1

1-DEFINITION

2-LES DIFFERENTS TYPES DE TECHNIQUES CHROMATOGRAPHIQUES

2-1-Classification selon la nature des phases• Chromatographie en phase liquide• Chromatographie en phase gazeuse

2-2-Classifications selon le procédé opératoire• Chromatographie sur colonne• Chromatographie sur papier ou couche mince

2-3 - Classification selon le phénomène mis en œuvre

3- LA CHROMATOGRAPHIE D’ADSORPTION

4- LA CHROMATOGRAPHIE DE PARTAGE4-1-Principe4-2-Mode opératoire4-3-Partition

Les méthodes chromatographiquesPlan du cours

5- CHROMATOGRAPHIE SUR ECHANGEURS D’IONS5-1-principe5-2-Les différents types d'échangeurs d'ions5-3-Elution des molécules fixées au gel

6- CHROMATOGRAPHIE D’EXCLUSION

7- CHROMATOGRAPHIE D’AFFINITE

8- CHROMATOGRAPHIE PHASE GAZEUSE

9- CHROMATOGRAPHIE HPLC

Les méthodes chromatographiquesPlan du cours

la solubilité dans un solvant liquide : la chromatographie de partage

la taille, la forme : la chromatographie d'exclusion

la polarité : la chromatographie d'adsorption, et d'adsorption en phase inversée

la charge électrique : la chromatographie par échange d'ions

la présence de groupements d'atomes formant des sitesparticuliers : la chromatographie d'affinité

2-3 - Classification selon le phénomène mis en œuvre

4- LA CHROMATOGRAPHIE DE PARTAGE

Référence frontale ( Rf):

Distance parcourue par le soluté/distance parcourue par le solvant

Rf=x/y ( Rf<1)

Phase stationnaire:liquide fixé sur support inerte

Phase mobile :liquide(solvant)

Chromatographie bidimensionnelle

Phase mobile a Phase mobile b

5- CHROMATOGRAPHIE SUR ECHANGEURS D’IONS

2

1

Billes de porositécontrôlée

6- CHROMATOGRAPHIE D’EXCLUSION: Les étapes

2 3

Remplissage de la colonne (billes) Dépôt de la solution:mélange de molécules de tailles différentes1

2 migration

3 Élution des molécules A

4 Elution des molécules B

4

Les petites et les grosses molécules vont être éluées différemment.

Petites moléculespénètrent dans les mailles

Grosses moléculessont entraînées par la phase mobile et exclue par le gel

Les molécules les plus grossesseront donc éluées les premières.

Phase stationnaire dans la colonne

6- CHROMATOGRAPHIE D’EXCLUSION

6- CHROMATOGRAPHIE D’EXCLUSION

Les molécules de masse molaire élevée sortent toutes à Vo.Les molécules de masse molaire faible sortent toutes à Vt.Les molécules de masse molaire intermédiaire sortent à des Ve intermédiaires et sont

effectivement séparées.

Application: détermination du poids moléculaire

7- CHROMATOGRAPHIE D’AFFINITE

support

Molécules greffées

Dépôt d’un mélange de molécules en solution Tampon A de

lavageTampon B d’élution

Phase stationnaire solide

8- CHROMATOGRAPHIE PHASE GAZEUSE

•Injection du mélange à séparer dans l’injecteur

•Vaporisation du mélange à chaud

•Transport de ce nuage à travers une colonne grâce au gaz vecteur

•Séparation à chaud, grâce à la colonne et sa phase stationnaire

•Détection des produits à la sortie de la colonne et traitement des données

Traitement des données

Colonne capillaire