la microbiologie des eaux d aliment at ion 03

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Hydro-bromatologie 2010/2011

LA MICROBIOLOGIE DES EAUX DALIMENTATIONI. INTRODUCTION : MTH : Les maladies transmission hydrique qui rassemblent un certain nombre de bactries pathognes, virus ou mme parasites. Le point commun de ces microorganismes : Contamination hydrique. Ces microorganismes sont responsables de : Vomissements, Diarrhes, Fivre. Ces microorganismes sont une menace permanente dans les pays en voie de dveloppement, particulirement dangereux pour les enfants et les personnes ges. La contamination se fait : 1) Gnralement par infiltration des eaux uses dans les EAP (cross-connexion) ; 2) Infiltration des eaux de pluie par les fausses septiques (Cholra, Typhode) ; 3) Contamination des nappes phratiques par les lessivages des eaux ou bien par les matires fcales ; 4) Naturellement c'est--dire consommation des plantes mal laves dont larrosage a t fait par des eaux uses non traites. Les maladies bactries : 1) Fivre typhode (salmonellose) : Salmonella typhi ou parathyphi A, B. Caractrise dune fivre accompagne dun abattement extrme (grande faiblesse) pouvant avoir des complications graves voire mortelles. 2) Cholra : Vibrio cholerae et V. cholereae NAG (non-agglutinable). 3) Lgionellose : Legionella pneumophila. La contamination se fait partir des climatiseurs, eaux chaudes (douches). 4) Gastroentrite grave : Responsable de syndromes intestinaux graves, douleurs abdominaux, expulsion de selles non fcales glaireux sanguinolentes et frquentes, amaigrissement et altration de ltat gnrale. 5) Escherichia coli : Genre saprophyte, se retrouve dans les selles et se multiplie par milliard dans les matires fcales. Cest le 1er indicateur de la pollution fcale. Sil existe : Forte chance quil y avait une contamination par les germes pathognes ; Bactrie dalerte ; Gnralement pas pathogne mais lorsquil existe en nombre lev il peut provoquer une septicmie. 6) Campylobacter jejuni : Infection sporadique (t +++) la suite de manipulation de nourriture mal cuite ou avarie. 7) Proteus : Responsable de diarrhes chez lenfant. 8) Pseudomonas aeroginosa : Germe opportuniste ; retrouv dans les eaux de baignade (piscines +++). 9) Streptococcus fecalis. 10) Clostridium sulftorduceur. Les maladies virus :

Hydro-bromatologie 2010/20111) Hpatite A +++ :

2)3) 4) 5) 6) 7)

= hpatite infectieuse ; virus de la famille des Picornaviridae ; maladie transmission fcale, eaux uses, consommation des produits contamins par les eaux uses. Evolution : ictre hpatique svre et prolong. Adnovirus : Conjonctivites et maladies respiratoires. Rotavirus : gastroentrite. Rhinovirus : Eruptions cutanes, affections respiratoires. Poliovirus : Poliomylite ; contamination dans les piscines. Papillomavirus : Responsable de verrues plantaires (eaux de baignade). Entrovirus humain : Mningites, encphalites, infections respiratoires, ruptions cutanes, conjonctivites, hmorragie, fivre.

Les maladies parasites : 1) Protozoaires : Entamoeba histolytica Amibiase (lgre diarrhe dysentrie sanguinolent fulminante); Giardia intestinalis Giardiase (diarrhes, crampes, nauses, vomissements); Cryptosporidium parvum Cryptosporidiose (diarrhes, troubles gastro-intestinaux); Balantidium coli Balantidiose (dysentrie sanglante aigue). 2) Helminthes : Ascaris lumricodes Ascaridiose ; Schistosoma haematobium schistosomiase ; Dracunculus medinensis Dracunculose (filaire de Mdine). Lutte contres ces maladies : - Eradication de lhabitat prcaire ; - Epuration des eaux uses avant dversement dans un milieu naturel ; - Contrle rigoureux des eaux des RA (rseaux dassainissement) et des EAP (eaux dalimentation potables) ; - Interdire larrosage par les eaux uses des fruits, lgumes ; - Sensibilisation et information des personnes sur les rgles dhygine ; - Les dcharges publiques : les sols rservs ceci doivent tre dots dune membrane impermable. Analyse : - Lanalyse nest significative que si le prlvement a t fait dans des bonnes conditions ; - Le prlvement doit tre fait par des personnes qualifies ; - Le prlvement doit tre reprsentatif ; - Flacons en verre, striles (striliss lautoclave 180C pendant 30 min) ; - Transport dans des glacires portatives, rapidement, ne dpassant pas 72 h ; - Le prlvement au robinet laisser leau couler pendant 4-5 min ; - Chaque prlvement doit tre accompagn dune fiche de renseignement ; - Lexamen doit tre fait 2 h aprs larrive au laboratoire.

II.

ANALYSE PROPREMENT DITE :

Hydro-bromatologie 2010/20111. Dnombrement des germes auto-msophiles (dnombrement des germes totaux) :

Ce test sert dnombrer de manire non spcifique le plus grand nombre de microorganisme, en particulier les bactries qui se dveloppent dans des conditions darobie habituelles de culture. Ces germes nont pas deffets directs sur la sant mais sous certaines conditions, ils peuvent gnrer des problmes. Ce sont des indicateurs qui rvlent la prsence possible dune contamination bactriologique. Le dnombrement se fait selon 2 mthodes :

Mthode par immersion (ou incorporation) : compter les colonies dans la glose. Ce test consiste prparer dans une boite de ptrie : 1 ml deau analyser, ensuite on va dune manire aseptique incorporer du glose (non spcifique) talement de leau lintrieur du glose 24h 30C ou 72h 22C. Ce procd permet de dnombrer les microorganismes prsents dans une culture : Germes anarobies ; Germes arobies facultatifs. Mthode par talement (ou flottation) : compter les colonies la surface de la glose. Glose (Hecktoen, GN) + 1cc eau analyser Etaler de manire homogne la surface du glose. Cette mthode est prconise pour les Germes arobies strictes. Mthode par immersion + mthode par talement Dnombrement des germes totaux

Technique proprement dite : 2 procds Travailler avec des dilutions pour avoir plus de chance davoir des colonies comptables. Chaque 1cc ncessite 2 boites de ptrie.

Lecture : 37C, compter le nombre des colonies soit la surface soit dans la glose (selon la technique). Le dnombrement se fait sur les boites comportant entre 50 300 colonies. Pour une bonne lecture, on divise la boite en cadrans le nombre obtenu est multipli par 4 puis par linverse de la dilution (x 10, x 102, x 103).

Hydro-bromatologie 2010/2011 Intrt : - Mthode dorientation ; - Ce test est indicateur de pollution dans des conditions naturelles (milieu naturel : eaux souterraines, nappes profondes ou eaux de surface) ; si cette eau est protg => le nombre de germes retrouvs est stable, mais volution du nombre des germes => pollution externe. - Cest un test dalerte (de surveillance) ; - Permet la surveillance des eaux de consommation dans les rseaux ; - Permet aussi de mesurer lefficacit des traitements (leau est toujours soumise aux traitements physico-chimiques analyse de leau brute puis aprs traitement si leau est bien traite diminution significative du nombre de germes) ; - Permet aussi de surveiller les eaux embouteilles mesurer une mauvaise hygine de lquipement ou de lenvironnement de lusine (pollution au niveau de la source ou des quipements).2. Recherche et dnombrement des germes tests de contamination fcale : +++

Leau potable est, normalement, exempte des germes de contamination fcale (germes pathognes). Les germes de contamination fcale Coliformes totaux : Escherichia coli, Klebsiella, Entrobacter, Citrobacter. Streptocoques fcaux

Ces germes sont mises en vidence par Colimtrie, cest un test qui consiste dceler et dnombrer les germes coliformes particulirement E. coli dorigine fcale. Ce dernier sil est prsent, il est souvent accompagn dautres germes pathognes. 2 techniques : En milieu liquide NPP (Nombre le plus probable possible). En milieu solide MF (Filtration sur membrane). NPP : Mthode alatoire. Le dnombrement se fait laide des tables de dnombrement. Le milieu utilis (liquide) tant le BCPL = Bouillon Lactos au Pourpre de Bromcrsol. Le BCPL peut se prsenter sous forme de : Flacons (doublement concentrs en BCPL) Tubes (simplement ou doublement concentrs en BCPL) Munis de cloches de Durham (permettant de dceler ventuellement le dgagement de gaz). La technique se fait en deux tapes : 1) Etape prsomptive : Recherche et dnombrement de tous les coliformes (coliformes totaux). On prend toujours : 1 flacon, 5 tubes simplement concentrs en BCPL et 5 tubes doublement concentrs en BCPL.

Hydro-bromatologie 2010/2011

2) Etape confirmative : Recherche et dnombrement des coliformes fcaux, essentiellement E. coli. Parmi ces 14 coliformes totaux, on dnombre les coliformes fcaux. Pour chaque Flacon (+) et Tube (+), on prend un milieu disolement = milieu Schubert = milieu mannitol-indole (transparent).

Tout tube prsentant : gaz(+), indole(+), contenait lorigine au moins un coliforme fcal.

Hydro-bromatologie 2010/2011 Cette mthode de colimtrie en milieu liquide peut tre confirme par une colimtrie en milieu solide. - A partir de chaque flacon et tube positif, on ensemence sur glose BCPL, - Incubation 24h 37C, - Virage du rouge au jaune colonies lactose (+), - Les colonies positives sont repiques sur TSI, - Et lidentification se fait par le test IMVIC : I : recherche de lindole, M : recherche de rouge de mthyle, V : VP, I : identification de linositol, C : citrate de Simmons. E. coli Klebsiella Entrobacte r Citrobacter Lac + + + + Glu + + + + H2S + Indole + RM + + VP + Citrate + + +

3. Recherche et dnombrement des streptocoques fcaux : Mme principe, 2 mthodes : En milieu liquide ; En milieu solide. Avec deux tapes : Etape prsomptive ; Etape confirmative. Mthode en milieu liquide : 1) Etape prsomptive : Le milieu utilis est spcifique : Bouillon lazide de Na = milieu de Rothe (marron clair). Le milieu de Rothe existe en : Flacon doublement concentr ; Tube simplement et doublement concentr. Flacon 50cc deau, tubes D[ ] 10cc, tubes S[ ] 1cc ; Incubation 37C pendant 48 h ; Les tubes et les flacons prsentant une louche microbienne (trouble) seront considrs comme pouvant contenir un streptocoque fcal. L il n y a pas de comptage => passer obligatoirement ltape confirmative. 2) Etape confirmative : A partir de chaque tube et flacon positifs ensemencement dans un milieu spcifique = milieu EVA (Ethyle violet azide de Na) ; Incubation 37C pendant 24 h ; Tous les tubes et les flacons prsentant une louche microbienne sont considrs comme positifs ; On note aussi gnralement la prsence au fond des tubes dune pastille violette (facultative). Le dnombrement se fait comme prcdemment sur table de Mac Grady.4. Recherche et dnombrement des Clostridium sulfito-rducteurs :

soit par cross-connexion, soit mlange dun milieu accidentelle ou volontaire. Ce sont des bactries anarobies, caractrises par la prsence des spores pluri-rsistantes (naturellement plus rsistants que les formes vgtatives). Rsistance au chlore plus importante.

La contamination se fait :

Hydro-bromatologie 2010/2011 La prsence des spores renseignent sur une pollution ancienne. Rq : Germes de contamination fcale (Streptocoque) pollution rcente. Dosage : Aprs destruction des formes vgtatives par chauffage 80C pendant 10 min, lchantillon analyser est incorpor dans un milieu de base de couleur verte GVF (Glose Viande Foie) additionne de sulfite de Na et Alun de fer. Aprs solidification et incubation ; la prsence de germes sulfitorducteur est traduit par un halo noir du sulfure de fer autour des colonies. Technique proprement dite : - Prparer la GVF + additifs (sulfate de Na et Alun de fer) ; - 25 ml deau analyser dans chaque tube (4 tubes) ; - Bain marie 80C pendant 10 min tuer toutes les formes vgtatives ; - Refroidir rapidement ; - Additionner 20 ml de glose prpar dans chaque tube ; - Retourner pour faire mlanger leau + glose ; - Incubation 37C pendant 24 48 h ; - 1re lecture au bout de 24 h, puis une 2me lecture au bout de 48 h. Lecture : Les spores apparaissent sous forme des grains de caf dans la masse de la glose. A partir de 48 h, possibilit que tout le tube se noircit. Si leau est charge tubes noirs. Le calcul : le nombre de spores pour 100 ml deau (ex : 7 colonies pour 100 ml qui est = 25 ml x 4 tubes). Cette technique est valable pour les eaux et les aliments. 5. Recherche de coliformes par filtration sur membrane : Principe : Cette technique consiste filtrer une quantit deau travers une membrane dester de cellulose, de marque Millipore ou Sartorius, de porosit dfinie 0,45 m, le diamtre du filtre est de 25 mm. Cette porosit est susceptible de retenir les particules. Cette membrane est ensuite dpose sur milieu glos appropri qui va permettre aux coliformes de se dvelopper de manire prfrentielle. 1) Etape prsomptive : Lappareil utilis sappelle : la rampe de filtration.

Hydro-bromatologie 2010/2011 On peut avoir un appareil form de plusieurs entonnoirs permettant ainsi une analyse rapide de plusieurs eaux (4 5 analyses). -

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Striliser lentonnoir au Bec Bunsen avant filtration ; Prendre le filtre (porosit 0,45 m, diamtre 25 mm) laide dune pince et le dposer sur la pastille ; Prendre lentonnoir strile et laccrocher ; Verser 100 ml de leau analyser dans le ballon jaug ; Dclencher la pompe vide ; Enlever lentonnoir et prendre le filtre et lensemencer en milieu appropri ; Le milieu utilis pour les coliformes totaux est le TTC + Tergitol ; TTC : Triphnyl Ttrazonium (vert bouteille) ; Incubation du 1er filtre 37C pendant 24 48 h, le 2me filtre 44C pendant 24 h, car pour chaque analyse, on filtre 2 quantits deau : une pour les Coliformes Totaux et lautre pour les Coliformes fcaux) : 100 ml 1er filtre : CT TTC 37C 100 ml 2me filtre : CF TTC 44C Aprs 24 h, lecture des boites ; CT : coloration jaune orange ou rouge brique jamais violette : absence de rduction du TTC par les coliformes. E. coli : provoque une coloration nettement orange avec halo jaune autour des colonies (CF). Klebsiella, Entrobacter et cytrobacter : jaunes ples. Puis on dnombre les colonies : rsultats exprims par 100 ml deau.

2) Etape confirmative : (CF) Repiquage sur milieu de Schubert 44C : E. coli : Gaz (+) dans la cloche de Durham, ractif de Kovacs Indole (+). 6. Recherche des streptocoques fcaux par filtration sur membrane : Cest lensemble des bactries contenant lAg D selon la classification de Lancefield. Cocci (+), en chainette, catalase (), hydrolyse de lesculine en 2 h 44C aprs repiquage sur BEA (Bile Esculine Agar). Par le mme principe (100 ml ou 50 ml : si eau de robinet, source, barrage) ; ce nest pas la mme mthode pour les eaux pollues il faut dabord faire des dilutions. Filtrer une quantit deau travers un filtre. Le milieu utilis : milieu de Slanetz ( lazide de Na). Incubation 37C pendant 48 h. Les colonies sont caractristiques : lisses, lgrement bombes, contour rgulier, pigments rouge, rose ou marron, tte dpingle. Transfrer les colonies sur milieu BEA ; Prchauffer 44C et incuber 44C 5C ; Colonies de coloration noire, traduisant lhydrolyse de lesculine (confirmer la prsence des streptocoques du groupe D). 7. Recherche de clostridium sulfito-rducteur par filtration sur membrane : - Dabord on traite lchantillon deau (c'est--dire on retient les spores par le filtre) ; - Le filtre (membrane poreuse) est dpos sur GVF + additifs (sulfate de Na et Alun de fer) ; - Incubation dans les conditions danarobiose ; - Colonies reconnaissables par lhalo noir.

Hydro-bromatologie 2010/2011 Rq : Eaux potables, de source, de pluie on utilise une quantit de 100 ml ; Mais 20 ml uniquement pour les eaux pollues puis complter 100 ml avec de leau distille strile. Comparaison des 2 mthodes : +++ NPP Eaux peu pollues ou pollues ; Coteuse ; Mobilise beaucoup le personnel ; Encombrante. MF Eaux claires, potables, de source (non pollues) sinon colmatage du filtre ; Plus adapte ; Moins encombrante ; Moins dquipements ; Moins de personnels ; Cot plus conomique ; Rsultats sont meilleurs.

8. Les germes pathognes : Directement lis la potabilit de leau (salmonelles, vibrio). Autres germes : Staphylocoques (eaux de piscine +++), Pseudomonas aeroginusa, Shigelles, virus et parasites peuvent donner lieu une MTH. Les plus spcifiques, responsables dpidmies Salmonelles (typhi et paratyphi) et Vibrio cholera. Les salmonelles : Ce sont des entrobactries qui peuvent survivre plusieurs semaines en milieu sec et plusieurs mois dans leau. Les salmonelles peuvent tre vhicules par les volailles, les animaux sauvages Il existe des porteurs sains. La contamination se fait par les eaux pollues par les excrments des animaux porteurs. Peuvent aussi se retrouver dans les aliments (viande et ufs), essentiellement Salmonella typhi et Salmonella paratyphi A, B et C. Ces germes pntrent par voie digestive ; Aprs une longue incubation, traversent la muqueuse intestinale et envahissent les tissus lymphodes ; Se transmettent dans la lymphe et passent dans la circulation sanguine septicmie. Gnralement, ce schma se fait par consommation dune eau riche en Salmonelle. Les plus exposs sont : enfants, femme enceinte et personnes immunodprimes. Lingestion dune faible quantit diarrhe, fivre et vomissements, rtablissement en quelques jours. Diagnostic : A. Hmoculture : Ralise aprs une semaine ; ncessite une quantit de sang assez importante. B. Coproculture : Milieux slectifs : Decoxylate citrate ; Vert brillant. Ces milieux donnent des rsultats ngatifs avec les autres germes. C. Eaux : 4 tapes :

Hydro-bromatologie 2010/2011 1) Pr-enrichissement : Ensemencer lchantillon deau sur milieu non slectif : Flacon SFM doublement concentr, Tubes simplement et doublement concentrs. Incubation 24 h 37C ; cette tape permet de revivifier les bactries. 2) Enrichissement : A partir du milieu de pr-enrichissement, on ensemence sur SFM simplement concentr. Incubation 24 h 37C. 3) Isolement : A partir du SFM, on ensemence sur une glose slective Hecktoen (3 isolements) Incubation 24 h 37C.

4) Identification : Sur milieu TSI ; incubation 24 h 37C.

Hydro-bromatologie 2010/2011 Culot Pente H2S Gaz S .typhi Jaune Rouge + S .paratyphi Jaune Rouge + Autres srotypes Jaune Rouge +++ + Agglutination : raction avec srum Anti O et Anti H (agglutine respectivement Antigne somatique Ag O et antigne flagellaire Ag H). Prophylaxie : - Contrle bactriologique ; - Dpistage des porteurs sains ; - Vaccination : vaccin TABC 75% typhique (3 injections SC 15 J dintervalle) ; 25% paratyphique.

Vibrio cholerae : Bactrie gram ngatif de la famille des vibrionaceae ; 2 biotypes : V .c .var El Torr, V .c .var Cholerae. En forme de virgule (btonnet incurv), non capsul, non sporul, flagell, arobie fermentative. Responsable de maladies pidmiques trs contagieuses transmission hydrique. Germe limination fcale => selles liquides (15-20 selles/jour) => mort par dshydratation. Source de contamination importante : contamination interhumaine (djections humaines -porteurs-). Rservoirs : Hommes : manque dhygine collective ou individuelle ; manque deau, catastrophes naturelles. Mouches : jouent un rle important dans la transmission du Vibrio Diagnostic : A. Coproculture : Pr-enrichissement des selles dans le milieu EPA (eau peptone alcaline) qui est 10 fois concentr (milieu hypersal), pH = 8,5 germes halotolrants supportant des concentrations de 36 de NaCl, flacon de 500cc. Incubation 24 h 37C. Enrichissement sur TCBS ou GNAB. Isolement sur TSI ou Krigler. Identification : galerie biochimique ou diagnostic srologique (srums agglutinants : Inaba, Agawa).

B. Hydrologie :

Hydro-bromatologie 2010/2011

Les colonies sont rondes, plates, bords rguliers, surface lisse brillante, translucides sous forme de goutte de rose. On ralise une oxydase : si (+) coloration violette. A partir des colonies suspectes suspension dans leau physiologique => agglutination sur srum polyvalent si (+) agglutination sur srums Ogawa et Inaba. Puis on fait un KIA, incubation 24 h 37C : LDH () ; LDC () ; ODC (+).

INFECTIONS BACTERIENNES : Atteintes ORL : Rhinite, rhinopharyngites, amygdalites, angines, otites, conjonctivites. Les germes incrimins responsables : Pseudomonas aeroginusa, responsables des otites externes + ruptions cutanes (tte et cou). Lincidence de ces maladies 5 fois plus importante chez les baigneurs que chez les non baigneurs (eaux de baignade). Affections cutanes : Plaie, blessure contamination des baigneurs ; Infection Staphylocoques (eaux de baignade) ; Aeromonas (eaux douces) ; Vibrion parahmolyticus (milieu marin) ; Mycobactries : Mycobactrium marinum Mycobactrium fortuitum Mycobactrium kansasii Granulomes des piscines.

Hydro-bromatologie 2010/2011 Leptospiroses : maladies de lenvironnement (eau douce) Pntration transcutane cerveau. Entrobactries. Infections virales : Tous les entrovirus : virus Polio, Coxackievirus, Adnovirus, virus de lhpatite A, Rnovirus, Echovirus. Mycoses : Dermatoses mycosiques trs frquentes dans les eaux de baignade ; Epidermophities interdigitalaires ou interplantaires (pieds dathlte) ; Eczma margine de Hebra ; Champignons : Tricophyton mentagraphytes Tricophyton rubrum Epidermophyton flocosum La contamination se fait par contact des pieds avec le sol, cabines douches, bains de vapeurs Candidoses vaginales, orales, cutanes ; Amibes : Naegleria, Entamoeba histolytica. CONTROLE DES PISCINES : Normes : Nombre de baigneurs ; Renouvellement continu de leau ; Traitement continu, chloration. Les paramtres contrler dans une eau de piscine : - Numration des germes totaux ; - Staphylocoques ; Contrle bactriologique - Coliformes totaux et fcaux ; - Pyocyaniques - pH ; - Turbidit ; Contrle physique - Azote ammoniacal ; - Oxydabilit organique ; - Test du chlore en continu. Lgionellose : 1976 : Pneumopathie broncho-alvolaire asphyxiante, mortalit dpasse 15%. La contamination tait faite par la climatisation. 1977 : isolement dune bactrie Legionella pneumophila. Aujourdhui : on dnombre 43 espces de lgionelles dont plus de 20 sont pathognes pour lhomme. Legionella pneumophila srotype LP1 le plus violent pour lhomme. Ce sont des bactries naturellement prsentes dans leau et les bouts, elles sont frquemment rencontres dans les rseaux deaux chaudes, les humidificateurs, arosols, nbulisateurs, l o il y a de leau condense : tours de refroidissement et de climatisation Cibles : ce sont :

Hydro-bromatologie 2010/2011-

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Les tablissements de sant ++; mdico-sociaux ; Les tablissements thermaux ; Les tablissements scolaires et sportifs ; Bureaux, btiments de travail, dhabitations

Rservoirs : Elle vit des les dpts calcaires, canalisations (eaux stagnantes). Ce sont des BGN incurv, mobile. Cultive pH = 6,9 ; T = 35C ; atmosphre riche en CO2. Arobie stricte. Milieu de culture spcial : BCYE (Bouillon Cystine Yeast Extract), elle peut pousser galement sur glose au sang. Colonies : microcolonies avec pigmentations du bleu au rose selon les espces. Caractres : Glu () ; Lac () ; Sac () ; Catalase faiblement (+) ; Nitrate () ; Ure (). Recherche : - Filtration dune quantit deau sur BCYE travers une membrane en polycarbonate ; - Incubation 3-10 J 37C ; - La prsence de lgionella est confirme par repiquage sur milieu slectif, on recherche surtout lexigence en L-cystine ; - Les bactries se caractrisent par une coloration gris bleu pouvant devenir blanchtre aprs vieillissement, bords nets et ross, aspect de verre fritt caractristique.

Rglementation algriennes : Normes : qualit bactriologiques des eaux de boissons. Unit : Bactrie / 100 ml. - Eau traite nombre de CF et CT doit tre nul. - Eau non traite CT < 10, CF = 0 (deux prlvements conscutifs). - Eau prleve partir dun rseau absence totale de CF et CT. - Eaux embouteilles CF et CT nul. - Dans tous ces cas Clostridium et streptocoque doivent tre nul.