASSIASSIATHANASE -NIANGORAN YAPI LAURENT -ADJE NAZAIRE ABOEN GUI JOSEPH -AKE KOHi THOMAS -ASSAMOI ASSAMOI -ASSI KAKOU VINCENT -N'DIA SEKA ABEL -YAPI YAPI ROLAND -AKOMOU YAPI SEVERIN


Yap~~~~01r~~~~=--:~=-::i~~---------XYI Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


v:-:~;-::-:;-------;~~--;::-:---:-:-------:-------:;:--;-;-;:----:-----;=:-:-:-:-=------:-----------~XVII Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A MA MARA!~E, Ma~ame AKA él)OUOO SEKA MARIE JEANNE Malgré vos lourdes responsabilités, vous avez spontanément accepté de parrainer cette cérémonie. Cela ne m'étonne pas car, j'ai été toujours marqué par votre simplicité, votre amabilité et par votre amour pour le prochain. Je suis tout aussi heureux d'être votre fils, raison pour laquelle je vous appelle « maman ». Que le Seigneur achève en vous ce qu'il a commencé et vous accorde grâce en abondance. A vous et à monsieur votre époux recevez mes sentiments de profonde admiration.

L'honneur que vous nous faites en acceptant de venir présider cette soutenance de thèse malgré vos nombreuses occupations nous fait sincèrement chaud au cœur. Je ne sais comment vous remercier pour tout ce que vous avez fait pour nous. Cette thèse est avant tout la vôtre et vous m'avez honoré en acceptant cette présidence. Que le Seigneur vous accorde toutes ses grâces de santé de paix et de prospérité.

XVIII---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A MONSIEUR lE PROFESSEUR SEl{A SEKA JOSEPH Pour tout ce temps passé à vos côtés durant mon parcours

universitaire ; pour m'avoir ouvert vos bras, écouté, consolé et conseillé dans mes moments difficiles ; pour m'avoir considéré comme votre fils je ne sais comment vous remercier. Mon admiration tant pour vos qualités morales que spirituelles ne cesse de grandir d'année en année. Vous êtes un modèle pour moi. Que l'Eternel accorde à vous et à votre famille toutes ses grâces.

AU DOCî[EUR AKR[E DAGRA rAUl Vous m'avez beaucoup appris, beaucoup donné ; vous m'avez

forgé. Cette thèse est la vôtre, le fruit de votre labeur. Que le Seigneur vous rende au centuple ce que vous avez fait pour moi.

AUX MEDEC~NS (Interne du service d'immunologie)

-DOCTEUR BRAVO -DOCTEUR N'GUESSAN ...

Pour avoir veillé à mes cotés et aidé dans mon travail ; cette thèse est aussi la vôtre.

Merci pour tout.

Je n'oublierai jamais votre courtoisie, votre générosité et tout ce que vous faites pour les jeunes. Votre présence à mes cotés m'honore.

Merci pour tout XIX ----------------------------

Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


Recevez toute ma reconnaissance.

A MONS~EUR LE MA~RE YAPO YAP~ DAUDEî Pour tout le soutien, tous les sages conseils à mon égard et en reconnaissance de l'affection que vous m'avez toujours portée, que ce travail vous témoigne toute ma profonde gratitude et toute ma reconnaissance. Que Dieu vous accorde un avenir radieux et vous garde longtemps. Merci une fois encore.

AU PROFESSEUR SOMBO MAMBO FRANCO~S : S~NCERES REMERC~EMENTS

Je ne sais comment vous remercier pour tout ce que vous avez fait pour moi, en m'acceptant dans votre laboratoire pour mener cette étude. J'ai été marqué durant ces jours passés à vos côtés par votre simplicité, votre amour effréné du travail, votre grande compassion pour votre prochain, votre humilité, votre foi. Que le Seigneur Dieu vous accorde toutes ses grâces de santé, de paix, de prospérité et de bonheur à vous et à votre famille.

XX ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A Î(Q)~~ (C~~i q~~ (Q)W]Î (C(Q)W]Îf~~~é à ~©1 ré©1~~~©1Î~(Q)W] d~ œ tr~v~~~ : ~~~œr~~ r~m~r~~~m~~m

-DOCTEUR ANON ADIKO -DOCTEUR PADJA BERNARD -DOCTEUR ASSI -DOCTEUR DASSE -DOCTEUR KABORE -DOCTEUR YAPO - MONSIEUR HIEN -MONSIEUR ASSI DIAHOU ACHILLE -MESSIEURS LES TECHNICIENS ET INGENIEURS :

.BAÏ GUSTAVE

.N'GUESSAN EMMANUEL

.KRAMO DENIS

.ASSIENIN CESARO

.BILE JONAS

.TOA JULES

.VAN JULES

.ASSOA AUGUSTIN

.VICTORIEN Toute ma gratitude et ma reconnaissance pour vos sages conseil

-A MESDAMES : .KOUASSI VIRGINIE .KOUADIO CATHERINE .GNAGNE MELESS PATRICIA

-A toute l'équipe du service d'entretien et de sécurité du laboratoire d'lmmunologie et d'Hématologie du CHU de Cocody.

Merci pour votre collaboration.

XXI---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A îOUS CEUX q~~ (Q)Wï)t étté (Q)~lb~~é Parce que je ne les ai pas cités ; je ne vous ai pas oublié, je vous ai tous porté dans mon cœur pendant ces longues heures de rédaction. Mais ces quelques pages auraient été insuffisantes pour vous citer tous. Je prie pour vous et vous savez chacun ce que je suis pour vous et ce que vous représentez pour moi. Nous nous comprenons du regard.

XXII ----------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


XXIII ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A NOTRE MA~îRE Eî PRE§~DENî DU JURY MONS~EUR lE ~ROFESSEUR KODO M~CHEl

-Professeur titulaire de Chirurgie Orthopédique et Traumatologique - Vice-doyen chargé de la recherche scientifique de l'UFR des Sciences Médicales de Bouaké - Membre de la société Ivoirienne de Chirurgie - Membre de l'association des orthopédistes de langue Française (AOLF) - Membre de la société internationale de chirurgie orthopédique et traumatologique (SICOT)

Cher maître, Votre simplicité, votre humilité, votre disponibilité sont pour nous un exemple de vie à suivre. Nous vous dédions ce travail en témoignage de notre reconnaissance. Veuillez trouver ici l'expression de notre profonde gratitude et de notre fidèle attachement.

XXIV Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A NOTRE MA~TRE MONS~EUR lE PROFESSEUR SANOGO ~BRAH~MA -Professeur titulaire d'hématologie -Chef de service adjoint du service d'hématologie clinique du CHU de Yopougon -Enseignant de l'UFR des sciences médicales d'Abidjan - Enseignant d'hématologie à l'école nationale des techniciens de laboratoires -Membre fondateur de la société ivoirienne d'hématologie (SIHI) -Membre fondateur de la société d'hématologie (S.AF.HEMA)

-Membre associé de la société ivoirienne de gynécologie obstétrique (S.I.G.O)

Au cours de nos études nous avons pu apprécier votre enseignement, votre compréhension du malade et votre grande générosité. En acceptant de codiriger ce travail et d'être notre juge, vous nous faites beaucoup d'honneur. Permettez que nous vous exprimions nos sentiments de profond respect.

XXV Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A NOîRE MA~îRE MONS~EUR LE PROFESSEUR SEKA SEKA JOSEPH -Professeur agrégé d'immunologie clinique et d'immunobiologie -Chef du département d'immunologie et de parasitologie de l'UFR des sciences médicales de Bouaké - Diplômé d'immunologie générale de l'institut Pasteur de Paris - Diplômé d'Etude Approfondie de Biologie Cellulaire et Moléculaire et Sciences de la Santé de l'Université de Rennes I en France -Membre fondateur de la société ouest africaine d'immunologie -Membre de l'association des anciens élèves de l'institut Pasteur de Paris -Membre de la société française d'immunologie -Ancien directeur du centre régional des œuvres universitaires (CROU) d'Abidjan -Directeur du cadre de vie au Ministère de l'Environnement et des Eaux et Forêts -PCA des écoles méthodistes de Côte d'Ivoire.

Cher maître, Plus qu'un Directeur de notre travail, vous êtes resté pour nous un père. Vous avez été le véritable artisan de ce travail. Adepte du travail bien fait, votre esprit de recherche et de perfection, votre rigueur et la clarté au travail, votre courtoisie, votre disponibilité et surtout votre humilité forcent l'admiration de tous ceux qui vous ont connu. Nous vous devons d'aimer l'lmmunologie et !'Hématologie. Trouvez en cette page, la haute estime et la profonde gratitude que nous vous portons. Que Dieu vous accorde toutes sortes de bénédictions.

XXVI---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A NOîRE MA~îRE MONS~EUR lE PROFESSEUR DJANHAN YAO -Professeur agrégé de gynécologie obstétrique et andrologie -Doyen de l'UFR des sciences médicales de Bouaké -Chef du service de gynécologie obstétrique et andrologie du CHU de Bouaké -Chevalier du mérite sportif -officier du mérite de l'enseignement supérieur

Cher maître, L'enthousiasme avec lequel vous avez accepté de juger notre travail n'a fait qu'accroître notre admiration pour vous. Mais nous n'avons pas eu cette chance d'apprendre suffisamment à vos cotés. Nous avons su apprécier votre simplicité votre humilité, votre courtoisie. Nous sommes convaincu de votre dynamisme et de votre rigueur au travail, de vos connaissances, car homme de science vous l'êtes, mais homme de grande culture vous l'êtes aussi. Vous nous faites l'honneur de juger notre travail, soyez en vivement remercié.

XXVII Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


A TOUS NOS MA~îR[ES a qui nous OOvons connnallœ, simp~cite, humilite et amour pourb prof~filon mooir.ale.

L'intérêt que vous portez à vos étudiants et votre savoir-faire font de vous une source intarissable à laquelle tous, nous venons nous abreuver. Trouver en cette page, l'expression de toute notre reconnaissance, de notre admiration et de notre profond respect. Recevez l'hommage d'un disciple qui promet de rester fidèle à l'image de ses maîtres.

:-:------:-::--:----:-----:--:-:----=----------------------~xx~vIII Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


ABREVIATIONSC~܊° : degrés CelsiusµL : microlitreCacl, : chlorure de calciumCHU : centre hospitalier et universitaireCNTS : centre national de transfusion sanguineColl. : collaborateurCROU : centre régional des œuvres universitairesDSAI : dépistage simple des agglutinines irrégulièresDu: Rhésus standard faibleD+: Rhésus D positifEDTA : Acide Ethylène Diamine Tétra-acétiqueF/: Duffy (a)Fyb: Duffy (b)g: grammeGR: Globule RougeH: HeavyIg: immunoglobulineJka: Kidd (a)Jkb: Kidd (b)Kpa: Kell (a)Kpb: Kell (b)L: light1: litreLea: Lewis (a)Leb: Lewis (b)Lu": Lutheran (a)Lub: Lutheran (b)Lw : Landsteiner et WinerMHNN: maladie hémolytique du nouveau néMin: minuteml: millilitreNaN3 : azide de sodiumP,oo: micropipette N°100P,ooo: micropipette N°1000P200 : micropipette N°200Psoo : micropipette N°500Pu: purRh: Rhésuss: secondeTr: toursUJ : unité internationale



INTRODUCTION 1

PREMIERE PARTIE: LES DONNES DE LA LITTERATURE 6

1-DEFFINITION 7 li-HISTORIQUE ? Ill-BASES GENETIQUES 13 IV-BASES BIOCHIMIQUES 14

V-LES DIFFERENTS SYSTEMES DE GROUPES SANGUINS ERYTHROCYTAIRES 16

A/SYSTEME ABO ET ASSOCIES 16 A 1) Système ABO 16

A1.1) les antigènes du système AB0 16 A 1.1.1) Les antigènes courants 16 A 1.1.2) Les variantes de A 1 et A2 17

A 1.1.3) La notion de phénotype et de génotype 17

A 1.1.4 )Les variantes faibles de A et de B 20 A 1.2) Les anticorps du système ABO 20

A 1.2.1) Structure générale des immunoglobulines 20

A 1.2.2) Les anticorps réguliers ou naturels 22 A 1.2.3) Les anticorps irréguliers ou immuns 22

A1.3) Techniques de phénotypage érythrocytaire ABO 23

A 1.3.1) Détermination de l'antigène globulaire par l'épreuve de BERTH-VINCENT 24

A 1.3.1.1) Principe 24 A 1.3.1.2) Mode opératoire 24

A 1.3.2) Détermination de l'antigène sérique par l'épreuve de SIMONIN 27

A 1.3.2.1) principe 27 A 1.3.2.2) Mode opératoire 27

A 1.3.3) Les difficultés de groupage ABO A2/ Les associés du système ABO 30

A2.1) Système Hh 30 A2.2) Système Lewis 30 A2.3) Les antigènes li 30 A2.4) système P 32


Mise au-point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO

B/ LES AUTRES SYSTEMES IMMUNOGENES DES GROUPES SANGUINS ERYTHROCYTAIRES 32

81/ Système Rhésus 32 B1.1) Les antigènes Rhésus 32

B1.1.1) L'antigènes O 33 B 1. 1. 2) Les autres antigènes du système

Rhésus 33 B1.2) les anticorps anti-Rhésus 34 B1.3) Détermination des antigènes Rhésus 35

B 1.3.1) Détermination de !'antigènes D ou Rhésus standard 35

B 1.3.2) Recherche de l'antigène 81 .3.3) Détermination des autres ou 36

Antigènes 37 82/ Système Kell. 38

B2.1/ Les antigènes du système Ke/1 38 B2. 2/ Les anticorps du système Ke/1 38

83/ système Duffy 38 84/ système Kidd 39 85 /Systeme MNSs 39 86/ Autres systeme 39

C/ DETERMINATION DES AUTRES SYSTEMES 39 VI- LES DIFFERENTES FREQUENCES OBSERVEES DANS LES

PHENOTYPES ABO EN COTE D'IVOIRE 40 VII- LES APPLICATIONS 42

A/ EN IMMUNOLOGIE MEDICALE 42 A1/ transfusions sanguine 45 A2/ Les greffes tissulaires et les transplantations 45

B/ EN PATHOLOGIE HUMAINE 45 81/ Association groupes sanguins et pathologies 45 82/ Transfusion sanguine 45

B2.1) Hémolyse intra vasculaire 46 82.2) Hémolyse extra vasculaire 46 B2.3) Sécurité transfusion ne/le 46

83/ Maladie hémolytique du nouveau né 47 C/ EN GENETIQUE HUMAINE 48

DEUXIEME PARTIE : NOTRE ETUDE 49 //-CADRE DEL 'ETUDE 50 Il- MA TER/EL ET METHODE 50

A/TYPE D'ETUDE 50



8/ POPULATION D'ETUDE 50 1-Critère d'inclusion 51 2- Critère de non inclusion 51 3-Recrutement des sujets 51 4-Taille de l'échantillon 51

Cl DETERMINATIONS 52 1-Phenotypage érythrocytaire ABO 52

1.1-Matériel et réactifs 52 1.2-Mode opératoire 52 1.2.1) Epreuve globulaire ou technique de BERTH-

VINCENT sur plaque d'opaline 53 1.2.2) Epreuve sérique ou technique de Simonin sur

plaque d'opaline 54 2-Recherche de la performance des anticorps anti-A,

anti-B et anti-AB dans les plasmas sélectionnés 54 2.1- Matériel et réactifs 54 2. 2- Méthode 55 2.3- Mode opératoire du test de performance 56

3- Recherche des anticorps immuns : (recherche d'agglutinines irrégulières) 60

3.1- Test en milieu salin 603.1.1- Matériel et reactifs 60

3.1.2- Mode opératoire 60 3.2- Le test de COOMBS indirect 61

3.2.1- Matériel et réactifs 61 3.2.2- Mode opératoire 60

D/CONSTITUTION DES POOLS DE PLASMAS ET LEUR TRAITEMENT 63

1-Stérilisation 64 1. 1- Matériel et réactifs 64 1.2- Mode opératoire 64

2- Recalcification 65 2. 1- Matériel et réactifs 65 2. 2- Mode opératoire 65

3- Filtration 65 4- Concentration 66 5- la coloration 66

E/ ETUDE COMPARATIVE DU GROUPAGE ABO PAR NOS REACTIFS ET LES REACTIFS DU COMMERCE 66

F/ TRAITEMENT DES DONNEES 66



Ill/RESULTATS 68 IV/ ANALYSE ET COMMENTAIRES DES RESULTATS 85 VI PERSPECTIVES 98 VII RECOMMANDATIONS 100

CONCLUSION 102 REFENCES BIBLIOGRAPHIQUE 104 SERMENT D'HYPPOCRATE 107



Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)

Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans Le système ABO

Les groupes sanguins érythrocytaires sont des allo-antigènes

de la membrane des globules rouges. Ce sont des marqueurs

allogéniques, génétiquement induits et génétiquement

indépendants les uns des autres. Ces groupes érythrocytaires, sont

groupés en systèmes. De nos jours, plus d'une vingtaine de systèmes de groupes

sanguins érythrocytaires ont été identifiés. Leur découverte a

révolutionné l'univers de la thérapeutique transfusionnelle,

permettant ainsi d'éviter les nombreux accidents enregistrés

pendant la période de leur méconnaissance.

Certains systèmes, notamment les systèmes ABO, Rhésus, Kell et

Duffy présentent un intérêt capital en immunologie médicale. Les

antigènes des systèmes ABO et Rhésus demeurent les plus

importants en thérapeutique transfusionnelle car, une transfusion

incompatible dans ces systèmes entraîne inéluctablement des

accidents plus ou moins graves. Le système ABO qui fait l'objet de notre étude est caractérisé par

l'existence dans le plasma de l'individu, des anticorps spécifiques

des antigènes absents de la membrane du globule rouge. Ces anticorps sont dits naturels car il est difficile de prouver

l'existence d'une immunisation préalable à leur développement.

Ils sont dits aussi réguliers parce qu'ils sont toujours présents chez

les individus et sont aussi spontanément agglutinants ; c'est cette

propriété qui a été utilisée pour leur mise en évidence. Ainsi un

individu du groupe B possède-t-il de façon naturelle des anticorps 2


Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans Le système ABO

anti-A, les sujets du groupe A possèdent quant à eux des anticorps

anti-B et les sujets du groupe O ont à la fois les anticorps anti-A et

anti-8, quand les sujets du groupe AB n'en possèdent aucun.

Le phénotypage érythrocytaire ou groupage sanguin dans le

système ABO se fait par la mise en évidence, simultanément, des

antigènes sur la membrane érythrocytaire et des anticorps naturels

correspondant dans le plasma ou le sérum, selon deux techniques :

une technique sérique ou technique de SIMONIN MICHON et un

test globulaire ou technique BETH-VINCENT-TZANK. Les anti

sérums utilisés peuvent être de type monoclonal, produits par la

technique des hybridomes de KÔHLER et MILSTEIN [8] ou de type

polyclonal à partir du plasma humain [2, 13]. L'utilisation de plasma humain comme réactif, nécessite un

traitement préalable tenant compte de certains critères de

performance tels l'avidité et l'intensité de l'agglutination.

La plupart des pays africains dont la Côte d'Ivoire importent chaque

année des quantités importantes de réactifs de groupages sanguins

produits par des multinationales. Les difficultés

d'approvisionnement et le coût élevé de ces produits sanguins à

caractère diagnostic constituent l'une des entraves majeures à un

fonctionnement correct et régulier des laboratoires d'immunologie

et hématologie en Côte d'Ivoire.

A titre d'exemple : au CHU de Cocody, les dépenses

d'approvisionnement en réactifs de phénotypage érythrocytaire

dans le système ABO se chiffrent chaque année à 1.386.000F. 3



Dans un souci économique pour nos pays Africains en général et

pour la Côte d'Ivoire en particulier, qui va entrer dans une période

post-crise, la possibilité d'utilisation d'anticorps polyclonaux comme

réactifs serait très avantageux.

Il nous est apparu donc nécessaire de mettre au point et affiner la

technique de production de tels anticorps polyclonaux à partir des

plasmas humains, pour le phénotypage érythrocytaire, dans le

système ABO.

• Objectif général Nous nous sommes ainsi fixés comme objectif général, la maîtrise

de la technique de production des anticorps polyclonaux anti-A,

anti-B et anti-AB ; la finalité étant de mettre à la disposition des

laboratoires de nos formations sanitaires, des réactifs de

phénotypage d'antigènes érythrocytaires dans le système ABO.

• Objectifs spécifiques

Les objectifs spécifiques sont:

1- établir les critères de performance que sont l'avidité,

l'intensité, le titre et le score des plasmas sélectionnés.

2- contrôler la spécificité des plasmas sélectionnés.

3- rapprocher les caractéristiques de nos anticorps de

celles des réactifs vendus dans le commerce.

4 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


Pour atteindre ces objectifs, notre travail s'articulera autour du plan

suivant, après cette introduction: I-LES DONNEES DE LA LITTERATURE

II-NOTRE TRAVAIL

III-RESULTATS

IV-ANALYSE ET COMMENTAIRES

V-PERSPECTIVES

VI-RECOMMANDATIONS

CONCLUSION

5Yapi Yapi Aurélien Doctorat e11 Médecine (Thèse d'Etat)


JPJPŒMXJEJPŒ JPAR1rXJE:

DONNEE§ DE LA LiîîERATIJRJE



1- DEFINITION DES GROUPES SANGUINS ERYTHROCYTAIRES

[4, 5]

La notion de groupes sanguins érythrocytaires est fondée, sur

le fait qu'il existe, sur les hématies humaines et sur les cellules de

divers tissus de l'organisme, des substances antigéniques

appelées, facteurs de groupes ou antigènes érythrocytaires ou

agglutinogènes. Ces substances sont de conditionnements

génétiques, c'est pourquoi elles sont transmises héréditairement.

Ces molécules sont immunogènes, ce qui explique leur désignation

sous le vocable d'antigènes de groupes sanguins.

11- HISTORIQUE

L'histoire des groupes sanguins remonte un peu plus loin dans

le temps, quand déjà, HARVEY a découvert le principe de la

circulation sanguine et qu'il a semblé logique de chercher a

introduire du sang dans les veines des malades, afin de les guérir

de leur maladie [7,10,15]. En 1900, LANDSTEINER observa que les hématies humaines

étaient agglutinées par le sérum de certaines personnes et non par

celui de d'autres. [10, 15] C'est la base de la découverte du

système ABO. Ceci impliquait l'existence d'Anticorps sériques

définissant au moins deux variétés d'antigènes érythrocytaires

majeurs, A et B. En 1902, ses élèves, DECASTELLO et STURLI ont décrit le

phénotype AB d'étendue plus réduite. En répétant l'expérience de



LANDSTEINER par le choix d'un échantillon de sang par groupe, la

réaction du sérum de chacun avec chaque échantillon de globules

rouges, a donné les résultats au tableau(!), où le signe ( +) signifie

qu'il s'est produit une agglutination et le signe (-) l'absence

d'agglutination.

8Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


Tableau 1 : EXPERIENCE DE LANDSTEINER DANS LA

DECOUVERTE DES GROUPES SANGUINS [10,15]

GLOBULES ROUGES

SERUM 0 A B AB

0 - + + +

A - - + +

B - + - +

AB - - - -

9 Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)


Ces réactions s'expliquent par le fait que, les globules rouges

portent des substances agglutinables ou agglutinogènes (ou encore

facteurs de groupes), tandis que le sérum contient des substances

agglutinantes ou agglutinines.

Les agglutinogènes sont appelés substances A et B et les

agglutinines sont appelées substances anti-A et anti-B. La

présence de l'un des facteurs de groupes sur le globule rouge

implique l'absence dans le sérum de l'agglutinine correspondante.

Mais, quand les globules rouges ne portent pas le facteur,

l'agglutinine correspondante se trouve toujours dans le sérum. Le

sérum de l'individu n'agglutine pas ses propres globules rouges.

C'est en 1910 que VON DUNGERN et HIRSZFERD démontrèrent

que le groupe A comprenait en réalité deux variétés [5].

-Une variété « A forte » appelé A1, qui agglutine avec la

même intensité avec tous les sérums anti-A, pourvu qu'ils soient

d'un titre élevé.

-Une variété « A faible » appelé A2, qui agglutine avec les

sérums anti-A mais n'agglutine pas avec I'anti-Ar.



TABLEAU Il: VARIANTES DE A [5]

Hématie A1 Hématie A2

Anti-A1 + -

Anti-A + +



Le système ABO ainsi établi est le premier système génétique

connu. Ce système se caractérise par sa transmission héréditaire. Il

a permis la classification des individus dans l'espèce humaine ;

d'où la notion d'allo-antigènes et d'allo-anticorps.

En dehors du système ABO d'autres systèmes ont été décrits.

En 1927, LANDSTEINER et LEVINE immunisent des animaux avec

des hématies humaines. Ils découvrent alors le système MNSs et P

se transmettant également sur le mode héréditaire [10, 15].

En 1940, LANDSTEINER et WIENER, par immunisation de lapins

par le sang de singe Macacus Rhésus découvrent l'antigène Lw [9,

10, 15]. Mais c'est en 1939 que LEVIN E accomplit des progrès

décisifs pour l'immuno-hématologie naissante, en montrant la

possibilité d'immunisation à l'intérieur d'une même espèce, et ce

par l'apport d'hématies d'un autre individu ; c'est l'allo

immunisation.

En effet, LEVINE met en évidence dans le sérum d'une femme

venant d'accoucher d'un enfant atteint d'érythroblastose fœtale, un

anticorps reconnaissant des antigènes de membrane des hématies

du père ainsi que ceux de l'enfant ictérique.

L'antigène ainsi reconnu au niveau des hématies humaines est au

début confondu avec l'antigène Lw (antigène LANDSTEINER et

WIENER) découvert après hetero-immunisation de lapin ou de

cobaye par les hématies de Macacus Rhésus ; d'où le nom de

Rhésus qui lui a été donné à tort [10, 15].L'érythroblastose fœtale

apparaît liée à !'allo-immunisation de la mère Rhésus négatif contre 12



l'antigène Rhésus dont le fœtus a hérité de son père. Il ne s'agit

plus de la formation spontanée d'anticorps naturels comme dans le

système ABO de LANDSTEINER, mais de la réaction classique

d'un organisme dépourvu d'un marqueur génétique, à l'introduction

de ce marqueur. Très rapidement, les techniques de recherche des anticorps

anti-Rhésus ont été mises au point, en particulier la réaction

imaginée par COOMBS, MOURANT et RACE en 1945 [10,15]

Ces techniques sont alors appliquées de façon systématique à

l'étude des sérums des malades polytransfusés ou des multipares,

dans le but de rechercher la présence d'anticorps permettant de

définir d'éventuels allo-antigènes nouveaux. Ainsi sont découverts, sous l'impulsion de RACE et SANGER,

de très nombreux antigènes identifiant de nouveaux systèmes de

groupes sanguins, notamment les systèmes Kell, Duffy et Kidd

[10,11,12,15].

Ces découvertes se sont poursuivies jusqu'aujourd'hui où, vingt-six

systèmes de groupes sanguins érythrocytaires indépendants sont

identifiés [1 O]. Ill -BASES GENETIQUES

Les groupes sanguins érythrocytaires se répartissent en systèmes

dont chacun constitue un ensemble indépendant d'antigènes

génétiquement contrôlés.

C'est-à-dire :



- que dans la transmission des caractères des parents aux

enfants, les groupes sanguins s'ignorent totalement les uns les

autres. Ils résultent d'une ségrégation indépendante. Aussi chez un

sujet ABMN, le caractère A est transmis avec la même probabilité

soit avec le caractère M, soit avec le caractère N. Les systèmes

ABO et MN sont donc deux ensembles indépendants.

- que ces caractères sont d'ordre immunologique ; ils peuvent

induire la formation d'Anticorps chez le sujet qui ne les possède

pas. Ils sont identifiés grâce à ces anticorps.

- que ces substances sont le résultat du fonctionnement des gènes

de la membrane du globule rouge. Les gènes qui les commandent

sont situés sur des chromosomes connus : Les gènes du système

ABO sont situés sur le chromosome N° 9, quand ceux du système

Rhésus se trouvent sur le chromosome N° 1 et ceux des systèmes

Duffy et P respectivement sur les chromosomes N° 1 et N° 6. Les

systèmes Rhésus et Duffy dont les gènes sont situés sur le même

chromosome sont dits syngéniques [10, 15]. La synthèse de certains de ces antigènes s'effectue au sein de

l'érythroblaste. La substance Lewis est un Antigène soluble venu du

plasma, de la salive et des autres sécrétions et qui, secondairement

est absorbée sur la membrane du globule rouge. [10, 15] IV- BASES BIOCHIMIQUES

Les antigènes de groupes sanguins érythrocytaires sont des

produits des gènes. Leur structure biochimique est connue. Il s'agit

de protéines pour la plupart. Il en existe qui sont des glycolipides 14


Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érytlirocytaires dans le système AB 0

comme la substance H, des sphingolipides comme l'antigène Lewis

plasmatique.

D'autres sont des glycoprotéines [10, 15].C'est la fraction

glucidique qui porte la spécificité des groupes sanguins.

Ces antigènes ne sont pas des produits primaires des gènes ABO,

H ou Lewis. [10, 15]. Les produits primaires sont des enzymes. En

effet, ces antigènes sont le résultat de l'activité spécifique

d'enzymes spécialisés, appelés glycosyltransferases [10, 15]. Pour la plupart des gènes, on connaît l'enzyme spécifique

Ainsi:

• La 3-Alpha-galactose transférase pour l'antigène B

• La 3-0-N-acetyl-galactosyl transférase pour l'antigène A

• La 2-Alpha fucosyltransferase pour l'antigène H

• La 4-2-Alpha fucosyltransferase pour Leb

• La 4-Alpha fucosyltransferase pour Lea

Lorsque l'antigène est une glycoprotéine on a environ 80% de

polysaccharide sur lesquels se greffe un faible pourcentage de

protéine.

Pour chacun de ces antigènes de groupe, il existe un sucre immuno

dominant connu. Ce sucre est

o Le N-acetyl-galactosamine pour la substance A

o Le Galactose pour la substance B

o Le Fucose en 4 pour la substance Lewis

o Le Fucose en 2 pour la substance H.



Les études biochimiques ont permis d'élucider de façon définitive,

les relations existant entre les systèmes Lewis, Hh, li (la substance

1 est présente sur les substances précurseurs ABH) qui

fonctionnent donc en association avec le système ABO.

V- LES DIFFERENTS SYSTEMES DE GROUPES SANGUINS

ERYTHROCYTAIRES

A/ LE SYSTEME ABO ET ASSOCIES

A1) LE SYSTEME ABO

A1.1) Les antigènes du système ABO

A1.1-1) les antigènes courants [6]

Les phénotypes ABO ou groupes sanguins ABO sont définis

par l'existence concomitante d'antigènes membranaires et

d'anticorps naturels plasmatiques. Il s'agit d'un système pouvant se

définir d'une part, par des antigènes, d'autre part, par des

anticorps.

Deux antigènes peuvent être reconnus à la surface des hématies :

les antigènes A et B qui définissent quatre groupes sanguins :

~ Le Groupe A, si l'antigène A est seul présent sur les

hématies du sujet. ~ Le Groupe B, si l'antigène B est seul présent.

~ Le Groupe AB, si les antigènes A et B sont tous les deux

présents ~ Le Groupe 0, si aucun des antigènes A ou B n'est présent.



A1.1-2) les variantes A1 et A2 Cette subdivision en phénotype A1 et A2 conduit à l'identification de

six (6) phénotypes courants A1 ; A2 ; B ; A1 B ; A2B ; 0, dans le

système ABOA1.1-J) Notion de phénotype et de génotype

Le phénotype se définit comme l'expression visible du groupe

sanguin ; c'est-à-dire, le caractère visualisable par les techniques

de détermination.

Le génotype est l'expression non visualisable par les techniques de

détermination et correspond à la somme du patrimoine génétique

transmis par les deux parents (Tableau IV)



TABLEAU 111 : EXPERIENCE DE LANDSTEINER [10, 15]

GROUPES Antigène Anticorps

globulaire plasmatique

A A Anti-B

B B Anti-A

AB AB Aucun

0 Aucun Anti-A Anti-B



TABLEAU IV : GENOTYPES ET PHENOTYPES DU SYSTEME ABO [6]

PHENOTYPES GENOTYPES POSSIBLES CORRESPONDANTS

A1 A1 A1 A1 A2 A10

A2 A2A2 A20

B B B BO

A1B A1B

A2B A2B

0 00



A1.1-4) les variants faibles de A et de B Les phénotypes faibles, sont des sujets dont les hématies ont, dans

les conditions habituelles de groupage, une réactivité inférieure à

celle de l'hématie A2. Ce sont A3, Ax, Am, Ael, B3, Bx, Bm, Bel [5].

A1.2) les anticorps du système ABO Les anticorps anti-érythrocytaires sont comme tout type d'anticorps

des immunoglobulines dont la structure est bâtie sur un modèle de

base commun qui est celui des lgG

A1.2-1) structure générale des immunoglobulines

Les molécules d'immunoglobuline définissant cinq classes (lgG,

lgA, lgM, lgD, lgE) comportent toutes 4 chaînes polypeptidiques

groupées en 2 paires de tailles inégales :

- D'une part, deux chaînes lourdes dites H (Heavy)

identiques, 2 gammas, 2 alphas, 2 mus, 2 deltas, 2 epsilons

respectivement pour les lgG, les lgA, les lgM, les lgD et les

lgE.

- D'autre part, deux chaînes légères dites L (Light) identiques,

soit 2 kappa soit 2 lambda.

Les chaînes lourdes sont unies entre elles par un ou

plusieurs ponts dissulfures intercartenaires. Les chaînes

légères sont unies aux chaînes lourdes par un pont

dissulfures intercartenaires très proche de l'extrémité

carboxyle terminale.

20 ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)


ITES Ac Régionvariable

l .xtrcmité 112

/onecharnicre

Rcsion e, constante

xtrémité NH2

Fab

Fe

Extrémité - H

Figure 1 : Structure de base des immunoglobulines [3]



Les anticorps se divisent en anticorps réguliers ou naturels et en

anticorps irréguliers ou immuns.

A1-2-2) les anticorps réguliers ou naturels Ils existent dans le sérum humain de façon constante sans

stimulation antigénique connue. Ils sont toujours présents dans le

sérum du sujet, dès que l'antigène correspondant est absent sur la

membrane du globule rouge. Ces anticorps ne sont pas présents à

la naissance, mais apparaissent progressivement chez l'enfant

entre O et 6 mois. Les anticorps naturels appartiennent à la classe

des lgM et sont capables d'agglutination spontanée in vitro.

A1.2.3) Les anticorps immuns ou irréguliers A côté des anticorps naturels, peuvent exister des anticorps

immuns anti-A ou anti-8, fortement hémolysants, constitués à la

fois d'lgG et lgM mais à prédominance lgG. Ces anticorps immuns

peuvent apparaître :

;;.,, par hétéro-immunisation due à des substances d'origine

animale ou bactérienne, riches en substance A (la substance B

n'est pratiquement jamais en cause).

Les vaccinations anti-diphtérique et anti-tétanique peuvent induire

une telle immunisation, du fait de la présence, dans leur milieu de

culture, de bacilles, d'extraits d'estomac de porc riche en substance

A.

;;.,, par allo-immunisation lors de la grossesse, si le sang du fœtus

est incompatible avec celui de la mère dans le système ABO, ou lors

d'une transfusion d'hématies incompatibles. Ces anticorps 22



apparaissent entre le 5e et 1 O" jour après la stimulation antigénique,

et persistent quelques semaines voire quelques mois après

l'immunisation. La détection de ces anticorps est d'un grand intérêt

pratique chez les donneurs de sang, car ils sont susceptibles

d'entraîner des accidents hémolytiques sévères.

A1-3) techniques de phénotypage érythrocytaire ABO [1 O] Le groupage sanguin repose sur la mise en évidence des antigènes

globulaires (Réaction de BETH VINCENT) et des anticorps

plasmatiques (réaction de SIMONIN), par une réaction

d'agglutination.

Au laboratoire des règles impératives sont à respecter. Il faut:

- réaliser en parallèle les épreuves globulaires et sériques,

- conduire les manipulations par deux techniciens différents

avec des réactifs provenant de lots différents.

Utiliser des réactifs témoins :

-Térnoin dit auto : sérum du malade plus globules rouges du

malade.

•Témoin dit allo: sérum du malade plus globules rouges de

phénotype O (mise en évidence éventuelle d'un allo anticorps)

• Témoin AB: sérum AB plus globules rouges du malade.

Les différentes épreuves s'effectuent à la température du

laboratoire.

Ces deux épreuves peuvent être réalisées sur plaque d'opaline, sur

plaque de verre, en tube ou sur gel. Nous décrivons dans la



deuxième partie notre étude, les deux épreuves sur plaque

d'opaline

A1.J-1) détermination de l'antigène globulaire par l'épreuve de BETH VINCENT

A1.3.1 -1) Le principe C'est une épreuve globulaire qui consiste à mettre en

évidence, des antigènes présents sur les hématies à partir

d'anticorps (antisérums) spécifiques anti-A et anti-B

A1.3.1 -2) Mode opératoire Épreuve globulaire en tube

Cette épreuve s'effectue en deux temps.

-Dans un premier temps, laver les hématies à tester trois fois à

l'aide de sérum physiologique à 9° / 00 et les mettre en suspension

globulaire à 5% ou à 2%.

-Le deuxième temps consiste à mettre respectivement dans trois

tubes à hémolyse bien identifiés, une goutte d'anti-sérum anti-A,

une goutte d'anti-sérum anti-B et une goutte d'anti-sérum anti-A+B.

-Une goutte d'hématies à tester en suspension 5% est ajoutée

dans chaque tube contenant l'anti-sérum.

-Mélanger par agitation puis une centrifugation pendant 30

secondes en 2000tr/min.

-Faire la lecture (recherche d'agglutination ou non)



Interprétation

Lors des réactions en tube, la réaction est lue macroscopiquement

en agitant doucement les tubes de façon à détacher le culot

globulaire. Si les hématies se détachent en amas (agglutination),

avec un liquide de fond clair, la réaction est dite positive. Si

l'agitation redonne une suspension homogène, la réaction est

négative.

Epreuve globulaire en gel

Dans des micro-tubes contenant un gel, sont ajoutées une goutte

d'anti-sérum anti-A, une goutte d'anti-sérum anti-B, ou une goutte

d'anti-sérum anti-AB par tube et une goutte de la suspension

globulaire à 2%. La lecture se fait après 30min d'incubation suivie

d'une centrifugation à 3000 tr/min pendant 1 Omin.

Interprétation

La réaction est dite positive quand les hématies se trouvent au

dessus du gel. Elle est dite négative quand les hématies se

trouvent dans le fond des micros tubes.

25Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)


î--A-~] B 1 D r1011: 1 W,l f'' H '.) Ir '1JI

•.. q("J 0 - (')C'Jg '-"

1-AHG AHG AHG

Figure 2 : résultat du groupage sanguin ABO par technique sur gel.



A1.3.2) épreuve de SIMONIN A1.J-2-1) Le principe

Il consiste à mettre en évidence les anticorps naturels présents

dans le sérum à l'aide d'hématies tests A1, A2 et B.

A1.J-2-2) Mode opératoire

Épreuve en tube

-Laver trois fois les trois hématies tests A1 A2 et B en eau

physiologique.

-les mettre en suspension à 5%

-identifier trois tubes à hémolyse numérotés.

-ajouter par tube une goutte des hématies test à 5% (A1, A2, B)

-ajouter ensuite dans chaque tube contenant des hématies tests

une goutte du sérum à étudier.

-agiter pour mélanger et faire une centrifugation à 3000 tr/min

pendant une min.

-la lecture se fait par agitation douce du tube à hémolyse.

Après un mélange par agitation et une centrifugation de 1 min à

2000 tr/min, noter les agglutinations.

Interprétation

Dans les réactions en tube, la réaction est lue

macroscopiquement en agitant doucement les tubes de façon à

détacher le culot globulaire. Si les hématies se détachent en amas



(agglutination), la réaction est dite positive. Si l'agitation redonne

une suspension homogène, la réaction est négative.

Ce résultat du groupage n'est considéré comme valable que

s'il y a une concordance entre les épreuves sériques et globulaires,

et entre les deux techniciens.

A1.3.3) Difficultés de groupage

Dans certaines conditions, l'identification des groupes dans le

système ABO n'est pas aisée. Ainsi on peut noter :

- des cas de double population ou les agglutinats apparaissent sur

un fond rosé constitué par les globules rouges non agglutinés :

Cas rencontrés au cours des leucémies ou après la transfusion de

sang O à un sujet A ou B.

-le phénomène de rouleau érythrocytaire où les hématies

sédimentent en piles d'assiettes.

-Le desséchement de la goutte qui se craquelle.

28 ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


Tableau V: RESULTAT DU GROUPAGE SANGUIN ABO PAR LES EPREUVES DE BETH VINCENT ET SIMONIN.

EPREUVE DE EPREUVE DE BETH VINCENT SIMONIN GROUPE Serum Serum Serum Serum Serum Globule Globule Globule

test anti test anti test anti test anti test anti rouge rouge rouge

A B AB A1 H test A1 Test A2 Test B

A1 + - + + - - - +

A2 + - + - + - - +

B - + + - + + + -

A1B + + + + - - - -

A2 B + + + + - - -

0 - - - - + + + +



A2) Les associés du système ABO A2-1) Système Hh [4]

Le système Hh est constitué de deux allèles : L'allèle H de grande

fréquence et l'allèle exceptionnel h considéré comme amorphe.

L'allèle H est responsable de la synthèse de l'enzyme 2-a-L-fucosyl

transférase dont le rôle est de transporter un Fucose sur un

substrat initial, donnant ainsi naissance à la substance H, elle

même substrat de A et B.

L'antigène H est très vite apparu comme ubiquitaire, mais son

expression est variable chez les individus selon le groupe sanguin

auquel ils appartiennent. La quantité de H est très importante sur

les hématies 0, puis par ordre décroissant sur les hématies A2, B,

A2B, A1B, A1.

Les phénotypes déficitaires en H sont exceptionnels (il existe

seulement quelques dizaines de famille au monde) et ils sont liés à

l'existence en double dose du gène h : ce sont les phénotypes

Bombay qui se caractérisent également par l'existence d'un

anticorps naturel Anti-H dans le plasma. Du fait de ce déficit en

substance H la traduction des gènes du système ABO normalement

présents dans les érythroblastes est inhibée. Les individus Bombay

n'expriment pas d'antigènes A ni B mais leurs sérums contiennent

des anticorps naturels anti-A et ou anti-B.

A2-2) Système Lewis [6] Il existe dans la salive une substance appelée substance LEWIS

dont la présence est également contrôlée par un système

------------------------- 30Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


génétique particulier à deux allèles : Le le. Le gène Le induit la

production d'une enzyme la 1-4-a-L-fucosyl transférase, qui

détermine l'apparition de l'antigène soluble Lewis a (lea), chez les

sujets possédant le gène Se (sujet dit sécréteur) et H. L'enzyme

produite par les gènes Le, entre en compétition avec l'enzyme H

pour convertir le précédant substrat (Lewis a en substance Lewis

b ). L'antigène Lewis est un antigène soluble, qui s'absorbe

secondairement à la surface des hématies, définissant les

phénotypes érythrocytaires Le (a+) et Le (a-).

Les anticorps anti-Lewis les plus fréquents et les plus importants

sont les anticorps anti-Le" Le'', Ce sont des lgM d'origine naturelle

qui réagissent à basse température. Comme ces anticorps sont

normalement naturels, ils peuvent être dangereux à la première

transfusion. Il est possible que le système Lewis joue un rôle dans

le rejet des transplants rénaux. [1 O] A2.3) Antigènes li [6]

Ils représentent une exception parmi les antigènes de groupes

sanguins humains, car ils sont définis par des auto-anticorps. De

plus ils ne constituent pas un véritable système de groupe sanguin

car, la substance i apparaît comme le substrat de 1.

La plupart des anti-1 ou anti-i puissants sont des auto-anticorps

froids de classe lgM monoclonales trouvées dans les maladies

chroniques des agglutinines froides (hémopathies malignes). Ils

sont très largement présents dans les tissus et dans les liquides

biologiques (salive, liquide amniotique). 31 ----------------------------



Les antigènes I et i présentent des relations avec les antigènes

ABH et P1.

A2-4) Système P [6]

Il a été découvert par LANDSTEINER et Levine en 1927 au

cours des travaux qui permirent la découverte du système MNSs. Il

est composé de trois phénotypes P, P1 et P2.

8) LES AUTRES SYSTEMES DE GROUPES SANGUINS

ERYTHROCYTAIRES.

Ce sont les systèmes Rhésus, Kell, Duffy, Kidd et MNSs dits

immunogènes dont certains antigènes peuvent être à l'origine de

conflits immunologiques transfusionnels ou foeto-maternels.

Suivant leur pouvoir immunogène, ces antigènes peuvent être

classés par ordre décroissant: l'antigène D, l'antigène Kell,

antigène C et E, antigène Fya, antigène Jk" et ensuite les

antigènes S et s.

81) Système Rhésus [6]

Ce système est d'un intérêt considérable en transfusion

sanguine et en obstétrique, de par l'immunogénicité remarquable

de ces antigènes notamment l'antigène D.

81-1) les antigènes Rhésus

A ce jour plus de 40 antigènes Rhésus ont été décrits. Ce qui

démontre sa complexité. Nous nous limiterons cependant aux cinq

principaux antigènes qu'il convient de connaître, c'est-à-dire les

antigènes D, C, c, E, e.



81.1-1) Antigène D

L'allo-anticorps de Levine discrimine à la surface des hématies un

antigène que l'on a dénommé D. L'on appelle par convention

Rhésus positif, les 85% de sujets dont les hématies sont

agglutinées par cet allo-anticorps et qui possèdent donc

l'antigène D, et Rhésus négatif les 15% d'individus dont les

hématies sont dépourvues de cet antigène.

Il existe deux variantes de l'antigène D [4] - Le D faible ou ou regroupe de manière générale les diminutions

d'expression antigénique D de nature quantitative, associées à un

phénotype Rhésus positif. Le sujet porteur de D faible, doit être

considéré comme un sujet Rhésus positif qu'il soit donneur ou

receveur de sang. - Le D partiel est réservé au rare individu o+ capable de développer un allo-anticorps anti-D à la suite d'une immunisation par

transfusion ou grossesse. Ces allo-anticorps anti-D réagissent avec

toutes les hématies D+ normales sauf celles de certains sujets D

partiels. 81-1-2) autres antigènes du système Rhésus [6]

Après la découverte de l'anticorps anti-Rhésus, ont été mis

en évidence d'autres anticorps qui n'agglutinent pas dans les

mêmes proportions que l'anti-D et qui reconnaissent de ce fait des

déterminants antigéniques autres que le D.

Ainsi ont été décrits les antigènes suivants :

L'antigène C présent chez 70% des individus 33



L'antigène E présent chez 30% des individus

L'antigène c présent chez 80%des individus

L'antigène e présent chez 98% des individus.

On a observé, de plus, des associations préférentielles dans la

distribution de ces antigènes. Ainsi les antigènes C et E se

rencontrent plus fréquemment chez les sujets Rhésus positifs que

chez les sujets Rhésus négatif. Il convient de noter que les

antigènes c et e sont antithétiques respectivement de C et E, ce qui

signifie que tout individu C négatif est nécessairement c positif et

inversement ; il en est de même pour les antigènes E et e.

81.2) Les anticorps anti-Rhésus

Ces anticorps ont un optimum thermique élevé. Ils ne

réagissent qu'à la température de 37°C. Contrairement aux

anticorps anti-A ou anti-B dits naturels du système ABO, la grande

majorité des anticorps dans le système Rhésus, résulte d'une

réponse immunitaire induite par une grossesse ou une transfusion

sanguine incompatible. L'antigène D est le plus immunogène, suivit

des antigènes E et c. 11 est responsable de la majorité des

accidents immunologiques graves au cours de la maladie

hémolytique par immunisation fœto-maternelle du nouveau né et

des transfusions incompatibles. La forte immunogénicité de

l'antigène D commande le respect de la compatibilité Rhésus entre

le donneur et le receveur en pratique transfusionnelle.

Les autres antigènes du système Rhésus sont significativement

moins immunogènes et l'apparition d'anticorps est donc moins 34-------------------------



fréquente après une transfusion ou une grossesse incompatible.

Cependant la fréquence d'immunisation n'est pas négligeable et

leur présence contre-indique toute transfusion incompatible pour

chacun des antigènes C, E, e, c.

Il est donc important de respecter la compatibilité pour les cinq

antigènes du système Rhésus dans les transfusions de globules

rouges, spécialement chez les patients de sexe féminin, avant la

ménopause et dans les pathologies impliquant des transfusions

répétées comme dans la drépanocytose, les insuffisances rénales

chroniques.

81.3) Détermination des antigènes Rhésus 81.3.1) Détermination de l'antigène D ou Rhésus

standard Cette détermination peut s'effectuer sur plaque chauffante

(Rhesuscop) ou en tube.

MODE OPERATOIRE

• Méthode sur plaque - Le sang à tester est prélevé sur anticoagulant, de préférence

l'EDTA.

- Sur la plaque chauffante à 37°C , on dépose une goutte de sérum

test albumineux anti-D

- On ajoute une goutte de globule à tester

-On mélange les deux gouttes à l'aide du fond d'un tube à

hémolyse,



- On Balance lentement la boite chauffante autour de son grand

axe.

-on effectue la lecture au bout de trois minutes.

INTERPRETATION L'agglutination doit être nette et apparaître au bout d'une ou deux

minutes maximum.

• Méthode en tube

-On lave trois fois les hématies à l'aide de sérum physiologique et

on les remet en suspension à 5% dans un tube à hémolyse bien

propre -On dépose dans un autre tube à hémolyse, une goutte de sérum

test anti-0.

-On ajoute une goutte de la suspension globulaire à 5%

-On incube au bain marie à 37°C pendant 20min, puis on centrifuge

à 2000tr/min pendant une minute.

-On incube à nouveau pendant 3 min à 37°C. -On effectue la lecture par agitation douce du tube à hémolyse.

INTERPRETATION

L'agglutination est habituellement nette. Si la réaction est douteuse ou négative, il est alors nécessaire de

faire la recherche d'un antigène faible le ou par exemple.

81.3.2) Recherche de l'antigène Du La présence de l'antigène ou sur les hématies peut parfois être

suspectée sur la constatation d'agglutination très fine et d'apparition

36---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


tardive avec le sérum anti-0. La recherche de l'antigène ou est effectuée par la réaction de Coombs indirect.

MODE OPERATOIRE

-On Lave trois fois les hématies à l'aide de sérum physiologique, on

les remet ensuite en suspension à 5% dans un tube à hémolyse

bien propre.

-On dépose dans un autre tube à hémolyse une goutte de sérum

test anti-0.

-On y ajoute une goutte de la suspension globulaire à 5%,

-On homogénéise puis on incube au bain marie, à 37°C, pendant

45 min ou 1 heure.

- On procède à trois lavages après l'incubation et on rejette

totalement l'eau du troisième lavage.

- On y ajoute une goutte d'anti-globuline polyvalente, on remet le

tout en suspension puis on centrifuge à 2000 tr pendant 1 min.

-On effectue la lecture en agitant légèrement le tube à hémolyse.

INTERPRETATION

La présence de l'agglutination témoigne de la présence de

l'antigène ou 81.3.3) Détermination des autres antigènes

Cette détermination est effectuée avec des anti-sérums test

monospécifique anti-C, anti-E, anti-c, anti-e. Elle se fait par la

méthode sur plaque chauffante, en milieu albumineux, avec des

anticorps incomplets ou en tube, en milieu salin, avec des anticorps

complets. 37



82) Système Kell [4] Le système Kell est le plus immunogène après le système Rhésus.

82.1) les antigènes du système Kell Le système Kell comporte deux antigènes principaux Kp8 et Kp",

portés par une glycoprotéine membranaire dont l'expression est

restreinte à la lignée érythrocytaire. Le système Kell est très

important en pratique transfusionnelle, du fait de la forte

immunogénicité de l'antigène Kp8• Il vient après l'antigène D. Mais

contrairement à ce dernier, l'antigène Kp8 présente une faible

fréquence dans les populations noires. Il a été noté des fréquences

de 7,3%au Bénin et 1,96% en Cote d'Ivoire. [4] 82.2) Les anticorps du système Kell

Ces anticorps sont de nature immune. Les anticorps Anti-K sont

fréquents et dangereux. Ils peuvent être responsables d'accidents

hémolytiques post-transfusionnels et de maladies hémolytiques du

nouveau né.

83) Le système Duffy [4] Ce système est défini par l'existence de deux antigènes

antithétiques Fy8 et Fy. L'antigène Fy8 est fortement immunogène.

Il arrive après les antigènes D, K, C et E. L'allo-immunisation par

l'antigène Fy8 produit un anticorps de classe lgG actif à 37°C et

responsable d'accidents transfusionnels ainsi que de la maladie

hémolytique du nouveau né.

Le système Duffy est intéressant à un autre titre, en raison de la 38



résistance que présentent les sujets porteurs du phénotype Fy ( a·

b +), à l'infestation par le Plasmodium vivax, agent du paludisme.

Ceci est le cas de la majorité des sujets de race noire. [14] 84) Système kidd [4]

Il est composé de deux antigènes Jk" et Jkb. Seul l'antigène

Jk8 est incriminé dans l'allo-immunisation et semble être aussi

immunisant que l'antigène Fy8•

Bs) Système MNSs [4] Il est composé de quatre antigènes M, N, Sets. Les antigènes

M et N sont antithétiques, de même que S et s. Le système M, N,

S, s est particulièrement utile dans les études de ségrégation

raciale et en recherche de paternité.

Bs) Autres systèmes D'autres systèmes érythrocytaires sont identifiés. Ils ont pour

la plus part un intérêt dans la recherche médicale. Ce sont entre

autre : -Le système LUTHERAN [6, 10, 15] avec deux antigènes Lu8 et Lu''-Le système DIEGO [15] qui est limité aux populations

mongoloïdes. C) DETERMINATION DES AUTRES SYSTEMES

Il s'agit des systèmes : Kell avec recherche des antigènes K, Kp8, Kpb

Lewis avec recherche des antigènes Le8 l.e"Duffy avec recherche des antigènes Fya Fyb

39---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)


Lutheran avec recherche des antigènes l.u" Lu

Kidd avec la recherche des antigènes Jk" Jk''

Diego, Au berger etc ...

Ces antigènes peuvent être déterminés par méthode d'agglutination

classique directe ou par test de Coombs indirect.

VI- LES DIFFERENTES FREQUENCES OBSERVEES DANS LES

PHENOTYPES ABO EN COTE D'IVOIRE

SEKA et coll. en 1987 [16] et SOMBO et coll. [17] en 1988 dans

deux études réalisées au CHU de Cocody à Abidjan sur les

groupes sanguins érythrocytaires dans les grands groupes

ethniques de Côte d'Ivoire rapportent:

- Une prédominance du groupe O avec une fréquence de

49,43%, suivi en seconde position du groupe B avec une fréquence

de 23, 11 %, le groupe A vient en troisième position avec 22,54%, le

groupe AB en quatrième position avec 4.9%.

- Dans les sous groupes de A, le phénotype A1 est beaucoup

plus rencontré avec une fréquence de 61,25% ; A2 apparaît dans

38, 75% des cas.



TABLEAU VI: POURCENTAGES GLOBAUX DANS LE

SYSTEME ABO [16]

Groupe Pourcentage des

phénotypes

,, A 1 ,, 13,8

A 22,54

, A2 8,73

B 23, 11

AB 4,10

0 49,43



VII-LES APPLICATIONS MEDICALES

Les applications des groupes sanguins érythrocytaires sont

nombreuses et diverses. Nous allons énoncer quelques unes,

notamment:

- en immunologie médicale

- en pathologie humaine

- en génétique humaine

A) EN IMMUNOLOGIE MEDICALE

A1) la transfusion sanguine

Le polymorphisme immunogénétique est le fondement de

l'application classique des groupes sanguins à l'immunologie

médicale. C 'est l'obstacle essentiel de toute tentative d'échange de

cellule d'un individu à l'autre. Les anticorps spécifiques naturels

constituent le premier obstacle. Ils rendent dangereuses les

transfusions non compatibles. Cette règle fondamentale de la

compatibilité est la base même de la transfusion sanguine qui est la

principale application des groupes sanguins et des greffes. Le

problème primordial de la transfusion sanguine est de garantir la

sécurité en empêchant l'incompatibilité, c'est à dire, la rencontre

entre un antigène donné et son anticorps spécifique.

Deux situations sont possibles : la plus sérieuse survient quand les

globules rouges du donneur introduisent l'antigène contre lequel le

receveur possède l'anticorps correspondant. Peuvent être



impliqués soit les anticorps naturels des systèmes ABO et parfois

Lewis, soit les anticorps immuns des systèmes Rhésus, Kell, Duffy,

Kidd et Ss. Ces systèmes sont à l'origine de la grande majorité des

réactions cliniques ou biologiques. Les globules rouges des

donneurs ne doivent introduire aucun antigène correspondant à

l'anticorps ou aux anticorps du receveur. Ce qui nous amène à

rappeler les règles fondamentales pour les transfusions

sanguines :(figure 3)

Le groupe O est aussi appelé donneur universel, le groupe AB,

receveur universel.


Mise au point d'une tee/inique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO

A ti A

/~ AB_. AB ~

~

it B

Figure 3 : règles fondamentales de la transfusion sanguine [6].



A2) Les greffes tissulaires et les transplantations [1 O]. Les antigènes A et B sont exprimés sur de nombreuses cellules de

l'organisme et en particulier, sur les structures vasculaires. Les

transplantations nécessitent un respect de compatibilité dans le

système ABO. DAUSSET et RAPPAPORT, grâce à la réalisation de séries de

greffes de peau, chez des volontaires sains, ont pu démontrer un

rejet accéléré dans les situations d'incompatibilité ABO. Ce rejet est

directement lié au titre d'anticorps anti-A et ou ariti-B.

8) EN PATHOLOGIE HUMAINE

81) Association groupe sanguin A80 et pathologies [11] Des associations significatives entre les groupes sanguins en

particulier ABO, et certaines maladies restent évidentes. C'est ainsi

qu'on note:

- Selon AIRD (1955), la relation entre les antigènes du système

ABO et le cancer de l'estomac s'établit par le rapport A/0, dans une

population donnée. Ce rapport est 12 fois plus élevé dans les

populations à risque que dans les autres, ce qui traduit une

prédisposition des sujets du groupe A au cancer de l'estomac.

-La relation entre ulcères duodénaux et sujets de groupe O non

sécréteurs. -L'anémie de Biemer prédominant chez les sujets de groupe A.

82) Transfusion sanguine

Quand, par suite d'une erreur humaine, la transfusion sanguine ne

respecte pas le schéma des compatibilités, les anticorps du ------------------------- 45Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


receveur vont détruire les globules rouges du donneur. Il s'ensuit

soit une hémolyse intravasculaire soit une hémolyse

extravascu lai re.

82.1) Hémolyse intravasculaire L'hémolyse intravasculaire intervient en présence d'anticorps

hémolysants tels ceux du système ABO et les anticorps anti-H,

l'anti-Jk" et parfois l'anti-Le" peuvent causer les mêmes dommages.

82.2) hémolyse extravasculaire

L'hémolyse extravasculaire, la plus fréquente, survient dans la rate

et le foie. La phagocytose dans la rate implique des anticorps à

prédominance lgG tels que les anti-Rhésus, alors que celle dans le

foie concerne les anticorps de la classe lgM tels que les anti-1. Ces

anticorps fixent le complément. Ainsi, sept systèmes de groupes sanguins sont très importants en

immunologie de la transfusion sanguine ; d'abord le système ABO

et à un moindre degré, le système Lewis dont les anticorps naturels

peuvent induire une réaction à la première transfusion. Ensuite, les

systèmes Rhésus, Duffy, Kidd et MNSs (pour les antigènes S et s)

peuvent induire une allo-immunisation et donc, des réactions

hémolytiques.

B2_3) La sécurité transfusionnelle Il faut autant que possible prévenir la formation d'allo-anticorps pour

garantir l'avenir du patient, surtout s'il s'agit d'une femme ou d'un

polytransfusé potentiel. La procédure de sécurité inclut :



-les règles obligatoires du groupage sanguin c'est-à-dire effectuer

le groupage des donneurs et des receveurs.

-La recherche d'anticorps irréguliers (RAI) avant toute première transfusion ou entre le 5ème et le 15ème jour après une série de

transfusions.

-Les tests de compatibilité entre le sérum du donneur et les

globules rouges du receveur.

-Le dépistage simple des anticorps irréguliers (OSAI).

-Le contrôle ultime au lit du patient ; cette étape finale est

obligatoire et relève de la responsabilité du médecin qui pratique la

transfusion.

-La carte transfusionnelle qui est une carte spéciale sur laquelle

l'historique transfusionnel du sujet est noté.

83) Maladie hémolytique du nouveau-né (MHNN)

Il a fallu attendre l'observation princeps de Levine pour comprendre

le mécanisme de la MHNN.

Il s'agit d'une immunisation de la mère contre un antigène du fœtus

que ce dernier a hérité de son père. Si l'anticorps maternel ainsi

formé est capable de traverser le placenta, il se fixe sur les

hématies fœtales vouées dès lors, à une destruction rapide.

La mère est du groupe Rhésus négatif, le père est groupe Rhésus

positif comme son enfant. L'antigène le plus souvent en cause est

l'antigène Rhésus standard D. De nombreux antigènes de groupe,

différent du Rhésus standard ont été reconnus comme à l'origine de

tel cas d'allo-immunisation fœto-maternelle. Ces antigènes 47 -------------------------



appartiennent soit au système Rhésus comme c ou E, soit à

d'autres systèmes comme Kell, Kidd, Duffy, Ss. Par ailleurs,

l'allo-immunisation ABO est connue.

La prévention de la maladie hémolytique par allo-immunisation par

l'antigène Rhésus (RhD) peut être réalisée grâce à l'injection à la

mère, dans les 24 à 72 heures suivant l'accouchement,

d'immunoglobuline anti-D. Ainsi la prévention progressive de la

maladie peut être raisonnablement escomptée.

C) EN GENETIQUE HUMAINE [1 O]

En génétique humaine l'on peut citer le recours aux antigènes de

groupes sanguins érythrocytaires dans l'exclusion de paternité ;

c'est le cas des systèmes MNSs et Rhésus.

En anthropologie le cas du système Diego attestant l'origine

mongoloïde d'un individu

48---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)


1 - CADRE DE L'ETUDE

Ce travail s'est effectué au laboratoire d'lmmunologie et

d'Hématologie du CHU de Cocody de Mars à Septembre. Il s'inscrit

dans le cadre général des divers travaux d'immuno-hématologie

initiés par l'équipe du professeur SEKA SEKA Joseph du

Département d'lmmunologie clinique et d'lmmunobiologie de l'UFR

des sciences médicales de Bouaké.

Les difficultés d'approvisionnement et le coût élevé des réactifs de

groupage sanguin ABO produits par les multinationales et importés

par la Côte d'Ivoire chaque année demeurent un obstacle majeur

au fonctionnement correct des laboratoires de biologie médicale

ayant le phénotypage dans le système ABO dans leurs attributions.

Dans un souci d'économie, la possibilité d'utilisation de réactifs de

groupage sanguin ABO produits à partir de sérum humain, dans

les différents laboratoires d'immunologie et hématologie, voire les

centres de transfusion sanguine du pays, serait d'un apport

i ncom mensu rab le.

11- MATERIEL ET METHODE

A/ TYPE D'ETUDE

Il s'agit d'une étude expérimentale et comparative.

8/ POPULATION D'ETUDE

1) Critère d'inclusion



Sont inclus dans notre étude, les sujets des deux sexes en

bonne santé apparente âgés de 18 à 30 ans, avec une sérologie

infectieuse négative.

2) Critère de non inclusion Sont exclus de l'étude, les sujets ayant été déjà transfusés au

moins une fois, les femmes multipares, les sujets de groupe AB.

3) Recrutement des sujets Il s'agit de sujets adressés au laboratoire d'lmmunologie et

d'Hématologie du CHU de Cocody pour tout bilan biologique,

incluant le groupage sanguin ABO. Ces sujets sont composés

essentiellement d'étudiants et de patients externes ou hospitalisés

qui satisfont à nos critères d'inclusion.

4) Taille de l'échantillon L'étude s'est déroulée en trois étapes. La première étape a

consisté à faire le groupage sanguin dans les système ABO et

Rhésus de 203 sujets recrutés. Dans une seconde étape, 90 sujets parmi les 203 ont été sélectionnés sur la base de la qualité de leur

plasma (absence d'hémolyse, séro-négativité au VIH, à l'hépatite et

au tréponema pallidum). Ces plasmas sélectionnés ont servi à la

recherche d'anticorps naturels anti-érythrocytaires.

Il s'agit de : - 30 sujets de groupe A rhésus positif

- 30 sujets de groupe B rhésus positif

- 30 sujets de groupe O rhésus positif



La troisième étape a permis de retenir sur les 90, 60 plasmas ayant

les meilleurs critères de performance.

C) LES DETERMINATIONS 1) Phénotypage érythrocytaire ABO

Cet examen a été réalisé dans un premier temps pour sélectionner

notre population d'étude.

1.1) Matériel et réactifs - Le matériel comprend :

.€5 une plaque d'opaline

.€5 une centrifugeuse de table

.€5 des tubes à hémolyse bien propres

.€5 des pipettes pasteurs

.€5 des compresses

.€5 des tubes de Nunc

- Les réactifs sont composés de : .€5 le sang à grouper prélevé sur anti-coagulant (EDTA)

.€5 les antisérums tests anti-A, anti-B et anti-AB produits par le

laboratoire Bio-rad F 92430.

.€5 Le sérum physiologique à 9°/00

.€5 Les globules rouge test A 1, A2, B du CNTS d' Abidjan.

1.2) Mode Opératoire Les sujets sélectionnés ont bénéficié d'un prélèvement de 5 à 10cc

de sang par ponction veineuse sur EDTA. Le sang recueilli est

conservé à la température du laboratoire pendant 30 minutes puis



centrifugé à 3000 tr/min pendant 10 minutes, permettant ainsi de

séparer le plasma du culot globulaire.

Nous avons effectué le groupage sanguin ABO sur plaque

d'opaline par les deux épreuves complémentaires classiques .

.ŒS L'épreuve globulaire ou technique de Beth-Vincent

Tzanck

.ŒS L'épreuve sérique ou technique de Simonin-Michon .

1.2.1) Epreuve globulaire ou technique de BETH Vincent -Tzanck sur plaque d'opaline

.ŒS On prépare une suspension de globules rouges des

sujets selectionnés à 10% à l'aide de sérum

physiologique à 9°foo..ŒS Sur une plaque d'opaline, à l'aide d'une pipette pasteur,

on dépose séparément trois gouttes de la suspension

globulaire à 10% de la gauche vers la droite.

.ŒS On ajoute successivement à chaque goutte globulaire,

une goutte d'anti-sérum anti-A, anti-sérum anti-B et

d'anti-sérum anti-AB,

.ŒS On mélange à l'aide du fond d'un tube à hémolyse,

.ŒS On homogénéise en imprimant à la plaque des

mouvements de rotation pendant 3 min.

.ŒS On effectue enfin la lecture.

• L'apparition d'agglutination témoigne de la présence sur les

globules rouges de l'antigène correspondant à l'anti-sérum utilisé ;

la réaction est dite positive . 53

Yapi Yapi Aurélien Doctorat e11 Médecine (Thèse d'Etat)


• En l'absence d'agglutination, la réaction est dite négative.

1.2.2) Epreuve sérique ou technique de Simonin sur plaque d'opaline

~ On prépare une suspension à 10% des hématies tests

connues A1, A2 et B.

~ On dépose sur une plaque d'opaline, à l'aide d'une

pipette pasteur, dans l'ordre : une goutte d'hématies tests

A 1, A2 et B de gauche vers la droite.

~ On Ajoute à chaque goutte d'hématies tests à 10% une

goutte du plasma à tester.

~ On mélange à l'aide du fond d'un tube à hémolyse.

~ On homogénéise en imprimant à la plaque d'opaline des

mouvements de rotation pendant 3 minutes,

~ On effectue la lecture.

• La présence d'agglutination signifie que la réaction est positive

donc présence dans le plasma du sujet d'anticorps naturels.

• La réaction est dite négative en absence d'agglutination.

2) Recherche de la performance des anticorps anti-A, anti-B et anti-AB dans les plasmas sélectionnés.

2.1) Le Matériel et les réactifs Le matériel Il se compose de :

~ une centrifugeuse de table;

~ un bain marie ; 54



~ un congélateur à - 40°C (SANYO Médical Freezer) ;

~ un réfrigérateur (SANYO Medicool) ;

~ des plaques d'opaline ;

~ un chronomètre ;

~ des gants propres ;

~ des compresses ;

~ des tubes de Nunc de 1,8 cc ;

~ des tubes à hémolyse bien propres ;

~ des portoirs pour tubes à hémolyse ;

~ des micropipettes (P100; P200 Psoo µI)

Les réactifs sont composés de : ~ globules rouge test A 1 ; A2 ; B ; AB provenant du CNTS

d'Abidjan;

~ l'héparine CHOAY 5 ml / 25.000 UI (SANOFI Winthrop

1 ndustrie Parie) ;

~ l'azide de sodium lyophilisé (Na N3) ;

~ chlorure de calcium en granulé (Caclz) ;

~ sérum physiologique à 9 °/00;

~ antiglobuline polyvalente (Biotec Labotorie ).

2.2) Méthode Après le groupage sanguin ABO classique et la conformité des

résultats des tests globulaire et sérique, les plasmas séparés du

culot globulaire après centrifugation sont mis en aliquote (3

aliquotes) par plasma dans des tubes de Nunc et conservés à -40°

C. 55 ----------------------------



Ainsi, les plasmas des sujets A contiennent des anticorps anti-B

,ceux des sujets de groupe B, des anti-A et les sujets O des anti-A

et anti-B. Ce sont ces plasmas qui seront sélectionnés comme

source d'anticorps polyclonaux pour le groupage sanguin ABO, s'ils

satisfont aux critères de performance universels. Pour chaque

plasma congelé, un des aliquotes a été décongelé pour la suite des

manipulations.

Nous avons ensuite testé la performance du plasma par la

détermination de l'avidité, de l'intensité de l'agglutination, du score

et du titre des anticorps naturels qu'il contient.

Nous avons alors réalisé une série de tests par la technique de

Simonin en tenant compte des caractéristiques des agglutinations

obtenues.

2.3) Mode Opératoire du test de performance

Le plasma est décomplémenté après décongélation au bain marie à

56°C pendant 30 minutes.

On réalise des dilutions dans chaque échantillon de plasmas selon

une progression géométrique de raison 2 dans des tubes à

hémolyse bien identifiés allant de ½ au 1 /256e.

On dépose sur une plaque d'opaline, à l'aide d'une micropipette

une goutte des hématies tests A 1, A2, B, AB à 10% ;

A côté de chaque goutte d'hématies tests, on dépose une goutte du

plasma dilué en allant de la plus faible concentration c'est à dire du

1 /256e au pur selon les modalités suivantes



• Le plasma de groupe A contenant les anticorps anti-B, sont mis

en contact avec une goutte d'hématies tests B dilué à 10%.

• Les plasmas de groupe B contenant les anticorps anti-A sont mis

en contact avec d'une part une goutte d'hématies tests A 1 à

10% et d'autre part une goutte d'hématies tests A2à 10%.

• Les plasmas de groupe O contenant les anticorps anti-A et anti-B

sont mis en contact avec une goutte d'hématies tests AB.

•A l'aide du fond d'un tube à hémolyse, on mélange les deux

gouttes ;

• On homogénéise en imprimant à la plaque des mouvements de

rotation ;

• On effectue la lecture, pour l'appréciation de :

• L'AVIDITE qui correspond au temps en seconde au bout

duquel apparaissent des agglutinats.

• L'INTENSITE qui correspond à l'aspect de l'agglutination, 3

minutes après la réaction.

Elle est notée par 1, 2 ou 3 croix selon l'aspect des agglutinats

obtenus.

• Le SCORE découle de l'intensité des agglutinations avant ou à 3 minutes .

.r6 Une intensité à 1 croix correspond au nombre 5

.r6 A 2 croix correspond au nombre 8

.r6 A 3 croix correspond au nombre 10

Au delà de 3 min, le score, en cas d'apparition d'agglutination est

coté à 3 sans notion de croix. 57-------------------------

Y api Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


Le score définitif sera la somme des différents nombres obtenus

par dilution pour chaque plasma.

• Le TITRE mesure la force des anticorps naturels contenus dans les plasmas. Il correspond, à l'inverse de la plus grande dilution du

plasma où sont observées des agglutinations.



TABLEAU VII: EXEMPLE D'INTERPRETATION DES DIFFERENTS CRITERES DE PERFORMANCE D'UN PLASMA DONNEE:

Dilution pu 1/2 1/4 1/8 1 /16 1/32 1/64 1/28 1/256

Avidité 1 " 1 " 2" 3" 1 '4" 1 '36" 2'30" 2'42" >3'

Intensité +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + +/-

Score 10 10 10 8 8 8 8 5 3

Titre

Ici Le score correspond à : 10 + 10 + 10 + 8 + 8 + 8 + 8 + 5 + 3 = 70

Le titre est 256



3) La Recherche des anticorps Immuns : Recherche d'agglutinines irrégulières.

Cette technique nous a permis de rechercher la présence

d'éventuels anticorps Immuns dans le plasma.

Deux techniques ont été utilisées dans le cadre de notre étude. Il

s'agit:

RS du test en milieu salin

RS du test de Coombs indirect.

3.1) Le Test en milieu Salin Permet la recherche d'auto-anticorps contenus dans le plasma. Les

auto-anticorps agglutinent généralement à froid et sont de type lgM.

3.1-1) Matériel et Réactifs Le matériel comprend :

RS un réfrigérateur (SANYO Medicool) ;

RS des tubes à hémolyse propres ;

RS une centrifugeuse de table ;

Les réactifs sont composés de :

RS sérum physiologique à 9°/00

RS les plasmas sélectionnés RS un panel de deux lots d'hématies tests Ode OSAI (dépistage

simple des agglutinines irrégulières) provenant du CNTS

d'Abidjan

3.1. 2) Mode Opératoire RS On lave trois fois les hématies tests O en sérum

physiologique ; 60



16 On prépare ensuite une suspension de ces hématies tests O à

5% dans le sérum physiologique ;

16 On dépose une goutte de cette suspension d'hématies tests

respectivement dans deux tubes à hémolyse propres, bien

identifiés ;

16 On ajoute une goutte de plasma dans chaque tube à

hémolyse contenant la suspension d'hématies tests.

16 On incube à 4 °C au réfrigérateur de 45 minutes à 1 heure

de temps.

16 On homogénéise et on centrifuge à 3000 tr/min pendant 1

min.

16 On effectue alors la lecture en agitant doucement les tubes à

hémolyse.

• La réaction est dite positive lorsque le culot se détache en amas

(agglutination)

• La réaction est négative lorsque le culot part en fumée.

3.2) Test de COOMBS indirect Le test de COOMBS indirect est un test sérique permettant de

mettre en évidence des anticorps immuns, libres dans un plasma et

fixés in vitro sur des hématies tests (hématies test 0) par le

technicien.

3.2.1) Matériel et Réactifs Le matériel comprend :

RS des tubes à hémolyse propres ;

16 un bain marie ; 61 -----------------------------



~ une centrifugeuse de table ;

~ des pipettes Pasteur ;

~ des compresses propres.


• Sérum physiologique à 9°/00 ;

• Antiglobuline polyvalente (Biotec labotorie) ;

• plasmas sélectionnés ;

• panel de OSAI du CNTS d'Abidjan ;

3.2.2) Mode Opératoire

~ on lave trois fois les hématies tests O à l'aide de sérum

physiologique.

~ on prépare une suspension à 5% de ces hématies tests dans le

sérum physiologique. ~ On dépose une goutte de cette suspension à 5% d'hématies

tests respectivement dans deux tubes à hémolyse propres bien

identifiés. RS On ajoute une goutte du plasma à tester dans chaque tube à

hémolyse. ~ On incube à 37°C au bain Marie pendant 45 min à 1 heure.

~ On effectue trois lavages des hématies dans le sérum

physiologique après l'incubation. RS Après le dernier lavage, on élimine toute l'eau physiologique et

on ajoute au culot, une goutte d'antiglobuline polyvalente, puis

on homogénéise et on centrifuge à 3.000 tr/min pendant 1 mn.



RS On procède à la lecture en agitant légèrement les tubes à

hémolyse.

• La présence d'agglutination traduit la positivité du test.

• L'absence d'agglutination correspond à un test négatif.

D) CONSTITUTION ET TRAITEMENT DES POOLS DE PLASMAS Nous avons constitué trois Pools de plasmas contenant

respectivement les anticorps anti-A, anti-B et anti-AB. Chaque Pool

est constitué de vingt plasmas différents.

Les plasmas ayant présentés les meilleurs critères de performance

dont un titre supérieur ou égal à 32 ainsi qu'une absence d'auto

anticorps et d'anticorps immuns ont été retenus.

Nous avons ainsi retenu : - un premier Pool de 20cc de plasma contenant les anticorps

naturels anti-A. - un deuxième Pool de 20cc de plasma contenant les anticorps

anti-B - un troisième Pool de 20cc de plasma contenant les anticorps

anti-A et anti-B. Chaque Pool de plasma a subi une série de tests, afin d'améliorer

la performance. Ainsi, avons-nous successivement réalisé : la

stérilisation, la recalcification, la filtration, la concentration et la

coloration des plasmas pour obtenir nos réactifs.



1) La stérilisation 1.1) Matériel et réactifs

- Le matériel comprend :

,ŒS Un ballon en pyrex ;

,ŒS Une tige aimantée ;

,ŒS Une balance (Electronic balance AND, Masse 40g)

,ŒS Une micropipette (P200, Psoo ; P1000 µI) ;

,ŒS Une plaque chauffante avec rotor;

,ŒS Un réfrigérateur (SANYO MEDICAL)

,ŒS Les trois pools de plasma ;


,ŒS 1 g d'azide de sodium lyophilisé NaN3)

,ŒS Eau distillée ( 1 1)

1.2) Mode opératoire Préparation de la solution d'azide de sodium

,ŒS Dans un ballon en pyrex, on dépose un gramme d'azide de

sodium lyophilisé.

,ŒS On y ajoute un litre d'eau distillée

,ŒS On met le ballon sur une plaque chauffante à rotor ;

,ŒS on homogénéise la solution à l'aide d'une tige aimantée.

* La stérilisation proprement dite A l'aide de la micropipette P 1000 ajouter à chaque pool de plasma

1 ml, de solution d'azide de sodium.



2) La recalcification

2.1) Matériels et réactifs

- Le Matériel est identique à celui de la stérilisation ;


16 chlorure de calcium en granulé (CaCb) ;

16 eau distillée ;

2.2) Mode opératoire

16 Préparation de la solution de chlorure de calcium.

16 Dans un ballon en pyrex, mettre 27, 75 grammes de chlorure

de calcium en granulé.

16 Ajouter 1 litre d'eau distillée.

16 Mettre le ballon sur une plaque chauffante à rotor ;

16 Homogénéiser la solution à l'aide d'une tige aimantée ;

* La recalcification proprement dite

Après la stérilisation, chaque pool de plasma a été recalcifié par

l'ajout d'une solution de chlorure de calcium dans une proportion de

2% à l'aide d'une micropipette P 200.

Les pools de plasmas sont ensuite incubés à 4 °C pendant 36

heures au réfrigérateur pour permettre une bonne formation de la

fibrine. Cette étape a permis la transformation du plasma en sérum.

3) La filtration

Les sérums obtenus après recalcification sont filtrés sous vide à

l'aide du filtre à papier.



4) La concentration

Le filtrat obtenu a été concentré par la méthode de congélation

décongélation suivante :

La congélation s'est faite à - 40°C pendant 22 heures suivie d'une

décongélation à 4 °C pendant 24 heures. On ajoute enfin à chaque

pool de sérums une solution d'héparine à 2% dans une proportion

de4%.

5) Coloration

Nous avons procédé à une coloration de nos réactifs pour faire la

distinction entre eux ; ainsi :

Le sérum test anti-A est coloré au vert de méthyl.

Le sérum test anti-B est coloré à l'éosine

Les sérums tests anti-A et anti-B sont non colorés

E) ETUDE COMPARATIVE DU GROUPAGE ABO PAR NOS

REACTIFS ET LES REACTIFS DU COMMERCE.

Nous avons comparé la performance des réactifs de notre série à

celle des produits vendus dans le commerce. Nous avons alors

avec les sérums obtenus, testés 150 prélèvements de sang dont :

36 sujets de groupe A

42 sujets de groupe B

9 sujets de groupe AB

63 sujets de groupe 0

F- TRAITEMENT DES DONNEES

Le traitement et l'analyse des données ont été effectués sur support

informatique au moyen de divers logiciels dont : 66



- WORLD pour le traitement de texte,

- EXCEL pour les graphiques

- EPI-DATA et SPSS pour l'analyse et l'interprétation

statistiques des données.



TABLEAU VIII: REPARTITION DES 203 SUJETS ETUDIES EN FONCTION DE L'AGE

Classe d'âge NOMBRE DE FREQUENCE SUJET (%)

r 18-221 55 27

[23-26] 91 45

[27-30] 57 28

Total 203 100

La tranche d'age comprise entre 23 et 26 ans est la plus représentée.

69 --------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)


D [18-22] D [23-26] D [26-30]

Figure5: Répartition des 203 sujets en fonction de l'âge



TABLEAU IX: REPARTITION DES 203 SUJETS EN FONCTION DU GROUPE SANGUIN ABO

GROUPE GROUPE GROUPE GROUPE GROUPE TOTALA B AB 0

Nombre 57 48 12 86 203

Fréquence 28,08 23,65 5,91 42,36 100(%)

Les sujets du groupe O avec 42,36% de notre population d'étude constituent l'échantillon le plus important.



42,36%

23,65%

5,91%

28,08%D GROUPE A

D GROUPE B

D GROUPE AB

D GROUPE 0

Figure 6 : Répartition des 203 sujets en fonction du groupe sanguin ABO



TABLEAU X: REPARTITION DES 203 SUJETS EN FONCTION DU GROUPE SANGUIN ABO ET DU SEXE

Groupe Sexe féminin Sexe masculin

A 26(12,8%) 31 (15,27%)

B 22(10,9%) 26(12,8%)

AB 6(3%) 6(3%)

0 49(24, 13%) 37(18,22%)

Total 103(51%) 100(49%)

Il y a sensiblement autant de sujets de sexe masculin (49%) que de sujets de sexes féminin (51 %). Cependant la répartition des groupes sanguins dans le système ABO varie en fonction du sexe.



90 80 1of /

Nomb~~ ~__:;--

40J/30 20 10 0

D sexe masculin D sexe féminin

1/ A B AB 0

Goupe sanguin

Figure 7: Répartition des sujets en fonction du groupe sanguin ABO et dusexe.

~~;-::-::-:~----;;;:-------;:-----:------:--:-:--:-:----:-------=-=----=------=---:------------- 74 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


TABLEAU XI: MOYENNES DES CRITERES DE PERFORMANCE DES 90 PLASMAS RETENUS SUR LA BASE DE LEUR QUALITE.

Plasmas GR tests Avidité Intensité Titre Scorecontenant (seconde)lesanticorpsnaturels

Al 11,64 +++ 26,67 36,40

Anti-A

A2 18,97 +++ 24,93 30,27

Anti-B B 14,40 +++ 33,60 41,80

Anti-AB AB 7,40 +++ 41,6 46,30

Les plasmas contenant les anticorps naturels anti-AB ont présenté les meilleures performances.


~ _,, ~~ i::i CD -· "' •.••.~ ~ ~c,, ••.• CD "'~C ~~~ ::J -, ~ ~ I\J I\J W W ,i:. ,i:. 01 ~- :::: ~. C CD O 01 0 01 0 01 0 01 0 01 0 ~ ~

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TABLEAU XII: CRITERES DE PERFORMANCE DES POOLS DE PLASMAS A V ANT LE TRAITEMENT.

Pool de GR tests Avidité Intensité Titre Scoreplasmas (seconde)contenantlesanticorpsnaturelsAnti-A

Al 9 +++ 64 46

A2 12 +++ 32 41

Anti-B B 10 +++ 32 41

Anti-AB AB 8 +++ 64 46

Les plasmas contenant les anticorps naturels anti-AB présentent les meilleurs critères de performance. Les valeurs de l'avidité de l'intensité et du score sont proches des valeurs de référence [2] avant le traitement des plasmas



TABLEAU XIII: ACTIVITES DES POOLS DE SERUMS TESTS CONSTITUES APRES TRAITEMENT.

Pool de GR tests Avidité Intensité Titre Score, (seconde)serum

Al 5 +++ 128 67Anti-A

A2 10 +++ 64 59

Anti-B B 9 +++ 64 61

Anti-AB AB 4 +++ 128 69

Le pool de sérum anti-AB a la meilleure activité suivi de l'anti-A (avec les hématies tests A 1) et de l'anti-B.



TABLEAU XIV: TABLEAU COMPARATIF DES RESULTAS DE NOS REACTIFS DE CEUX DE A BIGOT (CNTS DE COTONOU) ET AUX NORMES MINIMALES.

Avidité (s) Intensité Titre Score GR

Réactifs test NM NR CNTS NM NR CNTS NM NR CNTS NM NR CNTS cot. cot. cot. cot.

Anti-A A1 8 5 7 +++ +++ +++ 64 128 256 50 67 74

A2 12 10 11 +++ +++ +++ 64 64 64 50 59 55

Anti-B B 8 9 9 +++ +++ +++ 64 64 64 50 61 60

A1 Anti-AB Identique 8 Identique +++ Identique 64 Identique 60

A2 à l'Anti-A 4 12 à l'Anti-A à l'Anti-A à l'Anti-A et à et à +++ +++ et à 128 32 et à 69 51

B l'anti-B 8 l'anti-B l'anti-B l'anti-B +++ 64 65

NM: Normes Minimales; NR: Nos Réactifs; CNTS cot. : Centre National de Transfusion Sanguine de Cotonou. La valeur de nos réactifs est au dessus de la valeur des réactifs des normes minimales. Nos

valeurs sont proches de ceux de A BIGOT [2]

79



TABLEAU XV: REACTIVITE DES REACTIFS DU COMMERCE TESTES SUR LES GLOBULES ROUGES DANS LES MEMES CONDITIONS QUE LES POOLS DE SERUM DE NOTRE ETUDE.

Réactif GR tests Avidité Intensité Titre Score(seconde)

Anti-AAl 2 +++ 256 71

A2 2 +++ 128 67

Anti-B B 2 +++ 128 69

Anti-AB AB 1 +++ 256 76

L'avidité et le titre des réactifs du commerce sont plus élevés que ceux obtenus par les sérums de notre étude.



TABLEAU XVI: RESULTATS COMPARATIFS (NOMBRE ET% DE REACTIONS POSITIVES) DU GROUPAGE SANGUIN ABO PAR LES REACTIFS DE NOTRE ETUDE ET LES REACTIFS DU COMMERCE

Groupe sanguin Réactifs de notre Réactifs du étude commerce

Sujet de groupe A 24%(36) 24%(36)

Sujet de groupe B 28%(42) 28%(42)

Sujet de groupe AB 6%(9) 6%(9)

Sujet de groupe 0 42%(63) 42%(63)

Total 100%(150) 100%(150)

Les réactifs de notre étude ont donné les mêmes résultats que les réactifs du commerce sur 150 sujets chez qui un phénotype ABO a été réalisé.

81Yapi Yapi Aurélien Doctorat e11 Médecine (Thèse d'Etat)


TABLEAU XVII : COUT DE REVIENT DE LA PRODUCTION DE 60 ML DE SERUM TEST POUR LA DETECTION DE TOUS LES PHENOTYPES DU SYSTEME ABO

MATERIEL OU REACTIF Coût (FRANC CFA)

Recalcification (Chlorure de 740 calcium)

Antiseptique (Acide de 10 sodium)

Héparine 2% 220

Flacon (stérilin) 250

Colorants 70

Filtre à papier 200

Etiquettes 5

Personnel 745

Coût de revient total 2240

Le coût de production des réactifs de notre étude qui inclut le prix de revient du matériel des réactifs et du personnel est très bas.



TABLEAU XVIII: COMPARAISON DU COUT DES REACTIFS DU COMMERCE ET DE CELUI DES REACTIFS DE NOTRE TRAVAIL POUR LA REALISATION DE 150 TESTS

ANTI-A ANTI-B ANTI-AB TOTAL REACTIFS Quantité Coût Quantité Coût Quantité Coût Quantité Coût

(ml) (f cfa) (ml) (f cfa) (ml) (f cfa) (ml) (f cfa)

COMMERCE 10 6000 10 6000 10 6000 30 18000

10 375 10 375 10 375 30 1125 NOTRE

TRAVAIL

Il faut 30 ml de sérum pour un phénotypage ABO complet de 150 sujets. Ce qui revient à 18.000 F CFA avec les réactifs du commerce et 1125 F CFA avec les réactifs de notre étude.

83 ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)


TABLEAU XIX: ESTIMATIONS COMPAREES DES QUANTITES ET DES COÛTS ANNUELS DES REACTIFS DE NOTRE ETUDE ET DE CEUX DU CHU DE COCODY (REACTIFS DU COMMERCE)

Quantité de Nombre de Coût (CFA) réactifs tests (ml)

Commerce 2 310 11 550 1 386 000 (CHU de Cocody)

Notre travail 2 310 11 550 86625

Différence 0 0 1 299375

Il y a un différentiel annuel de 1 299375 F CFA entre nos réactifs et ceux du commerce.



Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat) 85


1- ETUDE EPIDEMIOLOGIQUE

Notre échantillon est composé de 203 sujets des deux sexes, âgés

de 18 à 30 ans avec une médiane à 24 ans, tous en bonne santé

apparente.

1) La répartition des 203 sujets en fonction de l'âge (TABLEAU VIII FIGURE 5)

Notre population d'étude a été répartie en trois tranches d'âge : La

première comprise entre 18 et 22 ans, représente 27% de

l'échantillon avec 55 sujets, la seconde, de 23 à 26 ans, regroupe

45% de l'échantillon avec 91 sujets et enfin la dernière de 27à 30

ans avec 57 sujets soit 28% de la population cible.

Les sujets de 23 à 26 ans constituent l'échantillon le plus

important, en nombre de notre étude. Ceci s'explique par le fait

que la majorité des sujets inclus dans notre travail est constituée

d'étudiants de 38 année des études médicales de l'UFR des

sciences médicales de Bouaké. Le choix de l'âge de nos sujets a été guidé par le fait que le

système immunitaire, responsable de la synthèse des anticorps

naturels anti-A et anti-B que nous recherchons dans notre étude,

est plus performant chez le sujet jeune.

Ces anticorps naturels comme il est décrit dans la littérature [1]

sont à des taux très faibles voir généralement absents à la

naissance et augmentent vers le 38 et 68 mois de la vie pour

atteindre un taux maximum vers l'adolescence. Leur titre diminue

chez les sujets âgés [1]. 86



2) Répartition des 203 sujets en fonction du groupe

sanguin ABO (Tableau IX ; figure 6)

L'analyse de la population en fonction du groupe sanguin ABO a

montré une prédominance des sujets de groupe O avec une

fréquence de 42,36%, suivis des sujets de groupe A qui

représentent 28,08% des cas, puis les sujets du groupe B avec

une prévalence de 23,65%. Les sujets de groupe AB arrivent en

quatrième position avec un taux de 5,91 %.Notre échantillon

respecte bien la répartition des groupes sanguins ABO dans la

population ivoirienne rapportée par CABANNES et coll. [16, 17].

En effet ces auteurs dans leur étude effectuée en Côte d'Ivoire ont

révélé des fréquences suivantes des groupes sanguins ABO : le

groupe sanguin O vient en tête avec une prévalence de 42, 10%

suivi du groupe B qui représente 31,29% de la population, le

groupe A vient en troisième avec une fréquence de 22,50%, enfin

le groupe AB exprimé par 4, 11 % de la population.

SEKA .S.J. et coll. [15], dans deux études réalisées au CHU de

Cocody à Abidjan, sur les groupes sanguins érythrocytaires ABO

dans les grands groupes ethniques, ont trouvé le même ordre de

fréquences, avec toujours une prédominance du groupe O.

Ailleurs en Afrique, DIENG. F. au Sénégal a trouvé la même

répartition que celle trouvée en Côte d'Ivoire. Des études réalisées

par MC Arthur d'une part et PENROSE d'autre part retrouvent la

même distribution des groupes sanguins ABO dans le monde avec



une prédominance du groupe O avec une fréquence de 62,30% et

une prévalence faible du groupe AB.

Notre échantillon respecte donc la répartition de groupes sanguins

ABO dans la population mondiale en général et ivoirienne en

particulier.

3) Répartition des 203 sujets en fonction du groupe et du sexe (Tableau X ; Figure 7)

Sur les 203 sujets recrutés, 103 soit 51 % sont de sexe féminin et

100 soit 49% de sexe masculin. Il y a sensiblement autant

d'hommes que de femmes car nous n'avons pas tenu compte du

sexe dans le recrutement de nos sujets d'étude. Nos résultats

montrent cependant une variation de la répartition des groupes en

fonction du sexe.

Ainsi concernant les groupes A et B on note une prédominance

masculine avec respectivement 15,27% contre 12,8% de femmes

et 12,8% d'hommes contre 10,9% de femmes.

Dans le groupe sanguin O par contre, on note une prédominance

féminine avec 24, 13% contre18, 22% d'homme.

Dans le groupe AB il y a autant d'hommes que de femmes. Nos

résultats sont superposables à ceux de SEKA et coll. [15] qui ont trouvé la même répartition.

Notre échantillon correspond donc à la répartition de la population

ivoirienne en ce qui concerne les groupes sanguins ABO.



11- ETUDE DE L'ACTIVITE DES DIFFERENTS PLASMAS

RECEUILLIS

1) Critères de sélection des plasmas

Sur les 203 plasmas analysés nous avons retenus 90 sur la base

des critères de qualité régissant les normes internationales

d'utilisation des produits sanguins comme réactifs, à savoir une

sérologie négative pour le VIH, l'hépatite virale B et le Tréponema

pallidum. Nous avons également éliminé les sangs hémolysés.

Le nombre de plasmas retenu pour notre étude 90 est largement

supérieur à celui de A BIGOT et coll. [2] qui dans leur travail sur la production expérimentale des réactifs de groupage sanguin ABO au

CNTS de Cotonou se sont contentés de 35 plasmas. Ceci

s'explique par le fait que leur étude ait été réalisée à partir de

donneurs réguliers de sang chez qui il est généralement prélevé

environ 450cc de sang. Cette différence de taille des échantillons

s'explique par le fait que dans notre travail la quantité de sang

prélevée par individu n'était que de 10cc au maximum. En général,

la production d'anticorps polyclonaux de groupage sanguin ABO se

fait dans les centres de transfusion sanguine qui disposent de sang

en terme de quantité. Notre étude expérimentale étant réalisée

dans un laboratoire d'immunologie et hématologie classique il était

important de tenir compte de la taille de la population d'étude du fait

de la faible quantité de sang prélevée par personne. Ainsi en

dehors des centres de transfusion sanguine, tout laboratoire de

biologie médicale peut produire des anti-sérums de phénotypage

------------------------ 89 Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)


ABO s'il dispose d'une quantité importante de prélèvement sanguin

sur anti-coagulant ; d'où la taille relativement importante de notre

échantillon.

2) Moyennes des critères de performance des 90 plasmas

retenus sur la base de leur qualité

(Tableau XI ; Figure 8)

On note de prime abord que l'avidité des sérums tests allait de 7,40

pour les anti-AB à 18,97 pour les anti-A2. Tous les sérums tests

affichaient une intensité à 3( + ). Les titres les plus élevés étaient

enregistrés pour les anti-AB avec 41,6, les anti-A2 donnant les

titres les plus bas avec une moyenne de 24,93. S'agissant des

scores, les anti-AB donnaient les scores les plus élevés avec 46,30

suivis des anti-B 41,80 puis des anti-A 1 36,40 et enfin les anti-A2 :

30,27.

L'analyse de la moyenne des critères de performance de ces

plasmas a montré que seuls ceux contenant les anticorps naturels

anti-AB ont présenté une activité moyenne relativement proche des

normes minimales auxquelles doivent répondre le sérum test anti-A

anti-B et anti-AB [2]. Nous avons alors dans une autre sélection

retenue que les plasmas qui donnent des agglutinations à un titre

supérieur ou égal à 32. Cette sélection nous a permis de retenir 60

plasmas les plus performants, pour le recueil des anti-sérums.

Ill- ETUDE DES POOLS DE PLASMAS CONSTITUES

A partir des 60 plasmas sélectionnés, nous avons constitué trois

pools en regroupant les plasmas en fonction du type d'anticorps

------------------------- 90 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


qu'ils contiennent. Nous avons ainsi obtenu trois pools de plasmas

contenant respectivement des anti-A, des anti-B et des anti-AB, qui

ont servi à l'étude des critères de performance.

1) Critères de performance des pools de plasmas

avant Je traitement (tableau XII)

L'analyse des résultats montre des valeurs proches des normes

minimales auxquelles doivent répondre le sérum test anti-A, anti-B

et anti-AB. Ainsi en ce qui concerne l'avidité, le pool de plasmas

contenant des anti-A donne une agglutination à 9 secondes avec

les hématies A1 et 12 secondes avec les hématies A2 ; les normes

étant respectivement de 8 secondes et 12 secondes.

De même, le pool de plasmas contenant les anti-B réagit à 1 O

secondes alors que la norme est de 8 secondes.

Quant aux titres ils sont identiques aux valeurs de référence soit 64

pour les pools de plasmas contenant les anti-A (avec le A1) et les

anti-AB. Ils sont cependant bas soit 32 pour l'anti-B et l'anti-A avec

le A2. L'intensité des agglutinations est déjà bonne à ce stade avec

trois croix pour chaque plasma. Les scores obtenus qui sont de 46

et de 41 sont proches de la norme qui est de 50. [2]

Avant le traitement déjà les pools de plasmas constitués donnent

des résultats satisfaisants quant à leur avidité et à l'intensité de la

réaction comparée aux normes de référence. La rapidité de la

réaction (avidité) et l'intensité qui sont diminuées dans notre cas

peuvent s'expliquer par le fait qu'avant le traitement, certains sites

de reconnaissance des anticorps ne sont pas libérés. Dans ces

------------------------- 91Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


conditions les anticorps sont moins avides. D'où nécessité de

traitement préalable pour améliorer l'activité de ces anticorps

naturels.

2) Activité des pools de plasmas après le traitement

(Tableau XII, XIII, XIV)

L'analyse des résultats montre une nette amélioration de la

performance des sérums après le traitement. L'avidité passe, de 9,

12, 10, et 8 (tableau XII) à 5, 10, 9 et 4 respectivement pour les

anti-A 1, anti-A2, anti-B et anti-AB (tableau XIII).

Les titres sont passés du simple au double pour les sérums tests et

les scores ont connu une élévation substantielle supérieure ou

égale à 20 unités pour chaque anti-sérum. Ceci s'explique par le

fait qu'après traitement, l'encombrement stérique est levé et les

sites anticorps libérés. Ainsi le titre maximum passe de 64 à 128

quand le titre minimal est de 64. Le score maximum de l'anti-AB

passe de 46 à 69.

Les agglutinations s'obtiennent plus rapidement à partir de 4

secondes pour l'anti-AB et à partir de 5 secondes pour l'anti-A

avec le A1.

L'intensité des agglutinations reste toujours à 3 ( +) pour tous les

sérums.

Comparés aux valeurs minimales auxquelles doivent répondre le

sérum test anti-A, anti-B, anti-AB [2] nos résultats se situent au

dessus des normes (tableau XIV). Aussi considérant le temps de

réaction, les anti-A obtenus dans notre série donnent une réaction 92----------------------------



avec les hématies A1 à 5 secondes comparativement à la norme qui

est de 8 secondes. Jusqu'à un titre 128, l'anti-A de notre série

donne une réaction avec les hématies A1.

Les anti-sérums anti-B et anti-AB sont tous aussi performants,

comparés aux valeurs de référence.

Nos résultats sont superposables à ceux obtenus par d'autres

auteurs notamment à A. Bigot et coll. [2] à Cotonou d'une part et N.

SAID et coll. [13] en Tunisie d'autre part. En effet A. Bigot et coll.

[2], dans leurs études sur la production expérimentale des réactifs

de groupage sanguin ABO au CNTS de Cotonou ont trouvé des

valeurs proches des nôtres aussi bien en ce qui concerne l'avidité ,

l'intensité , le titre que le score. Ainsi les sérums tests produits par

A Bigot et coll. [2]. Dans leur étude réagissent entre 7 et 12

secondes pour l'anti-A quand le nôtre agglutine entre 5 et 10

secondes. L'anti-B réagit à 9 secondes comme le nôtre. {Tableau

XIV).

Concernant l'anti-AB, nous avons fait réagir le nôtre uniquement sur

des hématies AB ce qui a donné une meilleure avidité 4 secondes

par rapport à celui du CNTS de Cotonou qui a été testé sur les

hématies A1(8 secondes) A2(12 secondes) et B (8secondes).

{Tableau XIV).

Ceux obtenus par A Bigot vont de 256 pour l'anti-A à 64 pour l'anti

B. Toutefois la norme minimale requise étant 64 notre sérum anti-A

garde toute sa qualité en tant que réactif de groupage. Les

performances des sérums tests obtenus par N. Said et coll [13] au 93-------------------------

Y api Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


CNTS de Tunisie bien que superposables aux nôtres sont

meilleures.

En outre ces auteurs ont obtenu des sérums dont les avidités

varient entre 2,67 secondes pour l'anti-A et 4,22 secondes pour

l'anti-B. Leurs réactifs ont réagi à des titres très élevés allant de

64(seul anti-8) à 512 (pour les autres). Deux explications peuvent

justifier la qualité de leur sérum. D'abord leur pool était constitué de

moins de sérums par rapport au nôtre, soit 5 sérums par pool

contre 20 dans nôtre cas. En suite ayant fait leur sélection chez des

donneurs réguliers de sang dans un centre de transfusion sanguine

(au CNTS de Tunisie), ils ont eu la possibilité de sélectionner les

sérums ayant présenté les meilleures performances pour constituer

leur pool. Si les réactifs obtenus par N. Said et coll. [13] ont

présenté de meilleures performances par rapport aux nôtres, nos

sérums demeurent de qualité acceptable par rapport aux normes

minimales requises. 3) Contrôle de qualité des sérums de notre série

(Tableau XV, XVI)

Nous avons effectué une étude comparative entre nos sérums tests

et les sérums vendus dans le commerce. Cette étude comparative

a porté sur le groupage sanguin de 150 sujets, composé de

patients adressés au laboratoire d'immunologie et d'hématologie du

CHU de Cocody pour phenotypage érythrocytaire dans le système

ABO. Les performances obtenues avec les réactifs du commerce

vont de 1 seconde à 2 secondes pour l'avidité. 94 ----------------------------



Les réactifs ont réagi à des titres très élevés, allant jusqu'au titre

256, avec des scores entre 69 et 76 (tableau XV). Les valeurs

obtenues avec les réactifs du commerce sont plus proches de

celles obtenues par N. Said et coll. [13] en Tunisie. Il faut noter que

les réactifs du commerce sont des anticorps monoclonaux, c'est à

dire produits par un seul clone de lymphocytes B par la technique

des hybridomes de Këhler et Milstein [8] et donc de pureté, de

spécificité et d'affinité plus élevées que les anticorps polyclonaux.

Cependant, nos réactifs ont permis de déterminer, il faut le dire, les

groupes sanguins du système ABO de notre échantillon dans des

proportions superposables à celles des réactifs du commerce

(tableau XV), et de caractéristiques de performance acceptables

par rapport aux normes admises (tableau XIII).

IV) ETUDE DU COÛT DE REVIENT DE NOS REACTIFS

(Tableau XVII, XVIII, XIX)

Il ressort de cette étude que les conditions matérielles minimales

à réunir pour la production de nos réactifs de groupage sanguin

ABO, sont de réalisation facile.

Il convient de mentionner qu'en dehors des colorants, des filtres,

des flacons des produits chimiques, que nous avons eu à acquérir

par financement propre (Tableau XVII), le reste du matériel se

retrouve dans l'équipement de base d'un laboratoire Immunologie

et hématologie classique.

C'est à partir du sang prélevé chez les tout-venants pour le phénotypage érythrocytaire dans le système ABO, d'un minimum

95--------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


de matériel et de quelques produits chimiques courants, facilement

accessibles dans le commerce que nous avons préparé les réactifs

de groupage sanguin ABO.

La technique de préparation des anticorps polyclonaux anti-A, anti

B et anti-AB a été facile et moins onéreuse.

La disponibilité du matériel et des réactifs suscités nous a permis

de répéter nos tests et de nous rendre compte de la reproductivité

de la technique ; les résultats étant identiques d'un test à un autre,

en terme d'avidité, d'intensité de la réaction, de titre que de score.

Dans le commerce, la quantité de chaque réactif de groupage

sanguin dans le système ABO est de 10 ml.

Les 3 flacons d'anti-A, d'anti-B et d'anti-AB nécessaires pour le

phénotype ABO complet, réalisent au total 150 groupages sanguins

dans le système ABO, ce qui équivaut alors à 30 ml de réactif.

(Tableau XVIII). Le prix d'achat d'un flacon de chaque spécificité

d'anticorps est de 6.000 F CFA d'où un coût total de 18.000 F CFA

pour grouper 150 individus. Dans notre étude, le prix de revient de 10ml de chaque

spécificité d'anticorps est de 375 F CFA ce qui revient à un coût

total de 1125 F CFA les 30 ml, pour réaliser 150 phénotypage

ABO. (Tableau XVIII).

La comparaison des coûts du commerce (anticorps monoclonaux)

et de notre étude (anticorps polyclonaux) montre un net avantage

en faveur de nos réactifs (Tableau XVIII). 96 ---------------------------



Quand nous faisons la comparaison avec le CHU de Cocody où

nous avons réalisé ce travail, les dépenses sont de 1.386.000 F

CFA pour l'achat de réactifs de groupage ABO par an.

Cette structure utilise 231 flacons de réactifs, ce qui correspond à

2.310 ml de réactifs et réalise 11.550 tests de phénotypage ABO.

(Tableau XIX). Si nous faisons une estimation par an avec nos

réactifs pour le même nombre de tests les dépenses se chiffrent à

86625 F CFA soit un différentiel de 1299375 F CFA même si l'on

inclut dans notre cas, certains coûts additionnels comme la

maintenance des appareils etc., le prix unitaire du flacon de 10ml

de nos réactifs n'excéderait pas la moitié du prix d'un flacon de 10

ml de réactif de commerce.

Le prix de revient de nos réactifs peut être estimé au moins à 16

fois moins chers que celui du commerce. Cette marge bénéficiaire

est sensiblement identique à celle retrouvée par

A. Bigot et coll. [2] qui est de 1.336.440 F.



De ce qui précède, on peut relever que, la découverte en 1975 de

la technique des hybridomes par Georges Kahler et César Milstein,

a entraîné une révolution dans la production des anticorps

monoclonaux. L'effet de mode aidant, tous les utilisateurs

d'anticorps se sont lancés dans la consommation des

monoclonaux, au détriment des polyclonaux, sans regarder au coût

de ces réactifs. La Côte d'Ivoire elle aussi dans les années 1980 a

opté pour l'utilisation des anticorps monoclonaux pour le

phénotypage érythrocytaire. Ceci était bien supportable parce que

coïncidant avec la relative prospérité du pays. Aujourd'hui la donne

a changé. Notre pays vit une crise qui a relégué son pouvoir

d'achat au plus bas ; malgré cela, il faut que les activités dans tous

les secteurs se poursuivent et particulièrement dans les centres de

santé. La transfusion sanguine, importante activité thérapeutique,

s'accompagne de phénotypage érythrocytaire préalable. Faut-il dès

lors persister dans l'usage de monoclonaux, quand la preuve vient

d'être faite qu'avec du sérieux, l'on peut produire des réactifs

polyclonaux à coût nettement inférieur ?

Nous pensons que le perfectionnement de la technique de

production des anticorps polyclonaux, pour le phénotypage

érythrocytaire dans le système ABO, en attendant d'arriver à

d'autres systèmes, notamment le système Rhésus, offre d'énormes

perspectives pour nos centres de santé dans la période per, mais

surtout post crise.



Il importe donc que :

1-le service d'immunologie poursuive le travail afin d'arriver à

produire ces réactifs en grande quantité

2-Le service d'immunologie affine la méthode de

conditionnement de ces réactifs

3-Un travail de sensibilisation des structures de consommation

des réactifs de groupage soit entrepris, afin de les amener à utiliser

ces réactifs polyclonaux qui, en terme de performance donnent

toute la satisfaction attendue, avec des coûts très concurrentiels.

101 ----------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


Cette étude expérimentale et comparative nous a permis d'analyser 203 plasmas de sujets adressés au laboratoire d'immunologie et d'hématologie pour bilan biologique, en vue de sélectionner les plasmas présentant une meilleure réactivité anticorps et utilisables comme réactifs de phénotypage érythrocytaire dans le système ABO. 60 plasmas ont été retenus sur la base des critères de qualité régissant les normes internationales d'utilisation des produits sanguins. Ces plasmas ont servi à constituer trois pools de sérums anti-A, anti-B et anti-AB comprenant chacun 20 types de sérums différents. Un premier test réalisé avec ces pools avant traitement a donné des résultats proches des normes de référence. Après le traitement on a obtenu de meilleurs résultats par rapport à ces normes de référence. 30cc de nos réactifs ont permis de faire le groupage sanguin ABO de 150 individus. Les résultats ont confirmé ceux des réactifs du commerce. Le prix de revient de 30cc de nos réactifs pour grouper ces 150 sujets est de 1225 francs CFA alors que 30cc de réactifs du commerce pour phénotyper les 150 sujets reviennent à 18.000F.

A ce coût, les comparaisons ont montré qu'une structure sanitaire qui utilise les réactifs du commerce dépense annuellement 1.386.000 F CFA contre 86625 F CFA pour nos anticorps en nombre de tests égal et à performances superposables.

Ces résultats nous fondent à recommander la vulgarisation de la technique perfectionnée de production de ces anticorps polyclonaux, pour mettre à la disposition de nos formations sanitaires, des réactifs de performance avérés et moins onéreux.

103------------------------------------ Y api Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


________________________________ 104 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


1) Assim lmmunogénétique des groupes sanguins in Assim immunologie générale deuxième édition Paris Arnette 1992. 291

2) Bigot A., Zohoun 1., Seclonde Ch., Lafia E., Kodjoh N. Guerrierie Cl. De Bruyer M. Production expérimentale des réactifs de groupage ABO au CNTS de Cotonou Médecine d'Afrique Noire, 1994 Vol 41 (7).

3) Brou Melaine Thibaut. Influence du paludisme grave plasmodium falciparum sur le test à l'antiglobuline (coombs direct) chez l'enfant ivoirien. Thèse médecine Abidjan (cote d'ivoire); université de cocody 2004-2005 N°4039.

4) Djohan Vincent. Contribution au phénotypage érythrocytaire chez les donneurs de sang.

Mémoire ces d'immunologie médicale Abidjan ( cote d'ivoire) ; université de cocody 2002-2003 N°1111.

5) Elmehdi A G Amahady . perfectionnement d'une techniquede production d'ac poly clonaux anti-érythrocytaire :systèmes ABO et RHESUSMémoire ces d'immunologie médicale Abidjan (cote d'ivoire) ;université de cocody 2002-2003 N°890.

6) Genetet B., système de groupe sanguine in B. Genetet hématologie ministère de l'éducation nationale.

7) Harvey Williame, la circulation du sang. Trad. du latin et précédé d'une étude historique par Charles Richet, ... Paris, Masson, 1692,232p

8) Kohler G. Milstein C. continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined speciality Nature,Aout 1975,256



9) Landsteiner. K, Winer. A, an agglutinable factor in human blood recognized by immum seraford Rhesus blood proc. soc. exp bail New York, 1940, 45.

10) N'goran kouassi lue kouame.contribution a l'étude desgroupes sanguins érythrocytaires : inventaire et répartitionselon les ethnies. Thèse médecine Bouaké (cote d'ivoire) ;université de Bouaké 2002-2003 N°52.

11) Race, Sanger Blood groups in man oxford, 1968 Blackwell Ed.

12) Race, Sanger Blood groups in man oxford, 1975 Blackwell Ed.

13) Said N., Regaya F., Benahmed F., Karoui M., Boukef K. Etude comparative de réactifs de groupa sanguin ABO Tunisie médicale, Nov. 1995, Vol73, N°11 447-480

14) Sanogo Adama, système Duffy et paludisme grave. Mémoire CES d'immunologie médicale Abidjan (Côte d'Ivoire) ; Université de Cocody 2003-2004 N°1126.

15) Seka Seka Joseph. Contribution à l'étude des groupes sanguins érythrocytaires : inventaire et répartition selon les ethnies thèse à Abidjan (Côte d'Ivoire) ; Université de Cocody 1985-1986 N°680

16) Seka Seka Joseph,Sombo Mambo François, Cabanes R. les groupes sanguins érythrocytaires en Côte d'Ivoire. Inventaire et répartition selon les ethnies, première partie. Publication médicale africaine, N°83, juin Juillet 1987

17) Sombo Mambo Francois, Seka Seka Joseph, Cabanes R. les groupes sanguins érythrocytaires en Côte d'Ivoire. Inventaire et répartition selon les ethnies, deuxième partie. Publication médicale africaine, N°94, 1988.



107----------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)

SERMENT D'HIPPOCRATE

En présence des maîtres de cette écoleet de 111es chers condisciples, je prometet je jure au 110111 de l'être suprême, d'êtrefidèle aux lois de l'honneur et de la probitédans ] 'exercice de la médecine.

Je donnerai mes soins gratuits à l'indigentet je n'exigerai jamais de salaires au-dessusde mon travail.

Admis à l "intérieur des niaisons, mes yeuxne verront pas ce qui s'y passe, 111a langue tairales secrets qui me seront confiés et 111011 étatne servira pas à corrompre les mœursni à favoriser les crimes.

Respectueux et reconnaissant envers mes maîtres,je rendrai à leurs enfants l'instruction que j'ai reçuede leur part.

Que les hommes m'accordent leur estime si je suisresté fidèle à mes promesses, que je sois couvertd'opprobres et méprisé de 111es confrères si j'ymanque.


109------------------------------------ Y api Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)


Ce travail réalisé de Mars à septembre 2006 est le résultat d'une étude expérimentale et comparative. Il nous a permis de perfectionner une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-A anti-B et anti-AB. Cette étude s'est déroulée au laboratoire d'immunologie et d'hématologie du CHU de COCODY en trois étapes. La première étape a consisté à faire le phénotypage érythrocytaire dans le système ABO de 203 sujets des deux sexes, âgés de 18 à 30 ans. Dans une seconde étape 90 plasmas recueillis ont été sélectionnés sur la base de leur qualité puis ont subi une série de tests dans un ordre bien défini à savoir: -La recherche des critères de performance des anticorps naturels contenus dans ces plasmas que sont l'avidité, l'intensité de la réaction, le titre et le score. -La recherche et l'élimination des sérums contenant des anticorps immuns par deux tests :

~ Le test en milieu salin ~ Le test de Coombs indirect

Enfin, dans une troisième étape nous avons retenu 60 plasmas ayant donné des agglutinations à des titres supérieurs ou égaux à 32. A partir de ces plasmas retenus, nous avons constitué trois pools en regroupant les plasmas par type d'anticorps qu'ils contiennent. Ainsi chaque pool contient 20 types de plasmas. Avions ainsi pour le pool 1 des anti-A pour le pool 2 des anti-B et pour le pool 3 des anti- AB.

Afin d'améliorer la performance, chaque pool de plasmas a été stérilisé par de l'azide de sodium, recalcifié par du chlorure de calcium enfin, de l'héparine a été ajoutée pour bloquer la fibrinoformation. La distinction de ces trois pools entre eux a nécessité une coloration par l'éosine et le vert de méthyl. Les sérums ainsi préparés ont servi au phénotypage érythrocytaire de 150 sujets dans le système ABO.

Nos résultats ont laissé noter que nos réactifs avec des performances comparables à celles des réactifs du commerce confirment l'efficacité de la technique de production de ces anticorps polyclonaux. MOTS CLES: mise au point, technique de production, Anticorps polyclonaux, anti érythrocytaire.



Lu et approuvé Le président du jury d'Abidjan, Monsieur le professeur KODO Michel

Le Doyen de l'UFR des Sciences Médicales

Monsieur le professeur DIOMANDE Nohenou Isidore Jean-Marie

Vu et permis d'imprimer, Le président de l'Université de Cocody-Abidjan

Monsieur le professeur THEA Gokou Célestin

Par délibération, la faculté a arrêté que les opinions émises dans les dissertations qui lui sont présentées doivent être coïncidées comme propres à leur auteur et qu'elle n'entend leur donner aucune approbation, ni improbation.


'

RESUME

Ce travail réalisé de Mars à septembre 2006 est le résultat d'une étudeexpérimentale et comparative.

Il nous a permis de perfectionner une technique de production d'anticorpspolyclonaux anti-A anti-8 et anti-AB. Cette étude s'est déroulée au laboratoired'immunologie et d'hématologie du CHU de COCODY en trois étapes.

La première étape a consisté à faire le phénotypage érythrocytaire dans lesystème ABO de 203 sujets des deux sexes, âgés de 18 à 30 ans. Dans uneseconde étape 90 plasmas recueillis ont été sélectionnés sur la base de leur qualitépuis ont subi une série de tests dans un ordre bien défini à savoir :

. -La recherche des critères de performance des anticorps naturels contenusdans ces plasmas que sont l'avidité, l'intensité de la réaction, Ae titre et le score.

-La recherche et l'élimination des sérums contenant des anticorps immunspar deux tests :

+ Le test en milieu salin

+ Le test de Coombs indirect

Enfin, dans une troisième étape nous avons retenu 60 plasmas ayant donnédes agglutinations à des titres supérieurs ou égaux à 32. A partir de ces plasmasretenus, nous avons constitué trois pools en regroupant les plasmas par typed'anticorps qu'ils contiennent. Ainsi chaque pool contient 20 types de plasmas.Avions ainsi pour le pool 1 des anti-A pour le pool 2 des anti-8 et pour le pool 3des anti- AB.

Afin d'améliorer la performance, chaque pool de plasmas a été stérilisé parde l'azide de sodium, recalcifié par du chlorure de calcium enfin, de l'héparine aété ajoutée pour bloquer la fibrinoformation. La distinction de ces trois pools entreeux a nécessité une coloration par l'éosine et le vert de méthyl.

Les sérums ainsi préparés ont servi au phénotypage érythrocytaire de 150sujets da1ts le système ABO.

Nos résultats ont laissé noter que nos réactifs avec des performancescomparables à celles des réactifs du commerce confirmentss l'efficacité de latechnique de production de ces anticorps polyclonaux.

MOTS CLES: mise au point, technique de production, Anticorps polyclonaux, anti-érythrocytaires.

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