MASSE MOLCULAIRE:

La MM dun AA varie entre 75 Da pour la glycine et 204 Da pour le tryptophane. La MM moyenne

dun rsidu dAA est de 115 Daltons (Da).

Une protine forme de 50 AA on dit quelle est compose de 50 rsidus dAA car il ya eu formation de 49 liaisons peptidiques et

dpart de 49 molcules deau il ne reste que des AA dshydrats : des rsidus.

Une protine de 50 rsidus aura une MM de 50

115 = 5750 Da ou 5,75 kDa.

La MM de la protine sera 5750g/mole

SOLUBILIT ET POINT DE FUSION:

La plupart de AA subissent facilement la solvatation par les solvants polaires tels que leau

Solubles dans les solvants polaires et insolubles dans les solvants apolaire ( Benzne, ther).

La solubilit est dpendante des proprits de la chaine latrale : la solubilit diminue avec le nombre datomes de carbone du radical mais inversement augmente si ce radical R est porteur de fonctions polaires (NH2, COOH) ou hydrophiles (OH).

Le point de fusion est lev > 200c

PROPRITS CHIMIQUES LIES AU

GROUPEMENT CARBOXYLIQUE ( COOH ):

- 1 - ESTRIFICATION:

Par un alcool en prsence dun acide fort:

R-CH-COOH + R-OH H+ R-CH-COOR + H2O

NH2 NH2

Acide amin Alcool Esther

- 2 - AMIDIFICATION:

Formation d'amide: elle rsulte avec une amine.

Cette raction est importante si lamine provient dun autre AA elle conduit la liaison peptidique.

R-CH-COOH + NH2-R R-CH-CO-NH-R + H2O

NH2 NH2

Acide amin Amine Amide

- 3 DCARBOXYLATION:

Donne naissance une amine, possible par voie:

chimique: chauffage en prsence de Ba(OH)2.

enzymatique: par les dcarboxylases qui

fonctionnent avec le phosphate de pyridoxal.

Intrt: aboutit aux amines biologiques trs actives:

formation de corps proprits particulires:

exp: -histidine histamine (choc allergique)

-tryptophane 5hydroxy tryptophane srotonine

(action sur la tension artrielle).

dosage des AA par mesure du CO2 dgag.

R-CH-COOH R-CH2-NH2 + CO2

NH2

- 4 - FORMATION DE SEL:

Action dune base sur COOH:

R-CH-COOH + KOH R-CH-COOK + H2O

NH2 NH2

Acide amin Base Sel

PROPRITS CHIMIQUES LIES AU

GROUPEMENT AMINE ( NH2 ):

- 1 - DSAMINATION:

Par lacide nitreux ( HNO2 ): formation dacide alcool avecdgagement dazote

Le dosage des AA par la mthode de Van Slyke est fond sur

la mesure du N2 dgag.

R-CH-COOH + HNO2 R-CH-COOH + N2 + H2O

NH2 OH

Acide amin Acide nitreux Acide Alcool

- 2 - ACTION DE LA NINHYDRINE:

Sert pour la dtection des AA. Cest un oxydant puissant qui par une dsamination oxydative des

AA conduit laldhyde correspondant avec libration dammoniac, de CO2 et formation de Ninhydrine rduite ( HYDRINDANTINE).

O

O

OH

OH

H2N

HOOC

CH-R

O

O

H

OH

R-C

H

O

+ NH2 +CO2++

NINHYDRINEAA

HYDRINDANTINE

Aldhyde

OO

H

OH

H

HH

N

DANS UN SECOND TEMPS LAMMONIAC RAGIT AVEC LHYDINDANTINE ETUNE AUTRE MOLCULE DE NINHYDRINE POUR DONNER UN COMPOS BLEU

VIOLAC: POURPRE DE RUHEMANN QUI ABSORBE 570 NM (RACTION

COLORIMTRIQUE EXTRMEMENT SENSIBLE POUR LE DOSAGE DES AA

OH

OH

O

O

N + 3H2O

O

OH

O

O

+ +

hydrindantine

ammoniac

ninhydrine Pourpre de Ruhemann

Les imino acides donnent un compos jaune dont le maximum dabsorption de la solution se situe au voisinage de 440nm.

- 3 - RACTION DE SANGER:

Action du 1fluoro2,4dinitro benzne (FDNB) qui ragit

facilement avec une fonction amine pour former par

substitution nuclophile un driv N2,4Dinitro-phnyl:

compos jaune facile identifier par chromatographie et

doser par spectrophotomtrie 360nm.

H2N-R NH-R + HF

NO2

NO2

NO2

NO2

F +NaHCO3

FDNB Driv N 2,4dinitrophnil

Nb: le NaHCO3 permet de neutraliser lacid due au HF form

- 4 - RACTION DEDMAN:

Action du phenylisothiocyante (PITC): ragit avec la

fonction amine en milieu alcalin pour donner un driv N

phenlthiocarbamyl qui en milieu acide se cyclise en

donnant une phenylthiohydantoine facile identifier .

Cette raction fondamentale trouver son application dans

lanalyse par rcurrence des squences peptidiques .

R OH-

C6H5 N = C = S + H2N-CH-COOH R - CH - COOH

PITC HN NH C6H5

H C

R C ------ CO S

(H+)

HN N- C6H5

C

S

Driv N-Phnyl

Thiocarbamyl

Phenyl-thiohydantoine

-5- LA DANSYLATION :

Le Chlorure de Dancyl ragit trs facilement avec des

fonctions amines des AA pour donner des drivs

sulfonamides trs fluorescents donc facilement dlectables

mme dinfimes quantit AA.

Cette raction est 100 fois plus sensible que la raction de

Sanger .

CH3 CH3 CH3 CH3

N N

O S O

CL

H

N-H

H-C-R

COOH

+

O S 0

NH

R CHCOOH

- HCL

Chlorure de dansyl AA

Dansyl aminoacide

REMARQUE

Lintrt fondamental de ces quatre dernires ractions rside en leur trs large utilisation dans

la dtermination de la structure primaire des

protines.

-6 - ACTION DE LA FLUORESCAMINE :

Elle ragit rapidement avec les AA permettant

lobtention de drivs extrmement fluorescents qui permettent la dtection avec une grande sensibilit de

quantits de lordre de nanomole (n.mol).

Ces proprits chimiques sont trs utilises pour:

- les dosages des AA

- lanalyse squentielles des peptides

- la rvlation des AA en Chromatographie sur

couche mince .

OO

O

O

+ R NH2 O

OH

COOH

R - NH2O

PH= 8-9

fluorescamine Compos trs fluorescent

Dtermination de la structure primaire des

protines .

Recherche des acides amins dans les liquides

biologiques (urine, sang)

Les nombreuses mthodes sont essentiellement :

o Les mthodes Chromatographiques

o Les mthodes Electrophortiques

o Dosage spcifique

LES MTHODES CHROMATOGRAPHIQUES :

Chromatographie sur papier .

Chromatographe sur couche mince .

Chromatographie en phrase gazeuse .

Chromatographie sur Echangeur dions .

CHROMATOGRAPHE SUR ECHANGEUR DIONS :

Excellent procd , permet des valuations quantitatives avec

de lordre de + ou - 3 % derreur .

Dans cette Mthode une colonne de chromatographie est

remplie dune rsine synthtique contenant des groupements chargs .

Il existe deux classes de rsines changeuses dions:

- les changeuses de cations

- les changeuses danions .

Les acides amins sont habituellement spars sur une colonne

changeuse de cations .

PRINCIPE :

Premire tape :

filtration du mlange dAA analyser travers une rsine constitue par des groupements sulfoniques (SO3-)

changeuse de cations on lui ajoute une solution acide (PH

= 2 ou 3) tous les AA sont sous formes de cations(charge + )

et donc se fixent sur la rsine

Nb: les AA basiques sont solidement lis et les AA acides le

sont moins.

Par augmentation du PH des tampons filtrs travers la

colonne la charge + des AA est progressivement neutralise

quand PH > Phi et leurs liaisons avec les groupements SO3- sont

rompus donc on lue le mlange (cest le faire migrer le long de la

colonne en faisant varier le PH et ainsi faire varier les charges des

AA et donc leur vitesse de migration)

Deuxime tape:

Analyse quantitative:

aprs addition de ninhydrine lfluent le mlange circule travers un bain marie bouillant ou la raction

colore se dveloppe

La lecture se fait 570 nm et 440 nm pour les imino

acides

les mesures sont inscrites en continue sur enregistreur

( les AA sont identifis par la position de leur pic

dabsorption et leur quantit est donne par la surface de ce pic).

LES MTHODES LCTROPHORTIQUES:

Les AA en milieu aqueux sont sous formes dions. Dans un champs lectrique, ils subiront un dplacement qui dpendra de leur charge nette au PH considr.

On dpose un mlange dAA sur une feuille de papier pralablement imprgne dun tampon et lon tablisse un champ lectrique continu de haut voltage.

En raison de leur valeurs diffrentes de Phi, les AA migrent dans des directions des vitesse diffrentes

Les AA neutres ne migrent pas.