THÈME :Les plasmides

Plan de travail:

Introduction

Définition des plasmides

Les types des plasmides

Autre propriétés

Les plasmides comme vecteurs

Comment on obtient les plasmides?

Mode d’insertion des plasmides

La selection des bactéries transformé

Application des plasmides

Conclusion

Référence

Introduction

En 1952 JOSHUA LEDBERG découvert les plasmides lorsque leur études des

salmonelle

dans notre exposer en va voire les types ; des propriétés en plus les plasmides

comme des vecteurs de clonage .

I -1 DEFINITION DES PLASMIDES:

Les plasmides: sont des petites molécules circulaires d’ADN double brin qui existe

indépendamment du chromosome , elles sont capables de se répliquer de manière autonome

.

Les plasmides ont relativement peu de gène généralement moins de 30

leur information génétique n’est pas nécessaire à l’hôte et les cellules(Prescott et al;2010).

Les plasmides transmissibles de façon stable à la descendance(primerose et al;2004).

les plasmides ne sont pas circulaire toujours . Par exemple, les plasmides de Streptomyces

sp et Bor relia burgdorferi sont linéaires et sont protégés de l’attaque des

nucléases par une association covalente avec une protéine (Str eptomyces) ou par la

formation d’une structure en épingle à cheveux (Bourrelai)(primorce et al;2004).

Les types des plasmides

1- des plasmides de fertilité: Plasmide porteur des gènes de la conjugaison Bactérienne transforme sa cellule

hôte ou cellule donneuse , ex plasmide F E coli. (Prescott et al ; 2010).

c'est a dire qu’ont un rôle dans la formation d’un couple de cellules ( Michael Met

John Martinko ;2007 ).

2- plasmide de résistance:

Des plasmides R qui portent des gènes codants une résistance aux antibiotiques

sulfamides, streptomycine et à la spectinomycine et ç la tétracycline ex:R100

( Michael Met John Martinko ;2007)

3- les plasmide de virulence :

les plasmide de virulence rendent les bactéries plus pathogènes .

Exemple Ti: plasmides inducteur de tumeur trouvé chez la bactérie

agrobacteium tumefaciens .(Prescott et al ;2010).

4-plasmide métabolique:

Qui porte des gènes cordant pour des enzymes qui dégradent des substances telles

que composée aromatique ,glucides… (Prescott et al 2010).

5- plasmide col: col contiennent des gènes de synthèse de bactériocines connues sous le nom de

colicine . Les bactériocines son des protéines bactériennes qui détruisent d’autres

bactéries (Prescott et al;2010) .

II- autre propriétés:

F Les plasmides sont des ADN CCC (Covalent Ly Cl osed Circles), mais si un des deux brins est ouvert, ils sont des ADN OC (Open Circle). (Primorse et al 2004).

Forme I : forme relachéeOC Open Circle

orme II : Forme normale surenrouléeCCC Covalent Close

Circle

Fig1: les formes des plasmides. www.sante.univ-nantes.fr/med/ticem/.../1444.pdf

L’incompatibilité des plasmide:

Certains plasmides ne cohabitent pas durablement dans la même bactérie (F’gal et

F’lac), culture en milieux non sélectifs . Elimination de l’un des

plasmides => compétition(www.sante.univ-nantes.fr/med/ticem/.../1444.pdf)

III –Les plasmides comme vecteurs:

- un vecteur faut contiens : origine de réplication Un marqueurs permette la sélection Une région permette d’inséré fragment d’ADN exogènes.

Fig2 :vecteur plasmidiques (Lodish et

al,2005)

III-1 comment on obtient les plasmides?

La plus utiliser => lyse alcaline

Lyse : altération des enveloppes bactériennes

Alcaline : dénaturation ADN

après => La neutralisation :

L'ADN chromosomique étant très long n'arrive pas à se rapparier

L'ADN plasmidique plus court arrive à se reformer à l‘état initiale

Ultracentrifugation à l’équilibre de densité:

CsCl + bromure d’ethidium(http://bioinfo2010.wordpress.com/).

Fig3: lextraction des plasmides apartire gradien de CsCl(Prescott et al;2010) .

III 2-Mode d’insertion des plasmides:

1- préparation du plasmide et l’insert par la coupure de même enzyme de restriction.

Fig4: préparation l’insert et plasmide .

ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf

2-utilisation de phosphatase alcaline:

Pour éviter la recirculation

Fig5 réparation par phosphatase alcaline.

ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf

3 –L’insertion du l’insert dans plasmide

Fig6: mode d’insertion des plasmides http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Recombinant_DNA.JPG

III-3 Commet les plasmides introduit ou cellule bactérienne?

Les plasmides peut inséré a laide d’une choc thermique ou électrique

Fig7: l’utilisation de choc électrique pour l’introduction les vecteur plasmidique. mon.ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf

III-4 la sélection des bactéries transformés: Le taux de transformation des bactéries est généralement très faible.

Si on utilise un gène de résistance dans plasmide on obtient une sélection séparer les

bactéries comportant des plasmides et les bactéries sans plasmides car ces dernières

sont tuées.

cette méthode permet pas de distinguer les bactéries avec plasmides intacts des

bactéries avec plasmides recombinants.

On utilise pour cela une résistance à un second antibiotique , ou plasmide a un gène

code (LacZ) pour un protéine β galactosidase.

- L’utilisation de changement de phénotype

Fig8: la double sélection

mon.ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf

Autre exemple: plasmide contient gène de Lac z

VI-Application des plasmides:

En agriculture.

En médicine:

-Production des hormones et des protéines :

-insuline → traitement de diabète.

-Interférons α β, δ agent antiviraux , anti-tumoraux et anti-inflammatoires.

-Streptokinase → anticoagulant (Prescott et la ; 2010).

CONCLUSION

Les plasmides sont utilisées par les bactéries comme moyen d’adaptation mais il y a un grand développement d’utilisation des plasmides permettre de développer plusieurs sciences et défend plusieurs maladies.

Référence:

_MICHAEL T.MADIGANT et JOHN M. MARTTNKO 2007

Brock Biologie des micro – organismes 11 e Ed PEARSON France , 1047P.

_PRESCOTT , HARLEY , KLEIN , WILLEY , SHERWOOD et WOOLVERTON 2010

Microbiologie 3eEd De Boeck Paris . 1088 P.

_S. PRIMROSE , TWYMAN et R. OLD 2004 GENIE GèNETIQUE 6eEd De Boeck

Pris . 400 P .

_ WILLIAM , S.KLUG , MICHAEL , R. CUMMINGS et CHARLOTTE , A. SPENCER ,

2006 Genetique 8eEd PEARSON Paris .704 P

http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Recombinant_DNA.JPG .ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf

www.sante.univ-nantes.fr/med/ticem/.../1444.pdf