Étude pratique des vaisseaux lymphatiques

F. BAZIN ( Maître de Conférence en Biologie)

M.A. BESLIER (technicienne de laboratoire de Biologie)

Ce document a pour but d’apporter les indications nécessaires à cette étude et de donner un aperçu des observations qui peuvent être faites par des étudiants en premier cycle d’études universitaires.

Il ne s’agit pas d’une publication de résultats originaux, mais de la mise à la disposition d’étudiants et d’enseignants d’un document susceptible de leur permettre de faire des observations personnelles ; la confrontation au réel étant le moyen le plus efficace pour s’approprier des connaissances

Les manipulations sur les animaux de laboratoire ont été effectuées à l’occasion de séances de travaux pratiques au Département de Génie Biologique de l’I.U.T. de CAEN. Ces travaux ont été réalisés par des personnes agréées et dans le respect des règles de bonnes pratiques de laboratoire.

A) Injection de ganglions lymphatiques chez la souris :mise en évidence de vaisseaux lymphatiques et de la circulation

de la lymphe

• 1°) Préparation du matérielLa technique utilisée est celle de l’injection de « Bleu de Prusse gélatiné » selon GABE (in « Techniques Histologiques » p.864-865, Masson et Cie édit. 1968).L’injection se fait sous un faible grossissement de la loupe binoculaire. Utiliser une seringue type seringue à insuline avec une aiguille fine au biseau neuf.La solution de colorant est visqueuse et peut boucher l’aiguille. Maintenir seringue et aiguille tièdes dans un bain marie jusqu’au moment de l’injection et vérifier l’écoulement du liquide au moment de procéder à la piqûre.

• 2°) Préparation de la sourisLa souris de préférence mâle, doit être choisie la moins grasse possible. Les femelles multipares ayant beaucoup de tissu adipeux sous-cutané ne doivent pas être utilisées.Les souris de race blanche permettent une meilleure observation de la coloration des vaisseaux se détachant sur le derme clair.La manipulation se fait sur un animal mort, mais encore chaud et souple. La souris est euthanasiées par asphyxie et immédiatement fixée par les pattes sur une plaquette de liège.

3°) Incisions de la peau et préparation des volets cutanés

11

22

3

4

1, 2, 3 : incisions de la peau

4 : décoller la peau en déchirant le tissu conjonctif sous-cutané.

Ne décoller qu’un seul côté à la fois.

5

5 : étaler le volet cutanéet l’épingler sur le liège.

Attention! La face interne de la peau se dessèche rapidement et le tissu conjonctif sous cutané est collant ; ne pas le toucher avec les doigts

Emplacement du ganglion lymphatique inguinal

cage thoracique

abdomen

Repérage d’un ganglion lymphatique inguinal et injection de colorant dans ce ganglion

cuisse

abdomenVolet cutané

veinule

Ganglion lymphatique

inguinal

aiguille

serin

gue

ganglion injecté

Colorant progressant dans un vaisseau

lymphatique

Repérage du ganglion Injection du ganglion

Observation d’un vaisseau lymphatique coloré après injection du ganglion inguinal droit

Ganglion injecté Ganglion non injecté

Veine et veinules confluentes

Vaisseau lymphatique principal et ramifications

Partie de vaisseau non injectée. L’injection se poursuit grâce à une ramification.

sens de migration du colorant au cours de l’injection

Ouverture de la cavité abdominale, observation des organes et repérage de la chaîne des ganglions

mésentériques

1

2

33

foie (masquant l’estomac)

pancréas

rate

coecum

gros intestin

ganglions lymphatiques mésentériques

anse de l’intestin grêle

Veines mésentériques le mésentère est transparent.1, 2 : sections de la paroi abdominale

3 : écarter les deux volets de muscles et les épingler sur les volets cutanés

Injection des ganglions lymphatiques mésentériques et des ganglions lombaires

Le colorant est injecté dans toute la chaîne ganglionnaire mésentérique

rectum

ganglion lombaires

vessie

vésicules séminales

veine cave postérieure

rein gauche

Le rein est déplacépour montrer un ganglion lymphatique rénal coloré

Un ganglion lymphatique rénal est en relation avec un ganglion lombaire par un vaisseau lymphatique

Ganglions lombaires injectés

1

2

34 4

1, 2 : découper la cage thoracique, retirer tout le plastron et le diaphragme

3, 4 : fendre la peau et étaler les deux volets cutanés.

thymus

oreillette droite

ventricule droit

lobes droits du poumon retournés

canal thoracique = vaisseau conduisant la lymphe collectée dans toute la partie postérieure du corps (organes contenus dans l’abdomen, membres postérieurs), vers le sinus veineux.

aorte dorsale

vaisseau lymphatique issu des ganglions mésentériques

rein droit

La lymphe conduite par le canal thoracique retourne dans le sang

Glandes salivaires

veines jugulaires externes

ganglion axillaire coloré après injection du ganglion inguinal gauche

thymus

Ganglions et vaisseaux lymphatiques mis en évidence par les injections de Bleu de Prusse

sinus veineux –oreillette droite

ganglion axillaire canal thoracique

ganglions mésentériques

ganglion rénal

ganglion lombaire

ganglion inguinal

Autres ganglions observables au cours de la dissection (d’après : www. eulep.org/Necropsy_of_the_Mouse)

ganglion caudal

Ganglions pyloriques ou pancréatiques

ganglion brachial

ganglion cervical (plusieurs ganglions collés contre les glandes salivaires )

B) Structure histologique des vaisseaux lymphatiquesLa paroi des vaisseaux lymphatiques est généralement fine, mis à part le cas du canal thoracique ou des gros

vaisseaux des grands Mammifères.

On peut rechercher sur des préparations histologiques les sections de ces vaisseaux. Leur reconnaissance est difficile pour un observateur débutant.

La lumière des vaisseaux lymphatiques est limitée comme dans le cas des vaisseaux sanguins par une couche de cellules étroitement imbriquées. Ces cellules forment un endothélium.

La lymphe s’écoule dans ces vaisseaux suivant une direction imposée par la présence de valvules.

Mésentère de souris traité par une solution de nitrate d’argent : les limites cellulaires sont marquées par un dépôt brun.

Segment de vaisseau lymphatique

tissu adipeux

2 valvules en position de fermeture du vaisseau

Une cellule de l’endothelium

C) Des vaisseaux lymphatiques spécialisés, les vaisseaux chylifèresconduisent les lipides absorbés par l’intestin

Ces vaisseaux sont les premiers vaisseaux lymphatiques découverts (Gaspare Aselli 1581-1626) car ils peuvent être remplis d’une lymphe laiteuse : le chyle. Cet aspect ne s’observe qu’après un repas riche en lipides.

Anse de l’intestin grêle sous-tendue par le mésentère d’après le dessin original de G. ASELLI

Intestin grêle (chien)

mésentère

Veine mésentérique (les artères ne sont pas figurées)

Vaisseaux lymphatiques

Les documents présentés ont été réalisés en faisant absorber de la crème par des anses intestinales de rat. Après lavage de la lumière de l’intestin, des portions de parois ont été conservées dans du formol salé. Des coupes à congélation réalisées dans ces prélèvements ont été colorées par le Noir Soudan (colorant lysochrome, c’est-à-dire : se dissolvant dans les lipides).

Absorption des lipides et formation du chyle

Coupe à congélation d’un segment d’intestin grêle de rat après absorption de crème de lait

1

1 = lumière de l’intestin

2 = pôles apicaux des entérocytes de l’épithélium absorbant : accumulation de lipides

3 = région des cryptes de Lieberkhun

4 = emplacement des chylifères. Les portions de chylifère emplies de chyle sont colorées en noir.

5 = tissu conjonctif de la sous-muqueuse

6 = vaisseau lymphatique collectant le chyle des chylifères

7 = vaisseau sanguin de la sous-muqueuse

8 = muscle lisse circulaire

2

2

3

3

4

4

5

56

6

7

78

8

Schéma d’interprétation

1

Formation du chyle et son acheminement par les chylifères et les vaisseaux lymphatiques de l’intestin

Pôles apicaux des entérocytes en coupe transversale

monoglycérides, acides gras, cholestérol

RELG

chyle

Microvillosités du plateau strié

Pôles apicaux emplis de chylomicrons agglomérés

noyau

chylifèreEpithélium absorbant formépar les entérocytes

Synthèse des chylomicrons par les entérocytes. REL = réticulum endoplasmique lisse, G appareil de Golgi

Vaisseau capillaire sanguin contenant des hématies

Chylifère contenant le chyle (chylomicrons agglutinés)

Les chylifères conduisent le chyle aux vaisseaux lymphatiques situés dans la

sous-muqueuse

artériole

Vaisseau lymphatique

Muscle lisse circulaire

Tissu conjonctif

Villo

sité

inte

stin

ale