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MERCI À TOUS NOS PARTENAIRES

Institut du cancer de Montréal

Institut de recherches cliniques de Montréal

Institut de recherche en immunologie et en cancérologie

Centre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont

XVIIe Journée scientifique des programmes de biologie moléculaire

Centre de recherche du CHU Sainte-Justineu cancer de Montréal

Vendredi 29 avril 2011CRCHUM - Hôpital Notre-Dame

Programme officiel et résumés des communications

1

XVIIe Journée scIentIfIque des programmes de bIologIe moléculaIre

Vendredi 29 avril 2011 - CRCHUM - Hôpital Notre-Dame

Membres du comité organisateur

• Muriel Aubry, représentante unité Campus• Richard Bertrand, président de la XVIIe Journée scientifique et représentant unité CRCHUM• Trang Hoang, directrice des programmes de biologie moléculaire• Martine Raymond, représentante de l’option biologie des systèmes• Jean-François Côté, représentant unité IRCM• Vivianne Jodoin, coordonnatrice des programmes de biologie moléculaire

Soutien à l’organisation

• Patrick Lacasse, IRIC• Pascale Le Thérizien, IRIC• Myriam Beauchemin, CRCHUM

• Nathalie Tapp, CRCHUM

Membres des jurys

Présentations orales :

• Edward Bradley, CRCHUM• Artur Kania, IRCM• Vincent Archambault, IRIC

Présentations par affiches :

• El Bachir Affar, CRHMR• Hugo Würtele, IRIC• Estelle Schmitt, CRCHUM• Damien D’Amours, IRIC• Marie Trudel, IRCM• Sandra Turcotte, CRCHUM• Gilbert Bernier, CRHMR• Hugo Lavoie, IRIC• Derek Boerboom, Faculté de médecine vétérinaire• Philippe Gannon, CRCHUM• Jean-Claude Labbé, IRIC• Jean Vacher, IRCM

Nos partenaires

L’organisation de cet événement et l’octroi de prix sont rendus possible grâce au soutien des partenaires suivants:

• Centre de recherche, Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)• Institut de recherches cliniques de Montréal (IRCM)• Institut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)• Centre de recherche du CHU Sainte-Justine• Institut du cancer de Montréal (ICM)• Beckman Coulter Canada

2

programme court

Auditorium Rousselot (Pavillon Lachapelle, rez-de-chaussée)

8h15 Accueil

8h45 Mot de bienvenue

9h00 - 10h15 Présentations orales : « Prolifération, différenciation et migration cellulaire »

Modérateur : Éric Milot, CRHMR

• Éric Deneault et al., IRIC

• Marie-Claude Sincennes et al., IRIC

• Julie Ross et al., CRHMR

• Malika Oubaha et al., IRCM

• Mélanie Laurin et al., IRCM

10h15 - 10h30 Pause-café

10h30 - 11h30 Présentations orales : « Stabilité chromosomique »

Modérateur : Sébastien Carréno, IRIC

• Ian Hammond-Martel et al., CRHMR

• Stéphanie Duhamel et al., IRIC

• Rajesh Ranjan et al., IRIC

• Claude Bherer et al., CHU Sainte-Justine

Salon Lucien Lacoste (Pavillon Mailloux, 1er étage)

11h30 - 12h45 Lunch

Gymnase (Pavillon Mailloux, 1er étage)

12h45 - 14h50 Présentations par affiches


15h00 - 16h00 Présentations orales : « Régulation et maturation de l’ARN »

Modérateur : Éric Lécuyer, IRCM

• Véronique Lisi et al., IRIC

• Dariel Ashton-Beaucage et al., IRIC

• Véronique Bolduc et al., CRCHUM

• Danielle de Verteuil et al., IRIC

3

programme court


16h00 - 17h30 Table ronde : « Les carrières en biologie moléculaire »

Président d’honneur : Vincent Castellucci, Ph.D., Vice-doyen adjoint, Faculté de médecine - Direction, Professeur titulaire, Université de Montréal

Panélistes :

• Charles Goyer, Ph.D., Agent de brevets, Associé chez Goudreau Gage Dubuc, Montréal

• Martin Houle, Ph.D., Conseiller scientifique, Ministère du développement économique, Innovation et Exportation, Gouvernement du Québec

• Claudie Paquet, Ph.D., Biologiste moléculaire, Service de pathologie, CHA-Hôpital du Saint-Sacrement, Québec

• Daniel Rajotte, Ph.D., Scientifique sénior principal, Sciences biologiques, Boehringer Ingelheim Canada Ltd., Laval

• Francis Rodier, Ph.D., Chercheur académique, Professeur-adjoint sous-octroi, CRCHUM, Université de Montréal

17h30 Mot de clôture

17h45 Remise des prix

Salon Lucien Lacoste (Pavillon Mailloux, 1er étage)

18h00 Vin d’honneur

4

prolIfératIon, dIfférencIatIon et mIgratIon cellulaIreAuditorium Rousselot (Pavillon Lachapelle, rez-de-chaussée), 9h00 - 10h15Modérateur: Éric Milot, Centre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)

Expansion ex vivo de cellules souches hématopoïétiques à l’aide de facteurs extrinsèques.Deneault Eric1, Wilhelm B1, Berthiaume S2, Bergeron A2, Barabé F2, Sauvageau G1

1 Institut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)2 Université Laval

L’oncoprotéine LMO2 régule la réplication de l’ADN.Sincennes Marie-Claude, Ley D, Haman A, Migneault F, Lisi V, Flaschner D, Hoang TInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Régulation du gène Hes1 par les facteurs IKAROS et GATA-1.Ross Julie, Mavoungou L, Milot ECentre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)

Polarized recruitment of atypical PKCz to b-catenin is required for the collective migration of endothelial cells.Oubaha Malika, Gratton J-PInstitut de recherches cliniques de Montreal (IRCM)

Defining the contribution of the atypical Rac-GEF Dock180 in ErbB2-mediated breast cancer.Laurin Mélanie1, Huber J1, Muller W2, Côté J-F1

1 Institut de recherches cliniques de Montreal (IRCM)2 Goodman Cancer Center, Université McGill

stabIlIté chromosomIqueAuditorium Rousselot (Pavillon Lachapelle, rez-de-chaussée), 10h30 - 11h30Modérateur: Sébastien Carréno, Institut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

PIKK-independent proteolysis of BRCA1 regulates Rad51 recruitment during genotoxic stress.Hammond-Martel Ian1, Pak H1, Yu H1, Rouget R1, Horwitz AA2, Parvin JD2, Drobetsky EA1, Affar EB1

1 Centre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)2 Department of Pathology, Harvard Medical School and Brigham and Women’s Hospital, Boston, USA

Implication de la voie de signalisation de Ras/Raf/MEK/ERK1/2 dans la régulation de la mitose, l’aneuploïdie et l’instabilité chromosomique.Duhamel Stéphanie, Dorn J, Maddox PS, Meloche SInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Topoisomerase II acts as both catalytically and as a scaffold in mitotic chromosome assembly.Ranjan Rajesh, Dorn J, Maddox AS, Maddox PSInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Changes in site frequency spectrum due to recent genealogic connections in the Quebec population.Bherer Claude1, Roy-Gagnon MH1,2, Excoffier L1,5,6, Vézina H4, Labuda D1,3

1 Centre de recherche du CHU Sainte-Justine2 Université de Montréal - Département de médecine sociale et préventive3 Université de Montréal - Département de pédiatrie 4 Université du Québec à Chicoutimi - BALSAC Project5 University of Bern - Institute of Ecology and Evolution, Suisse 6 Swiss Institute of Bioinformatics, Suisse

présentatIons orales

5

régulatIon et maturatIon de l’arnAuditorium Rousselot (Pavillon Lachapelle, rez-de-chaussée), 15h00 - 16h00Modérateur: Éric Lécuyer, Institut de recherches cliniques de Montreal (IRCM)

Identification of microRNA/transcription factor auto-regulatory loops and their role in proliferation and hematopoiesis. Lisi Véronique, Sincennes M-C, Hoang T, Major FInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

A diverse set of factors act to control MAPK levels and impinge on RAS1/MAPK signaling.Ashton-Beaucage Dariel, Udell C, Lavoie H, Baril C, Lefrançois M, Guenier A-S, Duchaine J, Lamarre D, Gendron P, Lemieux S, Therrien MInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

L’épissage alternatif comme mécanisme de compensation chez un patient porteur d’une mutation d’épissage au gène Anoctamin 5.Bolduc Véronique, Conte TC, Tétreault M, Brais BCRCHUM - Hôpital Notre-Dame

L’immunoprotéasome régule la transcription chez les cellules dendritiques.de Verteuil Danielle, Laperrière D, Mader S, Thibault P, Perreault CInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

présentatIons orales

6

présentatIons par affIchesGymnase (Pavillon Mailloux, 1er étage), 12h45 - 14h50

Étudiant(e) No affiche

Rôle de NHL-2 dans la régulation de la biogénèse des granules P de C. elegans.Amini Rana, Labbé J-CInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

11

Identification des mécanismes moléculaires de l’activation du ligand Delta dans la signalisation Notch.Assaker Gloria, Lafaille-Magnan M-E, Emery GInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

22

The Drosophila inositol-(5) phosphatase, dOCRL, controls PI(4,5)P2 homeostasis and the fidelity of cytokinesis.Ben El Kadhi Khaled, Roubinet C, Solinet S, Emery G, Carreno S Institut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

12

Implication du connective tissu grow factor (CTGF) et de la voie P13k/mTOR dans la différentiation myofibroblastique.Bernard Monique, Hébert MJCRCHUM - Hôpital Notre-Dame

32

Searching for the efflux pump that confers resistance to the anticancer drug bleomycin.Berra Siham, Aouida M, Ramotar DCentre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)

13

Le domaine C-terminal de MEIS1 convertit PREP1 en collaborateur de HOXA9 dans le développement de leucémies myéloïdes aiguës.Bisaillon Richard, Wilhelm B, Sauvageau M, Sauvageau GInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

53

Determining the sequence and structure of the eIF4E sensitivity element.Blanchet-Cohen Alexis, Culjkovic B, Major F, Borden KInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

1

Quantitative analysis of cytokinesis in vivo using the C. elegans vulval precursor cells.Bourdages Karine, Lacroix B, Dorn J, Ihara S, Sherwood D, Maddox ASInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

2

Implication de la GTPase RAN dans la progression du cancer épithélial ovarien. Caceres Katia1, Barrès V1, Tonin PN2, Provencher DM1, Mes-Masson A-M1

1 CRCHUM - Hôpital Notre-Dame / Institut du Cancer de Montréal (ICM)2 Centre de recherche du Centre universitaire de santé McGill (CRCUSM)

54

Regulation of the eIF4E-transporter by stress signalling.Cargnello Marie, Roux PPInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

33

Rôle de Gab1 dans la réorganisation du cytosquelette d’actine des cellules endothéliales en réponse au VEGF.Caron Christine, Royal ICRCHUM - Hôpital Notre-Dame / Institut du Cancer de Montréal (ICM)

23

7



Alpha Kinase 2, candidat à l’hypertension essentielle chez les rats Dahl.Chauvet Cristina, Crespo K, Ménard A, Wu Y, Xiao C, Blain M, Roy J, Deng AYCRCHUM - Technopôle-Angus

24

Functional characterization of ANO5 Dysfunction in LGMD2L by studying a transgenic KO mice model.Conte Talita, Bolduc V, Larivière R, Brais BCRCHUM - Hôpital Notre-Dame

25

Hybrid retinoic acid receptor agonist / histone deacetylase inhibitor as an antiproliferative agent in breast cancer.Cotnoir-White David, Gleason J, Mader SInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

55

Un polymorphisme dans une répition de glycine entre Dahl-Salt-Sensitive et Lewis serait à l’origine d’un QTL pour la pression artérielle sur le chromosome 16.Crespo Kimberley, Chauvet C, Blain M, Mennard A, Roy A, Deng AYCRCHUM - Technopôle-Angus

14

The involvement of neogenin in spinal motor neuron development.Croteau Louis-Philippe, Kania AInstitut de recherches cliniques de Montreal (IRCM)

26

The KNL-2 Myb domain directs epigenetic centromere specification via a conserved, structure based mechanism.De Rop Valérie, Osborne MJ, Moevus C, Borden KLB, Maddox PSInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

34

Regulation of histone H3 lysine 56 acetylation and DNA replication fork damage.Delgoshaie Neda, Wurtele H, Verreault AInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

43

Mechanism of action of full antiestrogens.El Ezzy Mohamed, Hilmi K, Hussein N, Cotnoir-White D, Mascle XH, Aubry M, Durette C, Thibault P, Mader SInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

3

Inside the brain: unraveling the role of the polycomb gene Bmi1 in aging and neurodegeneration.El Hajjar Jida, Bernier GCentre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)

44

Identification et caractérisation de nouveaux régulateurs de l’immunité antivirale innée.Es-Saad Salwa, Baril M, Chatel-Chaix L, Audette K, Guenier A-S, Duchaine J, Lamarre DInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

4

Screening for small molecules capable of expanding human hematopoietic stem cell ex vivo.Fares Iman, Chagraoui J, Roy DC, Sauvageau GInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

35

8



Identification of embryonic stem cell fate determinants.Fortier Simon, MacRae T, Bilodeau M, Laverdure JP, Sauvageau GInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

45

Increased de novo mutation rate in probands affected with schizophrenia.Girard Simon L1, Gauthier J1, Noreau A1, Xiong Lan1, Dionne-Laporte A1, Spiegelman D1, Dion PA1, Lok S2, Krebs M-O3, Rouleau GA1

1 Centre d’excellence en neuromique de l’Université de Montréal (CENUM)2 Genome Research Centre, The Li Ka Shing Faculty of Medicine, University of Hong Kong3 Université Paris Descartes, Faculté de Médecine Paris Descartes

27

High-troughput characterization of MHC-I-associated peptides presented by B lymphoblastoid cells.Granados Diana Paola, Yahyaoui W, Côté C, Muratore-Schroeder T, Thibault P, Perreault CInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

46

Understanding the transcriptional control of the eukaryotic translation factor eIF4E in cancer: Role of NFkB.Hariri Fadi, Arguello M, Borden KInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

36

Unraveling E2A-PBX induced leukaemogenesis.Hassawi Mona, Shestakova E, Fournier M, Lebert-Ghali CE, Bijl JCentre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)

5

Implication de TBK1 et IKKe dans l a progression du cancer de la prostate. Huon Yannick1, Péant B1, Saad F1,2, Mes-Masson A-M1

1 CRCHUM - Hôpital Notre-Dame / Institut du Cancer de Montréal (ICM)2 CHUM - Département d’Urologie

6

In vivo analysis of the cell cycle dynamics of germline stem cells in the C. elegans gonad.Khanikar Jayshree, Labbé J-C, Maddox PSInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

15

Genome-wide analysis of the Candida albicans transcription factor Fcr1p regulon.Khayat Aline, Zin-Al-Abdin O, Weber S, Raymond MInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

37

Genome-wide shRNA screen for genes affecting estrogen receptor expression in breast cancer cells.Kulpa Justyna, Wang X, Laperrière D, St-Hilaire E, Audette K, Guenier AS, Duchaine J, Mader SInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

28

Identification de KCNN4 comme effecteur thérapeutique d’ADPKD.Kurbegovic Almira, Trudel MInstitut de recherches cliniques de Montreal (IRCM)

56

Rôle de RelB dans la lignée cellulaire prostatique 22Rv1.Labouba Ingrid1, Poisson A1, Delvoye N1, Saad F1,2, Mes-Masson A-M1


57

9



Élucidation d’un nouveau mécanisme moléculaire impliqué dans la résistance des mélanomes aux agents chimiothérapeutiques.Lacasse Patrick, Moreau J, Carrière A, Roux PPInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

7

High-resolution analysis of mitotic chromosomes assembly.Ladouceur Anne-Marie, Maddox PInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

16

RabGAP dEvi5 regulates collective cell migration. Laflamme Carl, Emery GInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

47

Implication de DEP-1 dans la perméabilité induite par le VEGF.Langlois Simon, Chabot C, Spring K, Caron C, Royal ICRCHUM - Hôpital Notre-Dame / Institut du Cancer de Montréal (ICM)

8

Caractérisation de la collaboration entre les oncogènes NUP98-HOXA9 et Hth en utilisant la drosophile comme modèle.Laplante Mariline, Therrien MInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

9

SFRP4 may play a role in ovarian steroidogenesis but is dispensable for female fertility.Lapointe Evelyne, DeMayo F, Boerboom DCentre de recherche en reproduction animale (CRRA), Faculté de médecine vétérinaire de l’Université de Montréal

58

Positive autoregulation of the Candida albicans transcription factor Tac1 and its role in azole resistance. Louhichi Fatiha, Desmeules S, Raymond MInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

48

Rôle de la MAP kinase ERK3 dans la réparation des dommages à l’ADN.Mathien Simon, Meloche SInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

29

Deciphering nucleosome organization and distribution pattern at centromeres.Padeganeh Abbas, Ladouceur A-M, Maddox PSInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

38

Two B-type cyclins regulate anterior PAR protein localization in the early C. elegans embryo.Rabilotta Alexia, Labbé J-CInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

39

Une nouvelle base pour l’instabilité génomique des mélanomes.Rajotte Vincent, Drobetsky ECentre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)

17

10



Domain specific modulation of Plk/Cdc5 reveals unique role in the maintenance of genome stability.Ratsima Hery, Sauvé V, Salloum Z, Pascariu M, D’Amours DInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

49

Efficient muscle-specific expression after gene transfer with viral vectors using promoters derived from troponin I gene.Robert Marc-André1, Bendjelloul M1, Zeng Y1, Guérin C3, Larochelle N3, Massie B1,2, Nalbantoglu J3, Gilbert R1,3

1 Institut de recherche en biotechnologie (IRB)2 Université de Montréal - Départment de microbiologie et immunologie3 Institut neurologiques de Montréal - Université McGill

59

Scl and E2a regulate HSC quiescence by controlling the entry and the exit from the cell cycle.Rojas-Sutterlin Shanti, Haman A, Lacombe J, Hoang TInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

50

Caractérisation biochimiques de Smc5.Roy Marc-André, Siddiqui N, D’Amours DInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

40

Wnt4 regulates thymic cellularity VIA stroma-dependent mechanisms.Ruiz Juan, Heinonen K, Brochu S, Perreault CInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

30

HoxA gene function and regulation in extra-embryonic tissues.Scotti Martina, Kmita MInstitut de recherches cliniques de Montreal (IRCM)

60

Caractérisation fonctionnelle du gène Polycomb EZH2 dans les cellules souches hématopoïétiques.Simon Camille, Sauvageau M, Chagraoui J, Sauvageau GInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

18

The role of phosphorylation of the MRX complex in genomic integrity.Simoneau Antoine, Ladouceur A-M, D’Amours DInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

10

Le biomarqueur LG3, nouveau régulateur de remodelage vasculaire in vivo.Soulez Mathilde, Cardinal H, Dieudé M, Brassard N, Qi S, Wu S-J, Durocher Y, Madore F, Perreault C, Hébert M-JCRCHUM - Hôpital Notre-Dame

61

Mécanisme d’activation de la kinase Src par la phosphatase DEP-1 dans les cellules endothéliales en réponse au VEGF.Spring Kathleen, Langlois S, Lapointe L, Elchebly C, Royal ICRCHUM - Hôpital Notre-Dame / Institut du Cancer de Montréal (ICM)

62

Impacts fonctionnels de variants génétiques dans les promoteurs des gènes de l’apoptose.St-Cyr Janick, Larivière M, Sinnett DCentre de recherche du CHU Sainte-Justine

19

11



Genetic characterization of limb-girdle muscular dystrophy (LGMD) with childhood onset in the French-Canadian population.Tétreault Martine1, Srour M1, Allyson J1, Thiffault I1-2, Loisel L1, Robitaille Y2, Bouchard J-P3, Brais B1 1 CRCHUM - Centre d’excellence en Neuromique de l’Université de Montréal2 Institut neurologiques de Montréal, Université McGill3 CHU-Sainte-Justine, Département de pathologie4 CHAUQ - Hôpital de l’Enfant-Jésus, Université Laval, Département des sciences neurologiques

51

Implication de PARP-1 dans le cancer de la prostate.Thomas Etienne1, Gannon PO1, Koumakpayi IH1, Latour M2, Mes-Masson A-M1, Saad F1

1 CRCHUM - Hôpital Notre-Dame / Institut du Cancer de Montréal (ICM)2 CHUM, Département de pathologie

20

Developing selective chemical inhibitors for kinesin-13 family of microtubule depolymerases.Tremblay-Boudreault Thierry, Talje L, Kwok B Institut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

41

Répression des gènes d’histones par le complexe HIR en réponse aux agents génotoxiques.Villeneuve Valérie, Gharib M, Verreault AInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

42

The MHC I immunopeptidome reflects dynamic changes in mTOR signaling. Vincent Krystel, Caron E, Fortier M-H, Laverdure J-P, Bramoullé A, Hardy M-P, Voisin G, Roux PP, Lemieux S, Thibault P, Perreault CInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

21

Role of the deubiquitinase BAP1 in the maintenance of chromosomal stability.Yu Helen, Mashtalir N, Ghram M, Daou S, Drobetsky E, Affar EBCentre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)

52

Feedback regulation of Gab2 function by MAPK signalling.Zhang Xiaocui, Galan J, Roux PPInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

31

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Expansion ex vivo de cellules souches hématopoïétiques à l’aide de facteurs extrinsèques.Deneault Eric1, Wilhelm B1, Berthiaume S2, Bergeron A2, Barabé F2, Sauvageau G1

1 Institut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)2 Université Laval

Introduction: Une des plus grandes découvertes médicales du 20e siècle est la transplantation de cellules souches hématopoïétiques (HSCs). Le sang de cordon ombilical (CB) humain représente une source alternative de HSCs aux problèmes de compatibilité souvent rencontrés. Par contre, le nombre de HSCs n’est pas assez élevé dans la plupart des doses de CB pour se traduire en une greffe réussie. Donc, même une petite expansion prétransplantation des HSCs aurait un impact majeur sur le nombre de patients qui pourraient profiter de cette thérapie. Dans ce but, nous avons récemment effectué un criblage fonctionnel de gènes ayant un pouvoir d’expansion sur les HSCs murines in vitro. Nous en avons identifié 18 au total, dont la plupart exercent leur effet de façon extrinsèque aux HSCs. Méthodes et résultats: Le but principal de ce travail est de démontrer si les gènes identifiés plus haut ont aussi un effet d’expansion extrinsèque sur les HSCs humaines. Nous avons utilisé des fibroblastes nourriciers, surexprimant les gènes candidats, en coculture avec des HSCs humaines de CB (CD34+). Ces HSCs humaines ont ensuite été transplantées dans des souris immunodéficientes. Ainsi, nous avons démontré que trois de ces gènes, c’est-à-dire Fos, Klf10 et Vps72 induisent l’expansion extrinsèque des HSCs humaines in vitro. Conclusion et pertinence: Nous avons développé une méthode de criblage unique qui nous a permis de découvrir de nouvelles stratégies pour expandre les HSCs humaines. Cette avancée permettra d’améliorer l’efficacité des transplantations de HSCs. De plus, l’identification des facteurs extrinsèques produits a un potentiel immense en médecine translationnelle.

L’oncoprotéine LMO2 régule la réplication de l’ADN.Sincennes Marie-Claude, Ley D, Haman A, Migneault F, Lisi V, Flaschner D, Hoang TInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: 70% des réarrangements chromosomiques dans les leucémies aigues impliquent des oncogènes codant pour des facteurs de transcription (FT), révélant l’importance de cette classe de protéines dans la leucémogenèse. LMO2 est un FT leucémogénique important (T-ALL) dont le mécanisme de transformation est mal connu. Méthodes et résultats: Chez la souris (transplantation/FACS), la surexpression de LMO2 affecte spécifiquement le cycle cellulaire des progéniteurs thymiques (cibles de transformation par LMO2), et non des cellules de moelle osseuse, qui n’initient pas les leucémies T-ALL. Au niveau moléculaire, LMO2 est recruté sur plusieurs origines de réplication dans les cellules hématopoïétiques (ChIP), par l’interaction spécifique (double hybride) avec 3 protéines du complexe de pré-initiation (pre-IC) de la réplication: ADN polymérase δ, ADN primase et MCM6. L’association de LMO2 avec le pre-IC (immunoprécipitation) est distincte de son interaction avec le complexe transcriptionnel LMO2/GATA1/SCL déjà décrit. D’ailleurs, SCL et GATA1 ne sont pas retrouvés aux origines de réplication. LMO2 colocalise avec MCM5/6 dans la transition G1/S (microscopie confocale), lors de laquelle les niveaux protéiques de LMO2 sont les plus élevés. De plus, les cellules hématopoïétiques dont les niveaux de LMO2 sont diminués par shRNAs présentent un retard dans la progression en phase S, dû à une baisse de la vitesse d’élongation des fourches de réplication. Conclusion et pertinence: LMO2 pourrait réguler la transition G1/S en favorisant l’assemblage du pre-IC aux origines de réplication. Après c-Myc, LMO2 est le 2e FT connu pour réguler la réplication de l’ADN, suggérant que d’autres FT oncogéniques pourraient aussi transformer la cellule par des processus non-transcriptionnels, comme la réplication de l’ADN.

Régulation du gène Hes1 par les facteurs IKAROS et GATA-1.Ross Julie, Mavoungou L, Milot ECentre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)

Introduction: Hes1 est un gène cible de la voie Notch qui est impliqué dans la prolifération, la survie et la différentiation des cellules. Dans les cellules érythroïdes, son rôle est peu caractérisé. Ikaros et GATA-1 sont des facteurs de transcription impliqués dans la régulation de la transcription de nombreux gènes dans les cellules érythroïdes. Méthodes et résultats: Nous avons utilisé les cellules MEL (mouse erythroleukemia) comme modèle de différentiation érythroïde. La déplétion de Hes1 favorise la différentiation alors que la surexpression de Hes1 bloque la différentiation érythroïde de ces cellules. Nous avons caractérisé la répression de Hes1 et nous avons identifié par immunoprécipitation de chromatine (ChIP) que Ikaros et GATA-1 sont des régulateurs de Hes1 dans les cellules érythroïdes. Nous avons confirmé l’importance de ces facteurs dans un modèle murin déficient pour Ikaros (souris Ikaros null) et dans un modèle cellulaire déficient pour GATA-1 (G1E-ER4). De plus, nous avons déterminé par ChIP que la tri-méthylation de la lysine K27 de l’histone H3 est associé à la répression de Hes1. Cette méthylation est mise en place par l’enzyme EZH2, membre du complexe de répression PRC2. La présence de GATA-1 et Ikaros est importante pour le recrutement de EZH2 au promoteur de Hes1. Finalement, nos résultats de co-immunoprécipitation montrent que Ikaros, GATA-1 et EZH2 font partie d’un même complexe protéique. Conclusion et pertinence: La répression de Hes1 est nécessaire pour favoriser la différentiation érythroïde. Ikaros et GATA-1 sont des facteurs importants dans le mécanisme de répression. Nous montrons pour la première fois que GATA-1 régule un gène de la voie Notch. De plus, nos résultats mettent l’emphase sur l’importance de Ikaros dans la répression des gènes GATA-1-dépendante dans les cellules érythroïdes.

résumés - présentatIons oralesprolIfératIon, dIfférencIatIon et mIgratIon cellulaIre

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Polarized recruitment of atypical PKCz to b-catenin is required for the collective migration of endothelial cells.Oubaha Malika, Gratton J-PInstitut de recherches cliniques de Montreal (IRCM)

Introduction: The pro-angiogenic growth factor angiopoietin-1 (Ang-1) promotes maturation of the vasculature in part by reducing permeability of the endothelium. Ang-1 and vascular endothelial growth factor (VEGF) induce opposite effects on cell-cell contacts and on permeability. In addition, we have previously shown that, in contrast to VEGF, Ang-1 induces activation of atypical PKCz in EC. Collective cell migration implies that cell-cell contacts are maintained throughout the migratory process. Thus, we examined the migratory response of endothelial cells (EC) exposed to VEGF or Ang-1, and the involvement of PKCz in the regulation of migration. Methods and Results: Both VEGF and Ang-1 induce gap closure in wound healing assays using cultured EC. However, analysis of migrating endothelial cells by time-lapse imaging revealed that BAEC exposed to VEGF migrated within the gap significantly more as single cells whereas Ang-1 induced a collective migration pattern and increased directional persistence of EC migration. In our attempts to define the role of PKCz in the signaling pathways downstream of Ang-1, we identified by mass spectrometry the junctional protein β-catenin as a molecular partner of PKCz.The induction of this association by Ang-1 was confirmed by in vitro binding assays, immunoprecipitation and immunofluorescence studies. We also show that Ang-1 induces the formation of a novel VE-cadherin/ b-catenin/PKCz/Par6 complex at the leading edge of migrating EC. In addition, silencing of PKCzor b-catenin impairs the collective and persistent migration of EC in response to Ang-1. Conclusion and relevance: Our study identifies PKCz as a novel modulator of adherens junctions during EC migration and demonstrates that the polarized formation of a novel protein complex that includes PKCzand b-catenin regulates collective cell migration. These results provide insights in the cell migration process which is an essential step of vessel formation.

Defining the contribution of the atypical Rac-GEF Dock180 in ErbB2-mediated breast cancer.Laurin Mélanie1, Huber J1, Muller W2, Côté J-F1

1 Institut de recherches cliniques de Montreal (IRCM)2 Goodman Cancer Center, Université McGill

Introduction: The ErbB2 receptor is overexpressed and/or amplified in 20-30% of breast cancer cases. In part due to the ability of this receptor to promote proliferation, block apoptosis and facilitate cellular invasion, ErbB2-positive breast cancer are difficult to treat in the clinic and are often life threatening in particular when patients are afflicted with metastases. While the molecular events promoting invasiveness are still insufficiently defined, previous work uncovered proteins such as the integrins, p130Cas/Crk, STAT3, Rac and PI3K as key players in mediating this effect. Dock180 is a prototypical member of a new family of RhoGTPase nucleotide exchange factors and is reported to activate Rac to drive cell motility and invasion under both physiological and pathological conditions. Here we hypothesize that Dock180 may be a candidate to promote breast cancer progression and metastasis in vivo. Methods and results: To test this, we exploit the MMTV-NIC mouse model that allows for the dual expression of an activated form of the ErbB2 oncogene and the Cre recombinase from the same transcript. These MMTV-NIC mice were interbred with a conditional Dock180 knockout mouse. Using MMTV-NIC and MMTV-NIC Dock180-nul animals, the contribution of Dock180 to ErbB2-mediated tumor onset, growth, multiplicity and ability to metastasize to the lungs was assessed. Our results suggest that Dock180 is abundantly and preferentially expressed at invasive fronts of ErbB2 tumors and this correlates with a strong reduction in metastasis to the lungs in MMTV-NIC Dock180-nul animals. Conclusion and relevance: Using primary tumor explants, we are currently trying to identify the molecular effectors that work downstream of the ErbB2/Dock180/Rac signaling pathway with the aim of further mechanistically defining the role of Rac signaling in ErbB2-driven metastasis.

résumés - présentatIons oralesprolIfératIon, dIfférencIatIon et mIgratIon cellulaIre

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PIKK-independent proteolysis of BRCA1 regulates Rad51 recruitment during genotoxic stress.Hammond-Martel Ian1, Pak H1, Yu H1, Rouget R1, Horwitz AA2, Parvin JD2, Drobetsky EA1, Affar EB1

1 Centre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)2 Department of Pathology, Harvard Medical School and Brigham and Women’s Hospital, Boston, USA

Introduction: The function of BRCA1 in response to ionizing radiation, which directly generates DNA double strand breaks, has been extensively characterized. However previous investigations have produced conflicting data on mutagens that initially induce other classes of DNA adducts. Because of the fundamental and clinical importance of understanding BRCA1 function, we sought to rigorously evaluate the role of this tumor suppressor in response to diverse forms of genotoxic stress. Methods and results: We investigated BRCA1 stability and localization in various human cells treated with model mutagens that trigger different DNA damage signaling pathways. We established that, unlike ionizing radiation, either UVC or methylmethanesulfonate (MMS) (generating bulky DNA adducts or alkylated bases respectively) induces a transient downregulation of BRCA1 protein, which is neither prevented nor enhanced by inhibition of PIKKs. Moreover, we found that the proteasome mediates early degradation of BRCA1, BARD1, BACH1, and Rad52 implying that critical components of the homologous recombination machinery need to be functionally abrogated as part of the early response to UV or MMS. Significantly, we found that inhibition of BRCA1/BARD1 downregulation is accompanied by the unscheduled recruitment of both proteins to chromatin along with Rad51. Conclusion and relevance: Taken together our results demonstrate that (i) the stabilities of BRCA1/BARD1 complexes are regulated in a mutagen-specific manner, and (ii) indicate the existence of mechanisms that may be required to prevent the simultaneous recruitment of conflicting signaling pathways to sites of DNA damage.

Implication de la voie de signalisation de Ras/Raf/MEK/ERK1/2 dans la régulation de la mitose, l’aneuploïdie et l’instabilité chromosomique.Duhamel Stéphanie, Dorn J, Maddox PS, Meloche SInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Une dérégulation de la voie de signalisation de Ras/Raf/MEK/ERK1/2 est observée dans plus de 30% des cancers et des mutations activatrices de RAS sont observées dans 50% des cancers colorectaux. Il a été démontré que l’expression de Ras actif peut induire de l’instabilité chromosomique, contribuant ainsi à la progression des cancers. Les mécanismes responsables de ces aberrations demeurent toutefois inconnus. Méthodes et résultats: Des analyses de cytométrie de flux, d’immunofluorescence et d’imagerie cellulaire en temps réel ont été effectué sur des cellules intestinales épithéliales (IEC-6) exprimant le mutant H-RasV12, de même que sur des lignées de cancer colorectal. L’expression de H-RasV12 engendre des altérations du cycle cellulaire et de la mitose. Les anomalies mitotiques observées engendrent la formation de micronoyaux et de cellules binucléées. Une dérégulation de l’expression des protéines régulatrices de la mitose est également observée dans les cellules IEC-6-H-RasV12 et les lignées de cancer colorectal. Conclusion et pertinence: Nous avons identifié un nouveau mécanisme menant à la tétraploïdie qui, à notre connaissance, n’a jamais été décrit. Nous avons également démontré pour la première fois que l’hyperactivation de la voie des MAP kinases ERK1/2 mène à une dérégulation de la mitose et à l’aneuploïdie. Ces informations sont cruciales et démontrent l’importance de la voie Ras-ERK1/2 dans le processus d’instabilité chromosomique et la tumorigénèse.

Topoisomerase II acts as both catalytically and as a scaffold in mitotic chromosome assembly.Ranjan Rajesh, Dorn J, Maddox AS, Maddox PSInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Assembly of mitotic chromosomes is a dynamic event, occurring rapidly during prophase of each cell cycle. Given the complexity of this process, genetic and biochemical approaches have identified surprisingly few factors involved in condensation, notably histone H1, the condensin complex and DNA topoisomerase II (topo II). Topo II can cut and reseal DNA and has been hypothesized to act in a structural capacity, but its essential role(s) in mitotic chromosome condensation remains unknown. Methods and results: To define the roles of known and novel proteins involved in chromosome condensation, we are performing high-resolution live imaging of the C. elegans zygote. Images of fluorescently-tagged core histones are thresholded and segmented to quantify the distribution of chromatin within the prophase nucleus over time. When topo II is depleted by RNAi, chromosomes collapse prematurely during prophase. When the catalytic activity of topo II is inhibited with Dexrazoxane, chromosomes do not collapse prematurely; rather, chromatin remains diffuse. These results indicate that topo II performs two functions: forming a scaffold for condensation and decatenating DNA to allow proper condensation. Treatment of embryos depleted of topo II with Dexrazoxane also indicating that topo II is a scaffold for condensation and confirming that drug treatment is specific for topo II: chromatin collapsed prematurely as in the depletion alone. Conclusion and relevance: Therefore, our assay has defined two functions for topo II, catalytic and scaffold, in vivo. Using these approaches, we will define the mechanisms and molecular requirements of mitotic chromosome assembly, an essential target for cancer chemotherapy.

résumés - présentatIons oralesstabIlIté chromosomIque

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Changes in site frequency spectrum due to recent genealogic connections in the Quebec population.Bherer Claude1, Roy-Gagnon MH1,2, Excoffier L1,5,6, Vézina H4, Labuda D1,3

1 Centre de recherche du CHU Sainte-Justine2 Université de Montréal - Département de médecine sociale et préventive 3 Université de Montréal - Département de pédiatrie 4 Université du Québec à Chicoutimi - BALSAC Project5 University of Bern - Institute of Ecology and Evolution, Suisse 6 Swiss Institute of Bioinformatics, Suisse

Introduction: Deep individual genealogies recapitulate the recent and potentially complex demographic history of populations. Here, we use extensive and unique information on the genealogy of the Quebec population to study the effect of recent demographic history on its gene pool by performing genetic simulations conditional on genealogical structure. In particular, we investigate how did specific history of regional populations shaped their site frequency spectra. Methods and results: We used a sample of 2,221 individuals representative of Quebec population further partitioned into eight regions. These individuals belong to a 153,447 ancestors genealogy spanning on average 9.3 generations. Allele dropping simulations of the full spectrum revealed no distortion of the site frequency spectra between the founders and the regional samples, nor between regions for frequency classes larger than 2%. However, we observed a general loss of rarer alleles in contemporary samples, which was more pronounced in eastern regions. The joint site frequency spectra computed for all pairs of regions were very similar. Backward coalescent-like simulations conditioned on the genealogical structure revealed highly variable distributions of the number of founder’s genes surviving in their contemporary descendants. For a given locus, a majority of the founders’ alleles usually goes extinct and a small minority expands in the population. Conclusion and relevance: All these features might explain the elevated prevalence and regional distribution of rare Mendelian diseases in the Quebec population. Our findings have implications for better design of epidemiological studies conducted in the population of Quebec.

résumés - présentatIons oralesstabIlIté chromosomIque

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Identification of microRNA/transcription factor auto-regulatory loops and their role in proliferation and hematopoiesis. Lisi Véronique, Sincennes M-C, Hoang T, Major FInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: MicroRNAs (miRNAs) have recently been recognized as important actors of the mechanisms leading to cancer, and were shown involved in various regulation networks and in particular in auto-regulatory loops with transcription factors (TFs). It is thus reasonable to hypothesize that modifications in either miRNA or TF expression levels can result in a cascade of misregulations that could ultimately cause cancer. To measure the abundance of such loops, we first devised an algorithm that predicts these, and then validated the predictions experimentally. Methods and results: The algorithm is based on TargetScan and a customized version of the MatInspector algorithm applied to position weight matrices from Transfac and Jaspar. Applied to the human and mouse genomes, our algorithm predicts over 700 miRNA/TF auto-regulation loops involving 130 miRNAs and 182 TFs. So far, we validated the following loops: LMO2/miR-223, LMO2/miR-363, CEBPb/miR-155, CEBPb/miR-212, and GATA2/miR-489. Since LMO2 has been shown an important factor in hematopoiesis and is a major cause of T-cell leukemia, we further investigated the loops involving LMO2. We measured their effect on primary cell proliferation and demonstrated their importance in an in vivo context. We transplanted miR-223 or miR-363 infected cells in irradiated mice and measured the hematopoietic reconstitution showing important consequences of the loops in hematopoiesis. Conclusion and relevance: This project is among the first genome-wide attempts at predicting and validating miRNA/TF auto-regulatory loops. Our approach reveals the auto-regulatory loops of miRNAs but provide only a glimpse at their secondary effects; that is the effects of their target, which will likely prove important in the future. Furthermore, the implications of the auto-regulatory loops identified here go far beyond the direct implication of the factors involved in these loops and deserve additional studying.

A diverse set of factors act to control MAPK levels and impinge on RAS1/MAPK signaling.Ashton-Beaucage Dariel, Udell C, Lavoie H, Baril C, Lefrançois M, Guenier A-S, Duchaine J, Lamarre D, Gendron P, Lemieux S, Therrien MInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: The RAS1/MAPK signaling pathway is a key element of normal cellular proliferation and differentiation in metazoans. Importantly, oncogene driven activation of MAPK signaling is also tightly associated to the development and progression of cancer. Methods and results: In order to better understand the regulatory network surrounding the RAS1/MAPK signaling module, we conducted a genome-wide RNAi screen in Drosophila S2 cells. This experiment led to the identification of many mRNA processing factors, including splicing factors and the exon junction complex (EJC) as pathway regulators. Further analysis revealed that these components could be positioned downstream of the MAPKK, MEK, and were predominantly found to impact mapk expression. In particular, the EJC, a complex traditionally associated to post-splicing regulatory events, was unexpectedly found to regulate the splicing of mapk. Moreover, the specific changes in splicing produced by EJC depletion were distinct from those observed for other splicing factors identified in our screen, indicating that two different types of regulation occur at this level. Conclusion and relevance: We propose that the particular gene structure of mapk appears to make this Drosophila gene a choice target for splicing modulation. This would explain why multiple splicing modulators apparently converge on this specific point of the RAS1/MAPK pathway.

L’épissage alternatif comme mécanisme de compensation chez un patient porteur d’une mutation d’épissage au gène Anoctamin 5.Bolduc Véronique, Conte TC, Tétreault M, Brais BCRCHUM - Hôpital Notre-Dame

Introduction: Nous avons identifié les mutations récessives responsables de la LGMD2L, une LGMD (limb-girdle muscular dystrophy) parmi les plus fréquentes mondialement, dans le gène Anoctamin 5 (ANO5). Une de ces mutations (c.1295C>Gspl) crée un épissage aberrant à l’inté-rieur de l’exon 13, prédisant un changement de cadre de lecture et une terminaison prématurée. Nous avons montré que ces transcrits étaient dirigés vers la dégradation, ce qui supporte un mé-canisme de perte de fonction. Cependant, dans des coupes musculaires d’un patient homozygote pour cette mutation, nous avons observé la présence d’ANO5 par immunolocalisation. Méthodes et résultats: Pour vérifier si des évènements subséquents d’épissage permettaient de rétablir le cadre de lecture sur les transcrits porteurs de la mutation c.1295C>Gspl, nous avons amplifié ANO5 par RT-PCR en 2 réactions se chevauchant, ainsi qu’en une seule réaction, et sous-cloné les produits de cette réaction. Le séquençage des clones a confirmé que tous les trans-crits épissent de façon aberrante l’exon 13 chez le patient homozygote pour c.1295C>Gspl, mais qu’une proportion des transcrits (12/21 clones) épissent également l’exon 15, ce qui rétablit le cadre de lecture et produirait une protéine réduite de 10kDa. Nos résultats préliminaires sug-gèrent que cet évènement d’épissage de l’exon 15 ne survient pas dans le muscle d’un échantillon contrôle. Nous complétons le séquençage de patients additionnels pour vérifier si le saut d’exon est un mécanisme fréquemment utilisé par la cellule pour compenser pour les changements de cadre de lecture occasionnés par de nombreuses mutations au gène ANO5. Conclusion et pertinence: Le saut d’exon est une approche de plus en plus considérée pour la thérapie des dystrophies musculaires. La découverte du premier cas de LGMD2L chez qui le saut d’exon survient de façon naturelle nous permet d’étudier la complexité de l’épissage du gène ANO5 et suggère que cette approche thérapeutique pourrait être avancée dans des cas de LGMD2L.

résumés - présentatIons oralesrégulatIon et maturatIon de l’arn

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L’immunoprotéasome régule la transcription chez les cellules dendritiques.de Verteuil Danielle, Laperrière D, Mader S, Thibault P, Perreault CInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Le protéasome constitutif est exprimé dans toute cellule eucaryote. D’un autre côté, les cellules immunitaires ou stimulées par des cytokines expriment aussi un second type de protéasome appelé immunoprotéasome (IP). Bien que l’effet de l’IP sur la production de peptides liés au CMH I (pCMHI) soit grandement étudié, son rôle demeure énigmatique et l’hypothèse qu’il puisse déborder du cadre de la production de pCMHI est de plus en plus étudiée. Méthodes et résultats: Nous avons récemment démontré par microarrays que la délétion de 2 sous-unités de l’IP (LMP7 et MECL1) dans des cellules dendritiques de souris altère non seulement la diversité des pCMHI, mais aussi l’expression de 171 gènes principalement associés à des fonctions immunitaires et regroupés sur certains chromosomes. Nous montrons maintenant par qPCR que l’absence combinée de LMP7 et MECL1 est nécessaire pour modifier le transcriptome. La comparaison de l’abondance d’ARNm matures et non-épissés dans les cellules WT et IP-ko montre aussi que l’IP régule la maturation de quelques transcrits. Cependant, l’IP n’affecte pas la stabilité des transcrits lorsque leur synthèse est bloquée. La prédiction bioinformatique de sites de liaison de facteurs de transcription suggère que l’IP agit au niveau du processus de transcription. Conclusion et pertinence: Le contrôle de la transcription par l’IP pourrait expliquer les phénotypes aberrants des cellules T et B décrits chez les souris IP-ko. Une étude approfondie du rôle de l’IP sur l’expression génique nous aidera à mieux comprendre la pression sélective ayant permis la conservation de plus d’un type de protéasome chez les vertébrés.

résumés - présentatIons oralesrégulatIon et maturatIon de l’arn

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résumés - présentatIons par affIches

No 1Determining the sequence and structure of the eIF4E sensitivity element.Blanchet-Cohen Alexis, Culjkovic B, Major F, Borden KInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: The oncogene eIF4E has two distinct functions. In the cytoplasm, eIF4E recruits the ribosome to the 5’ cap of mRNAs. In the nucleus, eIF4E enhances the mRNA export of a subset of transcripts involved in cell survival and proliferation. The ability of eIF4E to bind mRNAs in the nucleus and promote their export is dependent on the presence of a common structural element, named the eIF4E sensitivity element (4E-SE), in the 3’ UTRs of the mRNAs. The location of 4E-SE has been mapped down to a 50 nucleotides region. It structure has been predicted to be a stem-loop pair. Our objective is to determine the exact sequence and structure of 4E-SE. Methods and results: To determine the exact sequence of 4E-SE, we first cloned into a pcDNA 3.1/LacZ plasmid truncated sequences of the 50 nucleotides region in which 4E-SE was previously demonstrated to lie. We then transfected U2OS cells. After lysing the cells and isolating the nucleus, we conducted an immunoprecipitation experiment to determine the ability of the lacZ-4ESE constructs to bind eIF4E. We also did an export assay. After overexpressing eIF4E, we measured the nuclear/cytoplasmic ratio of the lacZ-4ESE constructs. To determine the fine structure of 4E-SE, we submitted the sequences of 4E-SE to the RNA structure prediction software, MC-Fold|MC-Sym. Conclusion and relevance: Understanding the mechanism by which eIF4E overexpression promotes the export of a subset of mRNAs involved in cell growth may lead to the development of new therapies to disrupt the oncogenic effect of eIF4E overexpression.

No 2Quantitative analysis of cytokinesis in vivo using the C. elegans vulval precursor cells.Bourdages Karine, Lacroix B, Dorn J, Ihara S, Sherwood D, Maddox ASInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Cytokinesis is the last step of cellular division in which a cell is physically separated into two daughter cells. Yeast, cultured cells and invertebrate embryos, such as the nematode worm Caenorhabditis elegans, have been extensively used for the study of cytokinesis. However, cytokinesis has never been explored in living tissues. Methods and results: We developed a novel model for the characterization of cytokinesis in vivo observing the cells that give rise to the C. elegans vulva: the vulval precursor cells (VPCs). Vulva morphogenesis is a well characterized process, in which the row of vulval precursor cells undergoes three rounds of cell division, and migration, fusion and morphogenetic changes to form a tubular vulva. High resolution 3D time lapse imaging of the VPCs and computational analysis allow for the quantification of the kinetics and geometry of cytokinesis in living tissues. Computational analysis of ring closure in the VPCs demonstrated highly asymmetric ring constriction, as observed in the C. elegans zygote. Specifically, in the VPCs ring closure occurs towards the apical junctions. Finally, we observed that the VPCs first divide horizontally and exhibit distinct actomyosin contractile bands. In ongoing work, we are testing whether ring dimensions scale with cell size throughout each round of division. Conclusion and relevance: We developed a novel model for the study of cytokinesis in living epithelial tissues. This system will allow for the characterization of cytokinesis in a way that has never been done before. Our results will be compared to those obtained using other models to determine whether the knowledge of cytokinesis established with current models applies to cell division in vivo.

No 3Mechanism of action of full antiestrogens.El Ezzy Mohamed, Hilmi K, Hussein N, Cotnoir-White D, Mascle XH, Aubry M, Durette C, Thibault P, Mader SInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Breast cancer is the most frequently diagnosed cancer and the second cause of cancer death among women. Two thirds of breast tumors express or overexpress estrogen receptor alpha (ERa and are treated with antiestrogens (AEs), which act as competitive inhibitors of this receptor. Tamoxifen (Tam) has been widely used for the treatment of ERa-positive tumors, but intrinsic or acquired resistance can lead to tumor recurrence. Full AEs such as Fulvestrant are currently used in estrogen receptor alpha (ERa) positive breast cancers in postmenopausal women with disease progression following Tam therapy. Full AEs induce rapid polyubiquitination, SUMOylation and degradation of ERERa but the basis of these effects remains incompletely understood. Methods and results: Here we identify ERα as a target for Small Ubiquitin-like Modifier (SUMO) and ubiquitin modifications specifically when liganded with full AEs. Other types of AEs, which do not induce receptor degradation (e.g. tamoxifen and raloxifene), do not induce SUMOylation. Kinetics of SUMOylation are rapid and precede receptor degradation. Integrity of helix H12 in the ERERaligand-binding domain, which undergoes conformational changes in the presence of antiestrogens, is required for SUMOylation. Mapping analysis indicates that the DNA binding domain (DBD) plays a role in SUMOylation in addition to the ligand binding domain. Deletion of the DBD reduced both SUMOylation and receptor turn-over in the presence of full AEs. Finally, abolition of SUMOylation by expression of the desumoylase SENP1 abrogated the accelerated turnover of ERα induced by full AEs. Conclusion and relevance: These findings identify SUMOylation as a new mechanism modulating the turnover of ERα in a ligand-specific manner and suggest a link between SUMOylation and ubiquitination. Although it clarifies the molecular basis for the differential activity of Tam and full AEs in some breast tumors but further investigation must be done in order to reveal the complexity of these posttranslational modification on ER alpha.

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No 4Identification et caractérisation de nouveaux régulateurs de l’immunité antivirale innée.Es-Saad Salwa, Baril M, Chatel-Chaix L, Audette K, Guenier A-S, Duchaine J, Lamarre DInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: L’immunité innée est la première ligne de défense de l’organisme contre les agents infectieux. Nous avons effectué un criblage génomique aux ARN interférents visant l’identification des gènes et des voies de signalisation régulant la réponse antivirale innée dans la perspective de développer des stratégies thérapeutiques efficaces. Méthodes et résultats: Suite aux criblages primaires et secondaires, 132 régulateurs positifs et 103 régulateurs négatifs ont été identifiés. Deux de ces régulateurs négatifs appartiennent à la famille des protéines sécrétées Wnt. La caractérisation fonctionnelle du rôle de ces Wnt dans l’immunité antivirale innée est réalisée à l’aide d’outils de biologie moléculaire et cellulaire tels que la qRT-PCR et le western blot. Nos résultats montrent que ces protéines sont sécrétées après stimulation avec l’IFN-α, et que leur knockdown augmente significativement l’expression de certains régulateurs connus de l’immunité innée en réponse à une infection virale. Nous avons également effectué des essais de survie sur la Drosophile, et avons observé que le knockdown in vivo des orthologues de ces Wnt augmente significativement la survie de la Drosophile suite à une infection bactérienne. Ces données supportent le rôle des Wnt comme régulateurs négatifs de l’immunité innée et démontre la conservation de leur fonction de la Drosophile à l’humain. Conclusion et pertinence: Notre projet a permis de démontrer que deux membres de la famille des Wnt régulent négativement l’immunité innée. Ces protéines sécrétées sont prometteuses sur le plan thérapeutique, puisqu’elles peuvent facilement être ciblées par des anticorps inactivant ou des inhibiteurs chimiques. Ces inhibiteurs pourraient être utilisés comme agents immuno-modulateurs ayant un large spectre antiviral.

No 5Unraveling E2A-PBX induced leukaemogenesis.Hassawi Mona, Shestakova E, Fournier M, Lebert-Ghali CE, Bijl JCentre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)

Introduction: The fusion protein E2A-PBX1 is responsible for 25% of paediatric pre-B cell acute lymphoblastic leukemia (ALL), and is associated with a poor prognosis. E2A-PBX1 is a potent oncogene that can transform several cell types. The molecular mechanism activated by E2A-PBX1 is still poorly understood. To study this disease we have succeeded in the development of a unique mouse model for E2A-PBX1 induced B-cell leukaemias (Bijl, 2005), which reproduces the human disease. This model was used to identify collaborators to E2A-PBX1 in leukaemogenesis, using proviral insertional mutagenesis. HoxA genes emerged from this screen as potential partners to E2A-PBX1 in B-cell leukaemia induction. Moreover, collaboration between specific Hox genes and E2A-PBX1 in myeloid and T-cell leukaemia suggests that HoxA genes also might interact with E2A-PBX1 in the generation of B-cell leukaemias. Methods and results: Quantitative RT-PCR analysis showed that E2A-PBX1 induced B-cell leukemias express most of the HoxA genes at moderate levels in contrast to negligible expression in MMLV induced B-ALLs. To test for a direct genetic interaction between Hox genes and E2A-PBX1 in the induction of B-cell leukaemia, we co-overexpressed HOXA4, -A9 and –B4 together with E2A-PBX1 specifically in B-cells and transferred them into irradiated recipients. HOXA9 significantly accelerated E2A-PBX1 B-cell leukemia, but provoked a phenotypic change from pro-B to myeloid upon serial transplantation. Conclusion and relevance: These data indicate oncogenic interactions between HOXA9 and E2A-PBX1 in B-ALL, and suggest that deregulation of the HOX-PBX network contributes to leukemogenesis. The HOX pathway might thus be targetable for drug development.

No 6Implication de TBK1 et IKKe dans l a progression du cancer de la prostate. Huon Yannick1, Péant B1, Saad F1,2, Mes-Masson A-M1


Introduction: L’inflammation est associée à la progression du cancer de la prostate (CaP) d’une forme hormono-sensible (HS), vers une forme avancée résistante à la castration chimique (CR), de mauvais pronostic. Nous avons mis en évidence que la kinase IKKepsilon (IKKe) est constitutivement et différentiellement exprimée dans les cellules de CaP CR. La présence nucléaire d’IKKe corrèle avec la sécrétion d’IL-6 et IL-8 par ces cellules. Un partenaire cytoplasmique connu d’IKKe est la kinase ubiquitaire TBK1. Nous émettons l’hypothèse que TBK1 agit comme facteur de séquestration cytoplasmique d’IKKe. Notre étude cherche à décrire le rôle de TBK1 et d’IKKe dans la progression du CaP et l’émergence du statut CR. Méthodes et résultats: Les lignées cellulaires HS (22Rv1 et LNCaP) expriment la kinase TBK1, mais pas IKKe. Nous avons donc développé des cellules 22Rv1 qui coexpriment TBK1 et IKKe de façon inductible. Par contre, les lignées CR (DU145 et PC3) expriment TBK1 et surexpriment constitutivement IKKε. Pour ces lignées, nous avons développé des constructions lentivirales inductibles permettant soit de sousexprimer TBK1 ou de surexprimer TBK1. La localisation cellulaire d’IKKe, suivie par immunobuvardage, et la sécrétion d’IL-6 et IL-8, quantifiée par ELISA, sont actuellement en cours d’évaluation. Conclusion et pertinence: Nos résultats permettront de mettre en évidence le rôle de TBK1 dans la translocation nucléaire d’IKKe et dans la régulation des cytokines pro-inflammatoires IL-6 et IL-8. Des études complémentaires permettront de décrire le rôle de TBK1 et IKKe dans la progression du CaP et dans l’émergence du statut CR.

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No 7Élucidation d’un nouveau mécanisme moléculaire impliqué dans la résistance des mélanomes aux agents chimiothérapeutiques.Lacasse Patrick, Moreau J, Carrière A, Roux PPInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: La voie MAPK (mitogen-activated protein kinase) est fréquemment suractivée dans les cancers, notamment suite à la mutation du gène BRAF qui survient dans 70% des cas de mélanomes. La protéine kinase RSK (p90 ribosomal S6 kinase) est directement activée par la voie MAPK et régule diverses protéines impliquées dans la croissance et la prolifération cellulaire. Des travaux au laboratoire ont su démontrer que RSK phosphoryle directement l’oncogène MDM2, un inhibiteur important du suppresseur de tumeurs p53. Méthodes et résultats: Nos résultats indiquent que RSK facilite l’activation de MDM2 et ainsi, inhibe p53 afin de promouvoir la prolifération cellulaire. Nous avons montré que ces mécanismes sont actifs dans plusieurs lignées cellulaires provenant de mélanomes, et que l’inhibition de RSK induit l’accumulation de p53 dans ces cellules. Les mélanomes sont des tumeurs de la peau très agressives qui ne répondent pas efficacement aux agents chimiothérapeutiques, tel que la cisplatin et le dacarbazine. Comme p53 est impliquée dans la réponse cellulaire à ces agents chimiothérapeutiques, nos travaux suggèrent que l’inhibition de RSK dans les mélanomes pourrait réduire leur chimiorésistance. Cette hypothèse sera testée en culture cellulaire mais aussi à l’aide d’un modèle animal de croissance tumorale. Conclusion et pertinence: En conclusion, nos travaux suggèrent un rôle important de la protéine kinase RSK dans la régulation de MDM2 et de sa cible, p53. L’étude de ces mécanismes moléculaires aidera à définir les voies de signalisation impliquées dans la croissance des mélanomes, mais aussi dans la résistance de tumeurs aux agents chimiothérapeutiques.

No 8Implication de DEP-1 dans la perméabilité induite par le VEGF.Langlois Simon, Chabot C, Spring K, Caron C, Royal ICRCHUM - Hôpital Notre-Dame / Institut du Cancer de Montréal (ICM)

Introduction: Le laboratoire s’intéresse aux mécanismes régulant l’angiogenèse, processus de formation de nouveaux vaisseaux sanguins à partir d’un réseau vasculaire préexistant. Le facteur de croissance VEGF est impliqué dans cette réponse, en conditions normales et associées à la progression tumorale. Le VEGF est un inducteur de la perméabilité et permet le passage accru de substances favorisant l’angiogenèse, via le remodelage des jonctions intercellulaires. Dans un contexte tumoral, l’induction de la perméabilité par le VEGF contribue à l’intravasation des cellules tumorales et la formation de métastases. Un des effecteurs principaux de cette action du VEGF est la kinase Src. Nos travaux ont démontré que DEP-1, localisée aux jonctions adhérentes, permet l’activation de Src via la déphosphorylation de sa tyrosine 529 inhibitrice. Ce projet consiste donc à évaluer le rôle de DEP-1 dans la perméabilité induite par le VEGF. Méthodes et résultats: Des expériences d’immunoprécipitation et d’immunobuvardage sur des cellules transfectées avec des ARNi ciblant DEP-1 montrent que sa déplétion atténue la phosphorylation et augmente l’association des protéines des jonctions adhérentes VE-Cadhérine et b-Caténine en réponse au VEGF, signifiant une stabilisation des jonctions intercellulaires. Des expériences d’immunofluorescence confirment que la déplétion de DEP-1 diminue le relâchement de la b-Caténine des jonctions adhérentes lorsqu’en présence de VEGF. Pour conclure, des tests de perméabilité in vitro démontrent que la déplétion de DEP-1 bloque l’induction de la perméabilité par le VEGF telle qu’observée chez les cellules contrôles. Conclusion et pertinence: Ces résultats préliminaires démontrent que DEP-1 est impliqué dans la promotion de la perméabilité induite par le VEGF.

No 9Caractérisation de la collaboration entre les oncogènes NUP98-HOXA9 et Hth en utilisant la drosophile comme modèle.Laplante Mariline, Therrien MInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: La protéine de fusion NUP98-HOXA9 (NH) est observée dans la leucémie myéloïde aigüe (LMA). Son expression dans la moelle osseuse de souris provoque le développement d’une LMA, qui est accéléré par la surexpression de MEIS1. Chez la drosophile, la coexpression de NH et Hth (NHH), l’homologue de MEIS1, provoque un phénotype d’hyperprolifération dans les disques imaginaux qui peut être modulé par des protéines des complexes apico-basaux, des jonctions adhérentes et de la voie Hippo. L’objectif de ce projet est donc la caractérisation du lien unissant ces protéines à la collaboration entre NH et Hth. Méthodes et résultats: Pour ce faire, les niveaux d’expression de membres de la voie Hippo, des jonctions adhérentes et des complexes apico-basaux seront mesurés par qRT-PCR sur des cellules transgéniques exprimant NH, Hth et NHH et seront comparés à des cellules WT. De plus, un essai permettant d’évaluer le potentiel prolifératif de ces cellules transgéniques sera développé, en exprimant chaque transgène dans les hémocytes de larves et en mettant ceux-ci en culture pour évaluer leur survie au fil du temps. Conclusion et pertinence: Ce projet permettra de déterminer si les niveaux d’expression de gènes clés sont modifiés dans les cellules exprimant NH, Hth et NHH. De plus, un nouvel essai permettant d’évaluer le potentiel prolifératif de ces cellules transgéniques sera développé. L’élucidation des mécanismes par lesquels les oncogènes NH et Hth collaborent dans la transformation des cellules constitue un pas de plus vers l’identification de nouvelles cibles thérapeutiques pour les patients chez qui ces oncogènes sont exprimés.

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No 10The role of phosphorylation of the MRX complex in genomic integrity.Simoneau Antoine, Ladouceur A-M, D’Amours DInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: The conserved MRX complex is implicated in two important pathways for the preservation of genomic integrity: the DNA damage response and telomere replication. Using mass spectrometry, we identified Cdk1 consensus sites on two subunits of this complex, Mre11 and Xrs2. Here we show preliminary results on the characterization of these phosphorylation sites and their implication in both pathways. Methods and results: Using S. cerevisiae as a model, we show that phosphorylation of Xrs2 is cell cycle dependent. It accumulates in S phase and peaks in G2/M. Our results show that Cdk1 phosphorylates Xrs2 and Mre11 in vitro and that Xrs2 phosphorylation is Cdk1-dependent in vivo. In addition, single phospho-mutants of xrs2 and mre11 exhibit growth defects in presence of high concentrations of DNA damaging agents. Also, telomeres are unaffected in those mutants. The double mutant does not display additive phenotype, suggesting that phosphorylation of both subunits is involved in the same pathway. Conclusion and relevance: Taken together, our results show evidences that Cdk1 can regulate specifically the DNA damage response through phosphorylation of both Mre11 and Xrs2. We propose a model in which phosphorylation of both subunits is required for the whole complex to be functional. We therefore provide insights into an essential mechanism for the preservation of genomic integrity.

No 11Rôle de NHL-2 dans la régulation de la biogénèse des granules P de C. elegans.Amini Rana, Labbé J-CInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: La lignée germinale de C. elegans, est une lignée de cellules souches qui transmet l’information génétique à la génération suivante. Cette continuité est en partie due à la ségrégation asymétrique d’organelles ribonucléoprotéiques appelés les granules P. Néanmoins, la fonction précise des granules P est inconnue. Récemment, notre laboratoire a montré que NHL-2, un homologue de Mei-P26 de Drosophile, co-localise avec les granules P et joue un rôle dans la polarité cellulaire. Tous les granules P contiennent NHL-2, ce qui nous a mené à poser l’hypothèse que NHL-2 régule la stabilité ou la fonction des granules P. Méthodes et résultats: Nous avons testé cette hypothèse par imagerie et quantification de l’intensité de PGL-1, un composant essentiel des granules P, dans des embryons fixés. Nos résultats montrent une réduction significative 1) du nombre de granules P et 2) de l’intensité de la fluorescence de PGL-1 dans les mutants nhl-2 par rapport au type sauvage. Plusieurs études ont révélé que d’autres composants des granules P, par exemple GLH-1, fonctionnent en amont de PGL-1 dans la voie d’assemblage. Pour mieux définir le rôle moléculaire de NHL-2 dans la stabilité des granules P, nous avons étudié l’effet de la perte la fonction de NHL-2 sur les niveaux d’intensité de GLH-1. Nos résultats montrent que l’intensité de GLH-1 n’est pas affectée dans les mutants nhl-2, suggérant que NHL-2 fonctionne en aval de GLH-1 pour contrôler la biogénèse des granules P. Conclusion et pertinence: Ces résultats suggèrent donc que NHL-2 fonctionne à travers PGL-1 pour réguler la stabilité ou la biogénèse des granules P pendant l’embryogénèse.

No 12The Drosophila inositol-(5) phosphatase, dOCRL, controls PI(4,5)P2 homeostasis and the fidelity of cytokinesis.Ben El Kadhi Khaled, Roubinet C, Solinet S, Emery G, Carreno S Institut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: During cytokinesis, constriction of an equatorial acto-myosin ring physically separates the two daughter cells. At the cleavage furrow, the phosphoinositide PI(4,5)P2 plays important role by recruiting and regulating essential proteins of the cytokinesis machinery. Accordingly, perturbation of PI(4,5)P2 regulation leads to abortive furrowing and binucleation. Methods and results: To understand how PI(4,5)P2 is regulated during cytokinesis, we individually knocked-down each of the enzymes controlling the phosphoinositide (PIP) cycle in Drosophila. We show that depletion of the Drosophila ortholog of human OCRL1, an inositol 5-phosphatase mutated in the X-linked disorder oculocerebrorenal Lowe syndrome, triggers high rate of cytokinesis failure. In absence of dOCRL, several essential components of the cleavage furrow were found to be incorrectly localized on giant cytoplasmic vacuoles rich in PI(4,5)P2 and in endocytic markers. Conclusion and relevance: We demonstrate that dOCRL is associated with endosomes and we propose that it dephosphorylates PI(4,5)P2 on internal membranes to restrict this phosphoinositide at the plasma membrane and thereby regulates cleavage furrow formation and ingression. Identification of dOCRL as essential for cell division may be important to understand the molecular basis of the phenotypic manifestations of the Lowe syndrome.

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No 13Searching for the efflux pump that confers resistance to the anticancer drug bleomycin.Berra Siham, Aouida M, Ramotar DCentre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)

Introduction: Bleomycin is an anticancer drug that acts by damaging the DNA. It is used in combination therapy to effectively treat testicular cancers, but not other types such as colon cancer. Our aim is to use yeast as a model to find the mechanism of bleomycin resistance. Methods and results: Previously, our laboratory showed that S. cerevisiae lacking the transcriptional co-activator Imp2 are hypersensitive to bleomycin due to its toxic accumulation. We propose that Imp2 might regulate the expression of an efflux pump to expel bleomycin out of the cell. To test this, we screened for multicopy suppressors that restore the drug resistance to the imp2 null mutant. This search revealed the transcriptional activator Yap1, which binds to a specific promoter element to activate expression of a subset of genes, many of which are involved in regulating drug resistance. At least 27 efflux pumps exist in yeast, and some of these have binding sites for Yap1. Here, we report that Tpo1, one of the 27 efflux pumps, is activated by Yap1 and might be required to restore drug resistance to the imp2Δ mutant. Overexpression of Tpo1 in the imp2Δ conferred resistance to bleomycin. Studies are in progress to show that Yap1 binds more tightly to TPO1 promoter in response to the drug. Conclusion and relevance: We identify Tpo1 as an efflux pump that functions to expel bleomycin from cells. We anticipate that a similar mechanism involving modulation of efflux pump expression might be operational in cancer cells that are resistant to bleomycin.

No 14Un polymorphisme dans une répition de glycine entre Dahl-Salt-Sensitive et Lewis serait à l’origine d’un QTL pour la pression artérielle sur le chromosome 16.Crespo Kimberley, Chauvet C, Blain M, Mennard A, Roy A, Deng AYCRCHUM - Technopôle-Angus

Introduction: L’hypertension artérielle est un facteur de risque majeur dans le développement des maladies cardiovasculaires fatales. Notre objectif est l’identification des loci à traits quantitatifs (QTLs) impliqués dans la régulation de la pression artérielle chez le rat. Méthodes et résultats: L’analyse des QTLs pour la pression artérielle est facilitée grâce à des souches congéniques réalisées au laboratoire chez lesquelles on peut remplacer un fragment chromosomique contenant un allèle qui agit en augmentant la pression par un allèle qui agit en diminuant la pression. Le séquençage d’un gène candidat pour un QTL responsable de la pression sur le chromosome 16 chez deux souches contrastantes de rats : une souche normo-tendue (Lewis) et une souche hypertendue (Dahl-Salt-Sensitive, DSS) a montré la présence d’une mutation. Six répétitions de glycine pour la souche DSS et cinq pour la souche Lewis. D’après Ding et al. (The Prostate, 2005) l’expression protéique serait affectée par cette différence de répétition de glycine. Conclusion et pertinence: Ainsi un seul gène candidat situé dans une région de 2,3 Mb et regroupant près d’une trentaine de génes aurait été mis en évidence pour ce QTL du chromosome 16. Des études in vitro et in vivo destinées à tester l’effet de ce gène sur la fonction physiologique doivent être réalisées. De plus, le lien entre la pression artérielle et ce gène candidat reste à être élucider, auquel cas des techniques de diagnostic ou de thérapie contre l’hypertension pourraient voir le jour.

No 15In vivo analysis of the cell cycle dynamics of germline stem cells in the C. elegans gonad.Khanikar Jayshree, Labbé J-C, Maddox PSInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: The fundamental mechanisms of stem cell division remain a poorly understood avenue in cell biology, mainly due to technical hurdles in observing living cells at high resolution in their niche microenvironment. The C. elegans germline provides a tractable model to study stem cell biology in vivo. The germline has a small population of mitotically dividing germline stem cells (GSCs) maintained by a single somatic Distal Tip Cell (DTC) that serves as a niche. The DTC is known to employ GLP-1/Notch signaling to promote proliferation and self-renewal of GSCs. However, the in vivo properties of dividing GSCs remain unknown. Methods and results: To address this, we have initiated an analysis of the division of GSCs within their niche in the C. elegans gonad, using high-resolution time-lapse imaging approaches. Using β-tubulin::GFP and histone H2B::GFP markers, we will quantify fundamental parameters of GSC division such as duration of cell cycle, frequency of divisions, orientation of the mitotic spindles and rate of spindle pole elongation. In preliminary experiments, we found that the mitotic spindles preferentially (78%) align themselves towards the niche and the duration of mitotic progression is highly variable (6 +/- 2.8 min). RNAi depletion of bub-3 and mdf-1, two regulators of the spindle assembly checkpoint (SAC) pathway, reduced both the duration and variability in cell cycle of GSCs whereas depletion of polarity regulator par-6 randomized the mitotic spindle angles. Conclusion and relevance: We have shown that the spindle assembly checkpoint and the spindle orientation pathway is active in GSCs. Further investigation into these observations will uncover the molecular mechanisms governing GSC division.

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No 16High-resolution analysis of mitotic chromosomes assembly.Ladouceur Anne-Marie, Maddox PInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: During mitosis, the diffuse interphase chromatin is compacted in mitotic chromosomes. In mammalian cells, this event mainly occurs during a 10 minutes window in prophase. Thus, the highly dynamic event of chromosome condensation has made it difficult to study in vivo. Nevertheless, key proteins regulating mitotic chromosomes assembly have been identified: the DNA topoisomerase II (TopoII) enzyme and the condensin complexes. Interestingly, despite the fact that biochemical and genetic analysis have assigned specific function to each molecule, depletion of TopoII or condensin results in similar phenotypes, mainly a defect in sister chromatids separation. In fact, we still lack an in vivo integrated view of the relative implication of those important condensation factors. Methods and results: We are developing a high-resolution live cell imaging based assay to identify intermediate steps that allow the transition of diffuse chromatin into mitotic chromosomes during prophase and define the proteins associated to each step in a mammalian cell model. To achieve this, time-lapse movies of HeLa cells stably expressing GFP-H2B will be analyzed for chromosomes condensation, an assay that we will refer as the mass/density assay. This assay is based on distribution of GFP fluorophores (condensed chromosomes have more localized fluorophores than diffuse chromatin). Then, we will use shRNA mediated depletion of known proteins (condensin and TopoII) and assign specific role to those proteins using the mass/density assay. Conclusion and relevance: This study will provide a high spatial and temporal resolution view of the specific events compacting chromosomes and link those event to protein functions in vivo.

No 17Une nouvelle base pour l’instabilité génomique des mélanomes.Rajotte Vincent, Drobetsky E

Centre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)

Introduction: Les mélanomes malins (MM) représentent la deuxième néoplasie la plus fréquente chez les jeunes adultes (22-44 ans) au Canada en plus d’être une forme de cancer extrêmement mortelle. Tout indique que les dommages à l’ADN causés par les UV solaires sont la cause proéminente des MM. À cet effet, la réparation par excision de nucléotides (REN) représente la seule voie moléculaire étant capable de réparer les dommages génomiques induits par UV. En addition, les individus atteints du syndrome Xeroderma Pigmentosum (déficience en REN) ont une prédisposition multipliant les risques de contracter le cancer de la peau par 1000. En tenant compte des considérations antérieures, il est surprenant qu’aucune étude ne mette en évidence qu’une déficience dans cette voie de réparation est impliquée dans le développement des MM. Méthodes et résultats: Utilisant une nouvelle technique basée sur la cytométrie de flux pour mesurer la réparation de l’ADN, nous avons découvert pour la première fois que la majorité des lignées de mélanomes étaient déficientes en REN exclusivement en phase S. Aussi, nous avons démontré que l’activation de la kinase ATR (protéine capitale dans la réponse aux UV) était moindre dans les lignées déficientes versus celles étant efficientes en réparation. Ces résultats pourraient s’agencer d’une belle manière à une de nos publications précédentes (Auclair et al., PNAS, 2008), où il a été prouvé qu’une inhibition d’ATR amenait à une REN inefficace en phase S dans des lignées humaines primaires. Conclusion et pertinence: Notre travail révèle une nouvelle base concernant l’instabilité génomique dans les MM. Les objectifs de recherche futurs sont de connaître les mécanismes moléculaires, dépendant ou non d’ATR, qui engendrent la déficience en réparation de l’ADN. De telles avancées pourraient mener à une toute nouvelle interprétation de la façon dont se développent les mélanomes et ainsi paver la voie à des traitements curatifs et préventifs de cette néoplasie.

No 18Caractérisation fonctionnelle du gène Polycomb EZH2 dans les cellules souches hématopoïétiques.Simon Camille, Sauvageau M, Chagraoui J, Sauvageau GInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Les protéines du groupe Polycomb sont des répresseurs transcriptionnels participant à l’établissement et la maintenance de l’identité cellulaire. Ces protéines jouent un rôle important dans l’auto-renouvèlement de cellules souches et le développement du cancer. EZH2, la sous unité catalytique du Polycomb repressive complex 2 (PRC2) est connu comme un marqueur “d’agressivité” dans le cancer de la prostate et du sein. De nombreuses évidences suggèrent que EZH2 régule la balance entre auto-renouvèlement et prolifération dans les cellules souches hématopoïétiques. Méthodes et résultats: Afin de répondre à cette hypothèse nous avons étudié l’effet de la délétion d’ Ezh2 in vitro sur la fonction des cellules souches ainsi que l’effet de la délétion d’ Ezh2 in vivo sur l’hématopoïèse de la souris. Nous avons utilisé comme modèle des souris transgéniques dans lesquelles la délétion d’Ezh2 peut être conditionnellement induite. La délétion de Ezh2 entraine une diminution de la reconstitution du système hématopoïétique après transplantation dans des receveurs irradiés et une diminution de la prolifération in vitro. La délétion in vivo de Ezh2 entraine un grave défaut dans la maturation des lymphocytes T et une baisse de la fréquence phénotypique des cellules souches. Conclusion et pertinence: Nos résultats préliminaires indiquent que Ezh2 pourrait jouer un rôle dans les cellules souches en régulant leur prolifération et leur différentiation. Une meilleure compréhension de sa fonction dans les cellules souches hématopoïétiques pourrait aider à développer de nouveaux traitements contre le cancer et améliorer le pronostic chez les patients.

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No 19Impacts fonctionnels de variants génétiques dans les promoteurs des gènes de l’apoptose.St-Cyr Janick, Larivière M, Sinnett DCentre de recherche du CHU Sainte-Justine

Introduction: Le contrôle de la mort cellulaire programmée (apoptose) est important dans le maintient de l’homéostasie cellulaire et de l’intégrité du matériel génétique. La dérégulation du niveau d’expression des gènes codant pour des composantes de la voie intrinsèque de l’apoptose provoquerait une accumulation de cellules dérégulées et contenant des altérations génétiques, des caractéristiques des cellules leucémiques. Nous proposons que des polymorphismes fonctionnels au niveau des régions régulatrice (rSNPs) des gènes impliqués de la voie intrinsèque de l’apoptose auraient un impact significatif dans la leucémogenèse en modifiant le taux d’expression (ARN messagers et protéines) des gènes correspondants. Méthodes et résultats: Le principal objectif de cette étude est de caractériser les polymorphismes retrouvés au niveau de la région promotrice des gènes de la voie intrinsèque de l’apoptose. Le promoteur proximal (~2kb en amont du site d’initiation de la transcription) a été séquencé chez 20 enfants leucémique et 20 individus normaux (n=80 chromosomes) d’origine Canadienne-Française. Ceci nous a permis d’identifier 63 rSNPs dans 11 gènes de l’apoptose : BAG1, BAG3, CARD9, CD47, CYCS, NOD1, MAP4K3, MAPK1, MAPK8, YWHAB et YWHAQ. Ces données ont permis d’identifier 32 « haplotypes régulateurs majeurs (rHAPs) que nous avons sous-cloné dans un système de gène rapporteur luciférase (pGL3b). Ces constructions ont été utilisées dans des expériences de transfections transitoires dans 3 lignées cellulaires (HeLa, JEG3 et Jurkat) afin de mettre en évidence des activités promotrices alléliques. Conclusion et pertinence: Nous avons observé une activité promotrice différentielle pour des rHAPs associés aux gènes YWHAQ et YWHAB. Cette activité allélique pourrait contribuer à la dérégulation de l’apoptose et ainsi participer à la leucémogenèse de l’enfant.

No 20Implication de PARP-1 dans le cancer de la prostate.Thomas Etienne1, Gannon PO1, Koumakpayi IH1, Latour M2, Mes-Masson A-M1, Saad F1

1 CRCHUM - Hôpital Notre-Dame / Institut du Cancer de Montréal (ICM)2 CHUM, Département de pathologie

Introduction: Le cancer de la prostate (CaP) est le cancer avec le taux d’incidence le plus élevé au Canada. Des patients atteints, un quart progressera vers un stade plus avancé. Donc, des efforts sont dédiés à trouver des facteurs moléculaires pouvant améliorer le dépistage des patients susceptibles de progresser. L’expression de la protéine nucléaire poly(ADP-ribosyl) polymérase 1 (PARP-1) est associée à la progression de divers cancers. Par contre, peu d’information est disponible sur l’expression de PARP-1 dans les tumeurs de patients du CaP. Nous émettons l’hypothèse que la proportion des noyaux exprimant PARP-1 en tissu pourrait prédire la progression du PCa. Méthodes et résultats: Nous avons réalisé une étude d’immunohistochimie (IHC) sur des micro-étalages de tissus de la prostate provenant de patients atteints du PCa. Nous avons analysé le marquage de PARP-1 avec le programme d’analyse histologique Aperio et l’algorithme IHC Nuclear. Nous avons mesuré le pourcentage de noyaux marqués dans des tissus non-malins ainsi que dans les tumeurs malignes, ces dernières ayant une proportion de noyaux marqués significativement plus élevée que les tissus non-malins. Un pourcentage de noyaux marqués élevé corrèle avec la rechute biochimique. De plus, nous avons analysé le potentiel prédictif de PARP-1 par des régressions COX qui ont démontrées que PARP-1 prédit la progression. Conclusion et pertinence: Nos résultats préliminaires démontrent que PARP-1 prédit la progression du CaP. PARP-1 pourrait donc améliorer la détection de patients susceptible de progresser. Également, ceci pourrait suggérer que PARP-1 contribue à l’évolution du cancer, ce qui ouvrirait la voie à l’utilisation d’inhibiteurs de PARP-1 comme nouvelle thérapie dans le CaP.

No 21The MHC I immunopeptidome reflects dynamic changes in mTOR signaling. Vincent Krystel, Caron E, Fortier M-H, Laverdure J-P, Bramoullé A, Hardy M-P, Voisin G, Roux PP, Lemieux S, Thibault P, Perreault CInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Self/non-self discrimination is a fundamental requirement of life. Failure to respond to non-self can lead to death from infection whereas inappropriate response to self can lead to autoimmunity. Endogenous peptides presented by major histocompatibility complex class I (MHC I) molecules represent the essence of self for CD8 T lymphocytes. These MHC I peptides (MIPs) are collectively referred to as the immunopeptidome. Very little is known about the origin, composition and plasticity of the immunopeptidome. Our goals were to determine 1) the abundance and 2) the nature of MHC I associated peptides in response to metabolic perturbations. Methods and results: 1) Using a quantitative high throughput approach, we found that altering cellular metabolism via the inhibition of the mammalian target of rapamycin (mTOR) results in dynamic changes in the cell surface expression of MIPs. In fact, more than 60% of the 425 quantified peptides were progressively overexpressed upon rapamycin treatment. Thus, our results show that the immunopeptidome is plastic and molded by cellular metabolism. 2) We also found that MIPs appearing de novo upon rapamycin treatment were immunogenic, suggesting that plasticity of the immunopeptidome can be sensed by the immune system. Moreover, we provide evidence that the immunopeptidome projects at the cell surface a faithful representation of biochemical networks and metabolic events regulated at multiple levels inside the cell. Conclusion and relevance: Our findings open up new perspectives in systems immunology and predictive biology. Indeed, predicting variations in the immunopeptidome in response to cell-intrinsic and -extrinsic factors could be relevant to the rational design of immunotherapeutic interventions.

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No 22Identification des mécanismes moléculaires de l’activation du ligand Delta dans la signalisation Notch.Assaker Gloria, Lafaille-Magnan M-E, Emery GInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Le récepteur Notch joue un rôle clé dans le renouvellement des cellules souches, la prolifération cellulaire, la différenciation, et l’apoptose. Par conséquent il est impliqué dans plusieurs maladies et cancers. La signalisation Notch est régulée par différents processus cellulaires, incluant la modulation de l’activité des ligands de Notch. Ces derniers doivent être ubiquitinés, endocytés, et dans certains cas, recyclés à la membrane plasmique afin de transactiver Notch. Le ligand Delta serait modifié lors de ce trafic endosomal, mais la nature de cette modification est inconnue. Le but de ce projet est d’identifier les mécanismes moléculaires régulant l’activité de Delta. Méthodes et résultats: Pour identifier des régulateurs de Delta, nous envisageons d’effectuer un criblage shARN pangénomique utilisant un essai de signalisation Notch in vitro. Ensuite nous allons effectuer des cribles secondaires pour éliminer les faux positifs et valider les régulateurs potentiels dans des tissus physiologiquement réceptifs à la signalisation Notch. Nous avons commencé les mises au point pour le crible primaire et nous avons trouvé les conditions optimales pour évaluer le « range» dynamique de l’activation de Notch. Dans cet essai la lignée stable OP9-DL1 sera utilisée comme cellule émettrice du signal, et les cellules HeLa comme cellules-cibles. L’activité de Notch dans ces cellules sera suivie grâce à un rapporteur luciférase. Conclusion et pertinence: Ce projet constitue une opportunité unique d’identifier de nouveaux gènes régulant la signalisation Notch, avec une application potentielle dans le domaine clinique afin de développer de nouvelles cibles thérapeutiques pour les cancers impliquant Notch.

No 23Rôle de Gab1 dans la réorganisation du cytosquelette d’actine des cellules endothéliales en réponse au VEGF.Caron Christine, Royal ICRCHUM - Hôpital Notre-Dame / Institut du Cancer de Montréal (ICM)

Introduction: Le VEGF est l’un des plus importants médiateurs de l’angiogenèse normale et pathologique. Sa liaison aux cellules endothéliales résulte en l’induction de plusieurs voies de signalisation et la promotion d’activités biologiques telles que la prolifération, la migration et la survie. Notre laboratoire a démontré que la protéine adaptatrice Gab1 contribue à l’amplification de la signalisation ainsi qu’à la promotion de la migration et la formation de lamellipodes en réponse au VEGF. Nous avons donc émis l’hypothèse que Gab1 agissait à titre de médiateur de l’activation des Rho GTPases et de leurs activateurs GEFs, et contrôlait ainsi les changements morphologiques induits par le VEGF. Méthodes et résultats: Nous démontrons que la déplétion de Gab1 par traitement ARNi dans les cellules endothéliales stimulées au VEGF entraîne une réduction de l’activation de la RhoGTPase Rac, de la phosphorylation de la GEF VAV2 et de l’activation de la cortactine, un médiateur de la polymérisation d’actine. Nous constatons de plus que la déplétion de Gab1 entraîne une inhibition de l’association entre VAV2 et la p120Caténine, préalablement démontrée comme essentielle à la promotion de l’activation de Rac et la formation de lamellipodes. Conclusion et pertinence: Nos résultats suggèrent pour l’instant que Gab1 permet le contrôle de l’activité de la GTPase Rac, via l’activation de VAV2 et son association à la p120Caténine, ayant pour conséquence le remodelage du cytosquelette des cellules endothéliales en réponse au VEGF. Des expériences en cours tentent de déterminer quel domaine de VAV2 est impliqué dans l’association avec la p120Caténine.

No 24Alpha Kinase 2, candidat à l’hypertension essentielle chez les rats Dahl.Chauvet Cristina, Crespo K, Ménard A, Wu Y, Xiao C, Blain M, Roy J, Deng AYCRCHUM - Technopôle-Angus

Introduction: L’hypertension essentielle est une maladie polygénique très répendue. Il s’agit d’identifier des loci de traits quantitatifs (QTLs) à partir de souches congéniques porvenantes des souches normo- (Lewis) et hypertendues (Dahl Salt-Sensitive, DSS) dans le but de trouver, puis d’étudier les gènes présumés responsables de l’hypertension. Au niveau du QTL3 du chromosome 18 l’objectif a été vérifié s’il existe des mutations dans la séquence codante et dans le niveau d’expression de gènes entre les souches Lewis et DSS qui pourraient expliquer la différence de phénotype observé. Méthodes et résultats: Le séquençage des gènes Adrb2 récepteur b-adrénergique en lien avec la PA par la régulation de la fréquence cardiaque et Nedd4l, une ubiquitine ligase (impliquée dans le syndrome de Liddle) liée au contrôle du volume sanguin en régulant l’expression des canaux sodium épithéliaux ne révèle aucune mutation au niveau de leur région codante ni au niveau de leurs régions promotrices. Des études du niveau d’expression de ces gènes entre DSS et Lewis par Real-Time PCR ne montrent aucune différence au niveau de leur expression. Par contre, trois mutations ont été trouvées au niveau du gène Alpk2, codant pour une kinase dont la fonction demeure inconnue, entre DSS et Lewis. Conclusion et pertinence: Alpk2 étant un gène prédit, il faudra à présent trouver son vrai codon d’initiation, établir sa fonction et ses cibles, pour finalement détérminer l’effet des mutations sur ces dernières. Ainsi, la relation entre la fonction de Alpk2 et l’étiologie de l’hypertension pourra aboutir à la découverte d’un nouvel outil de diagnostique et/ou de traitement contre cette maladie.

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No 25Functional characterization of ANO5 Dysfunction in LGMD2L by studying a transgenic KO mice model.Conte Talita, Bolduc V, Larivière R, Brais BCRCHUM - Hôpital Notre-Dame

Introduction: Our lab has previously identified recessive mutations in ANO5 that result in LGMD2L myopathies. Though the function of the ANO5 protein is still unknown, it is predicted to code for a Calcium-activated Chloride channel. Fibroblasts from ANO5 mutations carriers have demonstrated a reduced membrane repair capacity. Methods and results: We have access to a growing colony of ANO5 KO mice. Since we have failed to identify any KO out of the 43 puppies generated from six different het x het crosses (27 het and 16 wt), we sacrificed 2 mothers and we found 2 KO embryos at E9 out of a total of 15 (2 KOs, 6 heterozygotes, 7 wildtypes). Gross physical examination revealed no evidence that the embryos were malformed in anyway. This may suggest a perinatal lethal phenotype. The exact position of ANO5 in the myofiber is still not known, however, another study in our lab has identified a partial co-localization of ANO5 and OPA1 (mitochondrial marker) and SERCA1 (sarcoplasmic reticulum marker) in mice tissue. We analyzed ANO5 expression in isolated mitochondria and microsomes from brain and microsomes from muscle, and we saw that ANO5 is present in brain and muscle microsomes, but not in brain mitochondria. We have also done muscle membrane protein fractionations and found that ANO5 is present in T-tubules, intracellular membranes and sarcoplasmic reticulum, but not in the plasma membrane. In order to analyze ANO5 role in membrane repair, we have started testing a wound assay in a primary myofiber culture of wt and dysferlin KO mice (defective in membrane repair) and confirmed the validity of the assay. Conclusion and relevance: To uncover ANO5’s function in skeletal muscle will shed light unto uncharted fields of muscular dystrophies pathophysiology in which ion channels and other pathways play important roles.

No 26The involvement of neogenin in spinal motor neuron development.Croteau Louis-Philippe, Kania AInstitut de recherches cliniques de Montreal (IRCM)

Introduction: The means by which the central nervous system generates the astonishing diversity among neuronal types remains obscure. Our preliminary evidence suggests that the transmembrane receptor Neogenin is required for the subtype differentiation of limb innervating motor neurons. Methods and results: We are investigating the role of Neogenin in chick spinal motor neuron diversification by studying the effects of electroporation of siRNAs directed against Neogenin, in the developing spinal cord. While the loss of Neogenin function does not affect the total number of limb innervating motor neurons, their subtype identity is altered. Conclusion and relevance: We are continuing the analysis of the effects of gain and loss of function of Neogenin, its ligands and putative downstream effectors in the chick spinal cord and will begin a detailed characterization of a mouse Neo1 knockout. Interestingly, Neogenin, its ligand RGMa, as well as a putative downstream effector, LMO4, have been implicated in vertebrate neural tube closure defects. Therefore, our studies, in addition to addressing the question of neuronal diversity generation, might shed some light on the molecular defects underlying a common human malformation.

No 27Increased de novo mutation rate in probands affected with schizophrenia.Girard Simon L1, Gauthier J1, Noreau A1, Xiong Lan1, Dionne-Laporte A1, Spiegelman D1, Dion PA1, Lok S2, Krebs M-O3, Rouleau GA1

1 Centre d’excellence en neuromique de l’Université de Montréal (CENUM)2 Genome Research Centre, The Li Ka Shing Faculty of Medicine, University of Hong Kong3 Université Paris Descartes, Faculté de Médecine Paris Descartes

Introduction: Schizophrenia (SCZ) is a severe psychiatric disorder that profoundly affects cognitive, behavioral and emotional processes. The wide spectrum of symptoms and clinical variability in SCZ suggests a complex genetic etiology, which is consistent with the numerous loci thus far identified by family linkage, copy number variation (CNV) and association studies. While SCZ heritability may be as high as ~80% the genes responsible for much of this heritability remain to be identified. Methods and results: This report suggests that de novo mutations (DNMs) may account for a substantial fraction of the missing SCZ heritability. Using high-throughput sequencing technologies, we sequenced the exome of 14 patients with schizophrenia and their parents and identified 14 DNMs in 8 probands, which is significantly more than expected considering the previously reported DNM rate. Conclusion and relevance: Our study supports the notion that DNMs play a major role in sporadic SCZ while providing a list of genes possibly involved in disease pathogenesis.

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No 28Genome-wide shRNA screen for genes affecting estrogen receptor expression in breast cancer cells.Kulpa Justyna, Wang X, Laperrière D, St-Hilaire E, Audette K, Guenier AS, Duchaine J, Mader SInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Over 70% of mammary tumours express estrogen receptor alpha (ERa) and their growth is dependent on estrogen signaling via this receptor. Estrogenic stimulation leads to receptor binding to estrogen-response elements (ERE) in target gene regulatory sequences and to association with multiple co-activators and/or co-repressors, resulting in altered gene expression profiles and tumour growth. Systematic identification of genes that regulate ER expression and/or activity is necessary for an in-depth understanding of mechanisms controlling estrogen signaling and tumour development. Methods and results: A genome-wide screen for genes affecting ER expression and signaling was undertaken using T47D-KBLuc cells, a human ER+ luminal breast cancer cell line that contains a luciferase reporter downstream of 3 EREs. Using the Mission shRNA lentiviral library, three shRNA clones were produced for each of 16,000 genes. Following four days of lentiviral infection and E2 stimulation, T47D-KBLuc cells were screened for luciferase activity at the HTS platform. Primary screening identified 1607 genes (double-hits, >50% cutoff) regulating luciferase reporter expression. We also identified 49 genes (double-hits, 25% cutoff) directly affecting cellular growth (alamar blue assay). Our hit list includes both known and potentially novel regulators of ER expression. Conclusion and relevance: A subset of ~600 genes has been selected for further counter-screening using cells transfected with reporter vectors that are not affected by estrogen signaling. In addition, secondary assays for ER expression levels (western blot, immunofluorescence), cell proliferation (EdU assay) and the expression of ER-target genes (real-time PCR) will be used to clarify mechanisms of regulation for validated hits. The identification of genes that regulate ER expression and signaling will give insight into estrogen-stimulated tumor growth and provide potential novel targets for therapeutic development.

No 29Rôle de la MAP kinase ERK3 dans la réparation des dommages à l’ADN.Mathien Simon, Meloche SInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Des travaux menés en collaboration avec notre laboratoire sur des souris mutantes Erk3-/- ont montré que ERK3 est requise pour la réparation des cassures à l’ADN occasionnées lors du développement normal des thymocytes. Un criblage d’interactions nous a permis d’identifier comme partenaire de ERK3 l’hétérodimère Ku70/80, composant essentiel de la machinerie de réparation de l’ADN « Non Homologous End Joining » (NHEJ). Notre hypothèse est que la signalisation ERK3 serait nécessaire à la réparation de l’ADN par NHEJ via son interaction avec Ku70/80 et que ce rôle est nécessaire au développement normal des thymocytes. Méthodes et résultats: Des expériences de co-immunoprécipitations ont validé l’interaction entre ERK3 et l’hétérodimère Ku70/80. La suite du projet s’intéressera : (i) à la caractérisation moléculaire de cette interaction, afin notamment de déterminer si Ku70/80 est un substrat de ERK3 ; (ii) à l’implication de ERK3 dans la réparation des cassures à l’ADN: l’accumulation de cassures à l’ADN et/ou le recrutement des protéines de réparation, la fonctionnalité des voies ATM et p53, la prolifération cellulaire et la sénescence en réponse à l’induction de dommages à l’ADN seront caractérisés dans ces modèles. Conclusion et pertinence: Cette étude permettra de mieux comprendre la fonction cellulaire de ERK3 qui reste peu connue, ainsi que le phénotype de développement anormal des lymphocytes observé chez les animaux Erk3-/-, mais aussi de manière plus générale le fonctionnement de la machinerie de réparation de l’ADN.

No 30Wnt4 regulates thymic cellularity VIA stroma-dependent mechanisms.Ruiz Juan, Heinonen K, Brochu S, Perreault CInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Thymus is the only organ capable of generating T lymphocytes. As the thymic output decreases with age, the size and diversity of the T cell repertoire also become more restricted, resulting in increased susceptibility to infections, in particular by emerging pathogens. We have previously shown that retroviral overexpression of Wnt4 by hematopoietic cells after long term reconstitution improved thymic recovery. Our current studies have focused on further characterizing the physiological role of Wnt4 in thymic organogenesis and in the maintenance of adult thymopoiesis in mice. Methods and results: Using both conventional and conditional knock-out mice, we show that Wnt4 regulates steady-state thymic cellularity by a thymic epithelial cell (TEC) dependent mechanism. The absence of Wnt4 during fetal thymopoiesis results in decreased TEC numbers and consequently lower thymic cellularity with no apparent effect on thymocyte differentiation. Deletion of Wnt4 at birth suppresses post-natal thymic expansion, resulting once more in decreased TEC numbers and an alteration of the medullary-to-cortical TEC ratio. Wnt4 is also implicated in the maintenance of adult thymopoiesis, as its deletion later in life decreases thymic cellularity, albeit to a lesser extent, and results in a disproportionate loss of the most immature cKithi thymic precursors. Conclusion and relevance: Together, our results show that Wnt4 controls thymic size by modulating TEC expansion and the earliest, TEC-dependent steps of thymocyte development both in the fetal and post-natal thymus. Wnt4 and its downstream signaling pathways could thus represent interesting candidates to improve thymic output in aging and disease

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No 31Feedback regulation of Gab2 function by MAPK signalling.Zhang Xiaocui, Galan J, Roux PPInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Tyrosine phosphorylation plays a crucial role in modulating cell growth, differentiation and motility. Abnormal regulation of tyrosine phosphorylation will result in human diseases such as cancer. The Grb2-associated binder (Gab) 2 is an adaptor protein that acts downstream of several receptor tyrosine kinases (RTKs) to regulate multiple signalling pathways. Following growth factor stimulation, Grb2 promotes Gab2 recruitment at the plasma membrane and its assembly with various relay molecules, including SHP-2, PI3K, CrkL, PLC and SHIP. Association with these various proteins leads to the activation of the Ras/ERK and PI3K/Akt pathways. In addition to playing an important role during embryonic development, Gab2 overexpression has recently been implicated in human cancer, but very little is known about the molecular mechanisms that potentiate or attenuate its function. Methods and results: Here we show that Gab2 becomes phosphorylated on Ser/Thr residues following treatment with growth factors that stimulate the Ras/ERK pathway. Using pharmacological inhibitors, we identified two protein kinases that are responsible for Gab2 phosphorylation in response to growth factors. These kinases appear to interact with Gab2 in a growth factor-dependent fashion, suggesting that they mediate a feedback response that modulates Gab2 function. Conclusion and relevance: The role of this feedback response remains unknown, but one likely hypothesis is that Ser/Thr phosphorylation negatively regulates Gab2-mediated PI3K/Akt signaling via SHP2 binding to prevent its hyperactivation in normal cells. My future work will focus on characterizing the impact of this feedback response on Gab2 function. Our studies will better define this new functional relationship and assess its biological significance in human cancer.

No 32Implication du connective tissu grow factor (CTGF) et de la voie P13k/mTOR dans la différentiation myofibroblastique.Bernard Monique, Hébert MJCRCHUM - Hôpital Notre-Dame

Introduction: La fibrose est une complication majeure de la transplantation d’organe menant à la perte de fonction de l’organe greffé. La raréfaction microvasculaire et l’augmentation de l’expression du CTGF dans le greffon sont deux facteurs prédictifs de fibrose d’allogreffe d’organe. Nous proposons que la carence en facteurs de croissance, liée à la raréfaction microvasculaire, promeut la fibrose en favorisant la différentiation myofibroblastique par l’activation de la voie PI3K/mTOR et la synthèse du CTGF. Méthodes et résultats: Nous utilisons la privation de sérum des fibroblastes WI38 comme modèle de carence en facteurs de croissance. Les marqueurs de différentiation myofibroblastique (aSMA, collagènes, formation de fibres de stress) sont augmentés suite à l’incubation sans sérum, évalués par Western Blot, Immuonofluorescence et qPCR. La privation de sérum induit la rephosphorylation d’Akt ser473 après 2 jours d’incubation suggérant la réactivation de la voie PI3K/mTOR. De plus, les inhibiteurs de PI3K (LY294002) et de mTOR (rapamycine) bloquent cette rephosphorylation ainsi que l’apparition des marqueurs de différentiation. Ces mêmes inhibiteurs, en absence de sérum, ont aussi diminué les niveaux de CTGF intra-cellulaires et sa sécrétion, suggérant l’implication de l’activité PI3K/mTOR dans la régulation de cet agent pro-fibrotique. Conclusion et pertinence: Les résultats démontrent que la carence en facteurs de croissance induit la différentiation myofibroblastique en activant la voie PI3K/mTOR qui contrôle aussi la synthèse et la sécrétion du CTGF. Ces résultats suggèrent un nouveau mécanisme pro-fibrotique en condition de raréfaction microvasculaire.

No 33Regulation of the eIF4E-transporter by stress signalling.Cargnello Marie, Roux PPInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: The eukaryotic initiation factor 4E (eIF4E) is a key regulator of mRNA translation and is overexpressed in many human cancers. eIF4E is a proto-oncogene highly regulated in normal cells through its interaction with different partners, like its transporter, 4E-T. Beside its function in regulating eIF4E localization, 4E-T was shown to play an active role in the decay of some mRNAs and to be essential in the assembly and maintenance of processing bodies (P-Bodies) which are cytoplasmic granules involved in the storage and the degradation of non-translated mRNAs. 4E-T appears to control protein synthesis at different levels but little is known about the molecular mechanisms regulating its localization and function. Methods and results: Here we show that activation of signalling pathways that promote formation of P-bodies induces the phosphorylation of 4E-T. We found that induction of oxidative stress is a prerequisite for the regulation of 4E-T by phosphorylation. We demonstrate that activation of these signalling pathways confines 4E-T to P-bodies without affecting its interaction with eIF4E, suggesting that oxidative stress regulates the fate of eIF4E-bound mRNAs by relocalizing them to P-Bodies. Using pharmacological inhibitors, we identified a signalling cascade involved in 4E-T phosphorylation. Further, we developed a method to quantify P-Bodies and found that inhibition of that cascade impairs P-Bodies assembly. Conclusion and relevance: Together, our results indicate that stress signalling that promotes an increase in P-bodies also leads to 4E-T phosphorylation. We show that the cascade responsible for 4E-T phosphorylation is required for P-Bodies formation. We propose that 4E-T phosphorylation participates in assembly of P-bodies and in eIF4E relocalization, suggesting a new molecular mechanism by which 4E-T suppresses mRNA translation.

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No 34The KNL-2 Myb domain directs epigenetic centromere specification via a conserved, structure based mechanism.De Rop Valérie, Osborne MJ, Moevus C, Borden KLB, Maddox PSInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Centromeres are chromosomal loci that direct kinetochore assembly in mitosis. Unlike genetic features, centromere DNA sequence is not conserved through phylogeny nor is it sufficient for centromere function. Therefore, it is commonly accepted that centromeres are epigenetically defined; a process mediated by the histone H3 variant CENtromere Protein-A (CENP-A). The Myb DNA binding protein, KNL2, is essential for CENP-A localization to the centromere in both C. elegans and human cells. Myb domains in other proteins have been shown to bind DNA with high sequence specificity. Thus, contrary to the epigenetic hypothesis, the KNL2 Myb domain might recognize a specific DNA pattern to localize CENP-A to centromeres. Here we show that the C. elegans KNL-2 (CeKNL-2) MYB domain is able to bind human centromeric DNA in vitro by bandshift assay. Furthermore, CeKNL2 localizes to centromeres when ectopically expressed in human cells. Together, these results indicate that the KNL2 Myb domain does not utilize a sequence specific DNA binding mechanism and possibly recognizes a specific structure generated by the presence of CENP-A nucleosomes at centromeres. Methods and results: To test this model, we solved the 3D structure of the CeKNL2 Myb domain using NMR. This revealed an expected helix-loop-helix-loop-helix structure. To determine which residues in KNL2 Myb bind DNA, we performed a HSQC NMR spectral analysis in presence of human centromeric DNA. This analysis revealed that, surprisingly, all the predicted DNA interacting residues reside within the first helix. Conclusion and relevance: Together, our results indicate that, although not conserved at the sequence level, CeKNL-2 MYB domain displays conserved activity in human.

No 35Screening for small molecules capable of expanding human hematopoietic stem cell ex vivo.Fares Iman, Chagraoui J, Roy DC, Sauvageau GInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: A worldwide hemopatoietic stem cell (HSC) transplantation survey suggests that yearly ~50,000 HSC transplantations are performed. Unfortunately, approximately 15% of patients in need of HSC transplantation are deprived of this potentially life saving procedure because of an insufficient number of stem cells in the graft. Methods and results: To identify molecules capable of expanding HSC ex vivo, we adapted an assay that used primary human CD34+ cells form mobilized peripheral blood and evaluated the most primitive uncommitted stem cells, CD34+CD45RA- sub population, after a seven day culture in a media comprising 1 mM compounds or vehicle (0.1% DMSO). Prior to the large screen, we initiated a pilot screen and assessed the efficiency of our assay. Using high throughput screen- fluorescence activated cell sorting (HTS-FACS) and taking SR1, aryl hydrocarbon receptor (AhR) antagonist, as a positive control for HSC expansion, we were able to achieve a reproducible result with a suitable Z-score. Compounds with ability to expand the starting CD34+CD45RA- population will be reanalyzed in secondary screen and will be subjected to further analyses such as transcriptional profiling to determine the mechanism of their action. Conclusion and relevance: Identifying small molecules with ability to expand Human HSCs ex vivo could rapidly improve possibility to protect stem cells from the deleterious effects of chemotherapy, and broaden the use of stem cell transplantation.

No 36Understanding the transcriptional control of the eukaryotic translation factor eIF4E in cancer: Role of NFkB.Hariri Fadi, Arguello M, Borden KInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: eIF4E is overexpressed in a wide range of cancers, this overexpression is correlated with cell transformation, metastasis, tumor invasion and poor prognosis. eIF4E is regulated at multiple levels but little is known about the transcriptional regulation of eIF4E. Expression of the IkB super repressor (IkB-SR), a negative regulator of NFkB, suppresses eIF4E transcript levels in AML primary specimens. Below, we describe the first steps in understanding the dysregulation of eIF4E expression in hematological malignancy. Methods and results: Analysis of the eIF4E promoter revealed 4 putative NFkB elements proximal to the transcription start site. Electrophoretic mobility shift assays (EMSA) carried out on TPA stimulated BJAB and Jurkat nuclear extracts demonstrated that these elements bind NFkB complexes, in particular Rel A/C and p50 as determined by supershift experiments. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) further corroborated NFkB loading on these elements. Furthermore, eIF4E transcript and protein levels were upregulated in TPA and TNF-a stimulated BJABs as well as MEFs but not in p65 knockout cells. Finally, luciferase reporter assays demonstrated transactivation of the eIF4E promoter with p65 and c-Rel. Conclusion and relevance: These findings implicate NFkB in the transcriptional regulation of eIF4E through physical interaction with the promoter as well as provide a link between this transcriptional regulator with the translational machinery. As many translation and mRNA export targets of eIF4E are also NFkB transcriptional targets, suggests that eIF4E could amplify NFkB signals and suggests that these proteins are part of the same, or highly overlapping, RNA regulon.

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No 37Genome-wide analysis of the Candida albicans transcription factor Fcr1p regulon.Khayat Aline, Zin-Al-Abdin O, Weber S, Raymond MInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Candida albicans is an opportunistic yeast which causes severe infections in immuno-compromised patients such as HIV or chemotherapy patients. These infections are often repeatedly treated with azole drugs which leads to the emergence of resistance. Our group has previously identified a C. albicans transcription factor, Fcr1p (Fluconazole resistance protein 1), that plays a role in azole tolerance and whose deletion results in a hyper-resistant phenotype. So far, the biological function of Fcr1p is unknown. Methods and results: To address this question, we performed ChIp-chip assays (chromatin immunoprecipitation on DNA microarrays). These experiments revealed a significantly enriched binding of Fcr1p to 126 genes including genes involved in ergosterol metabolism (UPC2, ERG1, ERG11) as well as several genes involved in ammonium, amino acid and oligopeptide transport (e.g. MEP1, OPT1), nitrogen metabolism (GLT1, GLN1, GDH3) and transcriptional regulation of nitrogen utilization (GAT1, STP3), suggesting that Fcr1p plays an important role in controlling ergosterol metabolism and nitrogen assimilation. To understand the functional relevance of Fcr1p binding to these targets and its role in nitrogen metabolism, we have grown wild-type and fcr1Δ/Δ mutant strains in media containing different sources of nitrogen and analyzed the expression of selected Fcr1p target genes by Northern blots. We found that OPT1 and STP3 expression is induced in the presence of proline (poor nitrogen source) and that this expression is even greater in the fcr1Δ/Δ mutant, indicating that Fcr1p functions as a repressor of these genes under these conditions. MEP1 expression was induced by ammonium sulfate, urea and proline in wild-type cells. On the other hand, in the fcr1Δ/Δ mutant, this induction was reduced in ammonium sulfate and urea but unaffected in proline. Conclusion and relevance: These results demonstrate that Fcr1p is involved in regulating nitrogen assimilation. They also suggest that Fcr1p functions as an activator or a repressor depending on the target and the nitrogen source. To better understand transcriptional regulation by Fcr1p, we will extend these analyses by performing expression profiling in different nitrogen sources.

No 38Deciphering nucleosome organization and distribution pattern at centromeres.Padeganeh Abbas, Ladouceur A-M, Maddox PSInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Chromosome segregation during mitosis is mediated by the formation of kinetochores between centrometic DNA and microtubules that generate force to faithfully distribute them into daughter cells. Defects in centromeres result in aneuploidy and cancer. Centromeric nucleosomes, characterized by replacement of histone H3 with an H3 variant, CENP-A, play a critical role in genome stability. Moreover, CENP-A is proposed to act as an epigenetic mark specifying and maintaining centromere identity in each cell division. In contrast to histone H3, incorporation of new CENP-A into nucleosomes is not coupled to DNA replication and during S-phase the CENP-A population is equally distributed between the newly synthesized centromeres. However, it is not known if this distribution occurs in a random or regulated manner. After cell division, centromeres are repopulated with CENP-A during G1 in preparation for the subsequent S-phase. It is unknown how CENP-A distribution is rectified prior to the next s-phase. Methods and results: Our goal is to develop a single-molecule imaging strategy to study the distribution of CENP-A and H3 in centromeric chromatin and investigate compositional changes in different phases of the cell cycle. To do this, we will tag the centromeric nucleosomes using GFP or RFP-fused CENP-A and GFP or RFP-fused H3 proteins. Purified fragments of tagged centromeric chromatin will then be analyzed with total internal reflection fluorescence microscopy (TIRFM). Conclusion and relevance: These results will reveal CENP-A/H3 nucleosome distribution patterns, how this pattern is regulated in the cell cycle, and thus provide fundamental insight into centromere function.

No 39Two B-type cyclins regulate anterior PAR protein localization in the early C. elegans embryo.Rabilotta Alexia, Labbé J-CInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: We are using C. elegans as a model to study asymmetric division. In the C. elegans embryo, the establishment of an anterior-posterior axis of polarity depends on actomyosin contractility and asymmetric localization of PAR proteins in two mutually exclusive groups: the anterior complex (PAR-3/PAR-6/PKC-3) and the posterior group (PAR-2/PAR-1). Depletion of any PAR protein causes a loss of polarity and embryonic lethality. A genome-wide RNAi screen identified two B-type cyclins, cyb-2.1 and cyb-2.2, (together named cyb-2) as suppressors of par-2(it5ts) lethality. The goal of this project is to determine the role of these cyclins in cell polarity. Methods and results: Using double and triple mutants, we showed that the lost of either cyclin suppressed lethality and restored normal cell cycle timing, asymmetric mitotic spindle positioning and anterior PAR protein localization in par-2 mutants. Interestingly, we observed that the localization of PAR-6::GFP was more anterior in cyb-2 mutants. Analysis of either anterior PAR proteins anchoring at the cortex or timing of contractile polarity establishment revealed that cyb-2 regulates anterior PAR localization without affecting their molecular properties and independently of contractility. However, western blot analyses show that PAR-6 levels are decreased in cyb-2 mutants. Interestingly, depletion of another par-2 suppressor, nos-3, also shows this phenotype, suggesting that control of PAR-6 levels is a novel step implicated in the regulation of cell polarity. We are currently using molecular and genetic tools to identify the pathway that regulates PAR-6 levels and define the role of CYB-2 in this pathway. Conclusion and relevance: Our results reveal a novel link between cell cycle regulation and regulation of PAR-6 levels during polarization of the C. elegans embryo.

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No 40Caractérisation biochimiques de Smc5.Roy Marc-André, Siddiqui N, D’Amours DInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Les protéines «Structural maintenance of chromosomes» sont essentielles à tout les domaines de la vie et sont impliquées dans un large éventail de processus cellulaires. Ces processus vont de la mitose à la réparation de l’ADN. Chez les eucaryotes comme la levure, il y a 6 protéines Smc qui sont extrêmement conservées et qui mènent à la formation de 3 complexes. Ces complexes sont cohesin (Smc1 et 3) impliquée dans la cohésion des chromatides soeurs, condensin (Smc2 et 4) impliquée dans la condensation et la ségrégation des chromatides soeurs. Le dernier complexe, Smc5/6, est le moins bien caractérisé et est impliqué dans plusieurs voies de réparation de l’ADN. C’est pourquoi nous voulons déterminer la biochimie de ce complexe pour mieux cerner son implication dans la réparation de l’ADN. Méthodes et résultats: Nous avons commencé notre investigation par Smc5, une des sous-unités Smc du complexe Smc5/6. Ainsi, Smc5 est capable de se lier à différents types d’ADN (simple brin (sb) ou double brins (db), linéaire ou circulaire). Malgré cette capacité, Smc5 possède une meilleure affinité et une préférence pour l’ADNsb. La longueur minimale d’ADNsb pour la liaison de Smc5 se situe entre 45 et 60 nucléotides. De plus, l’interaction entre Smc5 et l’ADN n’est pas dépendant de l’ATP mais est sensible à la force ionique. Finalement, bien que la liaison ne dépende pas de l’ATP, Smc5 possède tout de même une activité ATPase. Conclusion et pertinence: Cette caractérisation primaire de Smc5 devrait nous permettre d’émettre des hypothèses sur les fonctions biologiques du complexe entier.

No 41Developing selective chemical inhibitors for kinesin-13 family of microtubule depolymerases.Tremblay-Boudreault Thierry, Talje L, Kwok B Institut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: The formation of the mitotic spindle, a microtubule-based machine, is required for chromosome segregation when a cell divides. Inhibition of spindle assembly blocks cell division and is a viable means to treat cancer. The drug paclitaxel which targets tubulin, the building block of microtubules, is an effective anti-cancer agent. However, its success has been limited by undesirable side effects such as neuropathies and the development of drug resistance after prolonged treatment. To overcome this, alternative strategies are needed. The Kinesin-13 proteins are essential for mitotic spindle formation. We aim to develop selective kinesins-13 inhibitors as research tools to help define their respective roles in mitosis and as potential chemotherapeutic agents. Methods and results: Based on the fact that kinesin-13 proteins possess ATP-stimulated microtubule-depolymerizing activity, we propose two independent methods to achieve selective inhibition: a high-throughput small molecule inhibitor screen and a rational design of a chemical inhibitor-sensitive mutant. Conclusion and relevance: These tools that we are developing could be used to better understand the roles of kinesins-13 in spindle assembly and potentially lead to the development of improved cancer chemotherapeutics.

No 42Répression des gènes d’histones par le complexe HIR en réponse aux agents génotoxiques.Villeneuve Valérie, Gharib M, Verreault AInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Plusieurs mécanismes conservés de la levure jusqu’à l’homme permettent de prévenir les conséquences néfastes de l’accumulation d’excès d’histones telle l’instabilité génomique. L’un de ces mécanismes est la répression transcriptionnelle des gènes d’histones induite par les agents génotoxiques qui endommagent l’ADN et entravent sa réplication. Chez S. cerevisiae, cette répression requière les kinases de la réponse au dommage à l’ADN Mec1, Tel1 et Rad53, ainsi que le complexe HIR composé de quatre protéines (Hir1, Hir2, Hir3 et Hpc2). Méthodes et résultats: Nous avons démontré par des essais kinases in vitro que Hpc2 est directement phosphorylée par Rad53 et identifié les sites de phosphorylation par spectrométrie de masse. Un des sites phosphorylés par Rad53 in vitro est la sérine 332 d’Hpc2. De plus, la même sérine 332 d’Hpc2 est phosphorylée in vivo de manière Mec1/Tel1 et Rad53 dépendante en réponse au méthyl méthane sulfonate (MMS), un agent alkylant qui interfère avec la réplication de l’ADN. Nous avons également établi que Hpc2 est stable en G1 mais devient très instable durant la phase S afin de permettre la transcription des gènes d’histones. En réponse au MMS, Hpc2 est stabilisée. Nous avons émis comme hypothèse que Mec1 et/ou Rad53 phosphorylent Hpc2 afin de réprimer la transcription des gènes d’histones en réponse aux agents génotoxiques. Nous avons généré plusieurs mutants Hpc2 non phosphorylables (alanine) ou phosphomimétiques (acide aspartique) afin de déterminer leur impact sur la répression des gènes d’histones induite par le MMS. Conclusion et pertinence: Nous voulons déterminer le mécanisme par lequel la phosphorylation d’Hpc2 provoque la répression des gènes d’histones en réponse aux agents génotoxiques, puisque ce mécanisme est conservé chez l’humain mais sa base moléculaire n’est pas connue. Chez l’humain, la sénescence cellulaire est un mécanisme de défense important contre la tumorigénèse. Entre autres, la sénescence induite par le dommage à l’ADN et les oncogènes activés implique une répression stable des gènes d’histones par l’orthologue du complexe HIR.

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No 43Regulation of histone H3 lysine 56 acetylation and DNA replication fork damage.Delgoshaie Neda, Wurtele H, Verreault A

Institut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: In Saccharomyces cerevisiae, histone H3 lysine 56 acetylation (H3K56ac) is tightly controlled during the cell cycle and in response to DNA damage. This is mediated through regulation of the histone deacetylases Hst3 and Hst4. In hst3Δ hst4Δ cells, about 98% of H3 molecules are K56-acetylated throughout the cell cycle. Yeast cells lacking Hst3 and Hst4 are thermosensitive and hypersensitive to several genotoxic agents that interfere with DNA replication fork progression. However, very little is known about how the absence of Hst3 and Hst4 cripples the response to DNA replication fork damage. Methods and results: Using pulsed-field gel electrophoresis, we demonstrate that hst3Δ hst4Δ cells cannot complete chromosome duplication after transient exposure to genotoxic stress. In addition, we show that these cells exhibit persistent DNA damage and a constitutively active DNA damage checkpoint. Unexpectedly, it appears that an inability to inactivate the DNA damage checkpoint underlies part of the genotoxic agent sensitivity of hst3Δ hst4Δ cells. We also identified spontaneous suppressors of hst3Δ hst4Δ phenotypes and investigated their mechanisms of action. Interestingly, we identified a group of suppressors that do not demonstrate a decrease in H3K56ac level. Conclusion and relevance: In conclusion, our work provides further insight into the molecular mechanisms that underlie the severe genotoxic agent sensitivity conferred by constitutive H3K56 hyperacetylation. Our results also suggest that the phenotypes caused by the absence of Hst3 and Hst4 can be suppressed even in the absence of any striking decrease in H3K56ac levels.

No 44Inside the brain: unraveling the role of the polycomb gene Bmi1 in aging and neurodegeneration.El Hajjar Jida, Bernier GCentre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)

Introduction: Bmi1 mutant mice present early progeroid phenotype and oxidative stress accumulation, mainly due to upregulation of p53 pro-apoptotic and pro-oxidant activities in the central nervous system (CNS). Since sporadic neurodegenerative diseases are linked to the aging process, we hypothesize that Bmi1 depleted mice display neurodegenerative symptoms characterized by Tau accumulation, synaptic dysfunction, and neuron loss. Methods and results: Main hallmark of neurodegeneration is protein misfolding and aggregation such as the tau protein hyperphosphorylation and accumulation in the brain. Young Bmi1 mutant mice and Aged Bmi1 heterozygous mice exhibit increased hyperphosphorylation of Tau protein, promoting its clumping into tangle like structures in the brain. Moreover, these mice show a decrease in the expression of the synaptic vesicle synaptophysin implying synaptic impairement. Immunohistochemisrty against the apoptotic marker Caspase 3, the neuron specific marker NeuN, and the cell cycle re-entry marker PCNA, indicates damage of the neurons and ultimately death in Bmi1 mutant mice compared to their control littermates. Conclusion and relevance: Altogether we can conclude that Bmi1 mutation is detrimental for the neurons, resulting in protein aggregation, synaptic dysfunction, and degeneration. Tremendous work had stridden to elucidate the mechanisms underlying neurodegenerative disorders in order to find specific treatments. Therefore, we find particularly compelling to evaluate if the overexpression of Bmi1, specifically in the brain, would mitigate the neurodegenerative phenotype and could promote extended healthy lifespan; if so, then this is highly significant as it might be possible to treat late-onset human disorders with a single therapeutic entity.

No 45Identification of embryonic stem cell fate determinants.Fortier Simon, MacRae T, Bilodeau M, Laverdure JP, Sauvageau GInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: We have developed a viral based Cre/LoxP strategy that efficiently creates chromosomal deletions in mouse embryonic stem (ES) cells. Using this method, we generated a collection (named DelES: http://bioinfo.iric.ca/deles) of more than 1000 clones carrying a chromosomal deletion. An in vitro embryoid body (EB) formation screen was conducted with DelES clones to assess differentiation problems throughout our collection. Our aim is to complement these phenotypes by reinserting DNA fragments into the deleted clones, thus potentially identifying new determinants of ES cell fate. Methods and results: Complementation studies of DelES family 9 showed that only one BAC was able to rescue the in vitro EB formation phenotype caused by a 4.3Mb deletion. Additional experiments identified the ribosomal protein S14 (Rps14) coding gene as being haploinsufficient for EB formation. Altered ribosomal proteins expression has been shown to induce a “nucleolar stress” which results in increased levels of the p53 protein. Western blot analyses revealed that p53 was more abundant in family 9 clones. Interestingly, an shRNA against p53 was able to rescue the differentiation defect of clone 9-37. This result suggests that Rps14 is essential for EB formation and that its deletion leads to a p53-related block of differentiation. Our latest studies on ribosomal proteins confirmed that a p53 block of differentiation was common in at least one other family of clones. Conclusion and relevance: Future studies will focus on the molecular events that are responsible for the differentiation phenotype seen upon ribosomal protein defects. Moreover, about 30 ribosomal protein genes are deleted in different DelES families. It will therefore be interesting to compare the role of different ribosomal proteins in ES cells differentiation.

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No 46High-troughput characterization of MHC-I-associated peptides presented by B lymphoblastoid cells.Granados Diana Paola, Yahyaoui W, Côté C, Muratore-Schroeder T, Thibault P, Perreault CInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Sensing of the MHC I-peptide (MHC I-p) repertoire allows recognition of non-self from self and elimination of infected or transformed cells. High-throughput strategies used to study MHC I-p include i) the use of secreted forms of MHC I transfected into model cell lines, or ii) chemical or metabolic labeling of MHC I, which is limited to certain MHCs and to cell culture model systems. We used a quantitative proteomics approach to characterize and compare for the first time the MHC I-p repertoire associated to unlabeled human MHC I molecules of untransfected B lymphoblastoid cells (B-LCLs). Methods and results: Peptides were obtained from B-LCLs from 5 subjects by mild acid elution, fractionated by liquid chromatography and analyzed by nanoLC-MS/MS on a LTQ-Orbitrap mass spectrometer. We have identified more than 2000 unique 8-11mers associated to 10 different HLA-A,B alleles. We used bioinformatic tools to identify the genes source of peptides and to characterize and compare the proteins encoding the MHC I-p repertoire. The MHC I-p repertoire was encoded by all chromosomes but enriched for genes located in chromosomes 17 and 6. Also, it was enriched in peptides that derive form genes implicated in cell cycle, transcription and protein synthesis, as well as in immune and viral infection-related pathways, reflecting a B cell-specific signature. Conclusion and relevance: We characterized for the first time the MHC I-p repertoire associated to unlabeled human MHC I molecules of B-LCLs and showed that the MHC I-p repertoire is not random, but reflects a B cell-specific signature. This method could be use to discover new cancer or virus-associated MHC I-peptides that can be exploited in immunotherapy.

No 47RabGAP dEvi5 regulates collective cell migration. Laflamme Carl, Emery GInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Endocytosis is the process by which cells internalize molecules into internal compartments. Internalized receptors are sorted to be degraded or to be targeted back to the plasma membrane by trafficking through the recycling endosome. This later trafficking step is regulated by the small GTPase Rab11. Hence, Rab11 is an important regulator of cell signalling involved in controlling the level of cell surface receptors. In particular, we have recently involved Rab11 in the spatial restriction of signal transduction during collective cell migration. Methods and results: In order to understand how Rab11 is regulated, we aimed at identifying GTPase activating proteins (GAPs), which would act on Rab11. GAPs for Rab11 should co-localize and interact with Rab11, they should provide a GTPase activity for Rab11 and their loss-of-function should mimic the expression of constitutively active form of Rab11. Here we show that in Drosophila, the homolog of Evi5 fulfill these criteria. In particular, we show that Evi5 is recruited to membrane by the active form of Rab11 and that it is necessary for collective cell migration. Conclusion and relevance: Our work will provide important information on the molecular function of Evi5, which is involved in cancer and in multiple sclerosis.

No 48Positive autoregulation of the Candida albicans transcription factor Tac1 and its role in azole resistance. Louhichi Fatiha, Desmeules S, Raymond MInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Azole resistance in the pathogenic yeast Candida albicans is frequently due to gain-of-function (GOF) mutations in transcription factors of the zinc cluster family such as Tac1p, Upc2p and Mrr1p. Tac1p upregulates the CDR1 and CDR2 genes encoding drug efflux pumps by binding to a Drug Responsive Element containing two CGG triplets in their promoter (DRE: 5’-CGGAA/TATCGGATATTTTTTT-3’). The TAC1 gene appears to be positively autoregulated: TAC1 is overexpressed in azole-resistant (AR) strains in which Tac1p is activated by GOF mutations and chromatin immunoprecipitation (ChIP) showed that Tac1p binds in vivo to the TAC1 promoter. Our objectives are to determine whether TAC1 is autoregulated and, if so, whether this autoregulation plays a role in clinical azole resistance. Methods and results: ChIP-chip experiment with high density DNA tiling arrays showed that Tac1p binds between positions -985 and -1100 in the TAC1 promoter. Using TAC1 promoter-luciferase reporter constructs integrated in AS, AR and tac1Δ/Δ strains, we showed that this region contains all the cis-acting sequences mediating TAC1 self-induction. A mutational analysis identified two functional motifs in the TAC1 promoter, one corresponding to the 3’-half of the DRE (5’-CGGATATTTTT-3’) and one similar to the DRE (CGGN4CGG). Mutating the first motif reduced the promoter induction by 75% while mutating both motifs abolished the induction, suggesting that Tac1p binds to different CGG triplets to mediate its self-induction. We are currently investigating if these sequences are bound by Tac1p in vivo and their contribution to azole resistance. Conclusion and relevance: These studies will determine the importance of autoregulation in azole resistance, a mechanism common to many zinc cluster factors including Tac1p, Upc2p and Mrr1p. Also, the identification of the DNA sequences bound by these fungal-specific zinc cluster proteins may prove useful for the development of inhibitors that would serve as reversal agents of azole resistance in combination therapy.

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No 49Domain specific modulation of Plk/Cdc5 reveals unique role in the maintenance of genome stability.Ratsima Hery, Sauvé V, Salloum Z, Pascariu M, D’Amours DInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Polo kinases (Plks) are evolutionary conserved kinases crucial for the proper regulation of mitosis. Plks have multiple conserved roles, including the regulation of cytokinesis, sister-chromatid segregation, and checkpoint functions. They also share a conserved structure with a N-terminal kinase domain followed in C-terminus by the polo box domain, or PBD. The budding yeast Cdc5 protein is the sole member of the Plks family in this organism. Importantly, misregulation of the mammalian homolog of Cdc5, Plk1, is associated with tumorigenesis in human. Methods and results: In order to shed light on new mitotic functions of the Plks, we use the genetic power provided by the budding yeast. This organism allows us to investigate the in vivo roles of the multi-domain kinase Cdc5, one domain at a time. By means of rationally designed mutants, we aim to demonstrate the relative contribution of the kinase domain versus the PBD in a mitotic context. Specifically, we have generated PBD mutants that abrogate its binding to known substrates. To our surprise, this mutant is unable to control its ploidy, double its genome content as cells grows, and loose global genome integrity. To study the kinase domain, we have designed a novel genetic approach to generate conditional kinase mutants we name “kinants”. Cdc5 kinants are used in our study as a proof-of-concept to show that controlled inactivation of kinase activity in Cdc5 causes typical anaphase defects associated with inefficient mitotic exit. Conclusion and relevance: This study allowed us to unravel an unknown function of Plks: the PBD-dependent maintenance of ploidy state. Moreover, our study brings about an innovative genetic design of kinase mutants that allows one to temporally control the catalytic activity of any given kinase.

No 50Scl and E2a regulate HSC quiescence by controlling the entry and the exit from the cell cycle.Rojas-Sutterlin Shanti, Haman A, Lacombe J, Hoang TInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: In the adult, the majority of hematopoietic stem cells (HSCs) are quiescent whereas progenitors are more cycling. This quiescence is critical for long term HSC function and only few genes are known to control this process. Our previous work suggests that Scl (stem cell leukemia) gene dosage controls HSC quiescence in steady state. However, it is not known whether these genes regulate HSC quiescence by controlling the entry into and/or the exit from the cell cycle. Furthermore, E2A and HEB are obligate SCL heterodimers. The aim of this study is to evaluate the functional importance of Scl, E2a and/or Heb in HSC quiescence. Methods and results: I monitored the kinetics of HSC cell cycle following a proliferative stress. First, cytokine stimulation induced an increased proportion of HSC in G1 when Scl or E2a levels are decreased, indicating that these two genes control HSC entry into the cell cycle. Second, I optimized a procedure using 5-fluorouracil (5-FU), a drug that kills proliferating cells, to evaluate how loss of one allele of Scl, E2a or Heb affects HSC proliferation. 10 days post-5-FU, >60% of Sca-1+ cells were killed in Scl+/- and E2a+/- mice compared to ≈20% in Heb+/- and control mice indicating that these cells were in cycle. Accordingly, I found a two- to six-fold expansion of Scl- and E2a-deficient Sca-1+ cells respectively within 20 days after the nadir post 5-FU, while in Heb-deficient and control cells the expansion was not significant. At this time point, most of control HSCs have returned to their normal quiescent state (15% in G1SG2M). In contrast, ≈35% of Scl+/- and E2a+/- HSCs were still in active cycle. Conclusion and relevance: Altogether, my results indicate that Scl and E2a regulate HSC quiescence in stress conditions by controlling both the entry and the exit from the cell cycle.

No 51Genetic characterization of limb-girdle muscular dystrophy (LGMD) with childhood onset in the French-Canadian population.Tétreault Martine1, Srour M1, Allyson J1, Thiffault I1-2, Loisel L1, Robitaille Y2, Bouchard J-P3, Brais B1 1 CRCHUM - Centre d’excellence en Neuromique de l’Université de Montréal2 Institut neurologiques de Montréal, Université McGill3 CHU-Sainte-Justine, Département de pathologie4 CHAUQ - Hôpital de l’Enfant-Jésus, Université Laval, Département des sciences neurologiques

Introduction: We have recruited a group of four living and reviewed the records of six deceased distantly related French-Canadians of Acadian descent affected by a childhood-onset form of recessive limb-girdle muscular dystrophy (LGMD). All cases originate from the small archipelago of the Magdalen Islands (population: 13,000) isolated in the Gulf of St-Lawrence. Methods and results: Based on the likely sharing of the same founder mutation we completed a 319K SNPs genome-wide scan to identify the disease locus and then screen candidate genes in this region. All patients had normal initial motor milestones. They presented with limb girdle weakness at the average of 7 years (5-11). Progressive weakness led to loss of ambulation at a wide range of ages (10-39). Patients also developed macroglossia, large calves and mild to moderate contractures, hyperlordosis and decreased pulmonary function. Creatine kinase levels were elevated (1,800-10,000 U/L) in the first decades, but decreased with progression of disease. Homozygosity mapping uncovered a shared chromosomal region of 6.33Mb. The alpha sarcoglycan (SGCA) gene, mutated in LGMD2D, lied in this candidate interval. Sequencing of all SGCA exons uncovered a shared homozygous missense mutation (c.229C>T, p.R77C), the most common SGCA mutation internationally reported. Using demographic data, we estimated a high carrier rate of 1/22. Conclusion and relevance: The p.R77C mutation has also been observed in many populations, including in France and Spain (Basques). This corresponds to the first reported recessive founder disease for the Magdalen Islands, an archipelago settled in the XIXth century largely by Acadian immigrants.

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No 52Role of the deubiquitinase BAP1 in the maintenance of chromosomal stability.Yu Helen, Mashtalir N, Ghram M, Daou S, Drobetsky E, Affar EBCentre de recherche - Hôpital Maisonneuve-Rosemont (CRHMR)

Introduction: BAP1 (BRCA1-Associated Protein1) is a nuclear member of the ubiquitin C-terminal hydrolase (UCH) family with a large regulatory domain, not present in other UCH members. Interestingly, homozygous inactivating mutations of BAP1 have been found in eye, lung and breast cancers suggesting that BAP1 is a tumor suppressor. Indeed BAP1 overexpression reduces cell proliferation and tumor growth in xenograft models. Nonetheless, the biological function and mechanism of action of this deubiquitinase remain poorly defined. Methods and results: To shed new light on BAP1 function, we conducted immunostaining studies and found that BAP1 is mainly associated with euchromatin suggesting a role in transcription regulation. We then conducted a tandem affinity immunopurification of BAP1-associated proteins and indeed found that most of the interacting partners are transcription factors and cofactors. Gene expression studies suggest that BAP1 plays important roles in the maintenance of chromosomal stability. Consistently, loss- and gain- of function experiments revealed that BAP1 is required for the stability of chromosomes. Conclusion and relevance: In this study, we found that BAP1 is a transcriptional co-activator involved in the maintenance of chromosomal stability. Further studies are required to delineate the exact role of BAP1 in transcription and to define how deregulation of this pathway contributes to tumorogenesis. Defining the mechanisms of gene expression is a great interest, not only for understanding cancer development, but also for designing rational cancer therapies.

No 53Le domaine C-terminal de MEIS1 convertit PREP1 en collaborateur de HOXA9 dans le développement de leucémies myéloïdes aiguës.Bisaillon Richard, Wilhelm B, Sauvageau M, Sauvageau GInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Les protéines à homéodomaine MEIS1 et PREP1 partagent la capacité à interagir avec les protéines de la famille PBX de même qu’avec des séquences similaires d’ADN mais semblent jouer des rôles différents dans la tumorigenèse. Les niveaux d’expression élevés de MEIS1 accélèrent le développement de leucémies induites par les gènes Hox ou les fusions Mll, une fonction associée à son activité transcriptionnelle. À l’opposé, une réduction des niveaux de PREP1 mène au développement de lymphomes, malgré l’absence d’un domaine de transactivation identifiable. Méthodes et résultats: Une protéine chimérique fusionnant la protéine PREP1 au domaine C-terminal de MEIS1 contenant l’activité transcriptionnelle (Prep1-MC) est capable d’accélérer le développement de leucémies induites par l’expression ectopique du gène Hoxa9 lors des essais de reconstitution hématopoïétique par transplantation. Les analyses transcriptomiques des cellules transduites par Hoxa9+Meis1 et Hoxa9+Prep1-MC ont révélé des perturbations communes dans des groupes de gènes impliqués dans l’organisation de la chromatine et la régulation du cycle cellulaire. Conclusion et pertinence: Ensemble, ces resultats suggèrent que le domaine C-terminal de MEIS1 confère à PREP1 une activité ectopique de transactivation qui promouvoit la leucémogenèse en régulant l’expression de gènes impliqués dans l’accessibilité de la chromatine et la progression du cycle cellulaire.

No 54Implication de la GTPase RAN dans la progression du cancer épithélial ovarien. Caceres Katia1, Barrès V1, Tonin PN2, Provencher DM1, Mes-Masson A-M1

1 CRCHUM - Hôpital Notre-Dame / Institut du Cancer de Montréal (ICM)2 Centre de recherche du Centre universitaire de santé McGill (CRCUSM)

Introduction: Le cancer épithélial de l’ovaire (CEO) est le cancer gynécologique le plus meurtrier. Notre laboratoire a identifié RAN comme protéine surexprimée dans les CEOs de type séreux invasifs comparativement aux tumeurs à faible potentiel de malignité. Il a mis en évidence, in vitro et in vivo, qu’une diminution de l’expression de RAN induit la voie apoptotique associée à la caspase 3. Ces résultats suggèrent ainsi un rôle clé de RAN dans la tumorigénicité et dans la survie cellulaire. Méthodes et résultats: Afin d’identifier la fonction de Ran impliquée dans le contrôle de l’apoptose dans le CEO, ces deux grandes fonctions connues, la mitose et le transport nucléo-cytoplasmique, ont été étudiées. L’expression protéique de trois partenaires de RAN (XPO7, XPOT et TPX2) a été analysée sur des micro-étalages de tissues contenant 277 échantillons de CEO ainsi que sur une lignée cellulaire séreuse reflétant la maladie. La fonction de transport nucléo-cytoplasmique de RAN, soit l’export des ARN et des ARNt, a été étudiée par l’analyse des partenaires XPO7 et XPOT. La localisation nucléaire de XPO7 corrèle inversement avec le grade (p<0,001) et la surexpression nucléaire de XPOT corrèle positivement avec une meilleure survie (p=0,0162). Le rôle de RAN au niveau de la mitose a été suivi via son partenaire TPX2, une protéine essentielle à l’assemblage du fuseau mitotique. Son expression nucléaire corrèle positivement avec le grade (p=0,001), le stade (p=0,03) et avec un mauvais pronostic (p=0,003), tout comme RAN. De plus, une analyse du cycle cellulaire (H3P) montre une augmentation des cellules mitotiques suite à la perte de RAN, qui serait liée à une crise mitotique (mortaline). Conclusion et pertinence: Outre le potentiel de marqueurs pronostiques de TPX2 et XPOT, ces études suggèrent l’implication des deux fonctions de RAN dans la progression du CEO. Ces recherches, qui visent à accroître notre compréhension de la régulation de l’apoptose dans les CEOs, pourraient ouvrir la porte à de nouvelles stratégies de traitement tel que l’utilisation d’un nouvel inhibiteur pharmacologique ciblant RAN.

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No 55Hybrid retinoic acid receptor agonist / histone deacetylase inhibitor as an antiproliferative agent in breast cancer.Cotnoir-White David, Gleason J, Mader SInstitut de recherche en immunologie et en cancérologie (IRIC)

Introduction: Because of their growth-inhibiting and differentiation-promoting properties, retinoids hold therapeutic promise for treatment of a large spectrum of cancers, especially when used in combination with other agents. Histone deacetylase inhibitors (HDACi) are believed to suppress tumor growth in part by reactivation of the expression of epigenetically silenced tumor suppressor genes, but also induce growth inhibition and apoptosis. We have identified a molecule, TTNN-HA, which combines retinoid and HDACi function and is a potent antiproliferative agent in multiple breast cancer cell lines. Methods and results: BRET assays have revealed TTNN-HA to be an adequate retinoid capable of activating RARbeta and gamma at nanomolar concentration and activate retinoid target genes such as DHRS3 and RARB2. Moreover it possesses HDACi activity and causes hyperacetylation of p53 and histone H4 and can downregulate the expression of pro-survival Bcl-2 genes (Bcl-2, Bcl-xL and Bcl-w). TTNN-HA is shown to possess potent growth inhibitory properties towards breast cancer cell lines yet it is not toxic towards normal mammary epithelial cells. Conclusion and relevance: In summary, TTNN-HA shows great potential as the first in a new line of cancer therapeutics by selectively targeting basal-like breast cancer cells, a type of cancer for which no targeted therapy is widely available today.

No 56Identification de KCNN4 comme effecteur thérapeutique d’ADPKD.Kurbegovic Almira, Trudel MInstitut de recherches cliniques de Montreal (IRCM)

Introduction: La polykystose rénale autosomique dominante (ADPKD) est une des maladies génétiques les plus fréquentes. Elle se manifeste par la formation de kystes rénaux qui mène à une insuffisance rénale chronique à ∼50 ans. Les seuls traitements sont la dialyse/transplantation. Les études d’expression humaines du gène PKD1 responsable d’ADPKD suggèrent un mécanisme pathogénétique d’effet dosage qui corrèle avec les modèles murins Pkd1-/- et SBPkd1TAG transgénique. Dans un but thérapeutique, contrôler les niveaux de Pkd1 est presque impossible alors que moduler des effecteurs communs induits par la surexpression et l’absence de Pkd1 est la solution alternative. Chez l’humain et la souris, les cellules épithéliales ont des caractéristiques similaires: dérégulation de la prolifération, apoptose, fibrose et défaut de polarité. Cette anomalie cause une sécrétion élevée d’ions et d’eau menant à un grossissement des kystes et entraînant la destruction du tissu sain. Certaines observations sur les cellules épithéliales ont montré une dérégulation du AMPc et du calcium intracellulaire. Méthodes et résultats: Afin d’identifier les effecteurs importants d’ADPKD, nous nous sommes intéressés au rôle du canal ‘’Ca2+activated K+ channel’’ KCNN4 dans la progression de la kystogenèse rénale. Ce cotransporteur est sensible au calcium intracellulaire/AMPc et est important dans leur régulation et dans celle du canal CFTR. Premièrement, nous avons démontré que la surexpression de Pkd1 dans les souris SBkd1TAG résulte en une augmentation très importante du niveau de AMPc (∼10X). Deuxièmement, nous avons analysé le rôle du canal KCNN4 dans la progression de la maladie ADPKD en croisant la souris ‘’knock-out’’ de KCNN4 avec SBPkd1TAG. Nous avons évalué la taille des kystes chez les souris SBPkd1TAG; KCNN4-/- par rapport aux souris SBPkd1TAG. Nos résultats démontrent que la perte d’expression de KCNN4 non seulement réduit ∼50% la taille des kystes chez les souris homozygotes mais aussi chez les hétérozygotes. D’autre part, on observe remarquablement une réduction significative du nombre de kystes dans les hétéro/homozygotes KCNN4. Nos analyses des mécanismes cellulaires responsables de la diminution significative de la taille/nombre de kystes attribuent à KCNN4 un rôle déterminant dans la prolifération épithéliale rénale (∼2X). Conclusion et pertinence: Cette amélioration importante du phénotype kystique chez SBPkd1TAG révèle l’identification d’un effecteur thérapeutique et caractérise un mécanisme moléculaire/cellulaire. L’effet bénéfique de la modulation de KCNN4 sur la kystogenèse est très prometteur puisqu’un inhibiteur de KCNN4 en Phase III pourrait rapidement être évalué chez les patients ADPKD.

No 57Rôle de RelB dans la lignée cellulaire prostatique 22Rv1.Labouba Ingrid1, Poisson A1, Delvoye N1, Saad F1,2, Mes-Masson A-M1


Introduction: L’étude de la voie alternative NF-κB en oncologie est émergente et son implication dans le CaP est encore mal connue. Nous avons montré, chez des patients atteints de cancer de la prostate (CaP), l’activation de la voie alternative NF-κB à travers la localisation nucléaire des sous-unités RelB et p52. Notre hypothèse est donc que la voie alternative NF-κB aurait un rôle dans le CaP. La présente étude vise à explorer son rôle potentiel dans le CaP à travers l’étude de la sous-unité transactivatrice RelB. Méthodes et résultats: Les cellules 22Rv1, lignée prostatique hormonosensible, n’expriment pas RelB. En y introduisant l’ADNc de RelB par infection lentivirale, nous avons généré un modèle cellulaire de surexpression de RelB en vue de déterminer son impact sur la prolifération, la migration, la croissance en 3D et la formation de tumeurs in vivo. L’expression de RelB dans les 22Rv1 s’accompagne de sa translocation nucléaire ainsi que de l’expression nucléaire de p52. Cela suggère une activation de la voie alternative NF-κB suite à l’expression de RelB dans ces cellules. De plus, nos travaux montrent que l’expression de RelB double le potentiel prolifératif des 22Rv1 à 5 et 7 jours de culture (p<0.05). Par contre, RelB tend à inhiber leur potentiel de migration et diminue de moitié leur capacité à croitre en 3D sans ancrage (p=0.0016). Conclusion et pertinence: L’expression de RelB dans les 22Rv1 modifie leur biologie, ce qui pourrait affecter leur tumorigénicité. Une étude in vivo permettra de déterminer comment RelB influence le pouvoir tumorigène des cellules 22Rv1.

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No 58SFRP4 may play a role in ovarian steroidogenesis but is dispensable for female fertility.Lapointe Evelyne, DeMayo F, Boerboom DCentre de recherche en reproduction animale (CRRA), Faculté de médecine vétérinaire de l’Université de Montréal

Introduction: Canonical WNT signal transduction occurs via Frizzled (Fzd) receptors and results in the stabilization of CTNNB1 (β-catenin), which then enters the cell nucleus to modulate the transcriptional activity of target genes. WNT4 plays a role in the adult ovary by regulating follicle development and modulating the expression of a variety of ovarian genes, including several involved in steroid hormone biosynthesis. Secreted Frizzled Related Proteins (SFRPs) are antagonists of WNT signaling that act by directly binding WNTs and preventing their interaction with Fzd receptors. In particular, SFRP4 is induced during luteinization and its expression is maintained in the corpus luteum during gestation. These results suggest that SFRP4 could serve to antagonize WNT4-mediated steroidogenesis in the corpus luteum. Our objective was thus to characterize the ovarian role of SFRP4 during luteinization. Methods and results: To this end, we created a Sfrp4 KO mouse strain by conventional gene targeting. The deletion of SFRP4 did not result in any observable developmental or functional defects in non-reproductive tissues, and surprisingly, both male and female fertility appeared to be normal. Interestingly, qRT-PCR gene expression analyses showed an increased expression of the Wnt4-regulated genes StAR, Cyp11a1 and Ptgs2 around the time of ovulation in the ovaries of Sfrp4 KO mice compared to controls. However, preliminary data revealed that these changes in steroidogenic enzyme expression did not result in increased levels of progesterone in Sfrp4 KO mice. Conclusion and relevance: These findings indicate that SFRP4 appears to modulate WNT4 signaling in the ovary but its loss is not sufficient to compromise progesterone secretion and female fertility. Experiments are in progress to characterize the relation between WNT4 and SFRP4 and to better understand the way these molecules regulate ovarian function.

No 59Efficient muscle-specific expression after gene transfer with viral vectors using promoters derived from troponin I gene.Robert Marc-André1, Bendjelloul M1, Zeng Y1, Guérin C3, Larochelle N3, Massie B1,2, Nalbantoglu J3, Gilbert R1,3

1 Institut de recherche en biotechnologie (IRB)2 Université de Montréal - Départment de microbiologie et immunologie3 Institut neurologiques de Montréal - Université McGill

Introduction: Gene replacement therapy for muscle diseases using viral vectors requires strong and muscle specific expression of a therapeutic gene product. Methods and results: We generated regulatory cassettes by linking three or four copies of the truncated upstream enhancer (ΔUSE) from the slow troponin I gene. To evaluate the activity of ΔUSEx3 and ΔUSEx4 in the context of viral vectors, we constructed helper-dependent adenoviruses (HD), AAV and lentiviral vectors (LV) expressing the β-galactosidase (β-gal) or GFP. ΔUSEx3 and ΔUSEx4 were compare with the CMV or the potent CAG promoter. After transduction of non-muscle cells with HD, the activity of β-gal for ΔUSEx3 and ΔUSEx4 was 100 folds lower than CAG. In differentiated myotubes, the β-gal activity reached up to 20% of CAG. After intravenous delivery in mice, ΔUSEx3 and ΔUSEx4 were 100 folds weaker than CAG in the liver, lung and spleen. In contrast, after intramuscular injection in dystrophic mice (mdx), ΔUSEx3 was the best and reached ~20-40% the strength of CAG. Intramuscular injections of AAV in mdx mice resulted in similar GFP expression using either ΔUSEx4 or CMV. For LV, the GFP expression was 5 to 20 folds lower using ΔUSEx3 compared to CMV in culture of non-differentiated myoblasts. After differentiation of myoblasts into myotubes, the GFP expression became higher with ΔUSEx3. Conclusion and relevance: In summary, the strength and muscle specificity of ΔUSEx3 and ΔUSEx4 render them very attractive for gene transfer application in skeletal muscle.

No 60HoxA gene function and regulation in extra-embryonic tissues.Scotti Martina, Kmita MInstitut de recherches cliniques de Montreal (IRCM)

Introduction: The Hox family of transcription factors is well known for its key contribution in the establishment of the body architecture in all the animal kingdom. Studies of the Hox family in different species suggest that changes in its transcriptional control is tightly linked to morphological diversity. Here we report on the recruitment of Hoxa genes in the extra embryonic compartment. Methods and results: I found that targeted deletion of the entire HoxA cluster is detrimental for embryonic survival due to defects of the fetal-derived vasculature of the placenta. I found that the combined function of Hoxa13, Hoxa11 and Hoxa10 (5’ Hoxa genes) is required for the proper development of this vasculature. To further characterize this function, I generated a novel HoxA allele allowing me to follow the fate of Hoxa13 expressing cells. I found that Hoxa13 lineage is restricted to the labyrinthine vasculature and does not contribute to the formation of the vasculature within the yolk sac and the embryo proper. Lineage analysis also uncovered a dual origin for the fetal vasculature of the placenta. To gain insights into the regulatory mechanisms leading to 5’Hoxa genes expression in the extra-embryonic compartment, I analyzed mouse mutants carrying series of rearrangements inside and outside the HoxA cluster. My results indicate that 5’ Hoxa genes expression relies on an enhancer sharing mechanism, and one enhancer is located in the 50Kb 5’ to Hoxa13. I am currently dissecting the enhancer activity of this region in order to determine whether the enhancer responsible for the extra-embryonic expression of 5’Hoxa genes is also active in other embryonic structures, or is a specific and novel regulatory element(s). Conclusion and relevance: This work unravels a new role for 5’ Hoxa genes in the development of the placenta and provides novel insights into mechanisms underlying placental vasculature formation. The data obtained suggest that the recruitment of Hoxa genes in the extra-embryonic compartment predates the emergence of placental mammals and was likely associated with a change in Hox regulation in all amniotes

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No 61Le biomarqueur LG3, nouveau régulateur de remodelage vasculaire in vivo.Soulez Mathilde, Cardinal H, Dieudé M, Brassard N, Qi S, Wu S-J, Durocher Y, Madore F, Perreault C, Hébert M-JCRCHUM - Hôpital Notre-Dame

Introduction: La vasculopathie du greffon (VG) est caractérisée par le développement de néointima et l’apoptose endothéliale est déterminante dans l’initiation de ce remodelage vasculaire. Les cellules endothéliales (CE) apoptotiques relâchent la cathepsine L (CatL) qui clive le perlécan, ce qui libère un fragment C-terminal du perlécan (LG3). Nous avons cherché à évaluer si le LG3 et la CatL peuvent représenter de nouveaux marqueurs d’insulte vasculaire fonctionnellement importants dans la formation de la néointima. Méthodes et résultats: Nous avons mené une étude cas-contrôle pour comparer les niveaux de LG3 et de CatL sériques chez des patients receveurs d’allogreffe rénale en situation de Rejet Vasculaire Aigu (RVA), de Rejet Tubulo-Interstitiel Aigu (RTIA) et avec une fonction rénale normale. Les niveaux sériques de CatL et de LG3 étaient augmentés chez les patients RVA comparés avec les niveaux chez les patients RTIA ou avec une fonction rénale normale. De plus, les patients dont les niveaux de LG3 et de CatL se situaient dans le tertile le plus bas avaient une meilleure survie du greffon à long terme. Des transplantations orthotopiques d’aorte entre des souris allo-incompatibles ont été réalisées pour évaluer l’impact fonctionnel du LG3 dans le développement de la néointima. Chez les souris receveuses d’allogreffe aortique, des injections de LG3 recombinant augmentaient significativement la formation de la néointima et diminuaient le nombre de CE dans le greffon. Le LG3 induisait aussi, de façon β1-intégrine-dépendante, un phénotype anti-apoptotique dans les cellules musculaires lisses in vitro. Conclusion et pertinence: Ces résultats identifient la CatL et le LG3 comme biomarqueurs d’insulte sévère du greffon rénal et LG3 comme nouveau régulateur de la formation de néointima.

No 62Mécanisme d’activation de la kinase Src par la phosphatase DEP-1 dans les cellules endothéliales en réponse au VEGF.Spring Kathleen, Langlois S, Lapointe L, Elchebly C, Royal ICRCHUM - Hôpital Notre-Dame / Institut du Cancer de Montréal (ICM)

Introduction: DEP-1 est une protéine tyrosine phosphatase de type récepteur qui contribue au développement du système vasculaire et à l’inhibition de contact des cellules endothéliales, via la déphosphorylation du récepteur à activité tyrosine kinase VEGFR2. Nos travaux précédents ont cependant révélé que DEP-1 exerçait également un rôle positif en aval de VEGFR2 sur l’activation de la voie Src et la survie des cellules endothéliales, mais les événements moléculaires impliqués demeuraient méconnus. Méthodes et résultats: Nous avons démontré que la queue C-terminale de DEP-1 est phosphorylée sur les Y1311 et Y1320, et que ces résidus sont importants pour l’association de DEP-1 avec Src et pour la déphosphorylation de sa tyrosine inhibitrice (Y529). Conséquemment, l’expression de mutants non phosphorylables Y/F bloque l’activation de Src et la promotion de processus dépendants de Src, tels que l’adhésion cellulaire et la formation de capillaires in vitro. De plus, nous avons identifié par spectrométrie de masse et mutagenèse que DEP-1 est également phosphorylé sur la T1318. Nous montrons que la phosphorylation de la Y1320 est diminuée lorsque la T1318 est mutée, et que ceci résulte en la diminution de l’association de DEP-1 avec Src et de son activation. Conclusion et pertinence: Nos résultats démontrent l’importance de la phosphorylation sur tyrosine de DEP-1 pour l’activation de Src induite par VEGF. De plus, ils suggèrent que la T1318 régule ces événements en favorisant la phosphorylation de la Y1320 et une activation optimale de Src, permettant la promotion d’activités biologiques essentielles à l’angiogenèse.

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membres du Jury

Présentations orales

• Edward Bradley, CRCHUM• Artur Kania, IRCM• Vincent Archambault, IRIC

Présentations par affiches

Affiches 1 à 10:

• El Bachir Affar, CRHMR• Hugo Würtele, IRIC

Affiches 11 à 21:

• Estelle Schmitt, CRCHUM• Damien D’Amours, IRIC

Affiches 22 à 31:

• Marie Trudel, IRCM• Sandra Turcotte, CRCHUM

Affiches 32 à 42:

• Gilbert Bernier, CRHMR• Hugo Lavoie, IRIC

Affiches 43 à 52:

• Derek Boerboom, Faculté de médecine vétérinaire• Philippe Gannon, CRCHUM

Affiches 53 à 62:

• Jean-Claude Labbé, IRIC• Jean Vacher, IRCM

dIrectIVes concernant le déroulement des présentatIons

Présentations orales

Les étudiants font une présentation de 10 minutes suivie d’une période de questions de 5 minutes.

Présentations par affiches

Les étudiants présentent leur affiche pendant 5 minutes aux membres du jury. Ces derniers ont ensuite 2 à 3 minutes pour poser des questions. Les étudiants doivent se tenir près de leurs affiches afin de répondre aux questions des participants. Il est cependant possible de circuler pour voir le travail des autres.

Les membres de jurys doivent évaluer les affiches par ordre numérique croissant.

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rétrospectIVe de la XVIe Journée scIentIfIque des programmes de bIologIe moléculaIre

La XVIe Journée scientifique des programmes de biologie moléculaire a eu lieu le 6 mai 2010 à l’IRCM. Les participants ont pu assister à 12 présentations orales et 56 présentations par affiches. Notre conférencier invité était le Dr Paul Jolicoeur. À la fin de cette journée, douze prix ont été remis aux étudiants dont les présentations orales ou affiches ont été sélectionnées par des jurys, comme étant les meilleures de la journée. La remise des prix s’est finalement clôturée par un cocktail rassemblant tous les participants.

Les récipiendaires des prix remis lors de la XVIe Journée scientifique des programmes de biologie moléculaire sont:

• 1er prix des programmes de biologie moléculaire

Pierre Fabre, IRCMCatégorie : Présentations orales (Cellules souches et développement)Titre : « Boc mediates ipsilateral retinal ganglion cell axon segregation at the optic chiasm »

• 2e prix des programmes de biologie moléculaire (ex-aequo)

Éric Deneault, IRICCatégorie : Présentations par affichesTitre : « Traquer l’empreinte de l’auto-renouvellement de cellules souches à l’aide d’un criblage de facteurs nucléaires »

Jean-François Ouimette, IRCMCatégorie : Présentations par affichesTitre : « Divergent transcriptional activities of Tbx4 and Tbx5 determine limb identity »

• 4e prix des programmes de biologie moléculaire

Helen Yu, CRHMR

Catégorie : Présentations orales (Signalisation et biologie cellulaire)Titre : « Role of the deubiquitinase BAP1 in cell cycle progression »


Steve Poirier, IRCMCatégorie : Présentations orales (Maladies génétiques)Titre : « The cytosolic adaptor AP-1A is essential for the trafficking and function of NPC1 »


Chantal Roubinet, IRICCatégorie : Présentations orales (Signalisation et biologie cellulaire)Titre : « Pten et Skittles régulent la plasticité du cortex au cours de la division cellulaire »


Simon Fortier, IRICCatégorie : Présentations orales (Cellules souches et développement)Titre : « Identification of embryonic stem cell fate determinants »

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• Prix de l’Institut du Cancer de Montréal

Stéphanie Duhamel, IRICCatégorie : Présentations par affichesTitre : « Implication de la voie RAS/RAF/MEK/ERK1-2 dans l’instabilité chromosomique et la tétraploidïe »

• Prix de l’Institut de recherches cliniques de Montreal

Sabrina Facchino,CRHMRCatégorie : Présentations par affichesTitre : « BMI1 est requis pour la radiorésistance des cellules souches cancéreuses du glioblastome multiforme »

• Prix de l’Institut de recherche en immunologie et en cancérologie

Louis-Philippe Croteau, IRCMCatégorie : Présentations par affichesTitre : « Evidence for the requirement of neogenin in spinal motor neuron development »

• Prix du Centre de recherche de l’Hôpital Maisonneuve-Rosemont

Enrica Cannizzaro, Centre de recherche, hôpital Maisonneuve-RosemontCatégorie : Présentations par affichesTitre : « Étude du rôle de Pax6 dans la gliogenèse »

• Prix Fisher Scientific

Danielle de Verteuil, IRIC

Catégorie : Présentations par affichesTitre : « Immunoprotéasome : plus qu’un producteur de peptides? »

merci À tous nos partenaires xviie journée scientifique · 1 xviie journée scientifique des...

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