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TP3: MUTAGENESE D’UNE SOUCHE DE LEVURE SOUS L’EFFET DE L’ENVIRONNEMENT

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Page 1: TP3: MUTAGENESE DUNE SOUCHE DE LEVURE SOUS LEFFET DE LENVIRONNEMENT

TP3: MUTAGENESE

D’UNE SOUCHE DE LEVURE SOUS

L’EFFET DE L’ENVIRONNEMENT

Page 2: TP3: MUTAGENESE DUNE SOUCHE DE LEVURE SOUS LEFFET DE LENVIRONNEMENT

Situation déclenchante

Une souche de Levure (Champignon unicellulaire), appelée Ade2, présente une chaîne de synthèse de l’adénine incomplète aboutissant à l’accumulation d’un composé A.I.R. (Amino Imidazole Ribotide) se pigmentant en rouge par oxydation : la souche est, de ce fait, de couleur rouge (pour cultiver cette souche, il est donc nécessaire d’utiliser un milieu de culture contenant de l’adénine)

Une souche de Levure (Champignon unicellulaire), appelée Ade2, présente une chaîne de synthèse de l’adénine incomplète aboutissant à l’accumulation d’un composé A.I.R. (Amino Imidazole Ribotide) se pigmentant en rouge par oxydation : la souche est, de ce fait, de couleur rouge (pour cultiver cette souche, il est donc nécessaire d’utiliser un milieu de culture contenant de l’adénine)

Toute mutation affectant les gènes impliqués dans cette chaîne de synthèse de l’A.I.R. empêche la formation de ce composé et provoque la disparition du pigment rouge : les levures sont alors blanches.

Toute mutation affectant les gènes impliqués dans cette chaîne de synthèse de l’A.I.R. empêche la formation de ce composé et provoque la disparition du pigment rouge : les levures sont alors blanches.

D’autres mutations concernant des gènes importants du métabolisme de la Levure peuvent entraîner la mort de la cellule. Il s’agit de mutations dites létales.

D’autres mutations concernant des gènes importants du métabolisme de la Levure peuvent entraîner la mort de la cellule. Il s’agit de mutations dites létales.

Page 3: TP3: MUTAGENESE DUNE SOUCHE DE LEVURE SOUS LEFFET DE LENVIRONNEMENT

Problématique : l’intensité d’un agent

mutagène, ici les UV, a-t-elle une influence sur le type de gènes qui seront mutés ?

Problématique

Page 4: TP3: MUTAGENESE DUNE SOUCHE DE LEVURE SOUS LEFFET DE LENVIRONNEMENT

-Formulation de deux hypothèses et de leur conséquences vérifiables

-Construction d’un tableau de dénombrement des différentes colonies de Levure pour chaque durée d’exposition

-Réalisation d’un tableau de % de létalité et de % de colonies blanches

-Construction d’un graphique à l’aide du tableur « Excel » présentant l’évolution des deux pourcentages en fonction de la durée d’exposition aux UV.

-Réponse aux questions posées permettant de résoudre la problématique..

ConsigneConsigne

Page 5: TP3: MUTAGENESE DUNE SOUCHE DE LEVURE SOUS LEFFET DE LENVIRONNEMENT

Rappel: Démarche

expérimentale

Rappel: Démarche

expérimentaleProtocole de

manipulation en microbiologie

Protocole de manipulation en

microbiologie

Aide à la manipulation

Aide à la résolution

Page 6: TP3: MUTAGENESE DUNE SOUCHE DE LEVURE SOUS LEFFET DE LENVIRONNEMENT

 NOM DES ETAPES

 

 SIGNIFICATION DES ETAPES

  

OBSERVATION = CONSTATD’UN PHÉNOMÈNE BIOLOGIQUE

OU GÉOLOGIQUE

 Données d'origines diverses: médias, scolaires, personnelles..   

 PROBLEME

 Question issue de l'observation du phénomène biologique ou géologique observé 

  

HYPOTHESE

 Solution provisoire au problème posé. (=supposition)(on peut formuler plusieurs hypothèses pour résoudre un même problème) 

CONSEQUENCE VERIFIABLE Résultats auxquels on peut s'attendre si l'hypothèse est valide 

= Résultats prédictifs 

Page 7: TP3: MUTAGENESE DUNE SOUCHE DE LEVURE SOUS LEFFET DE LENVIRONNEMENT

    

EXPERIENCE (4 sous-étapes : Principe

Dispositif expérimental Protocole

Réalisation

 Elaboration et réalisation d’un protocole expérimental pour éprouver l’hypothèse. Le protocole expérimental doit respecter les 4 règles suivantes :* Le paramètre testé doit être supprimé et/ou doit varier* Il ne faut tester qu’un seul paramètre à la fois ( les autres devant être optimaux et constants )* Il faut réaliser une expérience témoin* Il faut réaliser plusieurs fois l’expérience 

 RESULTATS

 

Constat des différences entre le début et la fin de l’expérience

= Analyse des résultats 

   

INTERPRETATION

Confrontation des résultats avec les résultats prédictifs d’où l’hypothèse est validée ou réfutéeou Sans formulation d’hypothèse, l’interprétation correspond à l’explication des résultats proposés

 NOM DES ETAPES

 

 SIGNIFICATION DES ETAPES

 

Page 8: TP3: MUTAGENESE DUNE SOUCHE DE LEVURE SOUS LEFFET DE LENVIRONNEMENT

• ATTENTION ! Pour votre sécurité et la réussite de l’expérience, respecter bien les conditions de travail suivantes :

• Porter une blouse en coton• Passer les mains à l’alcool• Aseptiser la paillasse• Travailler uniquement dans une zone de stérilité lors de la manipulation des levures, des milieux et instruments

stériles• Ne pas toucher le milieu des boîtes de pétri avec les mains• Eviter les mouvements brusques et de parler devant les boîtes ouvertes• Placer les pipettes souillées dans un pot de javel

Étalement des suspensions de levures sur la gélose des boîtes de pétri :•Toujours agiter la suspension de levures avant d’en prélever, car les levures sédimentent rapidement•Verser avec un compte-gouttes stérile, 0,1 ml (2 gouttes) de la suspension de levures ade2 sur chacune des boîtes de milieu de culture mises à votre disposition.•Étaler immédiatement avec un étaleur stérile d’un mouvement circulaire et répété, afin de répartir le mieux possible le liquide sur le milieu (attention à ne pas endommager la surface de la gélose).•Fermer les boîtes puis tracer sur une des deux boîtes, 4 secteurs sur le fond de la boîte référencés : I, II, III et IV•Penser à également indiquer un nom du binôme pour retrouver les boîtes facilement 

Page 9: TP3: MUTAGENESE DUNE SOUCHE DE LEVURE SOUS LEFFET DE LENVIRONNEMENT

•Éteindre la lampe•Introduire la boîte de pétri sectorisée gélose vers le haut dans l’enceinte à UV C.•Enlever le couvercle des boîtes (Il est conseillé de laisser les couvercles à l’intérieur pour qu’ils restent dans des conditions de stérilité).•Remplacer par un couvercle découpé présent dans l’enceinte en mettant l’ouverture sur le secteur I •Vérifier le positionnement de la bavette transparente et la fermeture de la porte battante avant chaque période d’irradiation

•Démarrer le chronomètre une fois la lampe allumée•Exposer pendant 15 secondes le secteur I•Tourner le couvercle d’un quart de tour •Exposer pendant 45 secondes le secteur II•Tourner le couvercle d’un quart de tour •Exposer pendant 90 secondes le secteur III•Tourner le couvercle d’un quart de tour •Exposer pendant 120 secondes le secteur IV

•Dans l’enceinte enlever le couvercle découpé, le remplacer par un couvercle entier puis sortir la boîte de Pétri de l’enceinte.

Page 10: TP3: MUTAGENESE DUNE SOUCHE DE LEVURE SOUS LEFFET DE LENVIRONNEMENT

AIDE à la manipulation-Lisez attentivement la fiche technique « Travail en conditions stériles » afin de mener à bien votre expérience.

- Suivez rigoureusement les étapes de la fiche protocole : « Ensemencement et exposition aux UV ».

AIDE à la manipulation-Lisez attentivement la fiche technique « Travail en conditions stériles » afin de mener à bien votre expérience.

- Suivez rigoureusement les étapes de la fiche protocole : « Ensemencement et exposition aux UV ».

Page 11: TP3: MUTAGENESE DUNE SOUCHE DE LEVURE SOUS LEFFET DE LENVIRONNEMENT

AIDE à la résolution

-Pour le tableau de dénombrement, pensez aux différentes catégories de colonies qu’il vous faudra dénombrer.

-Pour le calcul de %, pensez aux quantités totales pour chaque rapport.

- Pour répondre à la question sur la variation des effets de l’agent mutagène, comparez les deux courbes du graphique après avoir fait le lien entre les différents types de mutations pouvant affecter la souche Ade2 et les % calculés.

AIDE à la résolution

-Pour le tableau de dénombrement, pensez aux différentes catégories de colonies qu’il vous faudra dénombrer.

-Pour le calcul de %, pensez aux quantités totales pour chaque rapport.

- Pour répondre à la question sur la variation des effets de l’agent mutagène, comparez les deux courbes du graphique après avoir fait le lien entre les différents types de mutations pouvant affecter la souche Ade2 et les % calculés.