Fotos: Farfán, 2009

M Sc. SOLANGE BENÍTEZBacterióloga. UCMC

Universidad Nacional de Colombia

Asohofrucol Universidad Nacional de Colombia

Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural

I. A. Ph.D. LILLIANA HOYOSProfesora Asistente

Universidad Nacional de Colombia

Caracterizar mediante técnicas biológicas, bioquímicas y

moleculares el agente etiológico de la enfermedad mancha

de aceite incidente en cultivos de gulupa (Passiflora edulis

Sims) en zonas productoras de Colombia.

Objetivo IV

Pruebas bioquímicas Pruebas moleculares

Objetivo III

Pruebas de patogenicidad en gulupa. Análisis de cortes histopatológicos

Objetivo II

Pruebas de hipersensibilidad en pimentón.

Objetivo I

Observaciones en campo y obtención de aislamientos.

Muestras de Gulupa y Maracuyá.

El Peñol

CajamarcaIbaguéVilla Rica

GarzónGigante

La Argentina

San Martín

GranadaSan Bernardo

Venecia

Buenavista

ManizalesSta. Rosa de Cabal

La praderaLa UniónToro

Roldanillo

Características generales de las zonas recolectadas:

•15‐20 C°.

•1.400‐2.300 msnm.

•1‐3 años.

Benítez  y Hoyos , 2009. Rev. Col. Cie. Hort.

La mayoría de aislamientos a partir de muestras de hojasafectadas corresponden a un 59 %, lo cual es un indicativode que los síntomas iniciales de la enfermedad demancha de aceite son foliares (tipo III).

Día 1-3

Día 7 Día 8-9

Día 14-15 Día 20

Día 30 Día 45

Tejido sano de gulupa.

Corte trasversal de hoja infectada en estado 4.

Avance de lesión.

Corte trasversal hoja sana de gulupa, nervadura central.

Corte trasversal de hoja infectada asociada lesión a nervadura

Disrupción celular y algunas fibras de pared celular

Árbol de análisis filogenético obtenido por Neighbour Joining de secuencias ADNr 16S de aislamientos bacterianos patogénicos obtenidos de gulupa. MEGA 4.1. Bootstrap: 1000 réplicas.

I.

II.

Xanthomonasaxonopodis

Stenotrophomonas sp.

Fotos: Farfán, 2009

PCR anidada para la confirmación del agente causal específicamente  pv. passiflorae.

Munhoz, 2009.

•

•

•

641 pb

520pb

641 pb

Pruebas bioquímicas: Sistema de Identificación API 20NE® Pruebas moleculares

Familia: Xanthomodaceae Familia: Enterobacteriaceae

Amplificación y secuenciación de ADNr 16S Amplificación de región específica de ITS 16S‐23S. pv. passiflorae

Xanthomonas axonopodis

X. campestris Stenophomonas sp.

E. cloceae o E. amylovora

Pantoea aglomerans

Xanthomonas axonopodisR‐22580

Stenophomonassp.LMG 11002, 957 y 11087

E. cloceae

Pantoea agglomerans P5WAM y AE10

Aislamientosanalizados

15/22 1/22 3/22 2/22 1/22 10/18 5/18 1/18 2/18 0/10

N° total de aislamientos analizados

22 18 10

0

7

14,3

28,6

42,9

54,7457,1 57,1

71,4

85,7

98,9

1 3 5 7 9 11 13 15 20 30 45

Índices d

e Severid

ad% (P

roceso de la enfermed

ad).

Días Pos‐Inoculación (Tiempo). 

Estado 0.

Estado 1.

2 X104 UFC/4cm2

(Fase epifítica).

Periodo de Incubación: Penetración e infección

Inicio de manifestación de síntomas:

Colonización (fase exponencial).

Estado 2.

Estado 3.

Inicio de Necrosis: Desarrollo de factores de 

patogenicidad. Actividad metabólica.

Manifestación de síntomas: 

Establecimiento y resistencia a estrés 

oxidativo etc.

Necrosis: 2 x 109

UFC/4cm2. Capacidad máxima por cm2.

Observación de síntomas en otros órganos:  P, C y E, traslado de población bacteriana. Necrosis 

generalizada, defoliamiento.

Disrupción del PL

Halos aceitosos en tallos y presencia de síntomas en hojas ascendentes.

Dispersión de población bacteriana por haces vasculares.

Mora et al., 2009 reportan que la incidencia en los lotes infectados varía del 30% al 95% donde los factores ambientales que favorecieron el desarrollo y la incidencia de esta enfermedad fueron una precipitación media de 3,29 mm, temperatura media de 20,8°C, humectación de la lámina foliar  366,5 por minuto y una humedad relativa media de 72.1%.

Xanthomonas axonopodis en gulupa (P.edulis Sims)

1 X108 UFC/4cm2

(Clorosis).

Estado 4.

Fase de Establecimiento (Est I)Colonización I.Infección I Establecimiento 

estableInfección  II Enfermedad ‐

Coloniza. II

Fase Patogénica (Est II)Las condiciones favorables de la enfermedad de “Mancha de aceite” es:•HR: 70-90%•T: 20-30°C•Alta humedad de la lámina foliar para su diseminación.

Patovariedad en X. axonopodis:

•No hubo coincidencia en los productos deamplificación con primers específicos•No se puede concluir con certeza si es o no X.axonopodis pv. passiflorae.

Fotos: Farfán, 2009

Los agentes bacterianos causales de la enfermedad de “Mancha de aceite” en gulupa (P.edulis) son X. axonopodis y Stenotrophomonas sp.

Síntomas:

•Lesiones iniciales manchas acuosas de bordes irregulares, acompañadas de necrosis y normalmente de color amarillento en el ápice o lámina lateral de las hojas. • Prevalencia de lesión tipo III•Cuando el progreso de la enfermedad es máximo ocurre desprendimiento foliar (pérdida de área fotosintética)• Halos aceitosos en otros órganos como frutos, tallos y flores.•Enfermedad sistémica.

Fotos: Farfán, 2009

Histología:

Las masas bacterianas se alojan principalmente en los espacios intercelulares del parénquima lagunar y cortical.En estados avanzados de la enfermedad se observan masas bacterianas en los haces vasculares.

Enfermedad de mancha de aceite :

Fase I: Infección y establecimiento de inóculo. Periodo de incubación 5 días hasta el inicio de manifestación de síntomas.Población bacteriana aumentó 100.000 veces hasta el 7 día pos-inoculación.

Fase II: Enfermedad.Movimiento de inoculo a otras localizaciones de la planta dispersión de síntomas.

Fotos: Farfán, 2009