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/. Embryol. exp. Morph. Vol. 29, 1, pp. 221-237, 1973 221 Printed in Great Britain Les premiers stades de la formation de Febauche de nageoire pelvienne de Truite (Salmo fario et Salmo gairdneri) I. Etude anatomique By J. GERAUDIE 1 ET Y. FRANCOIS 1 Laboratoire d'Anatomie comparee, Universite Paris VII SUMMARY The first stages of genesis of the pelvic fin Anlage in the Trout (Salmo fario and S. gairdneri). /. Anatomical study. The Anlage of the pelvic fins appears in Salmo 2 weeks after the fecundation day, at the level of the somites 23-26. The mesoderm has a double origin and seems to differ in this regard from the hind limb of most of the amniotes. The 'initial mesenchyme 1 comes from the local proliferation of the somatopleura. It will give essentially the skeletal components of dermal origin (actinotrichia and lepidotrichia). The 'secondary mesenchyme' is obtained by the dispersion of four ventral somitic processes that have reached and entered the initial mesenchyme blastema. The secondary mesenchyme will probably give the muscles and also the endoskeleton of the fin. The origin of the girdle is not clear. When the setting of the initial mesenchyme begins the epithelium that covers the embryo is already differentiated in an epiderm with numerous mucous cells resting on a visible basement membrane. At the apex of the pelvic bud, a localized and transitory thickening of the epiderm is produced by the increase in the height of the basal stratum. We call this structure by the name of 'pseudo apical cap' to stress the fact that it must be distinguished from the 'apical cap' described for the limb bud of amniotes. So, the morphogenesis of the pelvic fins of Salmo shows some important particularities in the epiderm as well as in the mesoderm. INTRODUCTION Beaucoup d'auteurs se sont interesses, des le debut du siecle, au developpe- ment des membres des Tetrapodes, et surtout aux relations qui s'etablissent entre rectoderme qui differencie localement une 'cape apicale' ( = crete apicale) et le mesoderme sous-jacent. On trouvera dans les articles de Zwilling (1961), Milaire (1961, 1962), Amprino (1965), et dans la mise au point recente de Faber (1971), quelques aspects des problemes poses par la croissance et la dirTerencia- tion du bourgeon de membre des Tetrapodes. Cette question des relations entre 1 Adresse des auteurs: Laboratoire d'Anatomie comparee, Universite Paris VII, 7, Quai Saint-Bernard, 75 Paris 5eme, France.

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Printed in Great Britain

Les premiers stades de laformation de Febauche de nageoire pelvienne de

Truite (Salmo fario et Salmo gairdneri)

I. Etude anatomique

By J. GERAUDIE1 ET Y. FRANCOIS1

Laboratoire d'Anatomie comparee, Universite Paris VII

SUMMARY

The first stages of genesis of the pelvic fin Anlage in the Trout (Salmo fario andS. gairdneri). /. Anatomical study.

The Anlage of the pelvic fins appears in Salmo 2 weeks after the fecundation day, at thelevel of the somites 23-26. The mesoderm has a double origin and seems to differ in this regardfrom the hind limb of most of the amniotes.

The 'initial mesenchyme1 comes from the local proliferation of the somatopleura. It willgive essentially the skeletal components of dermal origin (actinotrichia and lepidotrichia). The'secondary mesenchyme' is obtained by the dispersion of four ventral somitic processes thathave reached and entered the initial mesenchyme blastema. The secondary mesenchyme willprobably give the muscles and also the endoskeleton of the fin. The origin of the girdle is notclear. When the setting of the initial mesenchyme begins the epithelium that covers theembryo is already differentiated in an epiderm with numerous mucous cells resting on avisible basement membrane. At the apex of the pelvic bud, a localized and transitory thickeningof the epiderm is produced by the increase in the height of the basal stratum. We call thisstructure by the name of 'pseudo apical cap' to stress the fact that it must be distinguishedfrom the 'apical cap' described for the limb bud of amniotes.

So, the morphogenesis of the pelvic fins of Salmo shows some important particularities in theepiderm as well as in the mesoderm.

INTRODUCTION

Beaucoup d'auteurs se sont interesses, des le debut du siecle, au developpe-ment des membres des Tetrapodes, et surtout aux relations qui s'etablissententre rectoderme qui differencie localement une 'cape apicale' ( = crete apicale)et le mesoderme sous-jacent. On trouvera dans les articles de Zwilling (1961),Milaire (1961, 1962), Amprino (1965), et dans la mise au point recente de Faber(1971), quelques aspects des problemes poses par la croissance et la dirTerencia-tion du bourgeon de membre des Tetrapodes. Cette question des relations entre

1 Adresse des auteurs: Laboratoire d'Anatomie comparee, Universite Paris VII, 7, QuaiSaint-Bernard, 75 Paris 5eme, France.

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l'epiderme et le mesoderme lors de la genese des nageoires paries des Poissonsa ete abordee des la fin du siecle dernier. Oellacher (1879) s'est interesse lepremier a la formation des nageoires de la Truite. Pour lui, le mesoderme est leprincipal responsable de la morphogenese. Prince (1886) de son cote attribue al'ectoderme un role primordial lorsque s'edifient les nageoires pectorales d'Esox.Boyer (1892) travaillant sur Fundulus, croit au contraire a une preponderancedu mesoderme et envisage le premier une participation des somites a la realisa-tion de la nageoire pectorale. Corning (1894) confirms, sur Salmo et Esox,Interpretation de Boyer. Harrison enfin donne en 1894 et 1895, une descriptionminutieuse et precise des etapes de la morphogenese de chaque nageoire paire etimpaire du Saumon, Salmo salar. Comme Ducret (1894) chez la Truite de lac,Harrison observe un epaississement ectodermique, mais il n'aborde pas laquestion des relations ectoderme-mesoderme, question deja clairement poseepar Boyer.

A la lurniere des connaissances acquises dans les autres classes de Vertebres,nous nous somm.es attaches a etudier les influences reciproques qui pourraienteventuellement s'etablir entre l'ectoderme et le mesoderme lors de la genese dela nageoire pelvienne de la Truite. Nous avons voulu d'abord preciser et com-pleter les descriptions anterieures du developpement de la nageoire pelvienne(Harrison, 1895; Francois & Schintone, 1963; Bouvet, 1968). Ce travail preal-able, objet de ce memoire, nous a paru necessaire avant d'entreprendre l'etudehistochimique et histoenzymologique de ces ebauches ou de proceder a des inter-ventions sur le bourgeon, par des methodes microchirurgicales.

MATERIEL ET TECHNIQUES

Materiel

Le developpement des nageoires pelviennes a ete etudie sur des embryons etdes alevins de Truite d'elevage: Salmo fario L. provenant de la pisciculture desServices techniques de la Ville de Paris a Grattereau (Seine et Marne) et Salmogairdneri Rich. ( = Salmo irideus Gibb.) de la pisciculture d'Etrun (Pas deCalais). Le choix de ce materiel est Justine par la facilite avec laquelle sontobtenus, en grand nombre, des embryons dont la taille permet des interventionschirurgicales. La nageoire pelvienne qui apparait tardivement, est d'un accesbeaucoup plus aise que la pectorale, ebauchee tres tot a la surface du sac vitellintres fragile.

Les pontes, apportees au laboratoire dans les heures qui suivent la fecon-dation, sont mises a incuber en eau courante, a une temperature variant entre11° et 13 °C. Dans ces conditions, les embryons de Salmo fario eclosent 30 joursapres la date de la fecondation, et ceux de Salmo gairdneri, 25 jours.

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Techniques

Les prelevements ont debute 15 jours apres la mise en incubation. Us se sontpoursuivis quotidiennement jusque vers la fin de la resorption de la vesiculevitelline.

Pour Tetude histologique, le principal fixateur utilise a ete le Bouin aqueux.Les animaux inclus dans la paraffine ont ete coupes a 5 /on, dans le plan trans-versal et dans le plan sagittal. Les coupes seriees ont ete colorees essentielle-ment par rhemalun-picro-indigo-carmin, eventuellement associe a l'A.P.S.,et par TAzan de Romeis.

RESULTATS

Les stades de developpement de la nageoire

Dans 1'evolution des nageoires pelviennes, nous avons defini un certainnombre de stades morphologiques fondes sur les etapes de la mise en place desmateriaux mesodermiques et sur les aspects cytologiques de l'epiderme. Nousavons etabli secondairement la correspondance avec les stades de la table dedeveloppement de Vernier (1969) relative a Salmo gairdneri.

Stade I (stade 26a de Vernier)

Avant que Febauche pelvienne apparaisse morphologiquement, l'etude surcoupes de la region situee entre la vesicule vitelline et l'anus (Fig. 1 a), chez unembryon de 9 a 9,5 mm (15 jours apres la date de la fecondation), revele laposition du territoire de la nageoire pelvienne au niveau des 23eme et 26emesomites environ. L'epiderme y est plus epais (15 /on) que celui des regionsadjacentes (8 /*m) (Fig. 2A, B). La lame laterale epaisse, accolee a l'intestinet a la veine sous intestinale, n'est clivee que dans sa partie dorsale. Sous le bordventral des myotomes en differenciation mais encore coiffes d'une importantecalotte de cellules indifferenciees, des cellules issues de la parietopleure formentun blasteme plus dense dans cette region que dans les regions anterieure etposterieure.

Stade II {stade 27 de Vernier)

L'observation, a la loupe binoculaire, de la region pelvienne permet de situerle territoire du futur bourgeon grace a une certaine opacite sous la musculaturetroncale en arriere du sac vitellin (Fig. 1 b). L'etude sur coupe de cette regionmontre que le feuillet parietopleural, issu du clivage de la lame laterale, emet devolumineuses cellules a gros noyaux (10 jum de grand diametre). Ces cellulesforment un blasteme dans l'espace libre compris entre le bord ventral dessomites et l'epiderme.1 Nous avons designe ce mesenchyme dense sous le nom de

1 Comme le suggere Bouvet (1968), nous utiliserons le terme d'epiderme et non d'ecto-derme, puisqu'il y a deja d'importantes differentiations cellulaires, en particulier des cellulesmuqueuses abondantes.

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Fig. 1. Salmo fario. Vues laterales droites de la region abdominale ventrale d'em-bryons. Croissance de l'ebauche pelvienne. (a) Stade I (territoire presomptif).(b) Stade II - apparition morphologique du bourgeon pelvien. (c) Stade III.(d) Stade IV. (e) Stade V.

m.s., Musculature somitique; int., intestin; r.e.m., repli epidermique median; v.v.,vesicule vitelline.

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Vebauche de nageoire pelvienne de Truite 225'mesenchyme initial' (Fig. 2C). Aux depens de la calotte indifferenciee du poleventral de chacun des quatre myotomes du territoire de la pelvienne, s'organisea ce moment un court prolongement epithelial qui s'enfonce dans le blasteme demesenchyme initial et se developpera au stade suivant. L'epiderme se distinguenettement de celui des regions voisines. Son epaisseur totale est de 18 jim au lieude 8 /im. La couche germinative est faite de cellules cubiques a limites biennettes.

Stade III (stade 28-29 de Vernier)

L'apparition du bourgeon pelvien se traduit exterieurement sous forme d'unpetit bourrelet epidermique au niveau de la ligne ventrale des myotomes (Fig.1 c). Le mesenchyme initial forme alors un massif dense compose de cellules degrande taille a gros noyau et nucleole lobe, fortement colorable, qui se tassentcontre la membrane basale (Fig. 2D). Nous utilisons ici le terme sans doutedesuet de 'membrane basale' pour designer la couche frontiere entre l'epidermeet le mesoderme sous-jacent. Ce terme ne prejuge pas de la complexite de cettestructure dont les variations, dans le cas precis du bourgeon de la pelvienne deSabno, sont en cours d'etude.

Les massifs epitheliaux, emis au stade precedent par les somites 23 a 26, vontse disperser en formant un 'mesenchyme secondaire' cytologiquement distinctdu mesenchyme initial. Les cellules sont de plus petite taille et leur noyau rondpresente un unique nucleole central. L'epiderme offre maintenant un aspectcaracteristique. La modification essentielle porte sur la couche germinativeconstitute de cellules hautes (16 fim) a noyaux ovoides, de 12 jam dans leurplus grand diametre et orientes perpendiculairement a la base (Fig. 5).

Stade IV (stade 30 de Vernier)

On assiste, a cette etape precoce du developpement, a une croissance rapidedu bourgeon qui se presente alors sous forme d'un lobe epais et compact (Fig.Id). Sur coupe histologique, tout le volume de la nageoire est occupe par lemesenchyme initial qui forme un massif dense, non vascularise (Fig. 2E). Lescellules mesenchymateuses, de grande taille, occupent une position sous-epidermique et se pressent contre la membrane basale. Cette derniere s'aminciten direction de l'apex ou elle semble se fondre. A la racine de la nageoire, onretrouve des ilots de cellules dont les caracteres cytologiques sont identiques aceux de la calotte indifferenciee qui persiste encore aupole ventral des myotomes:noyau rond et clair, a nucleole central. Ce mesenchyme secondaire d'originesomitique se retrouve essentiellement du cote proximal de la nageoire et dansTaxe du bourgeon. L'epiderme des faces dorsale et ventrale du bourgeon estplus epais (25 /on) que celui du tronc (12 /an) bien qu'a ces deux niveaux,Tepithelium soit constitue pareillement de deux ou trois couches de cellules.L'apex du bourgeon est couvert par l'epiderme a couche basale palissadique misen place au stade precedent. Un repli epidermique apical se constitue, haut de

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50 /tm, au niveau duquel la membrane basale s'estompe et semble disparaitre(Fig. 2F).

Stade V (stade 31 de Vernier)

Ce stade est attient au moment de l'eclosion chez Salmo gairdneri. Lesebauches pelviennes se presentent alors comme deux lobes, legerement etiresvers l'arriere (Fig. 1 e), qui pendent de part et d'autre du repli median ventral sansen atteindre la hauteur. Les modifications essentielles resident dans l'organisa-tion du blasteme mesodermique ou les figures de mitoses sont nombreuses(Fig. 3 A), et dans la perte des caracteres particuliers de l'epiderme apical (Fig.3 B). Le mesenchyme initial occupe toujours une position sous-epidermique. Lamembrane basale forme un lisere tres fin et continu, d'epaisseur reguliereinferieure a 1 fim. 11 est tres difficile de suivre le devenir du mesenchyme secon-daire. La racine de la nageoire ainsi que l'axe sont occupes par un tissu qui offreles memes caracteristiques que les cellules du bord ventral du myotome. De lasomatopleure se detachent encore de petites cellules mesenchymateuses. II esthasardeux de conclure a la destinee du mesenchyme secondaire sur de simplescriteres topographiques. Des donnes histochimiques la preciseront. L'epidermea partout le meme aspect dans les differentes regions de l'ebauche pelvienne et endehors de cette ebauche. On n'observe aucune trace de necrose de cellulesepitheliales.

Stade VI (stade 32 de Vernier)

Le bourgeon pelvien forme alors une languette epaisse, ovoide, orientee versFarriere de l'alevin qui mesure maintenant 15-16 mm (Fig. 4a). Au sein de labase du bourgeon, dans le tiers proximal, on observe une serie axiale de cellules

F I G U R E 2

Salmo gairdneri. Coupes transversales d'embryons de Truite au niveau du bourgeonpelvien (sauf Fig. 2 B ou le niveau est plus anterieur).

(A) Stade I. Debut de Pepaississement de l'epiderme au niveau du territoire de lanageoire pelvienne. M., Myotome; M.i., mesenchyme initial; Int., intestin.(B) Meme embryon. Coupe a un niveau tres anterieur au niveau pelvien. L'epidermen'est pas epaissi. M., Myotome; Int., intestin.(C) Stade IT. Formation d'une expansion somitique. E.s., Expansion somitique;M., myotome; M.i., mesenchyme initial; CoeL, coelome.(D) Stade III. Accroissement de l'epaisseur de la couche germinative. Cette coupeest voisine de la coupe presentee sur la figure 5. E.e., Epiderme epaissi; E.s.,expansion somitique; M., myotome; M.i., mesenchyme initial.(E) Stade IV. Blasteme dense ou les deux mesenchymes sont reconnaissables.L'apex est occupe par un repli de l'epiderme. La membrane basale est tres amincie.C.i., Calotte indifferenciee; E.a.e., epiderme apical epaissi (= pseudo cape apicale);M.s., mesenchyme somitique.(F) Stade IV. Detail de l'epiderme apical epaissi (= pseudo cape apicale). Cm.,Cellule muqueuse; E.a.e., epiderme apical epaissi; M.b., membrane basale; M.i.,mesenchyme initial.

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aplaties, ebauche procartilagineuse de la ceinture pelvienne (Fig. 3C). La sub-stance fondamentale amorphe est APS-positive et non metachromatique.Entourant cette zone, un manchon de petites cellules a noyau rond representele perichondre. Simultanement, sur les faces externe et interne de la ceinture,commencent a se diflferencier deux massifs musculaires a l'origine des musclesabducteur et adducteur profonds (Fig. 3D). Les cellules musculaires en differen-tiation se distinguent du mesenchyme ambiant par leur noyau rond a chromatineclaire et nucleole central. Leur cytoplasme est basophile. Le reseau vasculaireapparait a ce moment sous forme d'une capillaire, proche de la somatopleure,qui penetrera tardivement dans le blasteme mesodermique.

Stade VII (stade 33 de Vernier)

Une semaine apres l'eclosion, chez l'alevin de 18-19 mm, les actinotrichesapparaissent dans la moitie distale de la nageoire, paralleles a la membranebasate et a son contact, entre elle et le mesenchyme initial. La chondriiicationde la partie centrale de la ceinture debute et la musculature profonde se developpe.Les muscles abducteur et adducteur superficiels s'ebauchent en position sousepidermique aux depens de cellules de mesenchyme probablement somitique.

Stade VIII (stade 34 de Vernier)

Quinze jours apres l'eclosion, la nageoire forme une lame aplatie, epaisse presde sa zone d'insertion sur le corps ou se localisent la ceinture et les muscles(Fig. 4 c). Dans sa partie distale, on observe la presence de trainees opaques,ebauches des lepidotriches, lames osseuses d'abord acellulaires, qui constituerontTexosquelette de la nageoire. Sur coupe, on remarque que les quatre faisceauxmusculaires sont bien individualises de part et d'autre de la ceinture pelvienneencore cartilagineuse. II s'agit, du cote interne, des deux muscles abducteurssuperficiel et profond dont la contraction entrainera un deploiement des lepido-triches, et, du cote externe, des muscles adducteurs antagonistes.

FIGURE 3

Salmo gairdneri. Coupes transversales d'alevins au niveau dubourgeon de nageoire pelvienne.

(A) Stade V. Noter les nombreuses mitoses dans le mesenchyme initial. La racinedu bourgeon est occupee par un mesenchyme dont les caracteristiques cytologiquesrappellent celles du bord ventral des myotomes. M., Myotome; M.i., mesenchymeinitial; M.S., mesenchyme somitique.(B) Detail de l'apex de bourgeon. L'epaississement apical epidermique biencaracterise au stade precedent s'est estompe. L'apex est occupe par le double affronte-ment des deux feuillets epidermiques separes par leur membrane basale.(C) Stade VI. II s'ebauche dans le tiers proximal de la nageoire, la ceinture pel-vienne et de part et d'autre, les muscles abducteur et adducteur profonds. M.,Myotome; M.i., mesenchyme initial.(D) Detail de la racine de la nageoire, montrant l'ebauche procartilagineuse de laceinture. C.p., Ceinture pelvienne; M.abd., muscle abducteur; M.add., muscleadducteur; P., perichondre; Sm., somatopleure.

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Fig. 4. Salmofario. Vues laterales droites de la region abdominale ventrale d'alevins.Croissance et differentiation au sein du bourgeon pelvien. (a) Stade VI. (b) StadeVI [. (c) Stade VIII. (d) Stade IX. /, Lepidotriches.

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Fig. 5. Sa/mo gairdneri. Coupe transversale dans le bourgeon pelvien au Stade III.Cm., Cellulemuqueuse; Coel., coelome; E.e., epidermeepaissi; E.s.,expansion somi-tique; Int., intestin; M., myotome; M.i., mesenchyme initial; Sm., somatopleure;V.s.i., veine sous intestinale.

Stade IX {stade 35 de Vernier)

Trois semaines apres l'eclosion, le jeune alevin encore vesicule, long de 21 a22 mm, presente deux nageoires pelviennes bien visibles, dont l'edirication estachevee. Ces deux nageoires s'etalent vers l'arriere (Fig. 4d). Chacune estsoutenue par six ou sept lepidotriches qui s'articulent sur trois radiaux carti-lagineux apparus tardivement a la base du repli epidermique et, semble-t-il,au sein de la partie distale du mesenchyme secondaire. Cet endosquelette occupeTextremite caudale de la plaque pelvienne, large a ce niveau et effilee versTavant. Les actinotriches ont ete refoules en bordure du repli cutane ou on lestrouvera desormais groupes en faisceaux entourant l'extremite des lepidotriches.

DISCUSSION

L'etude du developpement normal de la nageoire pelvienne a souleve quel-ques problemes qui meritent d'etre discutes et compares avec ceux poses par lamorphogenese des membres des Tetrapodes.

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232 J. GERAUDIE ET Y. FRANCOIS

Comportement de Vepiderme. Notion de pseudo-cape apicale

L'organisation et revolution de l'epiblaste qui recouvre le jeune bourgeon demembre des Amniotes ont fait l'objet de nombreux travaux, particulierementchez les Oiseaux. La Crete epitheliale de trois ou quatre couches de cellules,formee assez tardivement par le glissement proximo-distal d'une bande ventraled'epiblaste post-axial, est bien distincte de Fectoderme banal des faces lateralesdu bourgeon qui ne comporte que deux assises cellulaires. Cet epaississementepithelial qui recouvre l'apex du bourgeon de membre a ete decrit chez lePoulet (Saunders, 1948 a; Amprino, 1964) et retrouve avec les memes caractereschez le Rat et la Souris (Milaire, 1963, 1965). On le designe sous le nom de'cape (ou crete) apicale' (Kolliker, 1879; Peter, 1903).

Recouvrant l'ebauche des nageoires pelviennes de la Truite, on retrouve unepaississement epidermique, mais il se revele tres different de la cape apicale desAmniotes aussi bien par ses particularites histologiques et cytologiques que parson evolution. L'epaississement de F epithelium apparait tres tot, des le Stade I,alors que commence a peine la mise en place du mesenchyme primaire. L'aug-mentation de l'epaisseur de 1'epithelium est realisee par l'accroissement de lacouche germinative basale. Vers le Stade III, tout le revetement epidermique del'ebauche est plus epais que l'epiderme banal des flancs, et cette epaisseur est duelargement a la hauteur des cellules de la couche germinative. Puis au Stade IV,une plicature de cet epiderme apparait dans la region apicale, de sorte que deuxfeuillets epitheliaux s'y trouvent accoles, separes par la seule membrane basalecommune. Ainsi, les cellules epidermiques apicales impliquees dans ce repliperdent tout contact avec le mesoderme. Nous designerons cette formation sousle nom de 'pseudo-cape apicale' pour bien marquer qu'elle est profondementdifferente de la cape apicale du bourgeon de membre des Amniotes. Cette' pseudo-cape apicale' de la pelvienne de la Truite rappelle par sa structure le 'repliepidermique marginal' de l'apex de la pectorale de Scyliorhinus caniculus, decritpar Milaire (1961) et par Vasse (1971).

Des phenomenes de necrose au niveau du revetement epithelial ont ete misen evidence chez le Poulet par Jurand (1965), par Milaire (19676). C'est enfaisantintervenir de telles necroses dans les cellules epidermiques que Raynaud (1963)explique l'arretdudeveloppementdu bourgeon dep&ttQ d'Orvet (Anguisfragilis).La cape apicale ne pourrait plus, dans ces conditions, remplir son role inducteursur le mesoderme sous-jacent. Aucune indication de phenomene necrotiquede cet ordre n'a jamais ete observe dans l'ebauche de nageoire pelvienne deTruite, Salmo fario et Salmo gairdneri.

Une correlation a ete, d'autre part, envisagee entre l'apparition du sinusveineux marginal et le developpement de la cape apicale du bourgeon demembre chez le Poulet (Searls & Zwilling, 1964), mais aussi chez le Xenope(Tschumi, 1957), et l'Homme (O'Rahilly, Gardner & Gray, 1956). Chez laTruite, il n'y a pas de reseau vasculaire dans le mesoderme sous la

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Vebauche de nageoire pelvienne de Truite 233pseudo-cape apicale. La vascularisation debute tardivement a la racine de lanageoire.

La cape apicale persiste tout au long du developpement du bourgeon demembre des Amniotes et des degenerescences ectodermiques modelent la prisede forme de l'autopode. Chez la Truite, la pseudo-cape apicale achevee des leStade 111, coiffe l'apex du jeune blasteme mesodermique jusqu'au Stade IV. Austade suivant, elle s'estompe. Son existence est done tres fugace a l'inverse decelle de la cape apicale.

Par ailleurs, selon Milaire (1967#), chez le Poulet, 'comme chez les Mammi-feres, la plupart des cellules superficielles presentent un prolongement cyto-plasmique effile et riche en A.R.N. qui s'insinue profondement au contact de lamembrane basale'. Cette organisation epitheliale, deja observee par Jurand(1965) au cours d'une etude en microscopie electronique, correspond a ce queThistologie classique designe sous le terme d' 'epithelium pseudostratifie' (cf.Rubin & Saunders, 1972). Rien de tel n'est observe dans l'epiderme de bourgeonpelvien de la Truite, qui comporte deux ou trois couches de cellules dont uneassise basale de cellules cubiques ou palissadiques tout a fait jointives et a baselarge.

Dans Tebauche de la nageoire pelvienne de la Truite, la membrane basale auniveau de la pseudo-cape apicale est tres amincie et faiblement colorable; ilsemble que le materiel collagene ait disparu. L'etude ultrastructurale de cettemodification est en cours. Jurand (1965), sur le Poulet, signale des discon-tinuites de la membrane basale sous la cape apicale. Balinsky (1956) en avaitdeja observe chez Ambystoma, et les impliquait dans d'eventuels processusd'induction.

Duahte d'origine du mesoderme

Chez la Truite, on peut envisager avec certitude deux sources de mesenchymea Torigine du bourgeon de nageoire pelvienne: la somatopleure et le bordventral des somites.

(a) La somatopleure

Comme chez tous les Vertebres examines jusqu'ici, le feuillet somatopleuralfournit precocement chez la Truite le 'mesenchyme initial' caracterise par descellules de grande taille dont le noyau mesure parfois plus de 10 /im dans sonplus grand diametre. 11 occupe des le Stade II l'espace libre compris entrel'epiderme et le bord ventral des somites (Fig. 2C). Ce mesenchyme initial setasse des le Stade III contre la membrane basale. Les divisions cellulaires y sontd'abord peu abondantes. Puis aux stades suivants, elles deviennent tres nom-breuses. La position de ce mesenchyme initial reste sous epidermique. C'estau sein de cette nappe mesenchymateuse que se developpera, des le Stade VI,pres de la membrane basale, l'exosquelette de la nageoire, d'abord les actino-triches, puis les lepidotriches.

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Apres la mise en place du mesenchyme initial, s'echappent encore de la soma-topleure de nombreuses cellules mesenchymateuses de petite taille (5 a 6/*mde plus grand diametre nucleaire) qui occupent la racine de la nageoire. Ladestinee de ces formations mesenchymateuses tardives qu'il faut bien rattacherau mesenchyme initial n'a pas ete eclaircie. On ne peut exclure leur partici-pation a la genese de l'endosquelette de la nageoire.

(b) Contribution des somites

Les somites constituent la seconde source de mesenchyme dans la morpho-genese de la nageoire pelvienne de la Truite, par l'intermediaire des 'bourgeonsmusculaires' (Harrison, 1895) ou' expansions somitiques' (Francois & Schintone,1963). Par leur bord ventral les quatre somites 23, 24, 25, 26 envoient versl'avant, dans le mesenchyme primaire, des bourgeons epitheliaux de 50 jiim dehauteur, dont les caracteristiques cytologiques sont les memes que celles de lacalotte indifferenciee: noyau rond a contenu clair et nucleole central, cyto-plasme peu abondant. Ces prolongements mis en place des le Stade II sontparticulierement developpes au Stade III (Fig. 5); ils s'enfoncent dans lemesenchyme primaire en conservant leur integrite. Au stade suivant, on retrouveles expansions somitiques maintenant isolees du bord ventral de leur somited'origine, a la base du bourgeon. Elles se presentent alors comme des massifsisoles, oblongs, noyes dans le mesenchyme initial dont elles sont difficiles adistinguer. Au bord ventral des somites, persiste une mince calotte de cellulesencore indifferenciees qui ne participent pas a Fedification du blasteme etevoluent sur place en cellules musculaires des myotomes.

La destinee de ce mesenchyme somitique, dit mesenchyme secondaire, estdifficile a suivre au sein du blasteme. II assure l'edification de la musculatureassociee a la ceinture pelvienne et sans doute aussi de l'endosquelette pterygien.L'origine du cartilage de la ceinture est moins claire et Ton ne peut exclure laparticipation d'une poussee tardive du mesenchyme issu de la somatopleure.Des donnees histochimiques apporteront quelques precisions.

Ainsi, chez Salmo fario et Salmo gairdneri, les somites apportent-ils unecontribution cellulaire a l'edification du bourgeon de nageoire pelvienne. Cetteparticipation effective des somites aussi precoce ne s'observe ni chez le Poulet(Saunders, 1948b) ni chez les Mammiferes (cf. Milaire) prospectes jusqu'ici.Cependant, des expansions somitiques atteignant le bourgeon de membreposterieur ont ete decrites chez quelques Amphibiens Anoures (Tschernoff,1907; Griffiths, 1959); des formations de meme nature ont ete signalees dans lemembre anterieur de quelques Reptiles par Milaire (1957), Vasse & Pieau (1970)et Raynaud (1971).

II est d'ailleurs surprenant qu'un phenomene morphogenetique aussi impor-tant se manifeste dans certaines especes, Rana temporaria (Tschernoff, 1907) etRana ridibunda (Griffiths, 1959), et non dans d'autres, du meme genre, telle Ranapipiens (Taylor, 1943). La meme remarque peut etre faite a propos du developpe-

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Vebauche de nageoire pelvienne de Truite 235ment du raembre des Reptiles. Sans doute, de nouvelles recherches sont-ellessouhaitables.

Mais la ou les somites n'envoient pas de materiel cellulaire (Poulet, Canard)dans le bourgeon de membre en formation, on a cependant montre qu'ils inter-viennent par l'intermediaire d'une substance diffusible, arretee par une feuillede mica, mais capable de traverser un filtre Millipore. Cette substance, le'facteur somitique' de Murillo-Ferrol (1965), serait l'inducteur de la dirferen-ciation des constituants de la patte au niveau de 1' ' aire somatopleurale forma-trice du membre'. Kieny (1969, 1970, 1971) et Pinot (1969, 1970) ont confirmssur le Poulet les observations de Murillo-Ferrol.

L'apport cellulaire des somites dans l'edification du bourgeon pelvien de laTruite n'exclut pas evidemment une action inductrice du meme ordre sur ledeclenchement de la croissance et de la differentiation du mesoderme.

RESUME

L'ebauche des nageoires pelviennes apparait chez Salmo, une quinzaine de jours apresla fecondation, au niveau des somites 23 a 26. Le materiel mesodermique a une origine doubleet differe en cela du mesoderme du membre posterieur des Amniotes. Le mesenchyme initial,provenant de la proliferation locale de la somatopleure, fournira essentiellenient les elementssquelettiques dermiques (actinotriches puis lepidotriches). Le mesenchyme secondaire pro-vient de la dispersion de quatre expansions somitiques ventrales qui penetrent peu apres dansle blasteme de mesenchyme initial. Le mesenchyme secondaire donne naissance a la muscu-lature et aussi apparemment a l'endosquelette de la nageoire. L'origine de la ceinture estmoins claire.

Au moment ou debute la mise en place du mesenchyme initial, l'epithelium de revetementde l'embryon est deja differencie en un epiderme pourvu de nombreux mucocytes et reposantsur une membrane basale nette. A 1'apex du bourgeon de la nageoire pelvienne, un epaississe-ment localise et transitoire de cet epiderme est realise par l'accroissement en epaisseur de lacouche germinative et par une plicature qui forme une double lame epitheliale dont l'axe estconstitu6 par la membrane basale. Nous designons cette structure sous le terme de ' pseudo-cape apicale' pour marquer qu'elle doit etre distinguee de la 'cape apicale' decrite sur lebourgeon de membre des Amniotes.

La morphogenese de la nageoire pelvienne de Salmo presente done, au niveau de l'ecto-derme comme au niveau du mesoderme, des particularites importantes.

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