lactobacillus et autres bactéries lactiques bacilles gram+ réguliers, souvent allongés...

Lactobacillus et autres bactéries lactiquesBacilles Gram+ réguliers, souvent allongésasporulés,groupés (paires ou en chaînes)Immobilesfermentation de type lactiqueCatalase-, certains pseudo-catalase, et d’autres sont catalase+, microaérophiles ou anérobiesHomo et hétérolactiques

Lactobacillus et autres bactéries lactiques

Clé dichotomique des genres

1 – Catalase - : Lactobacillus, Carnobacterium, Bifidobacterium, Erysipelothrix2. Catalase + : 2.1 Culture à 37°C + : Listeria2.2 Culture à 37°C - : Brochothrix


Techniques isolement des Lactobacillus

Croissance faible milieu ordinaire (semi-anaérobiose)Bouillon de Briggs, à la tomate, Elliker…Le plus connu = MRS (contient du Tween 80), pH ajusté à 6,2 ou 6,5Pas assez spécifique

Rogosa : plus sélectif (acétate et acide acétique)

Inhibiteur spécifique : • acide sorbique (bactéries acétiques), • mélange acide sorbique / actidione pour les levures• Milieu MRS acidifié (pH 5)

Lactobacilles = microaérophiles isolement et numération par la technique de la double couche ou incubation en milieu anaérobie ou semi-anaérobie 2 à 3 jours à 30°C


Techniques d’identification des Lactobacillus

Répartition et identification des espèces basées sur les tests suivants

Lactobacillus divisé en 3 groupes (Orla-Jensen) :• Thermobacterium : homofermentaires thermophiles qui se développent à 45°C

mais pas à 15°C, ne fermentent ni les pentoses ni le gluconate : Les plus fréquentes (fromages, yaourts, lait) = helveticus, bulgaricus, lactis, acidophilus…

• Streptobacterium : homofermentaires mésophiles qui se développent à 15°C et occasionnellement hétérofermentaires en fonction du substrat : L casei (lactobacille prédominant du lait), plantarum (choucroute), curvatus, sake…

• Betabacterium : lactobacilles hétérofermentaires qui fermentent des pentoses et généralement le gluconate : L. fermentum, buchneri, brevis, sanfrancisco…



Type fermentaire

Milieu de Gibson et Abd El Malek – 2 à 7 jours à 30°C hétéro ou homofermentaires

Température de développement

Milieu MRS à 45°C (240 à 48 heures) et 15°C (1 à 2 semaines)Parfois tests à 48 et 51°C

Hydrolyse de l’arginine

Milieu MRS + arginine 0,3% - 2 à 3 jours à 30°C – réactif de Nessler – précipité orange +

Thermorésistance

Comme pour les streptocoques avec de MRS Deux tests : 60°C pendant 90 min et 65°C pendant 30 min



Croissance en présence de NaCl

Milieu MRs + 6,5% de NaCl 30°C pendant 2 à 3 jours

Croissance à pH 3,9

Milieu MRS à 30°C (HCl)

Croissance en présence de Teepol

Milieu MRS + 0,4% de Teepol - 2 à 3 jours à 30°C

Milieu LTV 48 heures à 30°C – centrifugation – surnageant additionné d’un volume éthanol – anneau opaque à l’interface présence de dextranes

Production de dextranes

Réduction du TTC

Milieu MRS + TTC coloration rose-rouge des colonies



Réduction du tellurite

Gélose : noircissement des colonies

Production du peroxyde hydrogène

Gélose glucose-oxyde de manganèse (48 heures à 30°C) apparition de zones claires autour des colonies

Action sur le lait tournesolé

Fermentation des sucres

Mise en évidence sur un milieu spécial de fermentation des lactobacilles additionné de différents sucres

Production H2S

Milieu classique



Hydrolyse de l’esculine

Milieu gélosé à l’esculine – noircissement du milieu

Besoin en vitamines

Tests technologiques

Identiques à ceux des StreptocoquesRecherche de l’activité lipolytique sur gélose à la tributyrine, caractère homo ou hétérofermentaires, essais de fermentations des pentoses ou du gluconate avec dosage des produits formés

Galeries d’identification rapide pour Lactobacilles : API 50CH, CHL


Pas de clé simple et fiable


Carnobacterium

Genre proche des Lactobacillus : bacilles isolés ou en courtes chaînes, mobile ou non, catalase-, nitrate réductase-, métabolisme hétérofermentaire, se développent à 10°C et non à 45°C (proche de Betabacterium)Dans les produits carnés et les poissons

Différences par rapport au Lactobacillus des viandes :• Croissance sur gélose à l’acétate : Carnobacterium ne se développe pas au

contraire des Lactobacillus• Présence d’acide diaminopimélique (mDAP) dans la paroi : CCM ou HPLC

Lactobacilus mDAP-(sauf L. plantarum), Carnobacterium mDAP+• Test ADH : Carnobacterium ADH+, Lactobacillus ADH+ ou – (L. plantarum -)


Bifidobacterium

Milieu de référence pour isolement : TPY (tryptone-phytone-yeast extract) additionné antibiotique ou inhibiteur : TPY-dicloxacilline, gélose NPNL modifié (TGY+néomycine, paromycine, acide nalidixique et chlorure de lithium)Incubation 72 heures en atmosphère enrichie en CO2 (Anaerocult, Gaspak…)

Identification par des caractères biochimiques en particulier enzymatiques :a-arabinosidase, b-glucosidase, N acétylglucosaminidase, leucineglycyl arylamidase, cystine aminopeptidase…Mise en évidence de la F6PPK : apparition d’une couleur violacée du à la production acétyl P

Système identification rapide : galerie Rapid Ana II (IDS), galeri API ZYM, API50CH, API50CHL….

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