Mdd Mal Infect. 1994 ; 24, Spdcial : 553-6

Problbmes d'interpr6tation des tests s6rologiques HTLV en transfusion sanguine*

S. VOISIN**, J. COSTE** et J .M. L E M A I R E *~

RESUME Les moyens de sdrodiagnostic des infections HTLV-I et II ont dtd considdrablement amdliords au cours des anndes passdes. Les tests de ddpistage ont une meilleure

sensibilitd et une plus grande spdcificitd. L'addition de protdines recombinantes aux Western- blots a permis de ddfmir des critbres plus stricts de sdropositivitd HTLV : la prdsence d'au minimum trois bandes vis-h-vis des protdines rgp21 p19 et p24. De m~me certains profils de Western-blots correspondant ~t des rdactions non spdcifiques h l'dgard des virus HTLV, seront prdcisds dans cette dtudei

Mots-clds : Sdrodiagnostic HTLV - Tests de ddpistage - Tests de confirmation : Western-blot.

Les rdtrovirus HTLV-I et HTLV-II sont des oncovirus transmissibles par voie sexuelle, par l'allaitement mater- nel (1), ou par voie parentdrale [transfusion (2), toxico- manie intra-veineuse (3)]. Le risque d'un porteur du virus HTLV-I de ddvelopper une maladie : leucdmie ou lymphome T de l'adulte (ATL) (4), ou une parapa- rdsie spastique tropicale (TSP) aussi appelde mydlopa- thie associde ~ HTLV-I (HAM) (5), est faible : moins de 7 % pour les ATL (latence d'au moins 30 ans) et moins de 1 % pour les TSP/HAM (latence plus courte). Le temps de latence peut etre rdduit chez les sujets immu- noddprimds (6). Le virus HTLV-II n'est pas clairement lid ~ une pathologie, bien qu'il ait dtd ddcrit dans cer- tains cas de leucdmies ~ tricholeucocytes (7).

Le ddpistage systdmatique des dons de sang a ddbutd au Japon (1985), puis aux USA (1989), au Canada (1990). En France, il a commencd le 1 er janvier 1989, aux Antilles/Guyane et dans les autres rdgions, il dtait alors conseitld de tester les donneurs originaires de zones enddmiques (circulaire de la Direction Gdndrale de la Santd du 17 mai 1989). Depuis le 15 juillet 199t, le ddpistage est systdmatique sur tousles dons de sang en France mdtropolitaine. Les mdthodes de diagnostic

* 3 e Colloque sur le Contr61e Epid6miologique des Maladies Infectieuses - Institut Pasteur de Paris - 27 mai 1994. ** Centre Rdgional de Transfusion Sanguine, 240 avenue E. Jeanbrau, F-34094 Montpellier cedex 5.

reposent sur la recherche d'anticorps anti-HTLV sdriques. Comme pour les autres rdtrovirus, les por- teurs d'anticorps sont porteurs du virus. I1 n'existe pas de test de recherche de l'Ag HTLV. Les techniques d'amplification gdnique par PCR d'ADN proviral HTLV, sont utilisdes en recherche ou en cas de diffi- cultds diagnostiques. Le sdrodiagnostic HTLV repose sur 3 6tapes : le d@istage, la confirmation et la diffd- renciation HTLV-I/II.

LES TESTS DE DEPISTAGE

Les 7 trousses de ddpistage disponibles en France au 10.04.1994

Le ddpistage peut ~tre rdalis6 par des trousses HTLV-I ou mixtes HTLV-I/!I (8). I1 s'agit de 5 trousses HTLV-I et 2 trousses mixtes HTLV-IflI. Un test repose sur le principe d'agglutination de particules non sensibilisdes (Serodia ATLA), les 6 autres sur le principe de I'ELISA indirect (5 ont un conjugu6 anti-IgG humaines, seule la trousse Sanofi Diagnostic Pasteur a un conjugu6 anti- IgG + IgM humaines). Les antig~nes choisis provien- nent de lysat viral HTLV-I dans 3 cas, de lysat viral HTLV-I enrichi de glycoprotdine d'enveloppe (gp46) dans 3 autres cas, ou sont reprdsentds par des protdines recombinantes d'enveloppe HTLV-I pour la derni~re trousse (tableau I).

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Bayer Diagnostics

Tableau I : Trousses enregistr6es au LNS (10.04.94).

Nom ddpos6 Type Mdthode Antigbnes

Serodia ATLA

Organon Teknika

Abbott

Sanofi Diagnostic Pasteur

Roche

Murex

Ortho

Vironostika HTLV-I

HTLV-I EIA

HTLV-I Platelia New HTLV-I

Anti-HTLV-I EIA Cobas Core

HTLV-I/II ELISA

HTLV-I/II ELISA

ELISA

INDIRECT

HTLV-I/II

AGGLUTINATION

Firme

Lysat viral HTLV-! enrichi gp46

Lysat viral HTLV-!

Lysat viral HTLV-I

Lysat viral HTLV-I

PR* Enveloppe HTLV-I

Lysat viral HTLV-I enrichi en rgp21

Lysat viral HTLV-I enrichi en rgp21

* PR : Prot6ine Recombinante

Tableau II : Sensibil i t6 des trousses de d6pistage des ant icorps ant i -HTLV.

S6rotype

Nombre de r6sultats positifs

HTLV-I

Panel Nbre Bayer Organon Abbott d'dch.

HTLV-II

SFTS 14 14 14 12

BBI 1 1 NT 1 PRP 203 BBI 4 4 4 4 PRA 202

SFTS 2 2 2 2

BBI 19 19 NT 16 PRP 203 BBI 19 19 19 17 PRA 202

NT = Non Test6

Les per formances de ces trousses

Aucun sdrum de sdroconversion n'dtant disponible, la sensibilit6 est 6tudi6e ~t l'aide de diffdrents panels de s6rums : panel SFTS et 2 panels de Boston Biomedica Inc N ° PRA 202 et PRP 203, et des panels locaux

Sanofi Diag

Pasteur

14

1

Roche Murex Ortho

14 14 14

1 1 1

4 4 NT 4

2 2 2 2

19 19 19 19

19 19 19 19

(tableau II). En dehors de la trousse Abbott, t ous l e s tests d6pistent correctement les 6chantillons HTLV-I et HTLV-II de ces panels. A noter, que la sensibilit6 de la trousse Abbott (enregistrde en 1990) peut ~tre amdlio- r6e en abaissant la valeur seuil sans alt6rer la sp6cificit6 de cette derni~re.

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Depuis 1991, les crit~res d'enregistrement d'un test s6rologique HTLV-I en France sont les suivants : - aucun faux ndgatif parmi les 6chantillons HTLV positif 6tudids par le Groupe "Rdtrovirus". - un taux de fausses rdactions positives inf6rieur 0,5 % parmi les 2000 donneurs de sang non sdlection- n6s 6tudi6s.

Les tes ts de c o n f i r m a t i o n

Tout 6chantillon positif r6p6table doit 4tre 6tudi6 en confirmation : la m6thode utilis6e en France est le Wes- tern-blot. Deux trousses sont disponibles : l'une de Cambridge Biotech Corporation distribude par Ortho Diagnostic Systems, l'autre de Diagnostic Biotechno- logy Ltd (DBL) distribu4e par Bioptim. Ces Western- blots consistent en un lysat viral HTLV-I enrichi d'une glycoprot6ine recombinante d'enveloppe rgp21 spdci- fique de la partie transmembranaire de l'enveloppe et commune aux 2 sdrotypes. Le r6actif DBL (Bioptim) pr6sente 6galement deux protdines recombinantes d'en- veloppe (portions extramembranaires) spdcifiques d'HTLV-I (nomm6e : MTA-1) ou d'HTLV-II (K55).

Diffdrents problbmes d'interpr6tation des Western-blots existent : les crit~res d'interprdtation varient selon les organismes publics et ne tiennent pas compte de l'ap- port des protdines recombinantes rgp21 : - Center for Disease Control (8) : p24 et gp46. - Organisation Mondiale de la Sant6 (9) : p19 ou p24 et gp46.

I1 existe des fausses r6actions positives vis-~t-vis de la rgp21 qui sont 6ventuellement assocides 5 d'autres pro- tdines comme la p19, p24 ....

Toutes ces raisons ont amen6 le groupe "R6trovirus" de la Socidt6 Franqaise de Transfusion Sanguine (SFTS) proposer des crithres restrictifs de sdropositivit6 HTLV. Un donneur est d6clar6 HTLV positif s'il pr6sente au moins les 3 protEines suivantes : rgp21, p19 et p24. Ces crithres sont suffisamment stricts pour 6viter d'an- noncer une fausse sdropositivit6 ~t une personne, mais ils impliquent de poursuivre les investigations si seule- ment 2 protEines sur les 3 sont pr6sentes, ~t savoir rgp21 et p19 ou p24. Les profils de sdroconversion HTLV ne sont pas nettement identifids, mais des rdactivitds anti- rgp21 isol6es ou associ6es h la p19 ou h la p24 ont 6t6 ddcrites (10).

• La reactivit6 des glycoprot6ines recombinantes d'en- veloppe MTA-1 ou K55, du Western-blot DBL/Biop- tim, oriente vers une sdropositivit6 HTLV-I ou HTLV-II respectivement. De fausses rdactions positives vis-h- vis de ces 2 protdines ont 6t6 observ6es et il est n6ces-

saire de recourir ?t d'autres proc6d6s de confirmation (RIPA et/ou PCR) dans le cas off l'une de ces protdines est prdsente et off le profil du Western-blot est inddter- rain6.

• Les crit~res d'interpr6tation des Western-blots pro- posds par le Groupe "R6trovirus" sont d6taillds tableau III.

T a b l e a u III : C r i t b r e s d ' i n t e r p r 6 t a t i o n

d es W e s t e r n - b l o t s H T L V .

Protdines prdsentes

rgp21 p19 p24

Interpr6tation

+ + +

+ + -

+ - - +

" t - m m

m - I - m

- - + +

Positif : Diffdrenciation HTLV-I/II.

Positivit6 incertaine : autres tests pour diffdrencier entre vrai et faux positif.

Ind6termin6 : tester un nouvel 6chantillon. Si profil.inchang6, la personne n'est pas infectde par les virus HTLV.

- Ndgatif

• Certains profils incomplets peuvent correspondre une sdropositivit6 HTLV ; des analyses compldmen- taires sont ndcessaires : le RIPA, tr~s sensible pour la mise en 6vidence du pr6curseur d'enveloppe, ou la PCR avec des amorces sp6cifiques des rdgions tax et pol. Ces 2 mdthodes sont les m6thodes de r6f6rence.

• D'autres profils ind6termin6s, prdsentant des rdacti- vit6s isol6es rgp21 ou p19, ou p24, ou p19 et p24 asso- ci6es et qui n'dvoluent pas h deux mois d'intervalle, correspondent ~t des rdactions non spdcifiques. Ainsi, le Groupe "Rdtrovirus" a montr6 que parmi les 9 cas 6tu- di6s pr6sentant une rgp21, 46 une p19, 49 une p24 et 27 une p19 et p24, aucun n'avait de rdsultat positif en RIPA (CRTS de Montpellier) ni en PCR (CRTS de Lille).

L a d i f f 6 r e n e i a t i o n HTLV-I/II

L'intensit6 relative des 2 bandes gag (p19 et p24) en cas de sdropositivit6 confirmde ou suspect6e par Western- blot oriente vers un sdrotype : il peut s'agir d'un HTLV-I si la p19 est d'intensit6 plus forte ou 6gale 5 la p24 ; 5 l'inverse, on s'oriente vers un HTLV-II si l'in-

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tensit6 de la p24 est la plus 61ev6e. Les 2 prot6ines recombinantes rgp46 du Western-blot DBL/Biopt im qui sont spdcifiques d'HTLV-I (MTA-1) ou d 'HTLV-II (K55) peuvent indiquer le sdrotype, mais il existe de fausses r6actions ndgatives vis-a-vis des deux.

IAF Biochem a ddvelopp6 un test ELISA de diffdren- ciat ion HTLV-I / I I distribu6 par Diagast . Seuls les 6chantillons HTLV positif confirm6s doivent &re ~tu- di6s, en raison de l 'existence de fausses rdactions posi- t ives de ce test. Certains 6chantil lons conf i rmds montrent, par ailleurs, de fausses rdactions ndgatives. Un test par immunofluorescence indirecte, de l'Institut Virion, bas6 sur la compara i son d e s titres lus sur la lign6e HTLV-I (MT2) d'une part et sur la lign6e HTLV-II (clone 19) d'autre part, est distribu6 par Roche.

Celui-ci ne peut 6galement etre utilis6 qu'aprbs confir- mation HTLV.

La PCR reste la technique de r6f6rence.

CONCLUSION

Le s6rodiagnostic des infections HTLV s'est am6lior6 durant les dernibres anndes. L 'appor t de la protEine recombinante transmembranaire rgp21 a permis d'aug- menter la sensibilit6 des tests de ddpistage et de Wes- tern-blot ; les crit~res proposds de s6ropositivit6 sont renforc6s afin d'dviter la d6claration crronde de per- sonnes HTLV positif ; de plus, certains profils, sans 6volution, ne correspondent pas h une infection HTLV.

SUMMARY PROBLEMS IN HTLV SERODIAGNOSIS IN BLOOD TRANSFUSION IN FRANCE

The means for HTLV-I and II serodiagnosis have been greatly improved during the last years. The screening tests show better sensitivity and higher specificity. Addition of recombinant proteins to Western-blot has permitted to define more severe criteria of seropositivity for HTLV infection : the presence of at least three bands on rgp21, p19 and p24. By another way, some Western-blot profiles correspond to non specific HTLV reactions, and will be discussed in this study.

Key-words : HTLV Serodiagnosis - Screening tests - Western-blot.

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