Southern blot

Préparé par:HAMIDOU SelmaHADJERSI Amina

Introduction:Les blots sont des techniques de transfert d'ADN,

d'ARN et de protéines sur un support de sorte qu'ils peuvent être séparés

C'est une technique indirecte d'hybridation de l'ADN mise au point en 1975 par le biochimiste Edwrad Southern.

La technique est connue comme le transfert d'ADN ou «Southern blot »

Le Southern est une technique longue qui est la base de l'essor de la biologie moléculaire mais qui est souvent remplacée par la PCR.

Le but de southern blot:

Elle permet de détecter une séquence d'ADN génomique dite unique

Cette technique permet de localiser une séquence d’ADN parmi les fragments ayant migrés, grâce à une sonde marquée

Principe :La clé de ce procédé est l'hybridation.

Hybridation: Il est le processus de formation d'une molécule d'ADN double brin entre une sonde d'ADN simple brin et un ADN cible simple brin.

Il ya 2 éléments importants de l'hybridation: ◦Les réactions sont spécifiques à des sondes vont

seulement se lier à des cibles avec une séquence complémentaire.

◦La sonde peut trouver une molécule de cible dans un mélange de millions de molécules apparentées mais non complémentaires.

Protocole :Extraction de l’ ADNRestriction de l’ADNl’électrophoréseTransfert Hybridation autoradiographie

Les outils :

EXTRACTION D’ADN:

Restriction de l'ADN génomique:

Champ d’application : Pour identifier l'ADN spécifique dans un échantillon

d'ADN Pour isoler l'ADN désiré pour la construction d'ADNr Identifier les mutations, délétions et des

réarrangements de gènes Utilisé dans le pronostic du cancer,EX:MYCN Le diagnostic de VIH-1 et les maladies infectieuses Dans RFLP Restriction Fragment Length

Polymorphism:Dans empreintes génétiquesle diagnostic prénatal et des maladies génétiques