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Résumé des épisodes précédents:

Ripley, Ron et l’antipathique John sont en route à bord de l’Héra, pour le Junon, après plusieurs jours de mission autour de la planète naine, Vesta.

TP 7

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1. Pluie de météores.

La porte du sas s’ouvre sans bruit sur le vide. Ripley active ses propulseurs à gaz et s’élance dans la clarté ténue. Le soleil n’est qu’un point perdu dans le sillage de l’Héra.

La voix de John Malcovich raisonne dans son casque.-- Ripley ?-- Je remonte la « colonne vertébrale » vers les moteurs. Les réservoirs 1 et 2 ont l’air en bon état. Pas de traces d’impacts. Je continue vers les 3 et 4.

-- C’est pas curieux de placer les réservoirs d’eau à cet endroit, demande Ron ?-- L’eau est notre meilleur bouclier contre les radiations électromagnétiques émises au cours des éruptions solaire. Cela évite à ton si beau visage de se ratatiner comme un vieux hamburger.

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1. Pluie de météores. Ripley continue sa progression.

-- J’y suis. L’ordi avait raison. La baisse de pression vient bien de mini perforations. Pas de gros dégâts. Je vais pouvoir réparer avec de la résine synthétique. Oh, c’est très curieux ! L’intérieur de la canalisation semble recouvert d’une espèce de mousse gluante. Je fais un prélèvement. Nous vérifierons que les tubes ne se décomposent pas.

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1. Pluie de météores. Ripley s’extirpe de sa combinaison spatiale. Ron inspecte et range les différents éléments du scaphandre.

-- Ca va, toi ?-- Sortir dans l’espace est mon plus grand plaisir. Penser à la présence de John me fait hésiter à rentrer dans le vaisseau. Je crois que j’aimerai me perdre dans le vide.-- Déconne pas.-- T’en fais pas, je sais que tu es là.Ron la prend dans ses bras.

-- On a l’air fin tous les deux. Moi une « louve », et toi un pithécanthrope sorti de la guerre du feu.

A quoi Ripley fait-elle allusion

à propos de Ron Perlman ?

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1. Pluie de météores. -- Nous sommes la démonstration que l’amour ne passe pas obligatoirement par des relations physiques.

-- Tu me fais une déclaration, ma parole !-- Prends-le comme tu veux. Mais si notre relation peut, à toi et à Eva, vous éviter des ennuis à notre retour,...-- Tu veux que je te dise ? Je me contrefous de notre retour. Tu me fais du bien. Je n’ai jamais ressenti ça auparavant. Pour un homme, je veux dire !-- Là, c’est toi qui me fais une déclaration. Qu’est-ce qu’Eva dirait si elle t’entendait ?-- Tu n’es pas un danger pour elle. J’espère qu’elle le comprendrait.Ron se met à grimacer en tenant son ventre.-- Tu ne te sens pas bien ?-- C’est rien, juste une crampe au niveau du ventre. -- Tu es blanc comme un linge ; Si on devait faire cette tête à chaque fois que nous avons nos règles !

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-- Ne me fais pas rire, ça fait mal.Ron se met à tousser. Un jet écarlate jaillit de sa bouche et asperge Ripley. L’habitacle se remplit de gouttelettes sanglantes.-- Merde, Ron qu’est-ce qu’il t’arrive ?Ripley est saisit elle aussi par une série de crampes abdominales. Elle se laisse flotter jusqu’à la salle de pilotage.-- John ! Appelle le Junon ! Ron est malade...Elle aperçoit le bras du mécanicien qui flotte au-dessus de l’accoudoir du fauteuil. Un nuage rouge recouvre les commandes.-- Merde !Ripley se sangle au fauteuil. Elle pianote maladroitement sur les touches de la console de communication.-- Junon, ici Héra. Diagnostique différentiel. John est sans connaissance. Ron a des douleurs au ventre et vomit du sang. Je commence à présenter les mêmes symptômes. Je pense perdre connaissance dans une vingtaine de minutes. Impossible de manœuvrer le vaisseau. Adieu ! Un dernier message pour Eva. Quitte à mourir, il vaut mieux mourir en héros qu’en traitre. Mes dernières pensées sont pour toi. Je ne regrette rien. Puisse, un jour, les louves du monde entier vivre libres. J’aurais tellement aimé hurler encore une fois à la lune avec toi.Elle tousse. Les étoiles devant elle se couvrent de rouge.

1. Pluie de météores.

2

La main gantée saisit le mécanisme d’ouverture de secours. Le sas de l’Héra s’ouvre. Le scaphandre se glisse à l’intérieur. Eva retire son casque. Elle se rend au poste de pilotage.

2. Retour au Junon.

Elle trouve Ripley sanglée à son poste. Elle l’a prend dans ses bras. Elle sent son cœur battre contre son oreille.

-- Ripley ! Nous hurlerons encore à la lune toutes les deux !Son amie ouvre lentement un œil et sourit. Elle retombe dans l’inconscience.

2.1

Mélanie aide Eva à retirer son scaphandre spatiale tandis que Karrie installe Ripley dans la couchette de l’infirmerie. Angie effectue les premiers prélèvements sur la cosmonaute inconsciente et file au labo, Eva sur ses talons.

2. Retour au Junon. 2.1. Intoxication.

-- Eva, va te reposer. Il ne sert à rien de venir avec moi.-- Je ne me reposerai pas tant que je ne saurais pas si Ripley va vivre.-- Je te jure que je les sauverai tous les trois.

2.1

Angie se penche sur son microscope. Elle passe d’une lame à l’autre.-- Tu as découvert quelque chose ?-- Regarde les expectorations et compare avec le prélèvement de Ripley dans la canalisation abîmée. Regarde !

2. Retour au Junon. 2.1. Intoxication.

-- Il est difficile  d’être sûr car les grossissements ne sont pas les même, mais on dirait que ce sont les mêmes !-- Tout à fait. Ils ont été intoxiqués par ces bactéries. Ce sont des Escherichia coli.

-- Ce ne sont pas des germes pathogènes ! Enfin, pas dans des conditions normales.-- Justement, tout porte à croire qu’elles ne sont pas normales. Elles ont été exposées aux rayonnements solaires. Je suis prête à parier qu’elles ont subi des mutations. Si j’en crois les symptômes, je pencherais pour un excès de déphosphorylation due à l’ingestion de phosphatase alcaline bactérienne. -- Alors ?-- Je vais ajouter à la perfusion de Ripley un cocktail d’antibiotiques. Quant à nous, nous allons étudier de plus près cette enzyme.

2.2

-- Pourquoi la phosphatase alcaline ? -- C’est une enzyme présente dans de nombreux tissus comme le foie et les os. Elle est produite en excès dans certains cancers. Elle catalyse l’hydrolyse des liaisons phosphate de nombreuses molécules.-- C’est un outil en biologie moléculaire et sert à déphosphoryler ADN ou ARN.-- La phosphatase alcaline de coli est un homodimère de 449 AA par sous unité. Les deux sites actifs contiennent deux ions de zinc (Zn2+) et un ion magnésium (Mg2+). Le phosphate est prie en charge (hydrolyse et transphosphorylation) par la Ser 102.

2. Retour au Junon. 2.1. Intoxication. 2.2. Phosphatase alcaline.

Elle est peu spécifique du type de substrat. On la met en évidence grâce à son action sur le para-nitrophénolate phosphate (PNPP) en mesurant la libération de para-nitrophénolate (PNP) qui possède un pic d’absorbance à 410 nm.

2.3

-- Tu veux un café frappé, demande Eva ?-- Non merci, je suis en train de préparer l’extraction le l’enzyme. Ca te vient d’où, cette manie des cafés frappés ?

2. Retour au Junon. 2.3. Extraction. 2.2. Phosphatase alcaline.

-- Du temps où je travaillais à l’institut polonais de motorisation cosmique. L’ingénieur en chef avait toujours un mug de café sur son bureau. On la surnommait la « rouge ».-- Elle était communiste ?-- Non, elle était rousse. Et c’était plus facile que de prononcer son nom. Elle s’appelait Wisniewskaïa ou quelque chose comme ça. Elle était championne de mikado. Elle m’expliquait qu’elle était capable de transformer mentalement une structure ordonnée en pur chaos. C’est comme ça qu’elle gagnait toujours.-- Tu l’as bien connue ?

-- Tu l’as bien connue ?-- Tu veux dire si nous avons eu une liaison ? Aucun risque ! Je me suis toujours méfié des rousses. Ce n’est pas pour rien qu’on les brûlait au moyen-âge. Je plaisante ! A l’époque j’étais plus attirée par les femmes viriles. Genre cheveux courts et salopette. Elle était tout le contraire. Bon, on se la fait cette extraction ?

2.3 protocole extract-- Je te signale que moi je suis prête. Nous allons suivre le protocole classique.

2. Retour au Junon. 2.3. Extraction.

- Prendre 1 mL de culture et mélanger à 1 mL de tampon Tris pH 8,8 (saccharose 0,1 mol.L-1)- Ajouter 300 µL d’EDTA pH 8 (0,1 mol.L-1)- Ajouter 3 mL de lysozyme à 5 mg.L-1. Attendre 5 mn.

- - Centrifuger 10 mn à 6 000 tr.mn-1

-----> C’est au cours de cette étape que se forment les sphéroplastes.

-----> Le surnageant contient l’extrait brut.

3 protocole prot

-- Avant tout dosage d’activité, nous allons doser la quantité de protéines purifiées.

2. Retour au Junon. 2.3. Extraction.

- Préparer une solution étalon de BSA à 0,15 g.L-1 à partir de la solution étalon à 8 g.L-1.- Préparer la gamme étalon en suivant les instructions du tableau.

3. Teneur en protéines.

- Homogénéiser.- Laisser incuber 15 min à l'obscurité.

- Mesurer l’absorbance des solutions à 595 nm.- Tracer la droite d'étalonnage Abs = f (Cmassique). - Préparer les échantillons et le témoin (C = 6 g.L-1)

selon le protocole résumé dans le tableau suivant 

-----> La coloration est stable plusieurs heures.

tubes 0 1 2 3 4 5

vol sérumalbumine (µL) 0 20 40 60 80 100

Tampon (µL) 100 80 60 40 20 0

Réactif (bleu de Coomassie) 1 mL

tubes T Sgt

vol sérumalbumine (µL) 50 50 40 40 80 80

Tampon (µL) 50 - - - - -Réactif (bleu de

Coomassie) 1 mL

----->diluer si nécessaire.:

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4. Activité enzymatique. Angie réveille doucement Eva.-- Ripley a repris connaissance. Nous pouvons aller la voir à l’infirmerie.Ripley rayonne ne voyant son amie.-- Heureuse de vous retrouver, les filles !Eva se blottit contre elle.-- Tu m’as foutu une sacrée trouille. La prochaine fois, jure moi que tu m’emmèneras avec toi !

-- Je pense que ta demande est purement rhétorique car tu sais que nous avons peu de prise sur ce genre de décision. Comment va Ron ?-- Il est soigné dans le secteur mâle. Je crois que ça va.-- Ron est un mec génial ! Il est ma principale découverte au cours de cette mission.-- Mais c’est un homme, intervient Eva choquée !-- C’est un être humain, comme nous. La société nous enferme dans un ghetto, ne faisons pas comme elle. Qu’importe son sexe, sa couleur ou sa religion. Qu’il soit beau ou qu’il soit laid. Qu’il soit homo ou hétéro. C’est quelqu’un que l’on peut aimer.

Angie siffle entre ses dents.-- Ripley philosophe et humaniste ! Si on m’avait dit à « Antartica » que la rude Ripley, la baroudeuse, l’homo militante, se laisserait fondre pour un mâle...-- C’est un mâle pour un bien, sans doute.-- Je vais vous laisser toutes les deux ! Je n’en ai pas fini avec ta pensionnaire commensale. Je vais débrancher la caméra de surveillance pour que vos retrouvailles ne soient pas diffusées en directe sur toutes les chaînes terriennes.

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4. Activité enzymatique.

Angie referme le sas derrière elles. Elle rejoint son labo. La fine cloison atténue à peine les bruits provenant de l’infirmerie. Mélanie et Karrie entrent. Elles collent leur oreille à la paroi.-- C’est la fête à côtés, dit Karrie.-- Ce n’est pas le moment de les déranger, ajoute Mélanie en s’installant aux commandes des moniteurs.Angie se concentre sur sa manipulation.

4.1. Cinétique préliminaire.

-- Je vais commencer par une cinétique en continue pour chacun des deux échantillons, l’extrait brut et la PAL humaine qui sert de témoin.

volume

PNPP (5.10-3 mol.L-1) 2 mL

H2O 0,5 mL

Tp Gly/NaOH 2,30 mL

PAL 200 µL

incubation 37° ou 18°

-----> Tracer [PNP] = f ( t ) avec e = 17 500 L.mol-1.cm-1

Inutile de chercher, aucun temps d’incubation ne

figure dans ce protocole !

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4. Activité enzymatique.

-- Mais qu’est-ce que tu fais ?-- J’ai reconnecté la caméra. Les filles, ça vous dit une petite séance télé-réalité ?-- Arrête ça ! Ca ne se fait pas !Elle déconnecte le système vidéo et l’écran devient gris.-- Je suis sûre qu’elles trouveraient ça drôle, dit Mélanie.-- Par forcément le jour où elles se retrouvent.-- Justement aujourd’hui ! Nous avons fait le serment des Amazones. On partage tout !-- Et puis, souviens-toi, elles ne se gênaient pas dans le dortoir de la base d’Antarctique.-- Les vraies louves n’ont que faire du regard des autres.-- Tu as peut-être raison.Angie reconnecte le système. Elles observent l’écran un moment.

4.1. Cinétique préliminaire.

Au bout d’un moment, lassées du spectacle, elles abandonnent l’écran.-- Ce n’est pas tout ça, mais j’ai du travail. Je vais continuer l’étude de cette enzyme.-- N’oublie pas que le créneau horaire pour la douche est dans 53 minutes.-- Je vous y rejoindrais si j’ai fini.-- Je vois, tu as peur de faire PAL-figure !-- Oh, la blague à deux euro-dollars ! Si vous me donnez un coup de main, on pourra y aller ensemble, comme au bon vieux temps !-- Comme hier, tu veux dire ?

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4. Activité enzymatique.

-- C’est du très classique : on mesure Vm et Km pour déterminer si leur mécanisme catalytique est le même.-- C’est à dire, demande Mélanie ?

4.2. Comparaison des deux iso-enzymes.

-- Le centre réactionnel de la PAL fait intervenir 7 acides aminés auxiliaires, 3 atomes métalliques et 1 acide aminé intervenant directement dans la réaction de phosphoryltransfert, la Ser 102.

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4. Activité enzymatique. 4.2. Comparaison des deux iso-enzymes.

Enzyme libre

Enzyme fixe le substrat

Hydrolyse de la liaison phosphate

(formation d’un intermédiaire covalent).

Hydrolyse de l’intermédiaire

(complexe enzyme/substrat)

Libération du phosphate.

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Ripley ouvre les yeux. Une violente douleur comprime sa poitrine. Elle se redresse. Eva se réveille à son tour. Elle sert son amie dans ses bras tandis que la douleur s’estompe peu à peu. Eva appelle sur l’intercom.-- Angie, on a besoin de toi.

5. Traitement.

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-- Les antibiotiques ont tué les bactéries, mais il reste encore de la PAL. Je vais tester l’effet de deux inhibiteurs, le phosphate et la phénylalanine, sur l’activité de l’extrait.

5. Traitement. 5.1. Utilisation d’inhibiteurs.

-----> Proposer le mécanisme d’action de ces deux molécules.

-- J’utilise une gamme de substrat pour chaque inhibiteur.

V (en mL) =x 0,05 0,10 0,25 0,50 0,75 1,00 1,25 1,50 2,00

Vol en mLsans

inhibiteur phénylalanine Phosphate

PNPP xphénylalanine C = 1 mmol.L-1 - 0,5 -

Phosphate C = 1 mmol.L-1 - - 0,5H2O distillée (mL) 2 - x

Tp Gly (mL) 2,3

Pré-incubationExtrait brut (mL) 0,2

incubation 2 mnNaOH (mL) 2

-----> Confirmer le type d’inhibition.

4-- Qui nous dit que la bactérie qui est apparue sur l’Héra ne peut pas se développer dans les canalisations du Junon ?-- C’est une possibilité que l’on ne peut pas exclure à priori. En vertu du principe de précaution, je vais mettre au point une technique de décontamination chimique par dénaturation thermique. Pour cela, je vais déterminer la « sensibilité » de l’enzyme à la chaleur. Je vais soumettre l'extrait brut à des incubations de durées croissantes à 60°C.

5. Traitement. 5.2. Dénaturation thermique.

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5. Traitement. 5.2. Dénaturation thermique.

n° blc 0 1 2 3 4 5 6 7 8

Tp Gly (mL) 2,5 2,3

Extrait brut (mL) - 0,2

Incubation 60°C (mn) 0 0 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 5,0

Pré-incubation

PNPP (mL) 2,5 2,5

incubation 2 mn à 37°C

NaOH (mL) 2 2

-----> Calculer l'activité résiduelle de l'enzyme dans les différents tubes.

Choisir une grandeur

pertinente!

-----> Tracer les graphes: activité = f ( t )Ln ( act / act0 ) = f ( t )

-----> Déterminer la demi-vie de la PAL à 60°C

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5. Traitement. 5.2. Dénaturation thermique.

Eva se penche sur sa compagne endormie.-- Ripley chérie, réveille-toi, lui chuchote-t-elle à l’oreille. Tu as de la visite.Ripley ouvre les yeux. Ron est debout au pied de son lit.-- Ron ! Je suis si heureuse de te voir.-- Moi aussi, ma grande. J’ai une surprise pour toi ! Habille-toi, je vous emmène.Intriguée, Ripley enfile un vêtement. Ron guide les deux amies dans les coursives. Ils entrent dans le cockpit. Jupiter occupe la moitié du champ visuel.-- C’est toi qui va commander les manœuvres de mise en orbite.-- Je ne suis pas commandant !-- J’ai raconté à la presse notre aventure à bord du Héra. L’opinion publique réclame qu’une place plus importante soit donnée aux femmes de l’expédition. Une façon comme une autre de réagir aux mesures moralistes du nouveau gouvernement. Tu es une héroïne maintenant !Ripley s’assoit aux commandes.