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Test biochimique 4 Recherche d'une
désoxyribonucléase (DNase)
Mme Hedia BEN ABDALLAH 1
Mme BEN ABDALLAH Hedia
BTS
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• Le test d'hydrolyse de l'ADN ou le test de désoxyribonucléase (DNase) vise à déterminer la capacité d'un micro-organisme à hydrolyser l'ADN et à l'utiliser comme source de carbone et d'énergie.
• La gélose à ADN, est un milieu différentiel:
permettant de mettre en évidence la capacité d'un micro-organisme à produire une désoxyribonucléase ou une DNase.
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• Ce milieu est de couleur vert pâle à cause de la présence du complexe ADN-vert de methyl (indicateur). Il contient également des nutriments pour les bactéries.
• NB: Le vert de méthyl est un cation qui se lie à l'ADN chargé négativement).
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• Si la souche est cultivée sur le milieu, elle va pouvoir produire de la désoxyribonucléase, qui décompose l'ADN en fragments de petite tailles.
• Comme l'ADN est décomposé, il ne se lie plus au vert de méthyle, et la couleur verte s'efface et la colonie est entourée d'un halo incolore (voir fig. 1).
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Test d’hydrolyse d’ADN
Halo clair
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Méthode
• Ensemencer les colonies suspectes en strie unique de 1 à 2 cm ou en spot de 5 mm de diamètre à la surface du milieu. 4 ou 5 souches peuvent être étudiées simultanément sur la même boîte.
• Incuber 24 heures à 37°C. 4.
• Verser à la surface de la gélose une solution d'acide chlorhydrique N.
• Après quelques minutes de contact, noter l'éclaircissement de la zone autour de la strie ou du spot, traduisant des colonies possédant une désoxyribonucléase.
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Lecture
• Positif: Comme l'ADN est hydrolysé, le vert de méthyle est libéré rendant le milieu incolore et transparant autour de la colonie.
• Négatif: absence d’hydrolyse de l'ADN, le milieu reste vert.
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intérêt d’utilisation de TEST de DNASE
• Il est utilisé pour différencier S.aureus (DNase + ve) des Staphylocoques non aureus qui ne produisent pas cette enzyme.
• Le test de DNase est utile en cas de difficulté à effectuer un test de coagulase.
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Inconvénients du test
• Certaines souches de Staphylococcus aureus résistant à la méticilline (SARM) ne donnent pas de résultat positif obtenu par le test de DNase .
• Certaines souches des staphylocoques non aureus tels que Staphylococcus capitis peuvent donner des réactions faibles avec le test DNASE.
• Les genres de Serratia et Moraxella produisent également de la désoxyribonucléase.
• Le HCl 1 N est bactéricide pour les staphylocoques. Une fois que le HCl a été appliqué, le test doit être lu dans les 5 minutes et ne peut pas être poursuivi par ré- incubation.
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Résultats
• Exemple de souche DNase (+) :
– Serratia marcescens
– Staphylococcus aureus
– Campylobacter jejuni (quelques espèces)
– M. Catarrhalis
• Exemple de souche DNase (-) :
– Staphylococcus epidermidis
– Neisseria gonorrhoeae