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Du Bon Usage du Laboratoire Pathologie d’Importation GARNOTEL Eric Service de Biologie HIA Laveran Marseille

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Du Bon Usage

du Laboratoire

Pathologie d’Importation

GARNOTEL Eric

Service de Biologie

HIA Laveran

Marseille

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Limites :

pathologies spécifiquement tropicales

infectieuses

diagnostic au laboratoire

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Contexte anamnestique :

pays, lieu, durée, dates

contexte épidémiologique

exposition à un risque

Prophylaxie chimioprophylaxie

vaccinations

Clinique

Démarche

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Prédéfinir les agents pathogènes potentiels

« On ne trouve que ce que l ’on cherche »

Syndromes :

fièvre

splénomégalie

ADP…..

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Diagnostic biologique

Eléments d’orientation : non spécifiques

numération formule

syndrome inflammatoire

Diagnostic de présomption

Diagnostic de certitude :

mise en évidence directe de l’agent infectieux

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Valeur d ’orientation de l ’hémogramme

hyperleucocytose à PNN

leucopénie

anémie

amibiase, leptospirose

paludisme, typhoïde, leishmaniose,

viroses (arboviroses)

paludisme, leishmaniose

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thrombopénie

hyperéosinophilie

syndrome mononucléosique

paludisme, dengue , leishmaniose

bilharziose, distomatose, trichinose,

toxocarose, phase invasion helminthes

VIH, hépatite virale

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Syndrome inflammatoire

VS, CRP, électrophorèse des protéines…..

Leishmaniose viscérale

Trypanosomiase

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Fièvre et splénomégalie

Paludisme

Fièvre typhoïde

Brucellose

Borréliose

Leishmaniose viscérale

Trypanosomiase

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Diagnostic du Paludisme

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Diagnostic du Paludisme

Frottis sanguin : diagnostic d ’espèce

parasitémie

S de 100 HP / µl

Goutte épaisse : temps de réalisation

S de 1 HP / µl

QBC : 5 mn

S de 0,5 HP / µl

HRP2 : diagnostic de P falciparum

faux négatifs

Biologie moléculaire

Valeur des Tests : Se et Sp

Expérience du Biologiste

référence

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Tests de diagnostic rapide

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Quantified Buffy Coat

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PCR

PCR classique

PCR en temps réel

•Se PCR = Se QBC

•Faux + et faux-

•Disponibilité

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Fièvre typhoïde et fièvres paratyphoïdes

Taux d’incidence des fièvres typhoïde et paratyphoïdes dans le monde

21M de cas/an Létalité de 1 à 4% 216-600 000 décès

Asie 13M

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Fièvre typhoïde et fièvres paratyphoïdes

Ac anti O

Ac anti H

J0 J8 J12

Hémocultures

Coprocultures

Widal et Felix

1/800

1/1600

1/400

Spécificité :

Vaccin TAB

Co aggl T B

faux +

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Brucellose

Rose bengale Ig G 80% 90% qualitative

Wright IgM 60% 90% 10 - 12 ième j

négativation rapide

faux-

faux+ (Yersinia, Vibrio)

fixation du Cpt IgG 60% 95% stade tardif

IFI Ig GMA 90% 95-100%précoce et tardif

Hémocultures : bactérie à croissance difficile

phase aiguë

Autres localisations

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Action sur l ’immunité spécifique

CPAg CD4

IL 2

IFN

IL 4-5

10-13

CD4 Th1 CD4 Th2

Facteurs : espèce

inoculum

réponse de l ’hôte

inf concomitante

LV

LCD LC

Leishmaniose viscérale ou cutanée

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Leishmaniose viscérale ou cutanée

Orientation : anamnèse

VS

pancytopénie

protidogramme

Présomption : sérologie IFI

ELISA, HA,….

Certitude : prélèvements moelle, ADP, foie, peau

examen direct

culture

biologie moléculaire

LV

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Peau Moelle

Peau

(ana path)

Diagnostic biologique (3)

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Diagnostic indirect :

problème des VAT

IFI ELISA aggl. en µplaque (T.b r)

HAI CATT

Trypanosomiase

Diagnostic direct :

adénopathie sang suc dermique LCR

état frais (mobilité), coloration (MGG)

techniques de concentration :goutte épaisse QBC

diagnostic de phase

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Fièvre et adénopathies

Primo infection VIH

Viroses (EBV, CMV….)

Dengue (arboviroses)

Tuberculose

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Primo-infection VIH

Ag p24-25 Ac anti VIH

ARN viral

15 jours

Sérologie : évolution des tests (sous-type O, Ag p24)

2 ELISA confirmés par Western Blot

ELISA Combo : Ac et Ag p24

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Primo-infection VIH

Confirmation sur le premier prélèvement

Western blot

GP160

GP120

P24

P18

GP41

P68

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Dengue et autres arboviroses

Culture virale :

EDTA

couche leucocytaire

Sérologie : ELISA

Ig M

Ig G

Laboratoires spécialisés +/-

Réactions sérologiques croisées

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Fièvre et ictère

Paludisme

Hépatites virales A

B – D

E

C

Leptospirose

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0-9 10-19 20-29 30-39 40-49 +50ans

Séroprévalence VHA %

Afrique - Asie

Pourtour méditérranéen

Europe - EU

Pays nordiques

100%

50%

IgM

Ig totaux

Ictère

Transaminases

Diagnostic

Hépatite A

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Ag HBs

Ac anti HBs

Ac anti HBc totaux

Ac anti HBc IgM

Ac anti HBe Ag HBe

ADN viral

Phase symptomatique

Cinétique des marqueurs Hépatite B

4-12 sem 1-2 sem 2 sem-3 mois

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Ag delta IgM IgG

1 - 4 sem

2 - 5 sem

Cinétique des marqueurs de l ’hépatite D

RT PCR

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VHE

Epidémies du passé

1915 : Epidémie de la

« Campagne de Mésopotamie »

Troupes britanniques

Troupes indiennes

Hépatite E

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VHE

Aujourd’hui

New Dehli (1955)

•crue de la rivière Yamunâ

•29 300 cas d’hépatites ictériques

Inde : 50% des hépatites aiguës de l’adulte

20 à 30% des hépatites aiguës de l’enfant

Monde : nombreux cas sporadiques

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Cycle du VHE

Zoonose Rôle du porc?

•VHE : 71% des porcs au Japon

•Transmission inter-espèce

•Souches humaines ou animales

proches ou identiques

Eau

Aliments

Contact direct (0,7-2,2%)

Autres

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Inde

1955 : 29 300

1975 : 2 600

1978 : 274

1990 : 79 000

Népal

1973 : 10 000

1981 : 6 000

1995 : 692

Pakistan

1987 : 133

1993 : 3 800

Birmanie

1976 : 20 000

1982 : 400

Bornéo

1987 : 2 000

Chine

1986 : 119 000

Algérie : 788

RCI : 623

Tchad : 38

Soudan : 2000

Somalie : 2000

Ethiopie : 423

Djibouti : 111

Aspects épidémiologiques du VHE

Epidémies ou VHE>25%

des hépatites non A non B

Souches de VHE isolée

Sources CDC

Okamoto, Virus Research, 127 (2007)

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Ig G

Ig M

Ictère

Sang Selles

ARN VHE

15-50j

Grandes épidémies - cas sporadiques

Inde - Asie - Afrique

Mortalité 1 - 2%

Diagnostic de l’infection par le VHE

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Hépatite C

Importance épidémiologique

Mode transmission

Variabilité des transaminases

Asymptomatique dans 75% des cas

2 tests ELISA de 3 ième génération

RT PCR qualitative

Génotypage

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Leptospirose

Diagnostic direct :

hémoculture (période septicémique, 10-12 j)

LCR

(urine)

Sérologie (15iéme jour) :

dépistage (macroaggl Ag TR, HA …)

confirmation (Martin et Pettit, micro aggl)

>20 sérovars

seuil 1/800 ou 2 dilutions sur 2 sérums

Hépato-néphrite

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Fièvre et image hépatique

Amibiase hépatique

Kyste hydatique

Abcès à pyogènes

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Amibiase hépatique

Examens morphologiques

Sérologies : diagnostic et suivi du traitement

IFI : très Se et Sp >1/200

titres très élevés

précoce, suivi du TTT

HA : GR sensibilisés >1/128

persistance des Ac

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Kyste hydatique

Pas de ponction

Sérologie : foie>poumon

HAI Se 89%

>1/320

IFI Se 96%

>1/100

IEF : spécificité

ELISA

diagnostic et suivi du traitement

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Fièvre et hyperéosinophilie

Bilharziose

Distomatose

Trichinose

Anguillulose

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Bilharziose

Sérologies:

IF : coupe de foie de souris

Se (seuil 1/10)

précoce (Ig M)

suivi du traitement

HA : seuil 1/64

précoce

immuno-électrophorèse : confirmation

(arc 4 et 8)

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Distomatose

Sérologie : + à la phase d ’invasion

IF (sur coupe de F hepatica) :

seuil 1/20, Se 95%

moins Sp (bilharziose, filariose)

HA : 1/320, Se 90%

ELISA : Se et Sp

Immuno-électrophorèse : Sp

(arc 2 spécifique de F hepatica)

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Trichinose

CPK

hyperéosinophilie

Mise en évidence du parasite : biopsie musculaire

Sérologie : IF

50% + à 3sem 95% à 8 sem

ELISA

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Anguillulose

Infestation massive

Examen parasitologique des selles après 1 semaine:

méthodes de concentration spécifiques

répétition des examens

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Diarrhées

Shigelles

Salmonelles

Campylobacter

Aeromonas-Plesiomonas

Yersinia+/-

Amibiase

Virale

Paludisme (enfant)

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Examen cyto bactériologique des selles : faible rendement

Pathovar d’Escherichia coli non recherchés

Nécessaire car risque Shigella et résistance aux AB

Réalisé 1 fois, spécifier le pays visité

Examen parasitologique des selles : cas particulier des amibes

1 prélèvement pour les protozoaires

3 prélèvements à quelques jours d’intervalles pour

les métazoaires : élimination intermittante

Méthodes de concentration

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Conclusion

Diagnostic des Pathologies d’importation :

parfois spécialisée

Prendre en compte

•les VPP et VPN des examens biologiques

•l’expérience des laboratoires