etude de l'effet larvicide de l’extrait hydroalcoolique de

République Algérienne Démocratique et Populaire

Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

Université Larbi Ben M’Hidi Oum El Bouaghi

Faculté des Sciences Exactes et des Sciences de la Nature et de la Vie

Département des Sciences de La Nature et de La Vie

N˚d’ordre.... N˚de série....

Mémoire

Présenté pour l’obtention du diplôme de

MASTER

Filière : Biologie Appliquée

OPTION : Biochimie des Molécules Bioactives et Application

Thème:

Présenté par:

Mansouri Fatima ZohraetMessabhia Hadjer

Devant le jury:

Président : Dr. Malki Samira MCB Université Oum El Bouaghi

Examinateur : Mr Boudjouref Mourad MAA Université Oum El Bouaghi

Rapporteur : Mr Zeghib Fouad MAA Université Oum El Bouaghi

Année Universitaire : 2017/2018

Etude de l'effet larvicide de l’extrait hydroalcoolique

de Rosmarinus officinalis à l'égard deCulex pipiens

Dédicace

Je dédie ce modeste travail :

Aux deux être le plus chers au monde,ma mère et mon père

qui m'ont élevé et soutenu tout ou long de ma vie

.A mes chers sœurs et frère ainsi a tout les membres de ma famille

A tous ceux qui m’aiment , ceux que j’aime, ce qui m’ont aidé de prés ou de loin et

A tous ceux qui m'ont encouragé pour arriver jusqu’ici .

Messabhia Hadjer

Je dédié ce travail à Ma famille et aux personnes les plus chères au monde mes chers Parents ;

A mon père; Rien au monde ne vaut les efforts fournis jour et nuit

pour mon éducation et mon bien être. Ce travail est fruit de

tes sacrifices qui tu as consentis pour mon éducation et ma formation.

A ma très chère mère ; Tu es l’exemple de dévouement qui’ n

pas cessé de m’encourager et de prier pour moi.

Et Puisse Dieu, le tout puissant, te préserver

t’accorder Santé, longue vie et bonheur.

A Mes chers sœurs et frères et mes chères amies

A tous ceux qui m'ont encouragé pour arriver jusqu’ici

Mansouri Fatima zohra

Remerciement

Nous remercions avant tous, Dieu « ALLAH » le tout puissant pour la volonté , santé et

et le courage qu’il nous a donné durant toutes les longues années d’études afin que

nous puissions arriver la.

Nous exprimons nos plus vifs remerciements à notre encadreur : Mr Zeghib Fouad

pour son encadrement exemplaire et complet . Son soutient pendant notre travaille , sa

compétence, son aide précieuse pour notre recherche, sa rigueur scientifique et sa

clairvoyance nous ont beaucoup appris. Nous avons l’honneur de vous exprimer nos

très profondes reconnaissances et nos sentiments les plus sincères.

Nous voudrons bien remercier du plus profond du cœur Mme Zeghib Assia ,docteur a

l’université de larbi tebessi a Tebessa pour son estimable participation dans

l’élaboration de ce travail , son encouragements inlassables, son amabilité, elle nous

avez toujours réservé le meilleur accueil, malgré son obligations professionnelles.

Nous tenons à remercier égalementDr. Malki Samiraqui nous a fait l’honneur de

présider ce jury et d’avoir eu l’amabilité de lire ce travail. Nous lui exprimons notre

reconnaissance pour sa bienveillance et sa gentillesse.

Nous exprimons également notre profonde gratitude à Mr Boudjouref Mourad

pour l’intérêt qu’il a porté à notre recherche en acceptant d’examiner et de juger notre

travail et de l’enrichir par leurs propositions.

Nous n’oublions pas de remercier vivement aux ingénieurs de laboratoire pour leur

aide, leur gentillesse, leur soutien et leur encouragement. Merci pour ce que tu fais

pour nous.

Nos sentiments de reconnaissance et nos remerciements vont également à nos

collègues de travail au le laboratoire.

Enfin nous veux dire merci à tous les enseignants du département de biologie

l’université l'arbi ben mhidi pour l’aide pendant notre formation d’étude et Nous

remercions toute personne ayant contribué de près ou de loin à la réalisation de ce

travail. Un grand merci à tous..

Sommaire Liste des figures

Liste des tableaux

Liste d’abréviations

I. Introduction .........................................................................................................................................1

Partie bibliographique

Chapitre 1 : présentation de la plante

1. Généralités ......................................................................................................................................5

2. Description botanique ...................................................................................................................5

3. Systématique de la plante .............................................................................................................6

4. Origine et distribution ...................................................................................................................7

5. L’utilisation en médecine traditionnelle .....................................................................................7

6. Les compositions chimiques : ......................................................................................................7

7. Activité biologique ........................................................................................................................7

7.1. Activité antioxydante .......................................................................................................... 8

7.2. Activité antibactérienne : ..................................................................................................... 8

7.3. Activité antiviral .................................................................................................................. 8

7.4. Activité anti-inflammatoire : ............................................................................................... 9

7.5. Activité anti proliférative : .................................................................................................. 9

7.6. Activité antidiabétique : ...................................................................................................... 9

7.7. Activité anti-ulcérogène .................................................................................................... 10

7.8. Activité antidépresseur ...................................................................................................... 10

7.9. Activité insecticide ........................................................................................................... 10

Chapitre 2 : présentation de l’espèce

1. Généralités ................................................................................................................................... 12

2. Présentation de l’espéce culex pipiens ..................................................................................... 12

3. Position systématique ................................................................................................................. 13

4. Cycle de développement de moustique .................................................................................. 14

4.1. Œufs ................................................................................................................................... 14

4.2. Larve .................................................................................................................................. 15

4.3. Nymphe ............................................................................................................................. 16

4.4. Adulte ................................................................................................................................ 16

5. Aperçu général sur les moyens de lutte contre les moustiques ............................................. 17

6. Différents moyens de lutte antivectorielle ............................................................................... 18

6.1. Lutte chimique ................................................................................................................... 18

6.2. Lutte physique ................................................................................................................... 19

6 .3. Lutte biologique ................................................................................................................ 19

Partie pratique

Matériels et méthodes

1. Objectif ......................................................................................................................................... 22

2. Matériels et réactifs : .................................................................................................................. 22

3. Présentation de l’espèce végétale ............................................................................................. 22

3.1. Collecte de la plante .......................................................................................................... 22

3.2. Méthode d’extraction ......................................................................................................... 23

3.3. Détermination du rendement ............................................................................................. 28

4. Présentation de l’insecte ............................................................................................................ 28

4.1. L’échantillonnage et technique d’élevage ........................................................................ 28

4.2. Tri les larves et l’identification de l’espèce culex pipiens ................................................. 29

4.3. Technique d’élevage : ........................................................................................................ 30

4.3.1. Elevage des larves : ........................................................................................................ 30

4.3.2. Elevage des nacelles. ...................................................................................................... 30

5. Test de solubilisation .................................................................................................................. 31

6. Test de toxicité ............................................................................................................................ 32

6.1. Détermination du taux de mortalité ................................................................................... 33

6.2. Analyse statistique ............................................................................................................. 33

Résultats

1. Rendement de l’extrait hydroethanolique de Rosmarinus Officinalis ................................. 35

2. Test de toxicité ............................................................................................................................ 35

2.1. Evaluation de l’effet larvicide de l’extrait de R. officinalis avec la concentration de «151

mg/mL» à différentes périodes de temps (24,48 et 72h). ......................................................... 35

2.2. Etude de l’effet de temps d’exposition à la concentration de 151mg/mL ..................... 36

2.3. Evaluation de l’effet larvicide de l’extrait de R. officinalis avec une concentration de

«604 mg/mL » à différentes périodes de temps (24, 48 et 72h). .............................................. 37

2.4. Etude de l’effet de temps d’exposition à la concentration de 604 mg/mL .................... 37

2.5. Etude de l’effet de concentration-test dans la même période de traitement ………...38

Discussion

1. Rendement de l’extrait hydroethanolique de Rosmarinus Officinalis .................................... 41

2. Les tests de toxicité ........................................................................................................................ 42

Conclusion : ......................................................................................................................................... 45

Références bibliographique

Résumé

.مهخص

Listes des figures

N° Titre Page

01 Rosmarinus officinalis. 05

02 Femelle de Culex pipiens au cours d'un repas sanguin.

13

03 Cycle de Culex pipiens .

14

04 œufs de culex.

15

05 larve de culex .

15

06 Nymphe du culex pipiens .

16

07 Nymphe mobile de sp.

16

08 Culex pipiens adulte ou imago.

17

09 Localisation géographique de la zone d’etude Djebel Belkfif, wilaya de

Tébessa.

23

10 Photographie représentant Les étapes de l’extraction hydroalcoolique

(photos originales).

24

11 Photographie représente Montage de Rotavapeur (photo originale).

25

12 L’extrait obtenu après l’évaporation (photo originale).

25

13 Séchage de l’extrait à l’étuve de type « KOTTERMANN » (photo

originale). 26

14 Photographie représente l’extrait hydro-éthanolique final (Photo

personnelle).

26

15 schéma représente le processus de l’extraction hydroalcoolique.

27

16 Site urbain de Hammamet (photo originale).

28

17 Cristallisoirs contient l’enchantions du Culex pipiens (photo originale).

29

18 Siphon de Culex pipiens (photo originale).

29

19 Nacelles de Culex pipiens (photo originale).

29

20 L’élevage des larves et des nacelles du Culex pipiens (Photo originale).

30

21 Photographie de la cage.

31

22 Photographie représentant les tests toxicologiques. 32

23 Diagramme de la variation du pourcentage de mortalité des larves L4

de Culex pipiens pour les deux concentrations-test (151 et -604

mg/mL) de l’extrait hydroethanolique de Rosmarinus officinalis après

(24, 48 et 72h) d’exposition .

39

Listes des tableaux

N0

Titre

Page

01 Rendement de l’extraits hydroéthanolique de Rosmarinus officinalis .

35

02 Effet de l’extrait de R. officinalis appliquée sur des larves de

quatrième stade nouvellement exuviées de Culex pipiens, sur le taux

de pourcentage de mortalité corrigée à différentes périodes de

temps (24, 48 et 72 heures) avec concentration «151 mg/mL » (m±

sd, n=7 répétitions comportant chacune 20 individus).

36

03 Effet de la durée d’exposition (24, 48 et 72h) à la concentration-test

de 151mg/mL de l’extrait hydroéthanolique de R. officinalis sur le

pourcentage de mortalité des larves L4 de Culex pipiens (ANOVA)

36

04 Effet de l’extrait de R. officinalis appliquée sur des larves de

quatrième stade nouvellement exuviées de Culex pipiens, sur le taux

de pourcentage de mortalité corrigée à différentes périodes de

temps (24, 48 et 72 heures) avec concentration «604 mg/mL » (m±


37

05 Effet de la durée d’exposition (24, 48 et 72h) à la concentration-test

de 604 mg/mL de l’extrait hydroéthanolique de R. officinalis sur le

pourcentage de mortalité des larves L4 de Culex pipiens (ANOVA).

38

06 Effet des deux concentrations-test de l’extrait hydroéthanolique R.

officinalis sur le pourcentage de mortalité des larves L4 de Culex

pipiens dans chaque période d’exposition (24,48 et 72h) .

39

Abréviations

Cx : culex.

R.o : Rosmarinus officinalis.

DMSO : diméthylsulfoxyde.

ml : millilitre.

ppm : partie par million .

P : Pseudaletia .

T : Trichoplusia.

VFVR : Virus de la Fièvre de la Vallée du Rift.

VWN : Virus de le West Nile.

HSV : Virus l’Herpès Simplex.

VRS : Virus Respiratoire Syncytial.

VIH : Virus de l’Immuno déficience Humaine.

OMS : Organisation Mondiale de la Santé.

Etude de l'effet larvicide de l’extrait hydroalcoolique de Rosmarinus officinalis à l'égard de Culex pipiens

[1]

I. Introduction Les Culicidae, communément connus sous le nom de moustiques, comptent aujourd'hui plus

de 3200 espèces et une quarantaine de genres répartis presque partout dans le

monde(Zerroug et al.,2017). Il sont des vecteurs potentiels de maladies aussi bien pour

l’homme que pour les animaux (Ghrabe et Bouattour, 1992). Cette famille contient les

genres Culex, Aedes et Anopheles(Larhbali et al.,2010).

Dans le monde, les espèces de moustiques notamment du genre Culex sont responsables de

la transmission de maladies parasitaires telles la filariose, la fièvre jaune et le virus West

Nile (El-Akhal et al.,2015).

La faune Culicidienne d'Algérie a fait l'objet d'un grand nombre de travaux qui

s'intéressent plus particulièrement à la systématique, la biochimie, la morphométrie, la lutte

chimique et biologique à l'égard des moustiques (Bouabida et al., 2012).

Dans les campagnes de lutte antimoustique, les insecticides de synthèse constituent les

seuls moyens de lutte. Ces préparations, bien qu’elles se soient très efficaces contre les

moustiques, ils sont révélés très toxiques et leurs effets collatéraux sur les écosystèmes

naturels restent inestimables vu leur large spectre d’action ; souvent sur des organismes non

cibles. S’ajoute aussi à ces à inconvénients, le problème de développement de résistance aux

insecticides chimiques, chez les insectes traités (Kemassi et al.,2015). Les larvicides

synthétiques perturbent également les systèmes de contrôle biologique naturel qui

aboutissent parfois à un développement généralisé de la résistance. Ce phénomène a

déclenché et encouragé le développement de techniques alternatives utilisant des produits

naturels (El-Bokl, 2016).

En quête de nouvelles techniques pour luter contre les insectes nuisibles, les possibilités

d’utiliser les substances secondaires des plantes contre les insectes nuisibles, a suscité

beaucoup de travaux (Kemassi et al.,2015), le contrôle intégré des moustiques est nécessaire

à tous les stades. Des études ethnobotaniques et en laboratoire ont révélé l'existence de

plantes insecticides appartenant à différentes familles dans différentes parties du monde. Des

extraits de solvants bruts de parties de plantes appartenant à différentes familles, d'huiles

essentielles ou de leurs fractions chromatographiques présentent différents niveaux de

bioactivité contre différents stades de développement des moustiques. Ces derniers temps,

les produits chimiques dérivés des plantes ont été projetés comme la clé du contrôle durable


[2]

des moustiques en raison du fait qu'ils sont écologiquement sûrs. Plus encore, les bioproduits

à base de plantes sont hautement dégradables et non toxiques pour les humains (Awosolu et

al., 2018).

L'utilisation des produits naturels devient une perspective de recherche intéressante, c’est

ainsi que nous nous sommes intéressé dans cette étude sur l’évaluation de l’activité larvicide

de l’extrait hydroéthanolique de la partie aérienne de la plante Rosmarinus officinalis sur les

larves du quatrième stade de développement de l’espèce de moustique Culex pipiens.


II - Partie bibliographique


Chapitre 1 : présentation de la plante


[5]

1. Généralités Rosmarinus officinalis L appartient à la famille Lamiaceae (Wang et al.,2012). Cette

famille compte 2700 espèces réparties en 31 genres (Claire, 1994). Le romarin est une

plante domestique commune cultivée dans de nombreuses régions du monde. Il est

largement répandu en Algérie (Boutekedjiret et al.,2003), Il est essentiellement utilisé en

médecine traditionnels, cosmétique et phytopharmacie (Boutabia et al.,2016).

2. Description botanique Rosmarinus officinalis L (fig.1) est un arbrisseau ligneux très odorants, Sa taille peut

atteindre 2 m (kothe, 2007). Ses Feuilles linéaires à marge révolutée, gaufrées, verdâtres en

dessus, hispides blanchâtres en dessous. La Calice en cloche, bilabié, et la Corolle bleue pâle

ou blanchâtre à 2 lèvres, la supérieure entière ou à peine marginéeet l'inférieure est trilobée

(Quezel et Santa, 1963). Ses fleurs bleues s’épanouissent tout au long de l’année et attirent

de nombreux insectes (Damerdji et Ladjmi, 2014).

D’après Claire 1994 :

Nom français : romarin, encensier, herbe aux couronnes, herbe aux troubadours.

Nom Anglais : rosemary, old man.

Nom Allemagne : rosmarin, weihrauchkrait, bodekrait.

Noms vernaculaires : Klil, Hassalhan , Iazir (Quezel et Santa, 1963).

Figure 1. Rosmarinus officinalis (Aouati, 2016 ).


[6]

3. Systématique de la plante La systématique du genre Rosmarinus n'a pas toujours été homogène, ce qui se traduit par

de nombreux noms d'espèces cités par les auteurs qui ne sont pas tous en usage

actuellement.

Des auteurs allemands et italiens mentionnent 4 espèces répertoriées surtout en Afrique du

Nord a savoir: Rosmarinus chilens, Rosmarinus laxifloru, Rosmarinus Iavandulaceus et

Rosmarinus tournefoni.

La famille des Iamiacées, présentent des variations en fonction des différents genres. Ces

genres sont classés en 9 groupes suivant des détails anatomiques communs. Ainsi les genres

Rosmarinus et Salvia forment un groupe et possèdent le caractère commun de n'avoir que 2

étamines (Claire, 1994).

Selon Begum etces collaborateur(2013), la systématique botanique de la plante est

comme suit :

Règne : Plantae

Sous règne : Tracheobionta

Embranchement : Spermatophyta

Sous embranchement : Magnoliophyta

Classe : Magnoliopsida

Sous classe : Asteridae

Ordre : Lamiales

Famille : Lamiaceae

Genre : Rosmarinus L.

Espèce : Officinalis


[7]

4. Origine et distribution Rosmarinus officinalis L est une plante largement distribué en Europe, en Asie et en Afrique

et notamment en bassin Méditerranée (Giedré et al.,2013). Il est rare et ne se manifeste que

dans quelques sites isolées en moyen orient (Yazina, 2010).

5. L’utilisation en médecine traditionnelle Rosmarinus officinalis L est une plante médicinale de la famille des labiées, il a été rapporté

qu’il à un potentiel dans le traitement de la prévention de plusieurs maladies. Il est était

utilisé pour soulager les coliques néphrétiques, l’asthme, troubles spasmogéne, ulcére

gastrique, maladies inflammatoires, hépatotoxicité, athérosclérose et ischémie cardiaque

(yacine et al., 2017).

Les feuilles de romarin ont été utilisées en médecine populaire aussi pour traiter les

rhumatismes, la névrose, les éczémas et les infections de la bouche (Manafi et al.,2014).

AI-Sereiti et al (1999), a rapporté que les feuilles et les somités de romarin ont été utilisé

comme antispasmodique dans les dysménorrhée aussi comme analgésique, carminatif,

cholagogue, duirétique, expectorant, antiépileptique, amélioré la fertilité humaine et été

aussi utilisé pour stimuler la croissance des cheveux.

6. Les compositions chimiques : L’analyse phytochimique des extraits d'acétate d'éthyle et de n ,hexane de Rosmarinus

officinalis révèle la présence de plusieurs constituant : les diterpènes, les flavonoïdes, les

acides triterpéniques et l’acide rosmarinique (Vassiliki et al., 2013).

Zaouali et al (2010), ont identifié 25 composants de huile essentielle du Rosmarinus

officinalis,dont les composants majeurs :1.8 cinéole, le camphre, l’alpha-pinène et le

camphéne.

Selon (Edrah et al., 2017), Les feuilles de Rosmarinus officinalis contiennent aussi des

tanins, des alcaloïdes et des saponines.

7. Activité biologique En plus de leurs utilisations traditionnelles, Rosmarinus officinalis possède de nombreuses

propriétés biologiques, parmi lesquelles on cite les plus importantes :


[8]

7.1. Activité antioxydante

Les extraits méthanoliques de romarin contient essentiellement d’acide coromarique et

d’acide romarique, et les huiles essentielles de ces graines contient une quantité considérable

d’antioxydant (Naciye et al.,2008).

Celiktaq et al (2007), a conclu que Les extraits éthanolique, méthanolique, et propanolique

de Rosmarinus officinalis montrent une grande capacité en terme de naturalisation des

radicaux libres.

Silvia et al (2006), ont étudié la composition en polyphénols par la méthode de folin-

ciocaulteau de Rosmarinus officinalis par différent solvants, les extraits de l’acétone et

méthanole contient le carnosol et l’acide carnosique, alors que l’extrait aqueux ne contient

que l’acide romarinique.

Nakatani and Inatani (1984), ont rapporté que ‘a partir des feuilles de romarin deux

manière antioxidant pirosomanol et isorosmanol présente une activité élevée.

7.2. Activité antibactérienne :

Rosmarinus officinalis est une plante médicinale utilisé efficacement par les praticiens

traditionnels dans le traitement de diverses maladies infectieuses. Mouas et al (2017), ont

évalué l’activité antibactérien de l’huile essentielle et de l’extrait méthanolïque du romarin,

ces derniers ont été très efficace contre 5 souches bactériennes : Staphylococcus aureus,

Enterococcus faecalis, Bacillus cerreus, Escherichia coli et Pseudomonas aeroginosa.

Tandis que Boutabia et al(2017), ont étudié la méthode d'aromatogramme de l’huile

essentielle du romarin, et leurs résultats ont montré que les huiles essentielles possède une

activité antibactérienne efficace contre les bactéries gram négatif : Escherichia .coli et

acinetobacter Sp , et les bactéries gram positifStaphylococcus aureus.

7.3. Activité antiviral

Plusieurs travaux ont été entrepris pour évaluer l’activité antiviral. L’extrait hydro

alcoolique de Rosmarinus officinalis possède des effets thérapeutiques sur les infections par

le virus l’herpès simplex (HSV) par des effets prédominants sur le stade précoce de la

réplication (Yousfi et Parsania, 2015).

Leplat (2017) rapporté que l'acide carnosique constituant actif de R. officinalis montre la

plus grande activité anti-VRS (Virus Respiratoire Syncytial) De plus, il inhibe l'activité

d'une protéase du VIH (Virus de l'Immunodéficience Humaine).


[9]

7.4. Activité anti-inflammatoire :

Selon Rafie et al (2017), Rosmarinus officinalis a montré une activité anti-inflammatoire.

L'huile essentielle et les extraits que contenaient plusieurs composés biologiquement actifs

de romarin inhibe significativement la migration des leucocytes in vivo, cela réduit le

nombre de leucocytes sur le site d’inflammation, ce que entraine un réponses anti-

inflammatoire.

Altinier et al(2007), ont étudié l’activité anti-inflammatoire des feuilles de Rosmarinus

officinalis par différents solvants : n-hexane, chloroforme, et méthanol. Les extraits de n-

hexane et de chloroforme ont montrée une activité anti-inflammatoire, notamment le

chloroforme avec une activité similaire à celle d’un médicament anti-inflammatoire non

stéroïdien : l’indométacine.

7.5. Activité anti proliférative :

Nombreuses études sur les mécanismes anticancéreux de Rosmarinus officinalis.selon

Rafie et al (2017), le romarin a affiché des activité antiprolifératives importantes contre

plusieurs cellules cancéreuses humaine où les composés majeurs présente dans l’extrait de la

plante tel que l’acide carnosique, le carnosol et l’acide rosemarinique ont induit l’appoptose

de ces cellules cancéreuses à travers de la production d’oxyde nitrique et l’acide carnosique.

L’extrait éthanolique de Rosmarinus officinalis a provoqué une activité antiproliférative

différentielle sur les lignées cellulaires de sein et de leucémie (Cheung et Tai, 2007).

7.6. Activité antidiabétique :

Le romarin est largement utilisé dans la médecine traditionnelle pour le traitement de

l'hyperglycémie.

Des effets hypoglycémiants ont été obtenus, par l'extrait éthanolique du romarin qui a un

effet optimal chez les lapins normo-glycémiques et chez les lapins hyper-glycémiques avec

une dose de 200mg/kg de l'extrait et cette activité est indépendante des effets de l‘insuline

(FADI, 2011).

Al-Jamal et Alqadi (2011), ont déterminé l’activité hypoglycémiante de l’extrait aqueux de

Rosmarinus officinalis sur le glucose plasmatique des rats diabétiques. L’administration de

romarin montre une diminution de 20% du taux de sucre.


[10]

7.7. Activité anti-ulcérogène

Le prétraitement répété avec l’extrait de Rosmarinus officinalis a induit un effet protecteur

significatif à des degrés variables contre les lésions de la muqueuse gastrique induites par

l'éthanol, ce extrait donnait un taux de guérison de 96,1% (Alkofahi et Atta, 1999).

7.8. Activité antidépresseur

Machado et al(2012), suggèrent un effet motivie sur le système nerveux par des extraits

éthanoliques de Rosmarinus officinalis qui se traduit par un effet antidépressif de l’acide

ursolique présent dans cette plante.

L'huile essentielle de cette plante a également un effet antidépresseur dont son principal

composé le 1,8-cinéole, ce qu’a été démontré par Daniel et al (2013), en étudiant l’action

protectrice thérapeutique de Rosmarinus officinalis en tant qu’antidépresseur, puisque les

effets de tous les extraits, et les huiles essentielles sont similaires à ceux produits par les

antidépresseurs classiques.

7.9. Activité insecticide

Les huiles essentielles de Rosmarinus officinalis se sont révélées ovicides et répulsives

respectivement vis-à-vis des trois espèces de moustiques: Anopheles Stephensi, Aedes

aegypti et Culex quinquefasciatus (Prajapati et al.,2005).

Les composants de romarin sont considéré comme réactifs dans certain nombre

d’insecticides commerciaux. Les huiles de romarin commercial possèdent une activité

insecticides contre les larves de Pseudaletia unipuncta et Trichoplusia ni, parmi les

composants individuelle le compher était le plus toxique pour les larves de P. unipuncta

etl'α-terpinéol était le composé le plus toxique pour les larves de T. ni(Murray et al.,2008).

Nia et al (2015), ont trouvé que l’extrait éthérique de feuilles de Rosmarinus Officinalis

étaient efficaces contre Myzus persicae.


[11]

Chapitre 2 : présentation de l’espèce


[12]

1. Généralités Les moustiques sont des Diptères nématocères de la famille des Culicidés, qui comporte

environ 3500 espèces réparties en 3 sous-familles : Toxorhynchitinés, Anophelinés et

Culicinés (Balenghien, 2007). La famille Culicidae serait toujours basé sur le genre Culex,

qui il a une distribution cosmopolite et comprend 768 espèces réparties en 26 sous-genres.

Le sous-groupe de Pipiens comprend quatre espèces: Cx.australicus, Cx. globocoxitus, Cx.

pipiens, et Cx. Quinquefasciatus (Harbach, 2012). Les prospections réalisées de 1995 à

1997, ont permis d’identifier 6 espèces de Culicidae. Elles appartiennent aux deux seules

sous familles représentées en Algérie, à savoir: les Culicinae et les Anophelinae, ces espèces

sont réparties dans quatre genres, le genre Culex avec 4 espèces : Culex pipiens, Culex

hortensis ,Culex theileri et Culex mimeticus (Berchi et al.,2012).

En Algérie, Culex pipiens L est l'espèce de moustique qui présente le plus d'intérêt en

raison de sa large répartition géographique, de son abondance et de sa nuisance réelle,

surtout dans les zones urbaines (Bendali et al.,2001).

2. Présentation de l’espèceculex pipiens Culex pipiens C’est un moustique extrêmement commun dans l’ensemble des zones

tempérées d’Europe, d’Afrique, d’Asie, d’Amérique du Nord et du Sud, et de l’Australie.

Très ubiquiste, ses gîtes larvaires sont très variés, souvent d’origine anthropique : vide

sanitaire, petit bassin, conteneur abandonné, fossé, marais… (Balenghien, 2007). Les Cx.

pipiens plus abondant à la fin de l'été et au début de l'automne (Michael et wilson, 2008).

Les stades de leur vie immatures préfèrent les habitats aquatiques avec un contenu organique

élevé (Jiafeng et al.,2011).

Actuellement, les caractères morphologiques utilisés pour les moustiques Culex sont

principalement la forme et la distance des bras du phallosome dorsal et ventrale chez les

mâles et le profil de la structure du siphon larvaire (Scott et al.,2015). La forme des bras

dorsaux et ventraux et la plaque latérale distinguent facilement les mâles (Harbach, 2012).

palpes allonges chez le male, plus longs que la trompe et plus courts que la trompe chez la

femelle ( Muriel, 2005).

Les femelles et les larves ne sont pas faciles à différencier sur le plan morphologique

(Norbert et al.,2012).


[13]

les femelles en diapause peuvent obtenir suffisamment d'énergie à partir d'un seul repas de

sang pour survivre à l'hiver (Carl et Hans, 1989)

Figuer 2. Femelle de Culex pipiens au cours d'un repas sanguin (Balenghien,2007).

3. Position systématique Le moustique est le nom commun des insectes de la famille des Culicidés qui forme le

sous ordre des nématocères dans l’ordre des diptères. La famille des Culicidés se divise en

trois sous-familles : les Culicinae, les Anophelinae et les Toxorhynchitinae .

Une liste taxonomique rapportée par Brunhes et al (1999), mentionne 66 espèces présentes

en Algérie. Elles appartiennent à deux sous-familles : Culicinae et Anophelinae et se

répartissent en 6 genres : Anopheles, Culex, Culiseta, Aedes, Orthopodomyia et

Uranotaenia (Benserradj, 2015).

La position systématique de l’espèce étudiée selon Linnée (1758) est la suivante :

Règne Animalia

Embranchement Arthropoda

Sous Embranchement Antennata

Classe Insecta

Sous Classe Pterygota

Ordre Diptera

Sous Ordre Nematocera

Famille Culicidae

Sous Famille Culicinae

Genre Culex

Espèce Pipiens


[14]

4. Cycle de développement de moustique Le cycle de Culex pipiens (fig.3) comporte, comme celui de tous les insectes, 4 stades :

l’oeuf, la larve, la nymphe et l’imago ou adulte. Il se décompose en deux phases : une phase

aquatique pour les trois premiers stades, et une phase aérienne pour le dernier stade. Dans

les conditions optimales, le cycle dure de 10 a 14 jours (Resseguier, 2011).

Figure 3. Cycle de Culex pipiens (Muriel, 2005).

4.1. Œufs

Les femelles de Culex (fig.4) déposent leurs œufs sous forme de radeaux d'œufs à la

surface de l'eau (Michaelakis et al.,2005). Les œufs sont pondus dans l’eau, claire en

général, mais on en trouve également dans les eaux polluées, avec des matières organiques

qui permettront aux larves de se nourrir, il sont déposés en paquets formant une nacelle qui

flotte sur l’eau, cette nacelle mesure 3-4 mm de large, l’éclosion se produit environ 24h à

48h après l’oviposition chaque œuf est protégé par une coque étanche à l’eau et résistante à

la dessiccation pour sortir de l’œuf, les larves utilisent un bouton d’éclosion, petite dent

située en arrière de leur tète (muriel, 2005). Les œufs pondus on pleine eau éclosent en

quelques jours selon la température ambiante de milieu (Benkalfate, 1991).


[15]

Figure 4. Œufs de culex (Resseguier, 2011).

4.2. Larve

Les larves de Culex pipiens(fig.5) se retrouvent dans les gîtes les plus divers des milieux

urbain et périurbain, plus particulièrement ceux riches en matières organiques (Berchi et al.,

2012). Ils sont aquatiques, mobiles, phytophages, zoophages ou saprophages, se nourrissent

du plancton ; des soies recourbées portées par les pré mandibules amènent les aliments vers

la bouche. Elles subissent 4 mues. Elles respirent l’air atmosphérique via un siphon caudal

(Balenghien, 2007).

Les larves du premier stade sortent de l'œuf soit par un opercule en général apical, soit en

déchirant la paroi. A leur naissance, elles mesurent 1 mm de longueur et sont à peine

visibles, a chaque mûe la larve augmente de taille, au quatrième stade elle atteint 5 à 6 mm

(Benkalfate, 1991).

La croissance pondérale des individus de C. pipiens est relativement rapide pendant les 2

premiers stades larvaires, et lente par la suite (Bendali et al.,2001).

Figure 5. Larve de culex (Resseguier, 2011).


[16]

4.3. Nymphe

La nymphe (fig.6) ne se nourrit pas, mais puise dans les réserves stockes au stade larvaire.

Elle reste généralement a la surface de l’eau mais plonge des qu’elle est dérangée, La tète et

le thorax fusionnent pour donner un cephalo-thorax sur lequel on trouve deux trompes qui

permettent a la nymphe de respirer. Sa forme globale (fig.7) rappelle celle d’un point

d’interrogation. Les orifices anal et buccal étant bouchés, ces palettes natatoires, situées sur

l’abdomen, lui permettent de se déplacer (Muriel, 2005).

figure 6. Nymphe du culex pipiens

( Resseguier, 2011)

figure 7. Nymphe mobile de sp

(Muriel, 2005).

4.4. Adulte

Ils sont aériens. Leur corps et leurs ailes sont recouverts de poils, le bord postérieur des

ailes est frangé d’écailles ; les antennes sont plumeuses chez le mâle, verticillées chez la

femelle. Si les mâles et les femelles se nourrissent de jus sucré, seules les femelles sont

hématophages (le sang constituant un apport protéique pour la maturation des œufs).

L’adulte est de taille moyenne, globalement brun clair, avec des bandes antérieures claires

sur les tergites abdominaux (Balenghien, 2007). Pour leur déplacement ils ne dépassent pas

3 km de distance, sauf lors de vent violent qui pousse les Culex beaucoup plus loin.

L’accouplement se produit dans les 48 heures suivant l’émergence des femelles et avant le

premier repas sanguin.

Après l’accouplement, la femelle part à la recherche d’un hôte pour se nourrir de sang

nécessaire à la maturation des ovules (Resseguier, 2011).


[17]

Figure8.Culex pipiens adulte ou imago (femelle en haut à droite, mâle en bas à droite).

(Resseguier,2011).

5. Aperçu général sur les moyens de lutte contre les

moustiques

L'ambition des moyens de lutte est de mettre en évidence les dangers liés aux pesticides

qui justifient la recherche de méthodes alternatives. Actuellement, près de 750 000

personnes contractent, chaque année, une maladie chronique telle que les cancers suite à une

exposition à des pesticides. Plus de 20 000 décès accidentels et 3 millions

d’empoisonnements liés aux pesticides sont annuellement recensés dans le monde (Momar

et al., 2011).

Dans les campagnes de lutte antimoustique, les insecticides de synthèse constituent la

seule moyen de lutte. Ces préparations, bien qu’elles se soient très efficaces sur les

moustiques, ils sont révélés très toxiques et leurs effets collatéraux sur les écosystèmes

naturels restent inestimables vu leur large spectre d’action ; souvent des organismes non

cibles sont également affectés (Kemassi et al., 2015).


[18]

6. Différents moyens de lutte antivectorielle La lutte antivectorielle, par définition, concerne les vecteurs. Il faut savoir reconnaître

l’espèce et évaluer son ineffectivité. Donc la lutte antivectorielle pourra cibler les gîtes de

pontes ou les lieux de repas et de repos des moustique à l’intérieur et à l’extérieur des

habitations humaines et animales selon les comportements, spontanés ou induits, des

vecteurs ciblés (Carnevale et al.,2009).

Il est possible de lutter contre les épidémies en procédant à des pulvérisations spatiales

d’insecticides pour détruire les moustiques adultes ou encore détruire leurs larves par des

moyens appropriés. Pour réduire le risque d’infection (OMS, 1999).

La capacité de Culex pipiens à s’adapter à tous les biotopes lui permet d’être vecteur de

plusieurs agents pathogènes responsables de maladies infectieuses parfois mortelles comme

le virus responsable delà fièvre de la vallée du Rift (VFVR), le virus du Nil occidental

(VWN), le paludisme, la leishmaniose, l’encéphalite japonaise (Aouati, 2016).

Le moustique Culex pipiens, largement reparti en Afrique du Nord, a été incriminé dans la

transmission de VWN et du VFVR dans d’autres régions du monde (Amraoui, 2012).

Les efforts mondiaux de lutte contre le paludisme ont produit des résultats remarquables

au cours des 15 dernières années. En 2015, on estimait à 214 millions le nombre d’épisodes

de paludisme et à 438 000 le nombre de décès dus à cette maladie. Une grande part de la

diminution récente de la charge mondiale du paludisme a été obtenue par le passage à plus

grande échelle d’interventions de lutte antivectorielle essentielles, à savoir la délivrance de

moustiquaires imprégnées d’insecticide à longue durée d’action et la réalisation de

pulvérisations intra domiciliaires d’insecticide à effet rémanent (OMS, 2017).

6.1. Lutte chimique

La lutte chimique se fait à l’emploi des produits synthétiques ou végétaux qui tuent les

insectes par ingestion ou par contact. Le mode d’application des produits est fonction de

l’écologie du vecteur et du stade visé (Bréhima, 2008).

Elle est basée sur l’utilisation d’insecticides chimiques. Ce sont des substances naturelles

d’origine végétale, animale, minérale ou de synthèse présentant une toxicité préférentielle

pour les insectes, Une substance ne peut être utilisée comme insecticide que si elle possède

les propriétés suivantes : une forte toxicité pour les insectes cibles seulement et sans


[19]

conséquence ni pour le reste de la faune, ni pour la flore ; une stabilité et une rémanence

importante, mais non excessive ; être dégradable dans l’environnement (Thierry, 2011).

6.2. Lutte physique

Elle consiste à modifier le biotope de l’insecte en supprimant tous les facteurs favorables à

son développement. Cette technique est la plus anciennement connue, À l’assainissement du

milieu urbain, une autre méthode de lutte physique complémentaire pourrait être adoptée :

l’utilisation de billes de polystyrène dans les gîtes clos (Thierry, 2011).

Elle consiste à supprimer définitivement les gîtes larvaires par des travaux de génie

sanitaire, ou mieux encore, à prévenir l'apparition de gîtes nouveaux, en veillant à

l'observance de certaines prescriptions dans la réalisation des travaux d'urbanisation et de

génie civil (Benkalfate, 1991).

6 .3. Lutte biologique

La lutte biologique contre les moustiques et autres espèces nuisibles consiste à introduire

dans leurs biotopes des espèces qui sont leurs ennemis naturels, par exemple, des parasites,

des micro-organismes pathogènes ou des prédateurs. Il peut s’agir d’insectes, de virus, de

bactéries, de protozoaires, de champignons, de végétaux divers, de nématodes ou de

poissons (OMS, 1999).


III – partie pratique


Matériels et méthodes


[22]

1. Objectif Le présent travail a pour objectif l'évaluation l’activité larvicide de l’extrait hydro-

éthanolique de la plante Rosmarinus officinalis sur les formes larvaires de moustique

domestique de l’espèce Culex pipiens.

2. Matériels et réactifs : - Rotavapeur ( Laborota 400.efficent).

- Etuve (Kottermann).

- Balance analytique.

- Vortex.

- Micropipettes.

- Plaque chauffante.

- Ethanol 96% et absolu.

- Méthanol.

- Diméthylsulfoxyde (DMSO).

- Eau distillée.

- Verrerie divers.

3. Présentation e l’espèce végétale Le matériel végétal utilisé pour cette étude est la partie aérienne (tiges et feuilles) de

l’espèce Rosmarinus officinalis, qui appartient de la famille Lamiaceae.

3.1. Collecte de la plante

La plante Rosmarinus officinalis (Fig.9 ) a été collectée au mois d’Octobre 2015 au stade

de floraison, au niveau d’un site de Djebal Belkfif à 35°33’28’Nord et 7° 59’2’Est de la

commune de Hammamet à la wilaya de Tébessa .Le site appartient à un milieu tempéré. La

plante a été rincée et séchée à l’ombre pendant quinze jours.

Celles -ci ont été ensuite pesées et récupérées dans des sacs en papier afin de les conserver

jusqu’au moment de l’expérience.

L’identification botanique de l’espèce a été réalisée au niveau du département de biologie

des êtres vivants, Université Cheikh Larbi Tebessi, par Mme Hayoune Soraya .Un

échantillon de référence est conservé au niveau du laboratoire des biomolécules actives et

applications.


[23]

Figure 9. Localisation géographique de la zone d’etude Djebel Belkfif, wilaya de Tébessa

(Google earth, 2017).

3.2. Méthode d’extraction

L’extraction a été réalisée au niveau du laboratoire de biochimie de l’université Larbi ben

M’hidi « oum el bouaghi ».

La méthode d’extraction que nous avons adopté est la macération successive par un

solvant hydroalcoolique; il s’agit du 80% éthanol et 20% d’eau distillée pendant 48heures.

la partie aérienne séchée de la plante (Rosmarinus officinalis) est broyée sous forme de

poudre assez fine et mise dans des sacs en papier.

50 g de la poudre végétale est misent dans un ernlenmeyer avec 400 ml de solvant. Le

mélange est soumis à une agitation manuelle douce à l'aide d'une baguette en verre.Ensuite,

nous fermons l’ernlenmeyer et le laissons à température ambiante pendant 48 heures. La

macération est répétée six fois par le même solvant et le même procédé.

A la fin de la macération on procède a une filtration des extraits hydroethanolique pour les

séparés de la matière végétale résiduelle en utilisant un entonnoir munit du coton hydrophile.

Les filtrats ont été récupérés dans des flacons propres en verre.


[24]

Figure 10. Photographie représentant Les étapes de l’extraction hydroalcoolique (photos

originales).

(1-mise en contact du solvant et matière végétale, 2- macération pendant 48h, 3-filtration, 4-

filtrat récupéré) .

Les filtrats sont additionnés et concentrés à sec par un évaporateur rotatif de type

« Laborota.400.efficent ». Dans cet appareil on réalise une évaporation sous vide en utilisant

une pompe à vide réglée à pression de 440 mmHg. Pendant l’évaporation le passage des

filtrés a été fait par des petits volumes de 20 ml dans un ballon de 250 ml plongé dans un

bain marie chauffé à une température de 58C° et mis en vitesse de rotation de 100 rtm.

L’appareil est muni d'un réfrigérant avec un ballon de récupération de condensat.

1

4 3

2


[25]

Figure 11. Photographie représentemontage de Rotavapeur (photo originale).

Figure 12.l’extrait obtenu après l’évaporation (photo originale).

(1 : Concentré 1 ; 2 : Concentré 2).

Après l’évaporation, l’extrait obtenu est placée à l'étuve à 45 C pendant 15 jours pour

éliminer le solvant et sécher l'extrait. Finalement la quantité d'extrait obtenue est pesée dans

une balance de précision pour le calcul du rendement.

1 2


[26]

Figure 13. Séchage de l’extrait à l’étuve (photo originale).

Le procédé d’extraction (fig.14), est répété deux fois (extrait 1 et extrait 2) dans les mêmes

conditions afin d’augmenter la quantité de l’extrait nécessaire tout au long de

l’expérimentation.

Figure 14.Photographie représentel’extrait hydro-éthanolique final (Photo personnelle).


[27]

Figure 15. Schéma représente le processus de l’extraction hydroalcoolique.

50g poudre de la plante

Addition du solvant

(ethanole Ŕeau )

Macération pendant 48h a

température ambiante

Filtration

Résidu Filtre 1

Filtre 2

Filtre 3

Filtre 4

Filtre 5

Filtre 6

La macération

est répété 5 fois

Evaporation par

rotavapeur

ensuite par l’étuve

Extrait hydro-

éthanolique


[28]

3.3. Détermination du rendement

Le rendement est défini comme étant le rapport entre la masse de résidu sec obtenue après

l'extraction (M') et la masse de la matière végétale utilisée (M). Le rendement est exprimé en

pourcentage, il est exprimé par la formule suivante :

R% = (M’/M)*100

4. Présentation de l’insecte Les larves de moustiques utilisées dans cette étude appartiennent à l'espèce Culex pipiens ,

Toutes ces larves ont été collectées dans un site de reproduction riche en matière organique .

Après l'élevage, les larves du 4ème stade ont été sélectionnées pour les essais

expérimentaux.

4.1. L’échantillonnage et technique d’élevage

Durant la période du mois d’avril et de mai 2018, une prospection préliminaire pour la

collecte des larves de moustiques a été conduite dans des zone urbaine et rurale des

différentes régions de la wilaya de Tébessa:Negrin,Safsaf El Ousri, Hammamet, El Aouinet

et Tébessa ville. Ces sites se caractérisent par une très forte densité des larves de Culicidés.

Cependant un seul site, celui de Tébessa ville qui contient l’espèce recherché.

Les œufs et les larves de moustiques sont récoltés à partir deux sites urbains celui de la

résidence universitaire « 1000 lits » de l’universite Larbi Tèbessi (Tébessa) et Hammamet.

Le prélèvement est effectué en plongeant dans l’eau une louche en plastique et en repérant

les larves et les œufs par leur position horizontale à la surface de l’eau. Le contenu de la

louche est versé à chaque fois dans des récipients, qui seront par la suite transporté

directement au laboratoire.

Figure 16. Site urbain de Hammamet (photo originale).


[29]

4.2. Tri les larves et l’identification de l’espèce culex pipiens

Au laboratoire, les larves et les œufs de moustiques récoltés des sites d’échantillonnages

sont transférées dans un cristallisoir contenant une eau déchlorurée. Le trie se fait selon les

espèces ensuite selon le stade du développement. Les larves de stade 4 sont triées et

identifiées par des caractères morphologiques distinctifs de l’espèce.

Figure 17. Cristallisoirs contient l’enchantions du Culex pipiens (photo originale).

Figure 18. Siphon de Culex pipien Figure 19. Nacelles de Culex pipiens

(Photo originale). (Photo originale).


[30]

4.3. Technique d’élevage :

4.3.1. Elevage des larves :

Les larves de moustiques récoltés sont triées par stade larvaire (L1,L2,L 3,L4) selon la

taille, puis transférées dans des récipients contenant 150 ml d’eau déchlorurée et nourries

avec un mélange à 75% de poudre de biscuit et 25 % de levure sèche (Rehimi &Soltani,

1999). Le changement de l’eau et l’adjonction de la nourriture sont effectués tous les 2 jours

car le régime alimentaire joue un grand rôle dans la fécondité car les protéines permettent à

la femelle de pondre plus d'oeufs par rapport aux femelles nourries de sucre seulement

(Wigglesworth, 1972). Pour accélérer leur développement, une température favorable doit

être fournie en utilisant une source de chaleur modérée (bain d’huile).

Nous avons procédé à des observations journalières jusqu’à l’obtention des nymphes. A ce

stade, elles sont placées dans des récipients et déposées dans une cage où elles se

transformeront en adulte. Cette cage cubique est recouverte d’un tulle avec une ouverture

fermée par une épingle pour faciliter le retrait des bacs.

Le régime alimentaire des moustiques adultes est constitué d’une grappe de raisin sec

placé dans le coté supérieure de la cage pour les males mais pour les femelles elles ont

besoin d'un repas sanguin.

4.3.2. Elevage des nacelles.

Pour les nacelles qui flottent à la surface de l'eau, elles ont été transférées soigneusement

dans des récipients contenant de l'eau déchlorurée avec la nourriture en plus d’une source de

chaleur pour accélérer éclosion les œufs.

Figure 20. Photographie représente l’élevage des larves et des nacelles du Culex pipiens

(Photo originale).


[31]

Figure 21. Photographie de la cage.

5. Test de solubilisation La procédure d'essai de solubilité est basée sur la tentative de dissoudre une masse de

l'extrait dans divers solvant pour déterminer lequel qui donne une meilleure solubilisation de

notre extrait.

Nous avons préparé une série de tubes à essai contenant chacun une quantité de la poudre

végétale avec 1 ml de solvant, puis on les mélange au vortex et on note la durée et l’aspect

de la préparation de chaque tube.

Les solvants utilisés dans cette préparation sont :

*Ethanol.

*Eau distillée.

*Ethanol +eau distillée.

*Méthanol.

*Méthanol+eau distillée.

*Méthanol + DMSO.

* Ethanol+DMSO.


[32]

6. Test de toxicité Conformément aux directives de l'Organisation mondiale de la Santé OMS (WHO, 2005)

des concentrations tests préliminaires ont été effectuées avant d’entamer le test de toxicité.

Pour cela deux concentrations 151 mg/mL et 604 mg/mL de l’extrait hydroéthanolique de

Rosmarinus officinalis ont été choisis dans les essais toxicologiques à l’égard du quatrième

stade larvaire de Culex pipiens. Les concentrations préparées dans 1ml de solvant

(méthanol/DMSO), ont été placées dans un gobelet en plastique contenant 150 mL d'eau

déchlorurée et auquel sont rajoutés 20 larves nouvellement exuvies.

Les expériences ont été menées avec 7 répétitions pour la première concentration

(151mg/mL) et 9 répétitions pour la deuxième concentration (60mg/mL). En parallèle on

prépare dans les mêmes conditions aux gobelets tests, deux lots de gobelets qui seront

utilisés comme des témoins :

Témoin positif : comporte les larves L4 + le solvant.

Témoin négatif : comporte les larves L4 seule.

Pour chaque série de concentration test et témoins positifs et négatifs, nous avons

dénombré les larves mortes et vivantes après 1, 3, 6, 24, 48 et 72 heures d'exposition. Pour

chaque comptage on place les larves mortes dans un autre récipient.

Figure 22. Photographie représente les tests toxicologiques.

Après 24h de contact, les larves vivantes sont rincées avec l’eau déchlorurée, puis

déplacées dans des nouveaux gobelets contenant 150 ml de l’eau déchlorurée avec l'ajout

d'une petite quantité de nourriture.


[33]

6.1. Détermination du taux de mortalité

La mortalité est le premier critère de jugement de l’efficacité d’un traitement chimique ou

biologique. Afin de caractériser l’effet toxicologique d’extrait de Rosmarinus officinalis à

l’égard des larves L4 de Culex pipiens nouvellement exuvies le pourcentage de la mortalité

observée chez les larves de quatrième stade de Culex pipiens nouvellement exuvies témoins

et traités, a été calculé en utilisant la formule :

Nombre des larves mortes

Mortalité observée % = × 100

Nombre des larves introduites

Il faudra effectuer un calcul similaire pour obtenir une valeur de la mortalité parmi les

témoins. Lorsque le taux de mortalité des témoins est compris entre 5 et 20% les

pourcentages de mortalités observées sont corrigés par la formule d’Abbott, (1925)qui

permet d’éliminer la mortalité naturelle. Lorsque ce même taux dépasse 20 %, le test doit

être renouvelé.

% mortalité des larves traitées − % mortalité des larves témoins

Mortalité corrigée % = ×100

100% mortalité des larves témoins

6.2. Analyse statistique

Les valeurs ont été exprimées en tant que moyennes ± écart-type. L'analyse de la variance de

classification ANOVA d’un seul facteur a été effectuée avec le logiciel Graph pad prism7

Les différences à p <0,05 étaient considéré statistiquement significatif.


[35]

1. Rendement de l’extrait hydroethanolique de Rosmarinus

Officinalis Dans cette étude, le rendement de chaque extraction (tab.1) à été déterminé par rapport à au

poids initial de la matière végétale. L’extrait obtenu présente un aspect sec de couleur verte

claire et une odeur caractéristique de la plante.

Tableau 1. Rendement de l’extrait hydroéthanolique de Rosmarinus officinalis.

Rendement (%)

extrait 1 18,87

extrait 2 20,06

Moyenne± écart type 19,47± 0,84

2. Test de toxicité Dans le but de connaitre l’effet larvicide de l’extrait hydroéthanolique de la plante

Rosmarinus officinalis, des essais toxicologiques préliminaires sur les larves du 4ème stade

de Culex pipens nouvellement exuvies ont été réalisés. Deux concentrations tests «151

mg/mL » et de «604 mg/mL » ont été choisis pour évaluer l’activité larvicide et ce a partir

de la mortalité enregistrée à différentes périodes de temps 24, 48 et 72 heures après

traitement.

2.1. Evaluation de l’effet larvicide de l’extrait de R. officinalis avec la

concentration de «151 mg/mL» à différentes périodes de temps (24,48 et

72h).

Les résultats obtenus qui représentent le pourcentage de mortalité corrigée des larves de

Culex pipiens, en fonction de l’extraits de R. officinalis avec concentration «151 mg/mL »

sont rapportée dans le tableau 2 et ceci après 24, 48 et 72 heures de traitement. Les résultats

sont exprimés par la moyenne et l’écart-type.


[36]

Tableau 02 : Effet de l’extrait de R. officinalis appliquée sur des larves de quatrième stade

nouvellement exuviées de Culex pipiens, sur le taux de pourcentage de mortalité corrigée à

différentes périodes de temps (24, 48 et 72 heures) avec concentration «151 mg/mL » (m±


Extrait à 151 mg/ML 24h 48h 72h

R1 0 5 5

R2 0 5 5

R3 0 0 10

R4 0 0 0

R5 0 0 0

R6 5 10 15

R7 5 30 30

M ± SD 1,43±2,44 7,14 ± 10,57 9,29±10,58

2.2. Etude de l’effet de temps d’exposition à la concentration de

151mg/mL

L’analyse de la variance (Tab 03) de pourcentage de mortalité des larves du 4éme stade de

Culex pipiens nouvellement exuviées,montre un effet temps non significative p =0.253 (p >

0,05) ne révélant pas ainsi, des différences d’action en terme de mortalité après (24h, 48h et

72h) d’exposition à la concentration de 151mg/mL de l’extrait hydroéthanolique de R.

officinalis.

Tableau 03 : Effet de la durée d’exposition (24, 48 et 72h) à la concentration-test de

151mg/mL de l’extrait hydroéthanolique de R. officinalis sur le pourcentage de mortalité des

larves L4 de Culex pipiens (ANOVA)

DDL : degré de liberté, SC : sommes des carrés des écarts, CM : carrés moyens, F : valeur

de F de Fisher, p : valeur de probabilité.

Source DDL SCE CM Valeur F P

Facteur

(Temps) 2 231 115,48 1,48 0,253

Erreur 18 1400 77,78

Totale 20 1631


[37]

2.3. Evaluation de l’effet larvicide de l’extrait de R. officinalis avec une

concentration de «604 mg/mL » à différentes périodes de temps (24, 48 et

72h).

Les résultats obtenus qui représentent le pourcentage de mortalité corrigée des larves de

Culex pipiens, en fonction de l’extraits de R. officinalis avec concentration «604 mg/mL »

sont rapportée dans le tableau 4 et ceci après 24, 48 et 72 heures de traitement. Les résultats

sont exprimés par la moyenne et l’écart-type.

Tableau 04 : Effet de l’extrait de R. officinalis appliquée sur des larves de quatrième

stade nouvellement exuviées de Culex pipiens, sur le taux de pourcentage de mortalité

corrigée à différentes périodes de temps (24, 48 et 72 heures) avec concentration «604

mg/mL » (m± sd, n=9 répétitions comportant chacune 20 individus).

Extrait à 604 mg / mL 24h 48h 72h

R1 5 10 10

R2 15 20 25

R3 25 60 60

R4 0 35 35

R5 10 10 10

R6 5 15 15

R7 20 20 20

R8 5 20 35

R9 0 35 35

M ± SD 9,44 ± 8,82 25 ± 16 27,22 ± 16,03

2.4. Etude de l’effet de temps d’exposition à la concentration de 604

mg/ml

L’analyse de la variance (Tab 05) du pourcentage de mortalité des larves du 4éme stade de

Culex pipiens nouvellement exuvies, montre un effet temps significative p= 0,0256

(p<0.05) pour la deuxième concentration-test de 604 mg/mL utilisée sur une période

d’exposition de (24, 48,72h).


[38]

Tableau 05 : Effet de la durée d’exposition (24, 48 et 72h) à la concentration-test de 604

mg/mL de l’extrait hydroéthanolique de R. officinalis sur le pourcentage de mortalité des

larves L4 de Culex pipiens (ANOVA).

Source DDL SCE CM Valeur F P

Facteur

(temps) 2 1689 844,4 4,287 0,0256

Erreur 24 4728 197

Totale 26 6417

DDL : degré de liberté, SC : sommes des carrés des écarts, CM : carrés moyens, F : valeur

de F de Fisher, p : valeur de probabilité.

2.5. Etude de l’effet de concentration -test dans la même période de

traitement :

Le tableau 06 et la figure représentent la variation de la moyenne de pourcentage de

mortalité des larves L4 de Culex pipiens nouvellement exuviées,en fonction des 2

concentrations utilisées (151 et 604 mg/mL) et ceci après 24, 48 et 72h d’exposition.

Après 24 heures de contact avec l'extrait hydroéthanolique R. officinalis, la moyenne de la

mortalité atteint 1,43 % pour la concentration de 151 mg /mL contre 9,44 % pour celle de

604 mg/mL.

Après 48 heures d'exposition, la concentration de 151 mg/mL donne une moyenne de

mortalité 7,14 % contre 25 % pour celle de 604 mg/mL.

Après 72 heures d’exposition, la moyenne de mortalité atteint 9,29 % pour la concentration

de 151 mg/mL contre 27,22 % pour celle de 604 mg/mL.


[39]

Tableau 06: Effet des deux concentrations-test de l’extrait hydroéthanolique R. officinalis

sur le pourcentage de mortalité des larves L4 de Culex pipiens dans chaque période

d’exposition (24,48 et 72h) .

Figure 23.Diagramme représente la variation du pourcentage de mortalité des larves L4 de

Culex pipiens pour les deux concentrations-test (151 et -604 mg/mL) de l’extrait

hydroethanolique de Rosmarinus officinalis après (24, 48 et 72h) d’exposition .

Etude de la variation de l’effet de la concentration dans la même période d’exposition par

le test de T de student a été significatif p= 0,0473 ( p< 0,05).

1.43

7.14

9.299.44

25.00

27.22

0

5

10

15

20

25

30

24h 48h 72h

Mo

rtlit

é c

orr

igé

e (

%)

Temps d'exposition (heures)

151 mg/ml

604 mg/ml

Moyenne de pourcentage de mortalité à chaque temps de contact (%)

Extrait 24h 48h 72h

151mg/ml 1,43 7,14 9,29

604 mg/mL 9,44 25 27,22


Discussion


[41]

1. Rendement de l’extrait hydroethanolique de Rosmarinus

officinalis Dans notre expérience le rendement obtenu de l’extraction par macération de la plante

Rosmarinus officinalis est de 19,47%. Ce taux est proche et souvent supérieur

comparativement à d’autres études internationales qui ont été faites dans autres régions du

monde pour la même espèce de plante et par la même méthode adoptée ou par des

différentes méthodes d’extraction ou protocoles.

Selon la littérature le meilleur rendement par macération a été obtenu est de 20% ce qui

proche de notre résultat et ce lors de l’étude de daniel et ses collaborateurs (daniel et al.,

2013) avec une durée de macération de 15 jours et par le même solvant a concentration

(50 :50). Les mêmes auteurs ont obtenu que de 10.2% de rendement avec l’éthanol 96%. Ce

qui est aussi proche de celui de catilo et al( 2012), avec un taux de 9.66%. Par ailleurs,

Zendehdel et al(2011), ont obtenu 15% de rendement réalisée avec éthanol 70% pendant 3

jours. Des valeurs nettement inferieures ont été rapportées par (Kosaka et yokoi, 2003)

avec un taux de 5.83 %. Par une extraction avec éthanol à 90%.

Plusieurs auteurs ont rapportés des valeurs variables du taux de rendement de Rosmarinus

Officinalis en utilisant la méthode d’extraction au soxhlet. La plus récente étude est celle de

Navaroet et al 2017 qui ont utilisé des différentes concentrations de solvant

hydrotheanolique, ont conclu que la concentration de 0-60% d'éthanol donne 19-28% de

rendement, tandis que la concentration de 60-80% d'éthanol n'a aucun effet sur le résultat,

mais si elle dépasse 80%, il réduit le rendement de 26% à 15%. Paradoxalement (mutalib)

en 2015 par la même méthode d’extraction au soxhlet a eu un rendement de 6.46%.

Les variations enregistrées peuvent être expliquées par plusieurs facteurs tels que la

localisation géographique de la plante, le temps d'extraction, les conditions expérimentales.

(Lagunez rivera, 2006) a rapporté que la teneur d’une plante en composés et en métabolites

secondaires varie en fonction de l’espèce végétale considérée et au sein de la même espèce

végétale en fonction du stade de développement, l’écotype, la saison, la période de récolte,

l’organe (feuille, tige, racine, etc..), et pour une estimation la teneur d’une plante en

métabolites secondaires quelconques le rendement d’extraction, évolue sensiblement selon

la procédure d’extraction utilisée.


[42]

2. Les tests de toxicité Les plantes aromatiques contiennent des molécules bioactives, ces derniers considérés

comme des matières naturelles utilisées pour protéger l’être humain et l’environnement et

pour lutter contre les insectes indésirables et de l’interdire de se reproduire.

Les résultats obtenus révèlent un effet toxique très faible traduit par un taux de mortalité

faible et une sensibilité variable des larves L4 nouvellement exuvies de culex pipiens vis-à-

vis des concentrations testées 151mlg/ml et 604 mlg/ml de l’extrait hydro-éthanolique de

Rosmarinus officinalis. Les résultats montrent également que l’activité larvicide est

progressive avec la durée de traitement, puisque on a enregistré une augmentation de la

mortalité au fur et à mesure qu’on prolonge le temps d’exposition de 24 à 48 et 72 heures.

Pour la première concentration «151 mg/mL »La mortalité après 24 heures est très faible et

ainsi de même après l'allongement du temps à 48 et 72 heures de contact.

Pour la deuxième concentration «604 mg/mL » malgré que la concentration est trés élevée

et la solution préparée est devenue hypersaturée la réponse n’atteignant pas les 10 % dès la

première 24 heure. Par ailleurs après 48 de contact l’extrait a tué le quart de la population

pour atteindre un maximum de mortalité de 27,22 % après 72 heures d’exposition.

Par la comparaison de nos résultats aux autres études menées pour la même plante et le

même espèce de moustique (culex pipiens ) on trouve sur le plan national celle de Guenez

et boumedjeria en 2017, dans la région de Tébessa qui ont étudié l’effet larvicide la même

plante de vis-à-vis des larves du même espèce de moustique culex pipiens et la même

concentration 151 mg/ml mais avec 5 solvants de polarité croissante. Leur résultats montrent

que l’extrait de l’éther de pétrole donne le taux de mortalité le plus élevé avec 88% de

mortalité après 72 heures d’exposition. En revanche, ce taux n’atteint que6.5% après 72

heures en utilisant de l’eau distillée.

Une autre étude menée par Aouati en 2016 dans la région de Constantine, montre que

l'extrait méthanolique de la plante Rosmarinus officinalis a engendré un maximum de 37%

de mortalité sur des larves du culex pipiens au bout de 72 h d’exposition en utilisant la

concentration 0.9 mg/ml.

Sur le plan international l’étude de boukhris en 2010 au Maroc montre que l’extrait aqueux

de R.O a une activité toxique sur les larves de culex avec un taux de mortalité maximal de

17.06 % après 24 heures réalisé avec la concentration de 0.025 mg/ml. Tandis que


[43]

Hasaballah and Moselhy(2015),en Egypteont étudié l’activité toxique de l’extrait de R .O

obtenu par le éther de pétrole sur les nymphes de Culex et leurs résultats montrent qu’à la

concentration de 2.5 mg/ml le taux de mortalité arrive à 100%.

Par ailleurs Veana et al en 2005 ont trouvé que les huiles essentielles de R.O ont un effet

toxique sur l’espèce de moustique culex quinquefasciatus. Cet effet est nul pour les larves

mais efficace pour les adultes.

À partir de ces comparaisons on peut conclure que le solvant utilisé dans l’extraction de la

plante et le temps de traitement ont un rôle très important de rendre l’extrait toxique ou

moins toxique. Ceci est approuvé par les taux variés de mortalité enregistrés par des extraits

différents pendant de différentes des périodes avec de concentrations différentes aussi.

Cette diversité d’action des extraits étudiés pourrait en fait être due à la diversification des

molécules bioactives qui les composent. Ces extraits pouvaient réaliser une action singulière

d’un des composants de la plante ou un effet synergique entre plusieurs composés vis-à-vis

des larves de moustiques.


[45]

Conclusion :

Les Culicidaes, sont sans doute, les insectes les plus connus et les plus redoutés tant pour le

désagrément et nuisance que constitue leur présence, que par les maladies parasitaires qu’ils

peuvent inoculer pendant leur repas sanguin, telle que la filariose, la fièvre jaune, la fièvre

du virus du Nile Occidental. La résistance de ces insectes aux pesticides chimiques utilisés

et la bioaccumulation des composés toxiques dans l’environnement, a incité les chercheurs à

trouver de nouvelles méthodes alternatives biologiques, sélectives et, surtout,

biodégradables, afin de préserver le milieu naturel. Plusieurs méthodes de contrôle sont

élaborées notamment celle relative à l’utilisation des extraits de plantes comme insecticides.

Le travail réalisé, nous a permis d’évaluer l’activité larvicide d’une espèce de moustiques

Culex pipiens, en utilisant l'extrait hydroéthanolique de la partie aérienne de Rosmarinus

officinalis.

L’étude de la toxicité de cet extrait vis a vis des larves du quatrième stade larvaire de Culex

pipiens par deux différentes concentration 151mg/ml et 604mg/ml, nous a permis de

constater que cet extrait ne révèle pas une activité larvicide importante en utilisant éthanol

comme solvant.

A l'avenir il serait intéressant de compléter cette recherche, mais par l’utilisation autres

solvants qui permettent d’estimer l’effet larvicide de cette plante et faire ainsi sa

valorisation.


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Résumé

Cette étude a été réalisée dans le but de développer une nouvelle stratégie de lutte contre les

larves de Culex pipiens, vecteurs de maladies, La méthode du travail que nous avons adopté,

vise l’évaluation de l’activité larvicide de l’extrait hydroétanolique de Rosmarinus officinalis

chez cette espèce de moustique.

Rendement de l’extrait hydro-alcoolique : l’extrait hydroéthanolique de la plante a été

obtenu par six macérations successives dans un mélange de solvant éthanol/eau distillée

(80/20). Le rendement moyen de l’extrait obtenu est 19,47%.

Aspect toxicologique : Les résultats montrent que l’extrait hydroéthanolique de Rosmarinus

officinalis donne un taux de mortalité très faible avec deux concentrations déférentes

:151mg\ml et 604mg\ml ce qui fait que cet extrait ne pourrait être utilisé comme larvicide.

Mots clés: Rosmarinus officinalis -culex pipiens - larvicide Ŕ toxicité - extrait

hydroéthanolique


:ملخص

واقلاث ، culex pipiens عهى يزقاثنهسيطزة جذيذة إسخزاحيجيت حطيز بذف انذراست ذي أجزيج

نىباث انمائي انكحل نمسخخهص انسمي انىشاط حقييم إنى اعخمذوا انخي انعمم طزيقت حذف, الأمزاض

Rosmarinus officinalisانبعض مه انىع ذا عهى.

مزاث 6 انىقع باسطت على مستخلص الكحول المائي للنبات حم انحصل :المائي المستخلص مردود

.19,47% عهي انمخحصم انخسط انمزدد فكان (,20-80 )ماء / ايثاول خهيط في

فياث معذل يعطي Rosmarinus officinalis وباث مسخخهص أن انىخائج أظزث : السمي الجانب

ما يعىي أن ذا انمسخخهص لا يمكه .مم /مغ 604 مه / مغ 151: مخخهفيه حزكيزيه باسطت جذا مىخفط

.اسخعمان كمبيذ يزقي

مستخلص – سمية –سمي يرقي - culex pipiens - Rosmarinus officinalis :الكلمات المفتاحية

.الكحول المائي

etude de l'effet larvicide de l’extrait hydroalcoolique de

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