rôle des cyp dans la synthèse doxylipides chez lhomme ea-948 faculté de médecine de brest...
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Rôle des CYP dans la synthèse d’oxylipides chez
l’homme
EA-948
Faculté de médecine de Brest
Journée OUEST-genopole® « Stress Oxydant »Rennes 28 juin 2007
Production cellulaire d’ERO
Consommation d’oxygène :
mitochondrieRéticulum endoplasmique
péroxysomes
CYTOCHROMES P450
Les CYPs : des monooxygénases multicartes
Oxydation des xénobiotiques élimination (fonctionnalisation)
Médicaments
Toxiques (Ethanol, benzo(a)pyrène, poluants )
Oxydation des endobiotiques élimination , signalisation
Hormones
Acides gras
COO-
La réaction enzymatique
Réaction d’hydroxylation
RH + O2 + NADPH + H+ R-O-H + H2O + NADP+P450
Cycle catalytique
Les CYP : des enzymes inductibles
Facteurs environnementaux :
– Médicaments (phénobarbital, fibrates …)– Alcool– Fumée de cigarette
Facteurs génétiques :
– Différences interindividuelles de sensibilité aux xénobiotiques (phamacogénétique)
Pathologies associées
Toxicité de l’éthanol (CYP2E1 Ethanol )
Re-perfusion après l’ischémie (CYP1A1, CYP2J2 fumée de cigarette, cocaïne)
Plaque d’athérome (CYP4F3, CYP2C9)
Inflammation (CYP4F3)
Cancers (CYP4A11)
Le métabolisme des acides gras par les CYP
COO-
acide arachidonique
PLA2
-oxydation
Stimuli : Infection, blessure, hormonal …
ProstaglandinesThromboxanes
COX
O
O
COO -
COOH
prostaglandine G2
Leucotriènes
LOX
COO -
OH
leukotriène B4
OH
EET, HETE
CYP450
COO-
OH20-HETE
CYP450
Rôles biologiques des oxylipides
AA EET : vasodilatateurs / rôle pro-angiogénique HETE : vasoconstricteurs / mitogénique
DHA activation canaux Ca+2
EPA Ligand de PPAR
Quelles isoenzymes impliquées
Enzymes recombinantes
Paramètres cinétiques
Inductions
Inhibitions (compétitives / « suicides »)
Anticorps monoclonaux
SiRNA
CYP 450 : famille muligénique (57 chez l’homme)
Quelles régulations ?
Régulation de l’expression du gène CYP4A11 dans les cellules hépatomateuses humaines
Régulation de l’expression du gène CYP4F3B dans les cellules hépatomateuses humaines
Régulation des CYP4A11, CYP4F3 chez l’homme
Production d’EET et de 20-HETE en fonction de l’état inflammatoire, l’hypertension
Quels modèles ?
Les enzymes recombinantes (Y. Amet, D. Lucas)
Les microsomes humains (banque) (Y. Amet, D. Lucas)
Les lignées cellulaires humaines (L. Corcos, E. Plée-Gautier)– Lignées Hépatomateuses (HepaRG)– Lignées gastriques, Oesophagiennes
Les cultures primaires humaines (E. Plée-Gautier)– Préadipocytes humains en différenciation
Les prélèvements sanguins (D. Lucas)
Quelles approches méthodologiques
In vitro– Etudes cinétiques (Y. Amet)– Méthodes analytiques : LC-MS, GC-MS, HPLC-radio (D. Lucas, Y. Amet)
Ex-vivo– Culture cellulaire (E. Plée-Gautier)– Transcripotomique (PCR-temps réel) (E. Plée-Gautier)– Protéomique (Western-blot) (D. Lucas, Y. Amet)– Lipidomique (GC-MS) (Y. Amet)– Si-RNA (E. Plée-Gautier)
In vivo– Prélèvement sanguins (inflammation, hypertension) (D. Lucas)
In-silico– Modélisation informatique du métabolisme lipidique (L. Corcos)
Les projets
Nouvelles stratégies anticancéreuses (cancers digestifs)
Implication des oxylipides dans mécanismes – de l’angiogénèse– de l’apoptose
Traitements anticancéreux : production de ERO
Pharmacogénomique des CYPs impliqués dans le métabolisme des anticancéreux (camptothécine)