IDENTIFICATION DES NOUVELLES VARIETES DE BLES PAR L’ELECTROPHORESE DES GLIADINES EN GEL DE

POLYACRYLAMIDE

ABDUL RAHIM muhammad najhan2ème année DUT CHIMIE

2012/2013

Maître de stage : LEMASSON Sylvia

PlanIntroduction de l’électrophorèsePrincipe de l’électrophorèseGliadinesDéroulementConclusion

Introduction de l’électrophorèsePermettre de

connaître la composition d’un mélange de blé présente dans le lot.

Permet de savoir si le profil électrophorétique de ces grains est stable ou pas.

Principe de l’électrophorèse des gliadines• Basée sur la migration différentielle de particules chargées électriquement.

•Protéines très chargées et de petites tailles migrent vite, et vice versa.

Après extraction dans l’éthanol, les gliadines en milieu acide, chargées positivement.

Elles vont migrer vers la cathode (pôle -) de la cuve électrophorétique.

Pourquoi travaillons nous avec les gliadines ?

Simple à solubiliser et pas de réarrangement.

Gluténines : poids moléculaires élevés. : difficiles à séparer. : tendance à se réarranger entre elles.

Déroulement

Dans une journée, il y a 40 grains à analyser

Pour simplifier, il faut organiser la journée.

Le schématique d’une journée

Echantillonnage•Peser grain par grain.

•Ecraser les et mettre dans les microtubes.

•Ajouter la solution chloro-2-éthanol.

•Laisser en contact au moins une journée.

Mise en place du matériel

•Homogénéiser les microtubes au vortex et centrifuger les.

•En attendant, faire le support de coulage et préparer les matériaux.

PolymérisationPrélever 70 mL de la

solution acrylmide et y ajouter 330 mL d’eau oxygénée.

Couler les gels entre les 2 plaques rapidement.

Atendre 5 minutes pour la polymérisation.

Méchanism de la polymérisationPolymérisation d’un monomère acrlyamide

+ un co monomère, NN-méthylène bisacrylamide résulte le gel de polyacrylamide.

Le gel est polymérisé par réaction en chaine.

SO42- ACRYLAMID

EBISACRYLAMIDE

Initiation

Propagation

Répétition n fois résulte le gel de polyacrylamide

Terminaison

Le dépôt d’extraits des protéines

L’électrophorèse

•Commencer l’électrophorèse quand tout sera prêt.

•Appliquer la tension 800 volts pendant la migration.

•Les protéines sont chargées positivement, donc migrent vers la cathode (-).

La coloration des gelsDès que, tous les

protéines sont migrées, arreter l’électrophorèse.

Démouler les gels et disposer séparément.

Ajouter 250 mL la solution colorante.

Laisser agiter au moins 24 heures avant la lecture.

25 mL solution de bleu coomasie + 95 mL acide trichloroacétique + QSP 500 mL l’eau.

Soit, il y a 2 gels différents à chaque synthèse.

La lecture de diagramme électrophorétiqueNous observons 20 bandes

protéiques.

Il y a 4 zones de migrations bien distinctes.

ω-gliadines, γ-gliadines, β-gliadines, et ά-gliadines.

Grâces à ces gliadines, la détermination la variété de blé est possible.

Résultat

Exemple

•Sogby, il a 2 types

•Sogby type 1 = 40,4+

•Sogby type 2 = 40,4-

CONCLUSION

MERCI BEAUCOUP